禽白血病凈化技術(shù)

李守富，盧春光，潘旭東，翁永剛，劉宇慧，邱觀連，李寧，于慧茹

摘要：禽白血病病毒是四種常見的可導(dǎo)致家禽免疫抑制的病毒之一，感染后不僅會產(chǎn)生腫瘤導(dǎo)致生產(chǎn)性能降低，還會引起禽的免疫抑制，從而導(dǎo)致其它各種疾病的發(fā)生。該病在我國養(yǎng)雞場中檢出率較高，常以亞臨床感染的形式出現(xiàn)，對我國禽類養(yǎng)殖危害巨大?！秶抑虚L期動物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》將其列為養(yǎng)禽業(yè)必須要凈化的四大疫病之一。本文就禽白血病綜合診斷及凈化技術(shù)進(jìn)行介紹，以期為養(yǎng)殖戶對該病的防控提供一定參考。

關(guān)鍵詞：禽白血病;診斷技術(shù);凈化

禽白血病病毒（avian leukemia virus，ALV）主要有兩種傳播途徑，即從母雞到后代的垂直傳播和通過直接或間接接觸傳染源在雞群中的水平傳播。由于至今尚無有效的藥物和疫苗可供使用，控制該病最有效的措施是通過病原檢測，淘汰陽性雞，達(dá)到凈化種群的目的。

1 凈化檢測技術(shù)

ALV主要通過垂直方式傳播，從種禽到商品禽會產(chǎn)生逐級放大效應(yīng)，因此必須從種雞核心群進(jìn)行凈化。建立無ALV感染的種雞群是最有效的防治措施。由于馬立克氏病、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖癥等也會出現(xiàn)腫瘤的癥狀，且部分帶毒雞沒有臨床癥狀或亞臨床癥狀，因此獸醫(yī)工作者在對白血病的診斷中除了根據(jù)臨床情況，同時需要借助實驗室診斷才能對該病進(jìn)行確診。檢測技術(shù)在AL的凈化過程中起著至關(guān)重要的作用。

1.1 檢測技術(shù)方法

目前用于檢測和鑒別診斷ALV的方法主要包括：病毒的分離與鑒定、病理學(xué)檢測、血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測等。其中病毒的分離及鑒定一直被認(rèn)為是診斷ALV的“金標(biāo)準(zhǔn)”。該病毒可以從血液、腫瘤組織、胎糞、精液、蛋清等多種材料中分離出來。病毒分離最常用的方法是：無菌采集雞的抗凝血，4℃低速離心后取上層血漿接種到鋪滿80%單層DF-1或CEF細(xì)胞中。2h浸染后換液，培養(yǎng)7～9d后，收集培養(yǎng)物，借助ELISA方法檢測血漿中是否含有p27抗原、PCR方法鑒別ALV感染病毒亞群。該方法特異性高，但檢測周期較長，對操作人員的技術(shù)要求和檢測中的儀器要求較高。大多數(shù)種雞場不具備病毒分離檢測的實驗室條件，需要委托有資質(zhì)和條件的實驗室開展相關(guān)工作。

1.2 凈化方案的制定

崔治中等[1]在參考國際成功經(jīng)驗和多年來自身開展雞場禽白血病凈化經(jīng)驗的基礎(chǔ)上，根據(jù)飼養(yǎng)模式、雞群特點、凈化要求等總結(jié)擬定了3套不同的凈化原則方案。3套凈化原則方案分別對應(yīng)自繁自養(yǎng)的原種雞場核心群、引進(jìn)的祖代或父母代種雞場以及小型自繁自養(yǎng)黃羽肉雞或地方品種的種雞群。其中在種源上封閉繁殖育種的原種雞場需要采用最嚴(yán)格的凈化程序：采用p27抗原ELISA試劑盒對1日齡雛雞胎糞檢測，以母雞為單位，檢測陽性，淘汰母雞及同一紙袋雛雞。6周齡育雛后期，采集血漿分離、檢測病毒，以飼養(yǎng)籠為單位，只要陽性就淘汰同籠中的其它后備雞。23～25周齡初產(chǎn)期母雞，采集初產(chǎn)蛋2枚進(jìn)行蛋清p27抗原檢測，留種公雞采集精液p27抗原檢測，其他雞采集抗凝血進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)淘汰陽性種雞。如同一小群中有一只陽性，淘汰該群所有雞。40～45周齡留種前，采集留種母雞2～3枚蛋開展蛋清抗原檢測，采集留種公雞精液檢測，其它雞采集血漿接種細(xì)胞分離培養(yǎng)。淘汰陽性種雞。在經(jīng)以上方式淘汰陽性雞后，每只母雞只能選用1只陰性公雞的精液授精。每只母雞的種蛋標(biāo)號后，放置于標(biāo)有母雞號的專用紙袋內(nèi)，置于出雛箱中孵化。此程序可循環(huán)進(jìn)行。種雞場可根據(jù)凈化計劃開始的時間，從任一階段開始凈化[1]。

2 凈化檢測關(guān)鍵

2.1 引進(jìn)種源的選擇

選擇凈化的種源是預(yù)防雞群感染禽白血病的關(guān)鍵。我國禽白血病的流行與進(jìn)口雞缺乏嚴(yán)格檢測密切相關(guān)。因此，在進(jìn)行國外引種過程中，必須要求進(jìn)口商出具政府簽發(fā)或批準(zhǔn)的檢驗檢疫證書，同時在進(jìn)口祖代雞的飼養(yǎng)過程中做好隔離及詳細(xì)跟蹤。此外，供應(yīng)商育種公司的信譽度、歷年引進(jìn)種雞的實際凈化情況、其他客戶的評價等都是選擇引種公司的依據(jù)。對于新的育種公司，則要求其提供具有資質(zhì)的第三方機構(gòu)出具的最新禽白血病抗原及抗體的檢測報告，確保種源的本底質(zhì)量狀態(tài)。

2.2 疫苗的檢測

目前國產(chǎn)禽用活疫苗沒有完全使用SPF雞胚，因此活疫苗也是禽白血病防控的一個關(guān)鍵風(fēng)險點。接種沒有凈化ALV雞胚生產(chǎn)的疫苗，可能引起種群再次受到污染，原有的凈化效果將功虧一簣。必須嚴(yán)格做好接種疫苗的實驗室檢測，嚴(yán)加防止使用被外源性ALV污染的疫苗。因此，在選擇疫苗中應(yīng)格外注意弱毒疫苗，特別是雞胚或雞胚生產(chǎn)的疫苗。為減少交叉感染，使用前后應(yīng)對免疫器械嚴(yán)格消毒。免疫接種過程中，使用無針頭注射器或每只雞更換針頭[2]。

2.3 生物安全措施

雖然ALV的橫向傳播能力相對較低，但由于建立和維持一個無外源ALV感染的原種雞核心群的成本很高，一旦污染，實施再次凈化所需周期很長，因此需要有一個良好的生物安全隔離環(huán)境。原種雞不同品系的每一個核心群都應(yīng)在相對封閉的環(huán)境中飼養(yǎng)，可在設(shè)施設(shè)備方面進(jìn)行最大限度的改進(jìn)和完善。建立與凈化場相匹配的硬件設(shè)施和外部環(huán)境，規(guī)范養(yǎng)殖管理環(huán)節(jié)，做好生物安全培訓(xùn)，提升人員生物安全意識，構(gòu)筑整體生物安全屏障，阻斷病毒傳播。

3 凈化中常見問題

禽白血病凈化過程通常復(fù)雜、漫長且曲折。我國原種雞群的凈化主要有三種凈化依據(jù)：國際金標(biāo)準(zhǔn)、通過ELISA方法檢測蛋清及泄殖腔棉拭子的p27抗原，淘汰陽性雞以及兩者結(jié)合的方式。但在實際凈化過程中，由于硬件條件、種群情況、人員配置等方面的差異，很難制定出統(tǒng)一規(guī)范的ALV凈化方案。大多數(shù)養(yǎng)殖企業(yè)都是在解決問題中，不斷摸索、修改或細(xì)化凈化方案。

3.1 檢測時間點的選擇

朱靜等[3]在對地方蛋雞配套性進(jìn)行禽白血病凈化，選擇在自繁前（第一世代）、1日齡、6和25周齡的檢測時間點進(jìn)行檢測，凈化效果明顯且穩(wěn)定。俞燕等[4]在對4個地方雞種保種核心群開展凈化，選擇1日齡、6周齡、17周齡、25～27周齡、36～40周齡等時間點。檢測時間的選擇主要依據(jù)雞群的排毒時間。王彥軍等[5]研究發(fā)現(xiàn)感染雞的具體排毒時間可能與雞的品種、病原亞型、感染的日齡、感染方式等有關(guān)。因此在檢測時間點的選擇、凈化方案的制定需要根據(jù)雞場流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果、雞群的排毒規(guī)律等進(jìn)行制定。

3.2 檢測方法的選擇

在檢測方法上，病毒分離技術(shù)是國際上通用的“金標(biāo)準(zhǔn)”。該方法準(zhǔn)確率高，能夠排除內(nèi)源性ALV的干擾造成的假陽性。此外，1日齡胎糞、開產(chǎn)前和留種前蛋清p27抗原ELISA檢測都是凈化中常用的凈化方法。崔治中[6]指出，沒有哪一種方法能一次將雞群中帶毒雞和感染雞全部檢出。此外，不同的檢測方法檢測結(jié)果也不完全相同。采用不同的檢測方法、增加檢測次數(shù)能夠顯著提高雞群的檢出率，但也增加凈化的成本及工作量。因此，檢測方法的選擇應(yīng)以雞場的實際軟硬件條件為基礎(chǔ)，選擇不同的檢測方法進(jìn)行組合。

3.3 檢測數(shù)量的選擇

凈化過程中，雞群的檢測覆蓋面決定了凈化的成本，也影響著凈化的效果。為了保護(hù)好種源，大型的自繁自養(yǎng)的育種公司，需要采取最嚴(yán)格的措施，每只種雞都要進(jìn)行檢測。當(dāng)連續(xù)3～4個世代都檢測不到ALV陽性雞后，該核心群可轉(zhuǎn)入維持期。進(jìn)入維持期，對于ALV的檢測可改為對一定比例雞的定期抽檢。對于引種的祖代雞父母代雞場只需要做到選擇凈化的種源，監(jiān)控并維持引進(jìn)種雞群的凈化狀態(tài)。這類雞場需要定期抽檢血清樣品的抗體狀態(tài)及種蛋蛋清p27抗原。對于一些小型的自繁自養(yǎng)的黃羽肉雞場以及地方品種雞群，則根據(jù)種雞場的規(guī)模、經(jīng)濟實力、技術(shù)水平開展凈化工作。

禽白血病的凈化是一個復(fù)雜且漫長的過程。ALV凈化方案的制定應(yīng)根據(jù)種雞場的實際情況制定措施。此外，在實施過程中可以不斷細(xì)化及改進(jìn)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 崔治中，孫淑紅，趙鵬，等.對種雞場禽白血病凈化方案的建議[J].中國家禽，2014，36（1）：3-6.

[2] 余春林，楊朝武，邱莫寒，等.蛋種雞場禽白血病防控體系的構(gòu)建[J].四川畜牧獸醫(yī)，2018，45（3）：33-34+37.

[3] 朱靜，沈海玉，竇新紅，等.地方蛋雞配套系禽白血病凈化的初步研究[J].中國家禽，2017，39（5）：26-29.

[4] 俞燕，徐步，范建華，等.地方雞種保種核心群禽白血病凈化研究[J].中國家禽，2019，41（19）：16-22.

[5] 王彥軍，孫淼，王宏鈞，等.禽白血病病毒自然感染及抗體變化動態(tài)規(guī)律[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（7）：17-19.

[6] 崔治中.種雞場禽白血病防控和凈化技術(shù)方案[J].中國家禽，2015，37（23）：1-7.