夫西地酸聯(lián)合抗生素抑制膿腫分枝桿菌的研究

何志群， 滕 飛， 高 超， 曾雪婷， 許馨月， 杜佳依， 李樹(shù)華， 曾菊梅， 汪 川

(1. 四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院/華西第四醫(yī)院 中毒、檢驗(yàn)與精準(zhǔn)防治研究轉(zhuǎn)化中心， 成都 610041; 2.四川大學(xué)生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 成都 610041; 3.四川大學(xué)華西醫(yī)院人類疾病與免疫治療實(shí)驗(yàn)室， 成都 610041; 4.陸軍軍醫(yī)大學(xué)陸軍特色醫(yī)學(xué)中心藥劑科， 重慶 400042)

1 引 言

膿腫分枝桿菌(Mycobacteriumabscessus,M.ab)是一種具有多重天然耐藥性的快生型非結(jié)核分枝桿菌(Nontuberculous mycobacteria, NTM)，引起人體嚴(yán)重的呼吸道、皮膚和粘膜感染.感染主要通過(guò)傷口(導(dǎo)管或其他暴露的表面)與環(huán)境或受污染的設(shè)備(手術(shù)器械等)直接接觸而發(fā)生[1-3].近年來(lái)，膿腫分枝桿菌在臨床感染的患者人數(shù)迅速增加，而可供選擇的治療藥物相對(duì)匱乏，已經(jīng)成為了不可忽視的臨床問(wèn)題.

已經(jīng)有證據(jù)表明，膿腫分枝桿菌感染可能通過(guò)氣溶膠或接觸污染物的方式在人與人之間傳播[4-5].膿腫分枝桿菌因其固有的多重天然耐藥性導(dǎo)致對(duì)大多數(shù)常規(guī)抗生素及抗結(jié)核化合物廣泛耐藥，治療時(shí)藥物選擇比較局限.分離菌株的體外藥敏結(jié)果以及患者用藥史是選擇聯(lián)合用藥方案的重要參考：克拉霉素、阿奇霉素、頭孢西丁、阿米卡星、替加環(huán)素、亞胺培南/西司他丁等藥物對(duì)膿腫分枝桿菌具有較好的體外抑菌活性，臨床上選擇上述藥物聯(lián)合使用治療膿腫分枝桿菌感染.膿腫分枝桿菌藥敏試驗(yàn)與臨床療效相關(guān)性不確定以及獲得性耐藥使得治療效果更不理想，治愈率僅30%～50%.其中新型大環(huán)內(nèi)酯類藥物對(duì)大多數(shù)NTM治療比較有效，但膿腫分枝桿菌因其單拷貝靶標(biāo)基因突變?nèi)菀桩a(chǎn)生克拉霉素(23S rRNA基因)和阿米卡星(16S rRNA基因)的獲得性抗性突變，產(chǎn)生耐藥，導(dǎo)致治療失敗.頭孢西丁聯(lián)合治療快生分枝桿菌患者確實(shí)能夠提高治愈率，但在臨床菌株中檢測(cè)到該藥物敏感性下降[6-7].其他治療膿腫分枝桿菌的藥物在臨床上也存在不同程度的獲得性耐藥現(xiàn)象發(fā)生，導(dǎo)致患者無(wú)法獲得長(zhǎng)期的痰培養(yǎng)轉(zhuǎn)陰結(jié)果以及臨床癥狀的改善[8].在目前的抗生素選擇下，膿腫分枝桿菌感染對(duì)大多數(shù)患者來(lái)說(shuō)是一種難以治愈的慢性感染.因此尋找新的抗菌藥物策略包括老藥新用以及聯(lián)合用藥對(duì)于選擇抗膿腫分枝桿菌藥物尤其重要.

夫西地酸(Fusidic acid，C31H48O6)對(duì)革蘭氏陽(yáng)性球菌尤其對(duì)葡萄球菌高度敏感，對(duì)某些革蘭氏陰性菌有一定的抗菌作用，也可抗厭氧菌感染，與其它抗生素?zé)o交叉耐藥性，常用于細(xì)菌性治療.多項(xiàng)體內(nèi)外研究[9-12]表明夫西地酸聯(lián)用其他抗生素對(duì)葡萄球菌協(xié)同抗菌作用顯著，能夠明顯縮窄金黃色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的耐藥突變選擇窗，抑制耐藥突變體的產(chǎn)生.另外夫西地酸聯(lián)用氨曲南或粘菌素對(duì)耐藥銅綠假單胞菌具有協(xié)同抗菌作用，夫西地酸聯(lián)用策略能夠一定程度逆轉(zhuǎn)菌株對(duì)藥物由耐藥變?yōu)槊舾袪顟B(tài)[13-14].已經(jīng)發(fā)現(xiàn)部分分枝桿菌對(duì)夫西地酸具有一定程度的敏感性，包括堪薩斯分枝桿菌，麻風(fēng)分枝桿菌，以及結(jié)核分枝桿菌.計(jì)算機(jī)成功模擬預(yù)測(cè)分枝桿菌FtsZ (Filamentous temperature-sensitive mutant Z)是夫西地酸作用的有效靶點(diǎn)[15].

本研究首先開(kāi)展了夫西地酸對(duì)膿腫分枝桿菌的抑菌活性研究，首次發(fā)現(xiàn)夫西地酸對(duì)膿腫分枝桿菌具有較好的體外抑菌活性；然后進(jìn)一步開(kāi)展了夫西地酸聯(lián)合阿奇霉素等藥物對(duì)膿腫分枝桿菌的抑菌活性研究，得到具有良好協(xié)同作用的兩種藥物組合，為臨床開(kāi)發(fā)新的治療膿腫分枝桿菌感染藥物方案提供參考.

2 材料和方法

2.1 材 料

2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株： 膿腫分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(ATCC 19977)；膿腫分枝桿菌臨床分離株7株(MAB-S1、MAB-S2、 MAB-S3、 MAB-R1、 MAB-R2、 MAB-R3、 MAB-R4)由四川大學(xué)華西第四醫(yī)院微生物室提供.

2.1.2 藥物與培養(yǎng)基 夫西地酸由四川大學(xué)生物治療國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室余洛汀教授課題組提供；阿奇霉素(Azithromycin, C38H72N2O12，批號(hào)：C11104216)和頭孢曲松鈉(Ceftriaxone sodium, C18H17N8NaO7S3，批號(hào)：C11330323)均購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司；貝達(dá)喹啉(Bedaquiline, C32H31BrN2O2，批號(hào)：B349211337769)購(gòu)自美國(guó)APExBIO公司；7H9肉湯/瓊脂培養(yǎng)基(BD-Difco)均嚴(yán)格按照說(shuō)明配制，4 ℃保存?zhèn)溆?；Resazurin(麥克林生化科技)，二甲基亞砜DMSO (MP Biomedicals)，Tween 80 (Sigma-Aldrich).

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 膿腫分枝桿菌的準(zhǔn)備 接種環(huán)挑取復(fù)蘇活化后的單個(gè)菌落在10 mL 7H9肉湯培養(yǎng)基中，37 ℃搖床恒溫振搖至菌液生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期：以7H9肉湯培養(yǎng)基作空白對(duì)照管，測(cè)得OD在600 nm波長(zhǎng)下吸光度約為0.5時(shí)，取菌液與新鮮7H9肉湯培養(yǎng)基稀釋制備菌懸液備用(約1×104CFU/mL).

2.2.2 藥物準(zhǔn)備 夫西地酸溶解于DMSO，頭孢曲松鈉溶解于無(wú)菌水，阿奇霉素溶解于無(wú)水乙醇，三種藥物均配制為10 mg/mL的儲(chǔ)存濃度；貝達(dá)喹啉溶解于無(wú)菌水，配制為5 mg/mL的儲(chǔ)存濃度，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌后-20 ℃凍存?zhèn)溆?

圖1 藥物結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1 The structure of Chemicals

2.2.5 最小殺菌濃度(MBC)測(cè)定 96孔板微量稀釋藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)后，分別取各藥物單獨(dú)作用和藥物聯(lián)用MIC90及MIC90以上三孔(無(wú)明顯細(xì)菌生長(zhǎng)孔)的孔中50 μL菌液(包括生長(zhǎng)對(duì)照菌液)作10-1、10-2、10-3、10-4稀釋后均勻涂布到無(wú)藥物的7H9瓊脂培養(yǎng)基上，一式三份，平板于5% CO2培養(yǎng)箱37℃倒置培養(yǎng)3 d，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù).規(guī)定能夠殺滅培養(yǎng)基內(nèi)99.9%的細(xì)菌(與無(wú)藥生長(zhǎng)對(duì)照孔平板培養(yǎng)后菌落數(shù)比較)的最小藥物濃度作為該藥的最小殺菌濃度MBC.

2.2.6 膿腫分枝桿菌臨床株驗(yàn)證藥物協(xié)同作用 采用2.2.4中方法先在96孔微孔板中測(cè)定夫西地酸與阿奇霉素、頭孢曲松鈉、貝達(dá)喹啉4種藥物單獨(dú)作用臨床膿腫分枝桿菌的體外抑菌作用，獲得各藥物針對(duì)臨床株的單獨(dú)MIC.結(jié)合各藥物聯(lián)用抑制標(biāo)準(zhǔn)株的結(jié)果，設(shè)置藥物兩兩聯(lián)用濃度梯度檢測(cè)聯(lián)用方案對(duì)臨床株的體外抑菌活性，比較膿腫分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株與臨床株對(duì)聯(lián)合用藥方案的體外敏感情況.夫西地酸聯(lián)用阿奇霉素的濃度為：200/50、 100/25、 50/12.5、 25/6.25、 12.5/3.13、 6.25/1.56、 3.13/0.78、 1.56/0.39、 0.78/0.20、 0.39/0.10 μg/mL；夫西地酸聯(lián)用頭孢曲松鈉的濃度為：200/50、 100/25、 50/12.5、 25/6.25、 12.5/3.13、 6.25/1.56、 3.13/0.78、 1.56/0.39、 0.78/0.20、 0.39/0.10 μg/mL(個(gè)別不敏感菌株從200/400或400/200起始濃度向下2倍梯度稀釋)；夫西地酸聯(lián)用貝達(dá)喹啉的濃度為：200/3.13、 100/1.56、 50/0.78、 25/0.39、 12.5/0.20、 6.25/0.10、 3.13/0.05、 1.56/0.02、 0.78/0.01、 0.39/0.006 μg/mL；在96孔板上得到兩種藥物不同濃度的組合，按照上述操作測(cè)定各濃度組合下對(duì)膿腫分枝桿菌臨床株的生長(zhǎng)抑制率.根據(jù)藥物單獨(dú)作用和聯(lián)用時(shí)MIC計(jì)算FICI值，評(píng)估分析不同藥物組合聯(lián)用對(duì)臨床株的抑菌效果.

3.1 藥物的最低抑菌濃度

微孔板二倍稀釋法測(cè)定MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，針對(duì)膿腫分枝桿菌的體外抑菌活性測(cè)定，單獨(dú)使用夫西地酸、阿奇霉素、頭孢曲松鈉和貝達(dá)喹啉時(shí)MIC50分別為6.25、 1.56、 1.56和0.78 μg/mL，MIC90分別為50、 6.25、 3.13及3.13 μg/mL (結(jié)果見(jiàn)圖2).

圖2 MABA法測(cè)定藥物單用對(duì)膿腫分枝桿菌的MIC結(jié)果

3.2 夫西地酸分別聯(lián)用三種藥物的協(xié)同效應(yīng)

夫西地酸分別聯(lián)用阿奇霉素、頭孢曲松鈉和貝達(dá)喹啉對(duì)標(biāo)準(zhǔn)膿腫分枝桿菌的抑菌作用，隨著藥物聯(lián)用濃度不同而表現(xiàn)出不同的抑菌效果(結(jié)果見(jiàn)圖3).夫西地酸與阿奇霉素聯(lián)用表現(xiàn)出協(xié)同作用，當(dāng)12.5 μg/mL夫西地酸聯(lián)用0.39 μg/mL阿奇霉素(或3.13 μg/mL 夫西地酸聯(lián)用1.56 μg/mL阿奇霉素)對(duì)膿腫分枝桿菌抑菌作用效果最佳，表現(xiàn)出協(xié)同的抗菌作用，夫西地酸聯(lián)用劑量降低為單用的1/4，同時(shí)阿奇霉素聯(lián)用劑量降低為單用的1/16.夫西地酸與頭孢曲松鈉聯(lián)用同樣表現(xiàn)出協(xié)同作用，當(dāng)6.25 μg/mL夫西地酸聯(lián)用0.39 μg/mL頭孢曲松鈉對(duì)膿腫分枝桿菌抑菌作用效果最佳，表現(xiàn)出協(xié)同的抗菌作用，夫西地酸聯(lián)用劑量降低為單用的1/8，同時(shí)頭孢曲松鈉聯(lián)用劑量降低為單用的1/8；夫西地酸與抗結(jié)核藥物貝達(dá)喹啉聯(lián)用表現(xiàn)出相加作用，即6.25 μg/mL夫西地酸聯(lián)用 1.56 μg/mL貝達(dá)喹啉效果最佳，夫西地酸聯(lián)用劑量降低為單用的1/8，貝達(dá)喹啉聯(lián)用劑量降低為單用的1/2.

上述結(jié)果表明,夫西地酸與三種藥物聯(lián)用皆能夠表現(xiàn)出良好的協(xié)同或相加作用；三種組合中，夫西地酸與大環(huán)內(nèi)酯類抗生素阿奇霉素或與頭孢菌素類藥物頭孢曲松鈉聯(lián)用協(xié)同抑菌效應(yīng)良好，與二芳基喹啉類抗結(jié)核藥物貝達(dá)喹啉僅表現(xiàn)出相加作用，無(wú)協(xié)同作用(結(jié)果見(jiàn)表1).

圖3 棋盤格法測(cè)定夫西地酸聯(lián)用藥物對(duì)膿腫分枝桿菌的抑菌結(jié)果

3.3 藥物的最小殺菌濃度

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，夫西地酸與阿奇霉素、頭孢曲松鈉和貝達(dá)喹啉對(duì)標(biāo)準(zhǔn)膿腫分枝桿菌的MBC分別為50、12.5、3.13、6.25 μg/mL，四種藥物的單用MBC與MIC比值范圍在1.0～2.0，說(shuō)明對(duì)標(biāo)準(zhǔn)膿腫分枝桿菌具有良好的殺菌活性.藥物聯(lián)用后MBC有所下降，夫西地酸聯(lián)用阿奇霉素后，夫西地酸的MBC降低4倍，阿奇霉素的MBC降低16倍；夫西地酸聯(lián)用頭孢曲松鈉后兩者的MBC皆降低8倍.結(jié)果表明夫西地酸聯(lián)用上述兩種藥物能夠增強(qiáng)其對(duì)膿腫分枝桿菌的殺菌作用，降低藥物的體外最小殺菌濃度，夫西地酸與阿奇霉素聯(lián)用能顯著降低阿奇霉素的最小殺菌濃度 (結(jié)果見(jiàn)表2).

表2 夫西地酸及三種藥物作用于膿腫分枝桿菌的MBC結(jié)果

3.4 聯(lián)合用藥對(duì)膿腫分枝桿菌臨床株的協(xié)同作用

夫西地酸與阿奇霉素、頭孢曲松鈉和貝達(dá)喹啉對(duì)膿腫分枝桿菌臨床株的最小抑菌濃度與標(biāo)準(zhǔn)株有所不同(結(jié)果見(jiàn)圖4).夫西地酸對(duì)S型臨床株的MIC90為100 μg/mL，對(duì)R型臨床株的MIC90為100～200 μg/mL，相較于標(biāo)準(zhǔn)株(50 μg/mL)有1～2倍升高；阿奇霉素對(duì)S型和R型的MIC90分別為3.13～50 μg/mL及1.56～6.25 μg/mL，表明阿奇霉素對(duì)R型菌落更加敏感；貝達(dá)喹啉對(duì)S型和R型的MIC90分別為0.20～0.78 μg/mL及0.10～0.20 μg/mL；當(dāng)夫西地酸聯(lián)用阿奇霉素作用于膿腫分枝桿菌臨床株后，三個(gè)S型臨床株的FICI值為0.09～0.28，皆小于0.5，表現(xiàn)出協(xié)同作用.其中MAB-S1株夫西地酸聯(lián)用劑量降低為單用的1/32, 同時(shí)阿奇霉素聯(lián)用劑量降低為單用的1/4.類似地，針對(duì)MAB-S2株夫西地酸聯(lián)用劑量降低為單用的1/16, 阿奇霉素聯(lián)用劑量降低為單用的1/16.而針對(duì)MAB-S3株夫西地酸聯(lián)用劑量也降低為單用的1/16, 阿奇霉素聯(lián)用劑量則降低為單用的1/32;另外四個(gè)R型臨床株的FICI值為0.53～1.06，無(wú)協(xié)同作用.夫西地酸聯(lián)用頭孢曲松鈉對(duì)于膿腫分枝桿菌臨床株并未表現(xiàn)出針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)株相似的協(xié)同作用，S型和R型的FICI指數(shù)均在0.5～1.5之間，表現(xiàn)出相加或無(wú)關(guān)作用.夫西地酸聯(lián)用貝達(dá)喹啉對(duì)于臨床株的FICI指數(shù)在1.12～1.5之間，僅表現(xiàn)出無(wú)關(guān)作用.

體外聯(lián)合藥敏結(jié)果表明夫西地酸與三種藥物聯(lián)用也能夠在膿腫分枝桿菌臨床株上一定程度表現(xiàn)出良好的協(xié)同或相加作用；其中尤其以夫西地酸與阿奇霉素聯(lián)用針對(duì)S型臨床株協(xié)同效應(yīng)最好，極大地降低藥物濃度(最高達(dá)32*16倍).與頭孢曲松鈉、貝達(dá)喹啉僅表現(xiàn)出相加或無(wú)關(guān)作用，無(wú)協(xié)同作用(結(jié)果見(jiàn)表3).

圖4 膿腫分枝桿菌臨床株驗(yàn)證夫西地酸聯(lián)用阿奇霉素的協(xié)同作用

表3 夫西地酸聯(lián)合三種藥物作用于膿腫分枝桿菌臨床株結(jié)果

4 討 論

NTM普遍存在于自然界土壤和水等環(huán)境中，人和動(dòng)物均能被感染.全球NTM感染的發(fā)病率和患病率整體呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)增長(zhǎng)趨勢(shì)，在部分國(guó)家和地區(qū)甚至超過(guò)結(jié)核發(fā)病率.我國(guó)鳥(niǎo)分枝桿菌復(fù)合群和膿腫分枝桿菌復(fù)合群是引起NTM肺病最常見(jiàn)的病原體[20-21].NTM肺病屬于慢性病，臨床癥狀與結(jié)核病相似，對(duì)抗結(jié)核藥物天然耐藥，容易被誤診誤治.膿腫分枝桿菌的固有廣泛耐藥性源于細(xì)胞壁的低滲透性、缺乏藥物活化系統(tǒng)、外排泵的誘導(dǎo)和廣泛的藥物修飾酶的產(chǎn)生[22-23].

夫西地酸是一種具有類甾體骨架的抗生素，從梭鏈孢酸脂球真菌中獲得，通過(guò)干擾延長(zhǎng)因子G阻止核糖體易位抑制細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成發(fā)揮抑菌或殺菌作用.夫西地酸自從1962年被提取出來(lái)后被多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)于臨床應(yīng)用，不良反應(yīng)輕，有組織穿透力強(qiáng)、藥物濃度高以及更安全可靠等特點(diǎn)高效抗菌，因其獨(dú)特的抑菌機(jī)制而不易與其它抗生素發(fā)生交叉耐藥.本文探究夫西地酸對(duì)具有天然耐藥性的膿腫分枝桿菌的抗菌活性，以及夫西地酸聯(lián)合阿奇霉素等藥物對(duì)膿腫分枝桿菌的協(xié)同抑菌作用.

阿奇霉素為十五元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，和克拉霉素被認(rèn)為是近20年來(lái)治療NTM病的重要新藥.其作用機(jī)制是通過(guò)阻礙細(xì)胞核蛋白 50S 亞基的聯(lián)結(jié)來(lái)抑制蛋白質(zhì)合成從而發(fā)揮抑菌作用，膿腫分枝桿菌對(duì)其相對(duì)不易產(chǎn)生耐藥.本研究中夫西地酸單獨(dú)作用于膿腫分枝桿菌的MIC值較高，4株S型菌株(包括標(biāo)準(zhǔn)株)與4株R型菌株的MIC90分別為50～100 μg/mL 與100～200 μg/mL.阿奇霉素單獨(dú)作用于4株S型菌株與4株R型菌株的MIC90為3.13～50 μg/mL、1.56～6.25 μg/mL.S型菌株中兩株為阿奇霉素耐藥，4株R型菌株皆為阿奇霉素敏感或中度敏感.聯(lián)合用藥后標(biāo)準(zhǔn)株的夫西地酸與阿奇霉素MIC90降為1/4 (12.5 μg/mL)與1/16 (0.39 μg/mL)，臨床株的夫西地酸與阿奇霉素MIC90降為1/32 (3.13 μg/mL)與1/32 (1.56 μg/mL)；夫西地酸聯(lián)用阿奇霉素后可以極大地降低抗生素使用劑量，恢復(fù)阿奇霉素對(duì)耐藥膿腫分枝桿菌(MAB-S2、 MAB-S3)的敏感性.夫西地酸聯(lián)合阿奇霉素用藥組合對(duì)肺炎支原體以及耐藥肺炎支原體也表現(xiàn)出體外協(xié)同抑菌作用[24].膿腫分枝桿菌分為光滑型和粗糙型兩種菌落形態(tài)，單用時(shí)R型菌落相比S型菌落對(duì)阿奇霉素更敏感，推測(cè)可能與粗糙型膿腫分枝桿菌的細(xì)胞壁上糖肽磷脂類物質(zhì)含量比較低，阿奇霉素藥物更容易進(jìn)入胞內(nèi)有關(guān)；其次夫西地酸聯(lián)用阿奇霉素僅在S型菌落上展現(xiàn)出優(yōu)異的協(xié)同作用，可能因?yàn)榉蛭鞯厮嶙鳛轭惞檀伎股?，具有?qiáng)大的脂溶性，良好的滲透力有助于阿奇霉素進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部作用于核蛋白發(fā)揮抑制膿腫分枝桿菌生長(zhǎng)和繁殖的作用.同時(shí)R型菌落更容易高度聚集，群體抵抗阿奇霉素的能力相比S型更強(qiáng)；已有文獻(xiàn)[25]證明膿腫分枝桿菌R型菌落在人巨噬細(xì)胞中接受阿奇霉素處理后存活率較S型菌落顯著更高，本次實(shí)驗(yàn)在臨床株上也同這一現(xiàn)象一致.

頭孢曲松鈉是第三代頭孢菌素類抗生素，屬于β-內(nèi)酰胺抗生素，通過(guò)結(jié)合細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋白而抑制胞壁的合成達(dá)到抗菌作用.同樣的，頭孢曲松鈉單用MIC90為3.13 μg/mL，與夫西地酸聯(lián)合用藥后MIC90為0.39 μg/mL.頭孢曲松鈉與夫西地酸聯(lián)用，推測(cè)可能是頭孢菌素作用于膿腫分枝桿菌細(xì)胞壁造成胞壁破損，更利于夫西地酸進(jìn)入胞內(nèi)作用于核糖體發(fā)揮作用，但是這一協(xié)同現(xiàn)象并未在臨床株中觀察到.貝達(dá)喹啉是一種二芳基喹啉抗結(jié)核新藥，用于耐多藥結(jié)核病聯(lián)合治療，通過(guò)抑制分枝桿菌ATP合酶阻斷能量供應(yīng)發(fā)揮作用.在體外對(duì)膿腫分枝桿菌有很好的抑菌活性，但其殺菌活性較弱[26-27]，本研究發(fā)現(xiàn)貝達(dá)喹啉單獨(dú)的MIC90為3.13 μg/mL，與夫西地酸聯(lián)合用藥后MIC90為1.56 μg/mL，該結(jié)果與文獻(xiàn)中趨勢(shì)一致，且與夫西地酸聯(lián)用也僅表現(xiàn)出相加的抑菌活性，無(wú)殺菌活性方面的改變，在臨床株中聯(lián)合用藥結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)株大致一致，僅觀察到相加與無(wú)關(guān)作用.

本研究結(jié)果可提示臨床疑似膿腫分枝桿菌除進(jìn)行分子菌種鑒定以外，還需進(jìn)行必要的分離培養(yǎng)以便菌落分型，單藥藥敏輔以聯(lián)合藥敏試驗(yàn)，能為更有效地診斷和治療膿腫分枝桿菌感染提供重要參考.針對(duì)類似阿奇霉素等抗生素出現(xiàn)臨床分離菌株單藥耐藥情況時(shí)，可嘗試與夫西地酸等不同抗菌機(jī)制的抗生素聯(lián)用，一定程度上能夠恢復(fù)對(duì)該藥的敏感性，增加可供選擇的治療藥物，同時(shí)也降低各藥物使用劑量，減少單藥耐藥的產(chǎn)生.聯(lián)合用藥能為患者治療帶來(lái)除協(xié)同增加抗菌效能外更多的獲益：降低毒副反應(yīng)以及減少單藥耐藥發(fā)生，避免無(wú)藥可治.老藥新用策略正在成為發(fā)現(xiàn)常見(jiàn)病和罕見(jiàn)病藥物的一種獨(dú)特方法[28].藥物再利用的優(yōu)勢(shì)不僅是因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞毒性、作用機(jī)制是已知的，而且這些化合物的大部分不良反應(yīng)都已經(jīng)得到充分的證明，同時(shí)還能極大地降低藥物開(kāi)發(fā)成本.

夫西地酸及阿奇霉素的聯(lián)合用藥組合在體外對(duì)膿腫分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株及臨床株均具有良好的協(xié)同抑菌活性，該抑菌效果仍需在大樣本臨床株中進(jìn)行驗(yàn)證，建立動(dòng)物模型研究體內(nèi)藥效、藥代試驗(yàn)，以及開(kāi)展完全隨機(jī)對(duì)照的臨床試驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步觀察臨床效果，并最終為臨床治療膿腫分枝桿菌感染聯(lián)合用藥做出指導(dǎo).