變異性漿細胞瘤異位1基因?qū)Ω咛桥囵B(yǎng)的大鼠心臟成纖維細胞的影響及其機制

白 楊，黃 婷，李真真，王 琰

(1.鄭州市第七人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，河南 鄭州 450016；2.鄭州市第七人民醫(yī)院心內(nèi)科，河南 鄭州 450016)

糖尿病是一種常見的代謝障礙疾病，其發(fā)病率呈逐年增長的趨勢，據(jù)世界流行病學統(tǒng)計，預計到2035年將有5.92億人患糖尿病[1]。糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy，DCM)是導致糖尿病患者死亡的主要原因之一[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，高糖條件下，心臟成纖維細胞(cardiac fibroblast，CF)過度增殖、膠原纖維過量積聚是導致糖尿病患者心室重構(gòu)、心肌肥厚及纖維化的重要機制[3]。因此，探討CF增殖及膠原纖維化進程中的分子生物學機制，對防治DCM及緩解糖尿病心肌纖維化進程具有潛在的臨床意義。高嘉夢等[4]研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)可使DCM患者CF中Ⅰ型膠原蛋白(type Ⅰ collagen,Col Ⅰ)、Ⅲ型膠原蛋白(type Ⅲ collagen,Col Ⅲ)產(chǎn)生和分泌增加，是誘導心肌向纖維化過程發(fā)展的重要細胞因子。有研究發(fā)現(xiàn)，微RNA(microRNA,miRNA)可通過不同機制調(diào)控心肌纖維化的發(fā)生、發(fā)展[5]。張偉峰等[6]研究證實，miRNA-93-5p可下調(diào)Col Ⅰ、Col Ⅲ表達并抑制心肌梗死小鼠CF的纖維化進程。但目前還不明確miR-93-5p與TGF-β1是否通過某種聯(lián)系調(diào)控心肌纖維化進程。變異性漿細胞瘤異位1(plasma-cytoma variant translocation 1，PVT1)基因被發(fā)現(xiàn)于人類衰老的成纖維細胞中，其水平降低可觸發(fā)增殖性CF的衰老凋亡[7]，PVT1可能在CF增殖及纖維化過程中扮演重要角色。然而，目前關(guān)于PVT1在心臟纖維化進程中的調(diào)控機制研究較少。本研究旨在探討PVT1基因表達對高糖培養(yǎng)的大鼠CF的影響及其作用機制，以期闡明CF增殖及纖維化進程中的復雜機制，為糖尿病心肌纖維化及DCM的治療提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 細胞、主要試劑與儀器大鼠永生化CF購自天津阿爾法生物科技有限公司；胎牛血清、達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbeco′s modified Eagle′s medium，DMEM)購自美國Gibco公司，Lipfeclamine 3000轉(zhuǎn)染試劑盒購自美國Thermo Fisher公司，PVT1 小干擾RNA (small interfering RNA，siRNA)及其陰性對照(PVT1 siRNA NC)試劑購自美國System Biosciences公司，miR-93-5p inhibitor及其陰性對照試劑(miR-93-5p inhibitor NC)購自上海振譽生物科技有限公司，二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白定量檢測試劑盒購自上海齊源生物科技有限公司，TGF-β1、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(phosphorylation Smad2/3，p-Smad2/3)、Smad7、細胞周期抑制因子p21、Col Ⅰ、α-平滑肌肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin，α-SMA)抗體購自美國Abcam公司，天狼猩紅染色試劑盒購自上海鈺博生物科技有限公司，細胞周期檢測試劑盒購自北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自北京索萊寶生物科技有限公司；倒置顯微鏡購自?？松?北京)科技有限公司，流式細胞儀購自上海佐明機械設(shè)備貿(mào)易有限公司，實時熒光定量聚合酶鏈反應(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)儀購自大龍興創(chuàng)實驗儀器(北京)股份有限公司，化學發(fā)光成像分析系統(tǒng)購自上海信裕生物科技有限公司；PVT1、TGF-β1及miR-93-5p引物序列由大連寶生物工程公司合成。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養(yǎng)取液氮中保存的CFs，常規(guī)復蘇后，接種至含體積分數(shù)10%胎牛血清的DMEM中，于37 ℃、含體積分數(shù)5% CO2飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)至第3代后收集細胞進行后續(xù)實驗。

1.2.2 細胞轉(zhuǎn)染及分組收集對數(shù)生長期的CFs，胰蛋白酶消化后，用培養(yǎng)液重懸，以每孔5×104個細胞接種至96孔板中，并隨機分為空白對照組、高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組，每組設(shè)置6個復孔?？瞻讓φ战M和高糖組細胞不進行轉(zhuǎn)染，PVT1 siRNA組及PVT1 siRNA NC組細胞分別轉(zhuǎn)染PVT1 siRNA、PVT1 siRNA NC，轉(zhuǎn)染操作按照Lipfeclamine 3000轉(zhuǎn)染試劑盒說明書進行。轉(zhuǎn)染24 h 后，高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞用含25 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培養(yǎng)，模擬高糖培養(yǎng)條件[8]；空白對照組細胞不作處理。

另取對數(shù)生長期CFs，胰蛋白酶消化后，用培養(yǎng)液重懸，以每孔5×104個細胞接種至96孔板上，并隨機分為未轉(zhuǎn)染組、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 siRNA+miR-93-5p NC組、PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 NC+miR-93-5p NC組，每組設(shè)置6個復孔。未轉(zhuǎn)染組不進行轉(zhuǎn)染，PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組細胞轉(zhuǎn)染PVT1 siRNA和miR-93-5p inhibitor，PVT1 siRNA+miR-93-5p NC組細胞轉(zhuǎn)染PVT1 siRNA和miR-93-5p NC，PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組細胞轉(zhuǎn)染PVT1 NC和miR-93-5p inhibitor，PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞轉(zhuǎn)染PVT1 NC和miR-93-5p NC，轉(zhuǎn)染操作按照Lipfeclamine 3000轉(zhuǎn)染試劑盒說明書進行。轉(zhuǎn)染24 h 后，用含25 mmol·L-1葡萄糖的DMEM處理未轉(zhuǎn)染組、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 siRNA+miR-93-5p NC組、PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞，模擬高糖培養(yǎng)條件。

1.2.3 天狼猩紅染色法觀察4組細胞膠原纖維沉積情況高糖處理24 h后，取空白對照組、高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞，胰蛋白酶消化離心后，用磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered saline，PBS)洗滌細胞3次，加入40 g·L-1多聚甲醛室溫固定15 min，PBS洗滌3次，加入體積分數(shù)0.5%的聚乙二醇辛基苯基醚處理20 min，滴加天狼猩紅染液染色1 h，膠原纖維被染成粉紅色，置于倒置顯微鏡下觀察并拍照。

1.2.4 流式細胞術(shù)檢測4組細胞細胞周期高糖處理24 h后，取空白對照組、高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞，胰蛋白酶消化離心后，用PBS洗滌細胞1次，加入預冷體積分數(shù)70%乙醇重懸細胞，4 ℃固定24 h，3 000 r·min-1離心10 min 收集各組細胞，按照細胞周期檢測試劑盒說明書染色處理后，使用流式細胞儀檢測各組細胞細胞周期分布。實驗重復6次，取平均值。

1.2.5 qRT-PCR法檢測4組細胞中PVT1、TGF-β1mRNA及miR-93-5p的表達收集高糖處理 24 h后的各組細胞，用TRIzol試劑盒提取總RNA，取1 μg RNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA后，將cDNA作為模板進行qRT-PCR。PVT1 上游引物序列為5′-GTCTTGGTGCTCTGTGTTC-3′，下游引物序列為5′-CCCGTTATTCTGTCCTTCT-3′； TGF-β1上游引物序列為5′-ACGCCTGAGTGGCTGTCTTTTGAC-3′，下游引物序列為5′-GGGCTGATCCCGTTGATTTCCACG-3′；miR-93-5p上游引物：5′-GCCATGTAAACATCTCGGACTG-3′，下游引物序列為5′-CAATGCGTGTGGTGGAGGAG-3′；內(nèi)參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceralde hyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)上游引物序列為5′-CTTTGGTATCGTGGAAGGACTC-3′，下游引物序列為5′-GTAGAGGCAGGGATGATGTTCT-3′。反應體系(25.0 μL)：SYBR Primix Ex Taq 12.5 μL，上下游引物各1.0 μL，cDNA 2.0 μL，ddH2O 8.5 μL。反應條件：95 ℃ 120 s(1個循環(huán))；95 ℃ 30 s、55～60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s(40個循環(huán))；72 ℃ 300 s(1個循環(huán))。采用2-△△Ct法計算PVT1、TGF-β1mRNA及miR-93-5p相對表達量。實驗重復6次，取平均值。

1.2.6 Western blot法檢測4組細胞中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、p21、α-SMA、Col Ⅰ 蛋白表達收集高糖處理24 h后的各組細胞，加入細胞裂解液抽提總蛋白，使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。取50 μg蛋白樣品行十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，以半干法轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯膜上，脫脂奶粉封閉2 h，加入TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、p21、Col Ⅰ、α-SMA一抗(稀釋度均為1：1 000)，4 ℃孵育過夜，加入羊抗兔辣根過氧化物酶二抗(1：5 000)，室溫孵育1 h。化學發(fā)光法顯影曝光后，應用化學發(fā)光成像分析系統(tǒng)拍照并分析各條帶灰度值，以GAPDH為內(nèi)參，以目的蛋白條帶灰度值與GAPDH灰度值比值表示目的蛋白相對表達量。實驗重復6次，取平均值。

1.2.7 Western blot法檢測5組細胞中TGF-β1、Smad7、ColⅠ蛋白表達高糖處理后24 h，收集未轉(zhuǎn)染組、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 siRNA+miR-93-5p NC組、PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞，按“1.2.6 項”方法檢測5組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ蛋白相對表達量。實驗重復6次，取平均值。

2 結(jié)果

2.1 4組細胞膠原纖維沉積情況結(jié)果見圖1。與空白對照組比較，高糖組細胞數(shù)量增多，紅色膠原纖維沉積增加。與高糖組比較，PVT1 siRNA組細胞間隙變大，紅色膠原纖維沉積減小；PVT1 siRNA NC組細胞紅色膠原纖維沉積與高糖組相近。

A:空白對照組;B:高糖組;C:PVT1 siRNA組;D:PVT1 siRNA NC組。圖1 4組細胞膠原纖維沉積情況(天狼猩紅染色，×200)Fig.1 Collagen fiber deposition of cells in four groups (sirius red staining，× 200)

2.2 4組細胞細胞周期比較結(jié)果見表1和圖2。高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組G0+G1期細胞比例顯著低于空白對照組，S+G2+M期細胞比例顯著高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA組G0+G1期細胞比例顯著高于高糖組，S+G2+M期細胞比例顯著低于高糖組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA NC組G0+G1期細胞比例顯著低于PVT1 siRNA組，S+G2+M期細胞比例顯著高于PVT1 siRNA組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。高糖組和PVT1 siRNA NC組G0+G1期細胞比例、S+G2+M期細胞比例比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 4組細胞細胞周期比較Tab.1 Comparison of cell cycle among the four groups

A:空白對照組;B:高糖組;C:PVT1 siRNA組;D:PVT1 siRNA NC組。圖2 4組細胞細胞周期分布Fig.2 Distribution of cell cycle in the four groups

2.3 4組細胞中PVT1、TGF-β1mRNA及miR-93-5p相對表達量比較結(jié)果見表2。高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞中PVT1、TGF-β1mRNA相對表達量均顯著高于空白對照組，miR-93-5p相對表達量顯著低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA組細胞中PVT1、TGF-β1mRNA相對表達量顯著低于高糖組，miR-93-5p相對表達量顯著高于高糖組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA NC組細胞中PVT1、TGF-β1mRNA相對表達量均顯著高于PVT1 siRNA組，miR-93-5p相對表達量顯著低于PVT1 siRNA組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。高糖組與PVT1 siRNA NC 組細胞PVT1、TGF-β1mRNA及miR-93-5p相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2 4組細胞中PVT1、TGF-β1 mRNA及miR-93-5p相對表達量比較Tab.2 Comparison of relative expression of PVT1,TGF-β1 mRNA and miR-93-5p of cells among the four groups

2.4 4組細胞中α-SMA 、Col Ⅰ、p21、TGF-β1、Smad7 蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比較結(jié)果見表3、圖3和圖4。高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞中α-SMA、Col Ⅰ、TGF-β1蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)顯著高于空白對照組，p21、Smad7蛋白相對表達量顯著低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA組細胞中α-SMA、Col Ⅰ、TGF-β1蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)顯著低于高糖組，p21、Smad7蛋白相對表達量顯著高于高糖組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA NC組細胞中α-SMA、Col Ⅰ、TGF-β1蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)顯著高于PVT1 siRNA組，p21、Smad7蛋白相對表達量顯著低于PVT1 siRNA組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。高糖組與PVT1 siRNA NC組細胞中α-SMA、Col Ⅰ、p21、TGF-β1、Smad7蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表3 4組細胞中α-SMA、Col Ⅰ、p21、TGF-β1、Smad7蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比較Tab.3 Comparison of relative expression levels of α-SMA,Col Ⅰ,p21,TGF-β1,Smad7 protein and (p-Smad2/3)/(Smad2/3) of cells among the four groups

A：空白對照組；B：高糖組；C：PVT1 siRNA組；D：PVT1 siRNA NC組。圖3 4組細胞中α-SMA、Col Ⅰ、p21蛋白表達Fig.3 Expression of α-SMA,Col Ⅰ and p21 protein of cells in the four groups

A：空白對照組；B：高糖組；C：PVT1 siRNA組；D：PVT1 siRNA NC組。圖4 4組細胞中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad2/3、Smad7蛋白表達Fig.4 Expression of TGF-β1,p-Smad2/3,Smad2/3 and Smad7 protein of cells in the four groups

2.5 5組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ蛋白相對表達量比較結(jié)果見表4和圖5。PVT1 siRNA+miR-93-5p NC組細胞中TGF-β1、Col Ⅰ蛋白相對表達量顯著低于未轉(zhuǎn)染組，Smad7蛋白相對表達量顯著高于未轉(zhuǎn)染組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組細胞中TGF-β1、Col Ⅰ蛋白相對表達量顯著高于未轉(zhuǎn)染組，Smad7蛋白相對表達量顯著低于未轉(zhuǎn)染組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。未轉(zhuǎn)染組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ蛋白相對表達量與PVT1 NC+miR-93-5p NC組、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相對表達量顯著高于PVT1 siRNA +miR-93-5p NC組，Smad7蛋白相對表達量顯著低于PVT1 siRNA+miR-93-5p NC組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相對表達量顯著低于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組，Smad7蛋白相對表達量顯著高于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組與PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ 蛋白相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表4 5組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ 蛋白相對表達量比較Tab.4 Comparison of relative expression levels of TGF-β1,Smad7 and Col Ⅰ protein of the cells among the five groups

A：未轉(zhuǎn)染組；B：PVT1 NC+miR-93-5p NC組；C：PVT1 siRNA +miR-93-5p NC組；D：PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組；E：PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組。圖5 5組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ蛋白表達Fig.5 Expression of TGF-β1,Smad7,Col Ⅰ protein of cells in the five groups

3 討論

心肌纖維化是心肌重塑及慢性心力衰竭發(fā)生的主要原因，CF是心肌纖維化的最終效應細胞[9]，高血糖條件下CF增殖可使細胞外基質(zhì)降解受阻、膠原蛋白合成增加，從而導致心肌間質(zhì)纖維化[10]。故探究CF纖維化的分子生物學機制，對抑制DCM的發(fā)展具有重要意義。

TGF-β1和Smad在CF增殖及纖維化過程中扮演重要角色[11]。有研究證實，細胞外TGF-β1可特異性識別Smad2/3使其磷酸化形成p-Smad2/3，并與Smad 4形成異三聚體復合物轉(zhuǎn)運至細胞核中，從而促進纖維化相關(guān)靶基因如Col Ⅰ和Col Ⅲ的表達及沉積，導致心肌纖維化發(fā)生、發(fā)展[12-13]。α-SMA水平可反映膠原沉積及纖維化嚴重程度[14]。本研究中高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組的CF用25 mmol·L-1葡萄糖高糖培養(yǎng)24 h后，細胞中膠原纖維沉積嚴重，TGF-β1mRNA、TGF-β1蛋白、Col Ⅰ蛋白、α-SMA蛋白相對表達量及(p-Smad2/3)/(Smad2/3)均顯著高于空白對照組，提示TGF-β1/Smad通路參與CF的纖維化過程，但TGF-β1/Smad通路活化的基因調(diào)控機制還不甚明確。

miR-93-5p是近2 a來在心肌梗死患者中新發(fā)現(xiàn)的失調(diào)的miRNA之一[15]。miR-93-5p與TGF-β1之間可通過共同的靶標分子Smad7參與細胞纖維化進程[16]。已有研究證實，miR-93-5p與TGF-β1之間可通過共同的靶標分子Smad7來抑制肺癌細胞TGF-β1信號傳導。LIANG等[17]研究證實，Smad7是TGF-β1信號通路的負反饋調(diào)節(jié)因子，TGF-β1不僅可抑制Smad7表達，還可通過募集Smad泛素連接酶蛋白2使TGF-β1配體泛素化降解，從而阻斷TGF-β1/Smad促纖維化通路激活。本研究結(jié)果顯示，高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞中miR-93-5p及Smad7蛋白相對表達量顯著低于空白對照組，說明高糖誘導可使TGF-β1/Smad通路被激活的同時，伴隨miR-93-5p表達及Smad7蛋白表達的降低，提示高糖誘導可抑制miR-93-5p/Smad7信號軸，導致TGF-β1/Smad促纖維化通路活化。但CF纖維化進程中的生物調(diào)控機制，不僅僅是靠單一的miRNA調(diào)節(jié)來完成的，還可能與其他因子有關(guān)，本研究對此進行繼續(xù)探究。

PVT1是一種與CF衰老有關(guān)的調(diào)節(jié)因子[18]。有研究證實，PVT1是一種抗凋亡基因，沉默PVT1表達可促進CF的凋亡[7]。CAO等[19]通過體內(nèi)體外實驗證實，PVT1過表達可促進CF的增殖、膠原蛋白的產(chǎn)生及TGF-β1/Smad信號通路的激活，而沉默PVT1后則產(chǎn)生相反的作用，提示干預PVT1 mRNA表達，可能對抑制CF增殖及纖維化進程具有重要意義。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高糖組、PVT1 siRNA組、PVT1 siRNA NC組細胞中PVT1 mRNA相對表達量均顯著高于空白對照組，細胞有絲分裂阻滯期G0+G1期細胞比例顯著低于空白對照組，細胞增長及有絲分裂期S+G2+M期細胞比例顯著高于空白對照組，且細胞周期抑制因子p21相對表達量顯著低于空白對照組，提示高糖誘導可促進PVT1表達，從而促進CF膠原纖維沉積及增殖分裂，可能與抑制miR-93-5p/Smad7信號軸表達，促進TGF-β1/Smad軸信號激活有關(guān)。為進一步驗證這一推測，本研究在沉默PVT1的基礎(chǔ)上抑制miR-93-5p表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組、PVT1 NC+miR-93-5p NC組細胞中TGF-β1、ColⅠ蛋白相對表達量顯著低于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組，Smad7蛋白相對表達量顯著高于PVT1 NC+miR-93-5p inhibitor組；PVT1 siRNA+miR-93-5p inhibitor組與PVT1 NC+miR-93-5pNC組細胞中TGF-β1、Smad7、Col Ⅰ蛋白相對表達量比較差異無統(tǒng)計學意義，提示PVT1沉默可抑制TGF-β1/Smad通路激活，促進miR-93-5p/Smad7通路活化，進而發(fā)揮促纖維化作用。

綜上所述，大鼠PVT1基因沉默可促進miR-93-5p/Smad7通路活化，抑制TGF-β1/Smad通路激活，進而抑制高糖誘導的CF纖維化進程，為闡明CF纖維化進程的機制提供一定參考。但本研究還存在一定的不足，PVT1與miR-93-5p之間的調(diào)控機制復雜，PVT1與miR-93-5p/Smad7-TGF-β1/Smad通路的靶向調(diào)控關(guān)系還有待進一步驗證。