兔疥螨病的診斷方法研究進展

王正義，蔡冬冬，李春，張輝，劉瑞瑛，羅毅，陳宇航

摘要：兔疥螨病是由疥螨引起的一種頑固性、接觸性、傳染性皮膚病，以劇癢、結痂、脫毛、皮膚增厚等癥狀為主要特征，嚴重影響兔群健康，給養(yǎng)兔業(yè)帶來巨大危害。正確、快速的診斷對防控兔疥螨病具有重要意義，本文就兔疥螨病的臨床診斷、痂皮刮片涂檢法、血清學診斷法以及PCR診斷法做一綜述，以期為兔疥螨病的診斷帶來一定參考價值。

關鍵詞：兔疥螨;痂皮刮片涂檢法;血清學診斷法;PCR診斷法

兔疥螨病是由疥螨寄生于兔體表引起的一種頑固性、高度接觸性、傳染性皮膚病。春、冬季節(jié)多發(fā)，主要經(jīng)被污染的兔舍、兔籠、用具及工作人員傳播。該病以劇癢、結痂、脫毛、皮膚增厚等癥狀為主要特征，患兔常因皮膚炎癥的不斷蔓延造成嚴重的貧血、消瘦，最后衰竭死亡，如不及時采取措施，會迅速波及全群，造成嚴重危害。因此早期診斷對控制兔疥螨病具有重要意義。

目前，關于兔疥螨病的診斷方法主要有臨床診斷、痂皮刮片涂檢法、血清學診斷法以及PCR診斷法。臨床診斷和痂皮刮片涂檢法適用于疥螨感染后期，此時感染部位臨床癥狀較為明顯，痂皮中有大量螨蟲。然而，感染初期，大部分病例無明顯疥螨病臨床癥狀或表現(xiàn)為亞臨床癥狀，且感染螨蟲數(shù)量少，診斷非常困難，血清學診斷法以及PCR診斷法則為早期診斷帶來希望。

1 臨床診斷

1.1 病原

疥螨（sarcoptesscabiei）隸屬于真螨目（acariformes）、疥螨科（sarcoptidae）、疥螨屬（sarcoptes），呈乳白色，分為假頭和軀體兩部分。蟲體較小，約為0.15～0.5mm，呈圓形或龜形，肉眼不易看到，常寄生于人或動物皮膚表皮內(nèi)，以宿主細胞間液、血清為食。

1.2 流行情況

疥螨離開宿主后在較高濕度和較低溫度（10～20℃）環(huán)境下可存活1～3周，且離開宿主24h后依然有很強的穿透皮膚的能力[1]，因此該病主要發(fā)生于陽光不足、陰暗潮濕、衛(wèi)生條件不好等飼養(yǎng)條件下，冬春季節(jié)發(fā)病率高于夏秋季。病兔直接接觸感染是主要的傳播途徑，也可通過被污染的籠舍、飼料、食具以及飼養(yǎng)人員等間接傳播。

1.3 臨床特征

感染初期，病家兔主要表現(xiàn)為瘙癢，不斷用足趾和嘴搔抓啃咬皮膚癢處，一般從鼻端開始，蔓延到眼圈、上唇、下頜，最后遍及全身，皮膚表面出現(xiàn)鮮紅色或淡紅色針尖大小出血點。感染后期，隨著瘙癢程度加劇，皮膚出現(xiàn)紅腫、水泡、局部脫毛、皮膚損傷等，繼而造成皮膚增厚、結痂、出血、壞死。同時，皮膚破損處，常?；旌霞毦?、真菌繼發(fā)感染，還會引起蜂窩織炎，淋巴管炎，急性腎小球炎等[2]。隨病情的發(fā)展，病兔采食和休息受到影響，生長發(fā)育受阻，表現(xiàn)為食欲不振、消瘦、貧血，最終可因極度衰竭而死亡。

通過該病的流行情況及臨床特征等，可做出初步診斷。但疥螨早期感染的臨床癥狀與濕疹、毛癬、虱病和營養(yǎng)性脫毛等疾病的臨床表現(xiàn)相似，使鑒別診斷變得復雜。

2 痂皮刮片涂檢法

痂皮刮片涂檢法適用于感染后期，患部有痂皮產(chǎn)生，可直接檢出螨蟲體。刮取患病部位皮膚與健康皮膚交界處，剪去被毛，刮下表層痂皮，然后用手術刀片或其他銳物刮取痂皮，直至微見出血為止，將刮下的皮屑收集于培養(yǎng)皿內(nèi)。然后將培養(yǎng)皿放置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)30min，低倍顯微鏡下觀察活螨。也可采用直接涂片法、沉淀法等鏡檢觀察。

痂皮刮片檢查法作為診斷疥螨病的傳統(tǒng)方法，方便快捷，能直接找到病原體。但它僅僅適用于疥螨病感染后期及樣品數(shù)較少時的診斷，在疥螨感染早期及樣品較多時還要依賴于其他診斷方法。

3 血清學診斷法

疥螨感染會引起宿主先天性與適應性免疫應答，誘導循環(huán)抗體產(chǎn)生。感染疥螨后，在宿主血清中也可檢測到特異性抗體，因此通過血清學診斷方法來檢測特異性抗體是可行的，如酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。

在血清學診斷中，需要確定合適的疥螨抗原以及合適的宿主抗體類型和特異性。目前，由于還沒有穩(wěn)定的體外螨蟲培養(yǎng)系統(tǒng)，只能通過從感染疥螨的宿主（如模式動物兔、犬、豬）上收集螨蟲，數(shù)量非常有限，所以天然抗原量較少。一些重組抗原分子已經(jīng)在宿主兔、犬和豬中進行研究篩選，重組抗原分子可以被宿主產(chǎn)生的循環(huán)抗體識別，具有一定的血清學診斷潛力。He等[3]從收集的疥螨中提取RNA重組克隆的鈣調(diào)蛋白建立ELISA檢測感染疥螨的兔，顯示有88%的敏感性，但因為疥螨和癢螨都擁有高度保守的鈣調(diào)蛋白，易出現(xiàn)交叉反應，其特異性僅為23%。沈能興等[4]選用重組蛋白酪氨酸激酶（rSsPTK）建立間接ELISA方法診斷兔疥螨早期感染，結果顯示敏感性為95.2%，該方法與感染兔球蟲和豆狀囊尾蚴的兔血清不存在交叉反應，但與3份感染兔耳癢螨血清發(fā)生了交叉反應，特異性為94.1%。在重組幾丁質酶類蛋白5（rSsCLP5）建立的間接ELISA方法中，對46份感染疥螨的兔血清進行檢測顯示該方法的敏感性為93.5%，與感染豆狀囊尾蚴的兔血清不發(fā)生交叉反應，與3份感染兔耳癢螨的兔血清和2份感染兔球蟲的兔血清發(fā)生了交叉反應，特異性為90.7%[5]。雖然，有基于疥螨粗提蛋白與重組蛋白的血清診斷方法研究，但是在敏感性與特異性上都有待提高，尤其是特異性方面，大量研究都顯示存在交叉反應。

同樣地，用于血清學檢測的抗體類型也很重要。疥螨感染會引起機體血清中IgM、IgA、IgG、IgE等循環(huán)抗體水平呈不同程度的升高[6]。IgM是機體感染后產(chǎn)生的第一抗體，IgA主要在黏膜免疫中發(fā)揮作用。Arlian等[7]對91例普通疥瘡患者中的一項研究顯示，45.1%、27.5%和73.6%的患者分別檢測到血清抗體IgA、IgG和IgM，只有2.2%的人顯示IgE抗體與疥螨抗原反應。但同時，研究也指出疥螨抗原與屋塵螨之間具有較高的交叉反應。因此，關于IgM和IgA抗體作為疥螨病的血清學診斷抗體還需進一步深入的研究。IgG抗體在免疫應答中起著激活補體、中和多種毒素的作用，在感染過程中持續(xù)時間長。疥螨感染兔后，血清中IgG抗體水平均顯著升高[8]，IgG抗體也是疥螨病血清學診斷中最常見的抗體。沈能興等[4，5]根據(jù)重組蛋白rSsPTK和rSsCLP5建立的間接ELISA方法檢測24只兔子，結果顯示，在感染疥螨1周和2周后，血清特異性IgG抗體水平均明顯升高，且兩種方法的檢出率均為100%，顯示了該方法作為早期診斷兔疥螨病的潛能。

4 PCR診斷方法

隨著分子技術的出現(xiàn)，加上疥螨基因組序列的完成，為替代診斷方法的開發(fā)提供了機會。Angelone-Alasaad等[9]對線粒體16S rD

NA中的135bp片段進行擴增，建立兩種疥瘡PCR診斷方法對從23種宿主物種收集的疥螨進行了檢測，顯示出高敏感性、特異性。此外，還有LAMP法[10]、巢式PCR法[11]等都顯示出用時時間短、檢出率高等特點。但在PCR診斷法實施過程中，收集的樣品中疥螨或者疥螨成分的有無直接影響檢測結果的準確性，且技術要求較高，所以基于PCR技術的診斷法還需要進一步的優(yōu)化研究。

綜上所述，在兔疥螨病的研究中，確切診斷與否，直接影響患病動物的康復情況及預后，嚴重者會影響全群動物的健康，造成嚴重的經(jīng)濟損失。臨床診斷及痂皮刮片檢測法簡單易用、經(jīng)濟方便、實操性強，在生產(chǎn)實際中應用廣泛，但漏檢、誤檢率高，在疥螨感染后期的診斷中發(fā)揮了重要作用。血清學診斷法及PCR診斷法為早期診斷帶來希望，但特異性及敏感性都有待提高，建立敏感性高、特異性強的早期診斷方法將是新的研究方向。

參考文獻：

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