小熊貓魏氏梭菌與大腸桿菌混合感染的診斷

李 達(dá)，湯德元，張玲麗，盧志遠(yuǎn)，王 琦，肖圖雄，謝景超，陳巧麗

(1.貴陽(yáng)黔靈山公園動(dòng)物園，貴州 貴陽(yáng) 550003；2.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025)

魏氏梭菌(也稱(chēng)產(chǎn)氣莢膜梭菌)病是以患病動(dòng)物器官出血為主要特征的疫病，俗稱(chēng)“腸毒血癥”，可導(dǎo)致動(dòng)物急性死亡且病死率高[1]。小熊貓屬于浣熊科動(dòng)物，與其他動(dòng)物相比較容易感染該病[2,3]。2020年6月下旬，貴州省某動(dòng)物園飼養(yǎng)的2只成年小熊貓發(fā)病，隨后相繼死亡。經(jīng)了解，該動(dòng)物園未接種相關(guān)疫苗，曾使用青霉素、阿莫西林等藥物進(jìn)行治療，但效果不佳。筆者根據(jù)臨床癥狀、病理變化、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診為魏氏梭菌與大腸桿菌混合感染，現(xiàn)將診斷情況報(bào)道如下，為此類(lèi)疫病的防治提供參考。

1 臨床癥狀

該動(dòng)物園共飼養(yǎng)有8只成年小熊貓，其中1只發(fā)病后急性死亡。另1只早期癥狀為精神沉郁、厭食、步態(tài)蹣跚、不合群、時(shí)而臥倒、腹脹、腹瀉、糞便呈膿樣且?guī)аz，繼而嘔吐(帶血)、暈倒，持續(xù)1天后死亡。

2 病理變化

剖檢病死小熊貓可見(jiàn)心臟有出血斑點(diǎn)，心肌色淡；肝臟表面有卡他性炎癥，淤血呈淡紅色；脾臟腫大，皮質(zhì)呈灰黃色；肺臟水腫帶血絲，有部分化膿灶(見(jiàn)圖1A)；胰腺被膜有大量氣泡；小腸黏膜有針尖狀出血點(diǎn)，腸壁變薄，黏膜壞死，漿膜下嚴(yán)重出血；膀胱充盈，腸系膜淋巴結(jié)出血(見(jiàn)圖1B)；腎臟腫大，皮質(zhì)有大量灰黃色斑點(diǎn)(見(jiàn)圖1C)；腦血管充血，腦膜有點(diǎn)狀出血。

圖1 病死小熊貓剖檢病理變化

3 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)(1)無(wú)菌取2只病死小熊貓的血液、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、淋巴結(jié)組織病料分別接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基(需氧培養(yǎng))、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基(厭氧培養(yǎng))，37 ℃培養(yǎng)24～72 h。結(jié)果：在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)不良；在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出大量的光滑、隆起、灰白色、半透明菌落；在麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)出較大的光滑、圓形、濕潤(rùn)、隆起、粉紅色菌落。(2)分別取單一菌落在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃需氧和厭氧純培養(yǎng)24～72 h。結(jié)果：在需氧條件下生長(zhǎng)菌落呈無(wú)色透明(大的菌落略呈淡灰色)，出現(xiàn)明顯透明的β溶血環(huán)；挑取菌落革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)兩端鈍圓的紅色革蘭氏陰性桿菌(見(jiàn)圖2)。在厭氧條件下生長(zhǎng)菌落呈半透明、表面光滑；挑取菌落革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)視野內(nèi)有兩端鈍圓的藍(lán)紫色革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，多呈單個(gè)散在，少數(shù)2個(gè)相連或呈鏈狀排列(見(jiàn)圖3)。

圖2 革蘭氏陰性菌(10×100)

圖3 革蘭氏陽(yáng)性菌(10×100)

3.2 細(xì)菌生化鑒定將純化培養(yǎng)的2種細(xì)菌在無(wú)菌條件下分別接種于微量生化鑒定管中，置于含有5%CO2的37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h。結(jié)果：(1)革蘭氏陽(yáng)性菌可使葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；不發(fā)酵木糖、甘露醇、山梨醇；硫化氫試驗(yàn)陽(yáng)性，靛基質(zhì)試驗(yàn)陰性；在含鐵牛乳試驗(yàn)中分解乳糖產(chǎn)酸，出現(xiàn)“洶涌”發(fā)酵現(xiàn)象，符合魏氏梭菌的生化特性。結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)特征，鑒定為魏氏梭菌。(2)革蘭氏陰性菌的鳥(niǎo)氨酸、氨基酸、枸櫞酸鹽、硫化氫、吲哚、七葉苷水解試驗(yàn)陽(yáng)性；葡磷胨水、山梨醇、V-P試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陰性，符合大腸桿菌的生化特性。結(jié)合細(xì)菌培養(yǎng)特征，鑒定為大腸桿菌。

3.3 藥敏試驗(yàn)在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)從鮮血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基上各挑取1個(gè)純化培養(yǎng)的菌落，分別接種于貼有8種常用藥敏紙片的鮮血瓊脂培養(yǎng)基(需氧培養(yǎng))、麥康凱培養(yǎng)基(厭氧培養(yǎng))，37 ℃培養(yǎng)24～48 h后觀察，測(cè)定抑菌圈直徑大小，判斷藥敏性。結(jié)果：(1)麥康凱培養(yǎng)基的細(xì)菌(魏氏梭菌)抑菌圈為：阿莫西林9 mm、青霉素8 mm，屬于低度敏感；慶大霉素14 mm，屬于中度敏感；磺胺類(lèi)21 mm、環(huán)丙沙星19 mm，屬于高度敏感。(2)鮮血瓊脂培養(yǎng)基的細(xì)菌(大腸桿菌)抑菌圈為：阿莫西林8 mm、青霉素7 mm，屬于低度敏感；鏈霉素12 mm，屬于中度敏感；頭孢曲松19 mm、頭孢拉定19 mm、環(huán)丙沙星21 mm、土霉素20 mm，屬于高度敏感。

4 診斷

根據(jù)臨床癥狀、病理變化和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，確診小熊貓急性死亡的原因?yàn)槲菏纤缶c大腸桿菌混合感染。

5 防治

5.1根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)未表現(xiàn)癥狀的6只小熊貓用魏氏梭菌疫苗進(jìn)行緊急接種，同時(shí)投喂高敏感藥物磺胺類(lèi)、環(huán)丙沙星、土霉素進(jìn)行預(yù)防性緊急治療5 d。通過(guò)緊急接種和預(yù)防性治療后6只小熊貓未發(fā)病，疫情得到控制。

5.2魏氏梭菌與大腸桿菌廣泛存在于自然界，屬于條件性致病菌。由于飼養(yǎng)管理不善、飼料營(yíng)養(yǎng)不均衡導(dǎo)致動(dòng)物體弱，腸道菌群失調(diào)，應(yīng)激性刺激等均可發(fā)病，且病程短，易發(fā)生急性死亡，一旦野生動(dòng)物發(fā)病很難治愈，死亡率高。對(duì)于魏氏梭菌病應(yīng)以預(yù)防為主，如動(dòng)物園經(jīng)常發(fā)生該病，可考慮對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全面接種魏氏梭菌疫苗，在飼料中適當(dāng)添加敏感的抗菌藥物投喂以減少此病發(fā)生。同時(shí)要加強(qiáng)動(dòng)物飼養(yǎng)管理，保持動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)均衡，增強(qiáng)體質(zhì)，保證食物衛(wèi)生，并定期對(duì)飼養(yǎng)場(chǎng)地、用具進(jìn)行全面消毒，加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生清潔。建立動(dòng)物無(wú)害化處理機(jī)制，對(duì)病死動(dòng)物需進(jìn)行深埋或焚燒并對(duì)飼養(yǎng)場(chǎng)地全面清理消毒。