腦脊液標(biāo)志物分析在中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病中的應(yīng)用研究進(jìn)展

王 勉，楊建民，宋志強(qiáng)，唐古生

（海軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科實(shí)驗(yàn)室，上海 200433）

中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病（central nervous system leukemia，CNSL）是白血病細(xì)胞對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的直接浸潤(rùn)，中樞神經(jīng)是白血病髓外受累最常見的部位，有研究發(fā)現(xiàn)，約26%的成人初發(fā)急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cute lymphoblastic leukemia，ALL）患者和21%的初發(fā)急性非淋巴細(xì)胞白血病患者會(huì)表現(xiàn)出中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累[1]。近半個(gè)多世紀(jì)以來(lái)，傳統(tǒng)化療方案的改進(jìn)和各種靶向藥物的應(yīng)用，使白血病治療的緩解率得到了顯著提高，但仍有許多白血病患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，合并CNSL是最重要的原因，預(yù)后往往較差[2-3]。初診CNSL患者復(fù)發(fā)率也較高，約占復(fù)發(fā)患者的20%～30%，占兒童復(fù)發(fā)ALL的30%～40%，是復(fù)發(fā)難治的主要原因[2-3]，CNSL患者需要更強(qiáng)的、靶向中樞的治療措施[2]，早期診斷和治療CNSL，對(duì)于預(yù)防白血病復(fù)發(fā)、提高患者生存率具有重要意義。

目前，CNSL的診斷主要依賴于實(shí)驗(yàn)室檢查和/或臨床癥狀。但總體而言，目前的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)無(wú)法較好地早期診斷CNSL。本文對(duì)腦脊液常規(guī)檢查（腦脊液壓力、細(xì)胞學(xué)涂片和生化指標(biāo)檢測(cè)）、流式細(xì)胞免疫分型等CNSL實(shí)驗(yàn)室輔助診斷方法和單個(gè)蛋白、核酸等標(biāo)志物，以及各種組學(xué)標(biāo)志的研究進(jìn)展和臨床應(yīng)用進(jìn)行綜述。

1 常規(guī)腦脊液細(xì)胞學(xué)和生化指標(biāo)檢測(cè)

目前，診斷CNSL的金標(biāo)準(zhǔn)是腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，但結(jié)果易受樣本采集、制片、主觀判讀等因素影響，靈敏度低，特別是容易漏診細(xì)胞較少的樣本，單次腦脊液形態(tài)學(xué)檢查的敏感性<50%[2]?；诩?xì)胞形態(tài)學(xué)的檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，成人ALL初診時(shí)僅有5%～10%伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累[2]，兒童則有8.0%～13.4%[2-4]。10%～35%的腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查未查見腫瘤細(xì)胞的白血病患者，后續(xù)仍會(huì)出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累[5]。另外，有60%的CNSL患者沒(méi)有顱神經(jīng)麻痹癥狀和細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)[6-7]，因此需要更靈敏的方法來(lái)確認(rèn)腦脊液中白血病細(xì)胞浸潤(rùn)情況。腦脊液壓力和生化指標(biāo)異常，對(duì)于臨床癥狀不明顯或處于疾病早期的病例，常會(huì)有提示作用。常用指標(biāo)包括：總蛋白質(zhì)、糖和氯化物定量。CNSL患者腦脊液蛋白質(zhì)的含量會(huì)明顯增多，主要與病變時(shí)血腦屏障通透性發(fā)生改變，外周血蛋白質(zhì)進(jìn)入腦脊液相關(guān)；而糖定量明顯減少是由其分解增多所導(dǎo)致的[8]。但這些指標(biāo)均不具有特異性，僅能輔助診斷CNSL。

腦脊液乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和β2-微球蛋白（beta2-microglobulin，β2-MG）也常被臨床用來(lái)輔助判斷CNSL。正常情況下，腦脊液LDH活性很低，約為血清中的 1/10，發(fā)生CNSL時(shí)，白血病細(xì)胞浸潤(rùn)到腦膜和腦實(shí)質(zhì)，使腦脊液LDH活性升高，與其他方式聯(lián)用可提高CNSL的診斷率[9]。正常腦脊液中的β2-MG含量很少，CNSL時(shí)白血病細(xì)胞無(wú)限增殖，腫瘤抗原致敏淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，使其大量合成β2-MG。王文靜等[10]發(fā)現(xiàn)，CNSL患者腦脊液中β2-MG水平明顯高于非CNSL患者，單指標(biāo)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為70.76%和68.01%，敏感性和特異性分別為67.34%和72.34%。因此，白血病患者腦脊液β2-MG水平升高可提示中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤浸潤(rùn)可能。然而，腦脊液常規(guī)、LDH和β2-MG等指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果受炎癥、感染、出血等多種因素的影響，臨床上也常見腦脊液壓力和/或蛋白升高或生化指標(biāo)異常，但疾病進(jìn)程中始終未見CNSL臨床表現(xiàn)的患者。因此，腦脊液常規(guī)生化指標(biāo)檢測(cè)診斷CNSL的特異性、敏感性仍遠(yuǎn)不能滿足需求。

2 腦脊液多參數(shù)流式細(xì)胞（multi-parameter flow cytometry，MFC）免疫分型

腦脊液MFC免疫分型較細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查具有分析速度快、收集細(xì)胞數(shù)量多和敏感性高（>0.01%）、特異性好等優(yōu)點(diǎn)[3，5]，可以更加敏感地預(yù)測(cè)CNSL的發(fā)生[11]，是目前臨床診斷CNSL的重要方法，極大提高了CNSL的確診率[12]。

對(duì)于檢測(cè)CNSL患者腦脊液白血病細(xì)胞免疫表型的抗體組合策略，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。通常是各實(shí)驗(yàn)室根據(jù)不同類型CNSL患者白血病細(xì)胞初發(fā)免疫表型（leukemia-associated immunophenotype，LAIP）輔以正常發(fā)育分化過(guò)程中特異性的系列標(biāo)志，依據(jù)實(shí)驗(yàn)室流式細(xì)胞儀多色通道的數(shù)量，組成各實(shí)驗(yàn)室特定的多色抗體組合?；镜呐袛喾椒ㄊ怯^察腦脊液有核細(xì)胞中是否有LAIP，或者表型特點(diǎn)不同于正常分化發(fā)育過(guò)程中各系列細(xì)胞（different from normal，DFN）的異常細(xì)胞。由于腦脊液細(xì)胞數(shù)少，通常僅組成單管或2管多色抗體組合，常用的抗體可參考《多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)急性白血病及漿細(xì)胞腫瘤微小殘留病中國(guó)專家共識(shí)（2017版）》[13]。HEGDE等[5]采用MFC在51例侵襲性淋巴瘤患者腦脊液中檢出11例（22%）陽(yáng)性，而細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查僅檢出1例陽(yáng)性。最新數(shù)據(jù)表明，采用MFC和/或細(xì)胞形態(tài)學(xué)方法檢測(cè)腦脊液診斷初診成人ALL伴CNSL陽(yáng)性率可達(dá)25%，兒童初診時(shí)伴CNSL陽(yáng)性率為29.0%～34.5%，遠(yuǎn)高于單用細(xì)胞形態(tài)學(xué)方法[2，14]，MFC聯(lián)合細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查腦脊液，可明顯提高CNSL的診斷率[15]。與細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查陽(yáng)性的患者相比，細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查陰性但MFC陽(yáng)性患者腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)和腫瘤細(xì)胞百分比較低，且大多患者無(wú)癥狀[16]。我們?cè)谂R床工作中采用MFC技術(shù)也多次先于臨床和細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)白血病/淋巴瘤細(xì)胞中樞浸潤(rùn)。流式細(xì)胞術(shù)高度敏感，能夠在細(xì)胞計(jì)數(shù)非常低的樣本中準(zhǔn)確檢出惡性腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而較早地發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤(rùn)，提示臨床進(jìn)行早期干預(yù)。但是，MFC方法學(xué)對(duì)技術(shù)人員血液病理論知識(shí)、實(shí)驗(yàn)操作及數(shù)據(jù)分析、樣本的即時(shí)性等要求比較高。因?yàn)橹袠薪?rùn)腫瘤細(xì)胞的免疫表型可能發(fā)生改變，引起MFC的漏檢，所以當(dāng)MFC陰性而細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查陽(yáng)性時(shí)，并不能排除CNSL，需要臨床醫(yī)生和檢測(cè)人員綜合評(píng)估、仔細(xì)評(píng)判。

3 蛋白質(zhì)水平的標(biāo)志物

在疾病發(fā)展過(guò)程中，白血病細(xì)胞向腦組織遷移并與血腦屏障結(jié)合，通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）破壞細(xì)胞外基質(zhì)和管腔緊密連接蛋白，從而破壞血腦屏障，并協(xié)助形成致瘤的局部微環(huán)境[17]。在這一過(guò)程中，各種蛋白均可能在腦脊液中出現(xiàn)，并可作為潛在的CNSL的標(biāo)志物。

MMP是細(xì)胞外微環(huán)境主要的調(diào)節(jié)因子，與基底膜破壞有關(guān)，與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）共同促進(jìn)血管生成和腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[18]。在惡性膠質(zhì)瘤中，腦脊液MMP-9可能是早期檢測(cè)腫瘤進(jìn)展的標(biāo)志，在血液系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用的是MMP-2和MMP-9，主要降解細(xì)胞外基質(zhì)中的Ⅳ型膠原蛋白[19]。有學(xué)者比較了67例白血病患者（CNSL患者29例）腦脊液中的MMP表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CNSL患者M(jìn)MP-2水平明顯高于非CNSL患者和對(duì)照者，后兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示MMP-2可能有助于診斷CNSL[20]。原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤和非中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤細(xì)胞分泌型磷酸化糖蛋白1（secreted phosphorylated glycoprotein-1，SPP-1）存在差異表達(dá)[21]，急性B淋巴（母）細(xì)胞白血?。˙-acute lymphoblastic leukemia，B-ALL）患者復(fù)發(fā)時(shí)腦脊液細(xì)胞中SPP-1蛋白表達(dá)水平比初診時(shí)顯著升高[22]，提示腦脊液SPP-1或許可以作為預(yù)測(cè)CNSL的潛在靶標(biāo)。

腦脊液中VEGF與受體結(jié)合，可促進(jìn)血管生成、增加血管通透性、破壞血腦屏障，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移。與非CNSL患者相比，伴CNSL的ALL患者腦脊液中VEGF水平明顯升高[23]。與血清樣本相比，腦脊液樣本中的細(xì)胞因子和趨化因子可更好地反映CNSL的狀態(tài)[10]。ROBERTS等[24]發(fā)現(xiàn)，趨化因子配體-2（chemokine ligand-2 ，CCL2）具有破壞血腦屏障的作用，有利于白血病細(xì)胞進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)浸潤(rùn)，無(wú)論是腦脊液中，還是外周血中，CNSL患者的CCL2均高于非CNSL患者和對(duì)照者。CCL2增加與腫瘤中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移相關(guān)，可能是CNSL的發(fā)生機(jī)制之一[25]。ALL患者腦脊液中的可溶性白細(xì)胞介素-2受體（soluble interleukin-2 receptor，sIL2-R）水平對(duì)白血病細(xì)胞的識(shí)別能力優(yōu)于腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)，腦脊液sIL2-R臨界值為10 U/mL時(shí)，診斷敏感性為89.5%，特異性為89.6%，可作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累的客觀指標(biāo)。腦脊液sIL2-R水平或可作為診斷CNSL新的輔助指標(biāo)[26]。

總體而言，關(guān)于以上單一蛋白類標(biāo)志物對(duì)CNSL的診斷和預(yù)測(cè)作用，無(wú)論是特異性，還是敏感性，目前國(guó)內(nèi)外的相關(guān)研究仍缺乏實(shí)質(zhì)性的進(jìn)展，它們?cè)谂R床實(shí)踐中的價(jià)值仍不清楚，尚需要大樣本數(shù)據(jù)對(duì)相關(guān)指標(biāo)單用或聯(lián)用的診斷效能進(jìn)行更多的臨床評(píng)價(jià)。

4 腦脊液核酸檢測(cè)

急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia，AML）患者FLT3通常高表達(dá)，可能與存在FLT3內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)基因（internal tandem duplication of the FLT3，F(xiàn)LT3-ITD）、FLT3/D835Mt突變或者混合譜系白血病串聯(lián)重復(fù)基因（tandem duplication of the mixed lineage leukemia gene，MLL-TD）相關(guān)，ALL患者也存在不同程度的FLT3表達(dá)[27-28]。OZEKI等[27]發(fā)現(xiàn)，CNSL患者腦脊液FLT3 mRNA陽(yáng)性率及表達(dá)水平顯著高于完全緩解組和對(duì)照組非腫瘤患者，非CNSL患者腦脊液中FLT3基因表達(dá)多為陰性。腦脊液FLT3陽(yáng)性組單個(gè)核細(xì)胞數(shù)高于陰性組，LDH水平也更高，提示腦脊液FLT3表達(dá)與CNSL發(fā)生密切相關(guān)[28]。腦脊液WT1 mRNA水平與CNSL以及血液學(xué)復(fù)發(fā)也有很強(qiáng)的相關(guān)性[29]。盡管不能覆蓋所有CNSL患者，但腦脊液中FLT3和WT1表達(dá)水平的改變或可作為CNSL更敏感的早期診斷和療效判斷指標(biāo)。同時(shí)采用MFC和聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）檢測(cè)疾病特異性的免疫球蛋白重連基因IGHR重排和/或T細(xì)胞受體基因TCR重排評(píng)估ALL患兒腦脊液白血病浸潤(rùn)情況，并與傳統(tǒng)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)PCR檢測(cè)基因重排診斷CNSL的陽(yáng)性率可達(dá)60%，MFC檢測(cè)的陽(yáng)性率為46.6% ，細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的陽(yáng)性率僅為22.2%，MFC和PCR診斷效能是細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的2～3倍，提示腦脊液疾病特異性基因重排核酸檢測(cè)可作為ALL患者早期中樞浸潤(rùn)敏感的診斷方法。然而，基因重排檢測(cè)需要設(shè)計(jì)個(gè)性化疾病特異性的PCR引物，耗時(shí)且檢測(cè)成本高，也需要足夠量的腦脊液和白血病細(xì)胞，技術(shù)要求高，而且較容易出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因而臨床易見MFC陽(yáng)性但PCR不能檢出的情況，需要綜合判斷[30-31]，因此該技術(shù)臨床應(yīng)用尚不廣泛。

游離DNA（cell-free DNA，cfDNA）是存在于血液、尿液、腦脊液等體液中的細(xì)胞外DNA。正常情況下，腦脊液cfDNA水平較低，中樞浸潤(rùn)白血病/淋巴瘤患者腦脊液中可檢出腫瘤特異性的DNA——循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA）及其相關(guān)突變，輔助CNSL的診斷，可以彌補(bǔ)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查和MFC免疫分型的不足。約85%的初發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤（primary central nervous system lymphoma，PCNSL）患者攜帶MYD88（L265P）突變。數(shù)字PCR檢測(cè)腦脊液細(xì)胞DNA或cfDNA MYD88（L265P）突變?cè)\斷CNSL有極高的特異性[32]。有研究對(duì)中樞淋巴瘤組織靶向下一代測(cè)序（next generation sequencing，NGS），對(duì)獲得的突變位點(diǎn)，在外周血和腦脊液中采用數(shù)字PCR進(jìn)行個(gè)體化突變位點(diǎn)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)腦脊液cfDNA檢出率及突變頻率比血漿更高，且腦脊液檢測(cè)cfDNA與MFC免疫分型結(jié)果吻合度好[33]。對(duì)腦脊液行全外顯子測(cè)序，進(jìn)一步證實(shí)了腦脊液ctDNA診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤的高特異性，在系統(tǒng)性非中樞淋巴瘤患者腦脊液中均未檢測(cè)到ctDNA，且CNSL患者治療后，腦脊液MFC檢測(cè)陰性的患者，部分仍可檢出ctDNA[34]。

因此，基于普通PCR對(duì)腦脊液浸潤(rùn)細(xì)胞DNA和/或RNA，以及cfDNA中腫瘤特異性突變位點(diǎn)進(jìn)行數(shù)字PCR或NGS檢測(cè)，可能是敏感性更高的原發(fā)或繼發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤檢測(cè)方法。

5 組學(xué)檢測(cè)

ROY等[35]采用基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）的方法，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)B細(xì)胞淋巴瘤與其他良性疾病患者的腦脊液中差異定量和鑒定了500種蛋白質(zhì)，將兩者進(jìn)行了有效區(qū)分。GUO等[36]使用LC-MS/MS對(duì)比ALL患兒和對(duì)照者的腦脊液，鑒定出51種差異表達(dá)蛋白質(zhì)，并發(fā)現(xiàn)這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)并不是隨機(jī)的，相互之間有復(fù)雜的互動(dòng)網(wǎng)絡(luò)，其中多種蛋白質(zhì)都與癌癥有關(guān)，提示白血病細(xì)胞相關(guān)蛋白可以出現(xiàn)在腦脊液中。MO等[37]采用LCMS/MS對(duì)6例ALL伴CNSL患兒治療前后的腦脊液進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，并繪制了CNSL患兒腦脊液的蛋白質(zhì)組學(xué)圖譜，量化了化療前后發(fā)生變化的蛋白質(zhì)，證實(shí)這些蛋白質(zhì)可作為ALL疾病進(jìn)展標(biāo)志物以及CNSL新的治療靶點(diǎn)。然而，上述研究[35-37]樣本量均較小，觀察周期相對(duì)較短，需要擴(kuò)大樣本量，并延長(zhǎng)觀察時(shí)間，進(jìn)一步驗(yàn)證這些改變的蛋白質(zhì)在CNSL診斷中的作用。

代謝組學(xué)主要通過(guò)色譜、質(zhì)譜與核磁共振技術(shù)，以及幾種技術(shù)的聯(lián)合使用，定性或定量分析內(nèi)源性小分子代謝物，繼而快速、系統(tǒng)、全面地檢測(cè)各種因素導(dǎo)致的細(xì)胞生理或病理性代謝物變化，為疾病的早期診斷與預(yù)后監(jiān)測(cè)提供強(qiáng)有力的支持。目前，對(duì)血液病患者腦脊液代謝組學(xué)的研究較少。對(duì)腦原發(fā)或繼發(fā)中樞淋巴瘤、肺癌腦轉(zhuǎn)移或未轉(zhuǎn)移患者的腦脊液進(jìn)行代謝組學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，腦實(shí)體瘤患者與非腦實(shí)體瘤患者腦脊液在多種氨基酸和嘌呤代謝通路上存在顯著差異[38]。腦原發(fā)中樞淋巴瘤和肺癌腦轉(zhuǎn)移均存在植物鞘氨醇和L-谷氨酰胺水平的上調(diào)。植物鞘氨醇水平升高可能反映了相對(duì)較高的腫瘤細(xì)胞增殖速率和脂質(zhì)膜增加重塑；L-谷氨酰胺增高可能與腦腫瘤快速增長(zhǎng)所需的高能耗相關(guān)[39]。與腦原發(fā)中樞淋巴瘤患者相比，繼發(fā)中樞淋巴瘤患者腦脊液中5-氨基咪唑上調(diào)，但肌醇磷酸、高半胱氨酸和戊基蛋氨酸下調(diào)，可以反映出2種疾病之間固有的病理生理差異，或可用于2種疾病的鑒別診斷[40]。有研究發(fā)現(xiàn)，采用8個(gè)代謝產(chǎn)物的組合，可以鑒別診斷肺癌腦轉(zhuǎn)移與非腦轉(zhuǎn)移，曲線下面積為0.91；6個(gè)代謝物鑒別診斷繼發(fā)中樞淋巴瘤與腦轉(zhuǎn)移的曲線下面積為0.87；提示代謝組學(xué)可區(qū)分不同腦腫瘤患者腦脊液的代謝物差異，初步顯示出其診斷不同類型腦腫瘤的巨大潛力[40]。本課題組正在進(jìn)行的研究結(jié)果顯示，腦脊液代謝組學(xué)檢測(cè)可以有效輔助區(qū)分ALL患者中樞浸潤(rùn)情況，且其確診CNSL的時(shí)間可能更短（數(shù)據(jù)尚未發(fā)表），提示采用腦脊液代謝組學(xué)進(jìn)行CNSL的診斷和鑒別診斷，具有明確的臨床可操作性和實(shí)際的臨床價(jià)值，值得進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行臨床研究和推廣應(yīng)用。對(duì)相關(guān)特異性代謝產(chǎn)物的進(jìn)一步回溯分析，有助于從代謝角度理解腫瘤中樞浸潤(rùn)可能的新機(jī)制。

6 總結(jié)

血液系統(tǒng)惡性腫瘤中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累患者臨床預(yù)后較差。腦脊液腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)篩查和MFC檢測(cè)是目前診斷CNSL的主要方法，但其敏感性、特異性尚不能滿足臨床需求。蛋白標(biāo)志物、核酸分析，各種組學(xué)評(píng)估臨床研究的開展有望在腦脊液樣本中發(fā)現(xiàn)新的CNSL標(biāo)志物，并可能更早提示CNSL的發(fā)生，但仍然需要更多的臨床研究數(shù)據(jù)支持。未來(lái)研究不僅要著眼于發(fā)現(xiàn)新的和更敏感、更特異的腦脊液分析方法和新的標(biāo)志物，還要通過(guò)多中心的大樣本臨床試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志物、代謝物的臨床實(shí)用性。