中成藥復(fù)方丹參片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

母 丹

（重慶市生物技術(shù)研究所有限責(zé)任公司 重慶 401121）

中藥復(fù)方提取物是一個(gè)較復(fù)雜的混合物，為提高中藥質(zhì)量，保證用藥的安全、合理、有效，在中藥制劑的研究，生產(chǎn)，保管，供應(yīng)及臨床使用過程中，都應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的分析檢驗(yàn)，全面控制中藥制劑的質(zhì)量。在平時(shí)工作中，中藥整個(gè)制作流程，從原料采購(gòu)、生產(chǎn)設(shè)備、生產(chǎn)工藝、檢驗(yàn)檢測(cè)到儲(chǔ)存都應(yīng)該嚴(yán)格遵守中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本論文按《中國(guó)藥典》（2015年版一部）[1]質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察復(fù)方丹參片的質(zhì)量，主要是用高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參片中每片含丹參量，以丹參酮IIA的含量來判斷，復(fù)方丹參片中每片含丹參以丹參酮IIA計(jì)不得少于0.20mg。

一、復(fù)方丹參片的介紹

（一）復(fù)方丹參片的制法

按照《中國(guó)藥典》中規(guī)定的方法制得。丹參450g，三七141g，冰片8g這三味中藥材，先將丹參提取三次，第一次加入乙醇回流，過濾，回收濃縮至相對(duì)密度1.30（55～60℃）。第二次加50%的乙醇回流1.5小時(shí)，過濾。第三次加水回流2小時(shí)，過濾，合并后面兩次的濾液再回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度1.40（55～60℃），與第一次的濃縮液合并，混勻，制成相對(duì)密度為1.35～1.39（55℃）的清膏。將三七粉碎成細(xì)粉，與丹參清膏拌勻，干燥，制成顆粒，將冰片研細(xì)，與上述顆?；靹颍瑝褐瞥? 000片，或包糖衣或薄膜衣，即得。

（二）復(fù)方丹參片的藥理作用

復(fù)方丹參片是由丹參、三七及冰片按一定比例互配制成的中成藥[2]，具有活血化淤、理氣止痛的功效。常用于活血化瘀，理氣止痛及氣滯血瘀所致的胸中憋悶，癥見胸悶、心前刺痛、心絞痛等。臨床上，常用于心血管疾病方面的治療，因此必須保證復(fù)方丹參片的產(chǎn)品質(zhì)量，研究其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有著極其重要的作用。

二、實(shí)驗(yàn)部分

本論文實(shí)驗(yàn)根據(jù)中國(guó)藥典2015年版一部檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)復(fù)方丹參片進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)，共檢測(cè)了20100901、20100902、20100903三批復(fù)方丹參片，規(guī)格為0.3g。

（一）性狀

根據(jù)藥典的方法，對(duì)復(fù)方丹參片的外觀性質(zhì)進(jìn)行記載。

（二）定性鑒別

按照《中國(guó)藥典》2015年版一部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定。

1.樣品色譜中，樣品色譜和丹參酮IIA對(duì)照品色譜相同位置上，當(dāng)顯現(xiàn)出相同顏色的斑點(diǎn)后，馬上噴上1%香草醛硫酸溶液，再110℃加熱顯色。在與冰片對(duì)照品色譜相同的位置上，顯現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)（色譜圖見圖1）。

圖1 復(fù)方丹參片中丹參與冰片的TLC鑒別

2.供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（色譜圖見圖2）。

圖2 復(fù)方丹參片中三七的TLC鑒別

（三）檢查

復(fù)方丹參片為片劑，除按照《中國(guó)藥典》2015年版通則0101片劑項(xiàng)下的規(guī)定測(cè)定其重量差異，崩解時(shí)限項(xiàng)目外，還應(yīng)該測(cè)定砷鹽、重金屬、微生物限度的指標(biāo)。

1.重量差異

取3批樣品各20片，按重量差異檢查法（《中國(guó)藥典》2015年版通則0101）檢查結(jié)果。

2.崩解時(shí)限

按《中國(guó)藥典》2015年版通則0921檢查法檢查。

3.重金屬

按《中國(guó)藥典》2015年版四部重金屬檢查法第二法檢查。

4.砷鹽

取本品研細(xì)，取1g，加10%硝酸鎂乙醇液10mL，點(diǎn)燃，熄滅后，緩緩在550℃熾灼使完全炭化、放冷，殘?jiān)欲}酸溶液（2～10）10mL時(shí)溶解，將溶液移入檢砷瓶中，坩堝用13mL的水分次洗滌干凈，洗液均加入檢砷瓶中，再加3mL鹽酸，按《中國(guó)藥典》2015版四部砷鹽檢查法項(xiàng)下第一法（古蔡氏法），自“再加碘化鉀試液5mL”起，依法操作，檢測(cè)3批樣品中砷鹽含量。

5.微生物限度檢查

按《中國(guó)藥典》2015年版四部（通則1105）檢測(cè)法檢查。

復(fù)方丹參片屬于中藥復(fù)方制劑，其處方組成為丹參-三七-冰片（450∶141∶8），實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，由于復(fù)方丹參片中含有丹參和冰片，這兩種中藥材均含有抑制菌落生長(zhǎng)的物質(zhì)，對(duì)微生物限度檢查結(jié)果會(huì)產(chǎn)生一定的影響，在進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，由于常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法檢出率較低，為了制定科學(xué)合理的復(fù)方丹參片微生物限度檢驗(yàn)方法，制定出科學(xué)合理的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，特采用薄膜過濾法對(duì)細(xì)菌、酵母菌及霉菌進(jìn)行檢查，以消除藥品中抑菌成分的干擾。

三、有效成分含量測(cè)定

為了更好地控制制劑的質(zhì)量，對(duì)處方中的有效成分進(jìn)行含量測(cè)定，擬選擇處方中主藥丹參所含的有效成分丹參酮IIA作為控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。由于高效液相在藥品分析定量方面應(yīng)用廣泛、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、精密度高等優(yōu)點(diǎn)。故參照《中國(guó)藥典》2015年版有關(guān)規(guī)定，建立了高效液相色譜法測(cè)定丹參酮IIA的含量測(cè)定方法。

（一）丹參酮IIA的測(cè)定

丹參酮IIA照高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定。

1.色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6×250mm粒度 5-Micron）；流動(dòng)相：甲醇：水為73：27；柱溫：室溫；流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm；理論板數(shù)按丹參酮IIA峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.配液

制備對(duì)照品溶液，精密稱取丹參酮Ⅱ＜[A]＞對(duì)照品10mg，放置在50mL的棕色量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，搖勻。精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1mL中含丹參酮Ⅱ＜[A]＞40μg）。

供試品溶液的制備取本品10片，除去糖衣片，用乳缽研細(xì)至粉末，精密稱取1g，加入甲醇25mL，稱定重量并記錄，超聲處理15分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻后過濾，取續(xù)濾液，即得。

（二）線性關(guān)系考察

精密移取對(duì)丹參酮IIA照品溶液0μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL、14μL分別進(jìn)樣，測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（三）精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)丹參酮IIA對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)定。

（四）重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密吸取取同一批號(hào)供試品液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣3次，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)定。

（五）供試品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定即得。

四、結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)中對(duì)藥物進(jìn)行的質(zhì)量評(píng)價(jià)，所涉及到的檢測(cè)項(xiàng)目有：性狀、鑒別、粒度、水分、溶化性、裝量差異、含量測(cè)定、微生物限度。通過本次實(shí)驗(yàn)加深了對(duì)藥品檢查項(xiàng)目的了解，以及在操作過程中很多問題也在實(shí)踐中得到解決。[3]

本論文按照《中國(guó)藥典》2015版復(fù)方丹參片的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，依次進(jìn)行性狀檢驗(yàn)；鑒別項(xiàng)檢驗(yàn)；有關(guān)物質(zhì)、崩解時(shí)限、微生物限度的檢查；含量測(cè)定；完成了對(duì)三個(gè)批號(hào)復(fù)方丹參片的質(zhì)量檢測(cè)。其檢驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1

三批復(fù)方丹參片的片重差異、重金屬、砷鹽、含量測(cè)定的檢查符合藥典的規(guī)定，經(jīng)薄層鑒別證實(shí)復(fù)方丹參片中含有丹參、冰片和三七。通過線性、精密度、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證該定量體系簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用做復(fù)方丹參片的質(zhì)量控制。[4]

復(fù)方丹參片在臨床上應(yīng)用廣泛，但是不同的生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)出來的產(chǎn)品質(zhì)量也不盡相同，其中三七和冰片的含量也存在較大的差異。丹參由于產(chǎn)地、時(shí)間、來源等的差異，即使同一企業(yè)的的丹參不同批次的產(chǎn)品也會(huì)存在差異。又由于冰片具有揮發(fā)性，其保存不當(dāng)也會(huì)回復(fù)方丹參片的質(zhì)量造成影響。因此，研究復(fù)方丹參片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其重要，提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)勢(shì)在必行。