CpG ODN 佐劑的研究進(jìn)展及其藥學(xué)研究的思考

徐莉，李敏

國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，北京100022

目前國外已有應(yīng)用CpG ODN 作為佐劑的預(yù)防性疫苗上市，且多個(gè)疫苗處于臨床試驗(yàn)研究階段，國內(nèi)也有疫苗正在開展臨床試驗(yàn)研究，成為目前疫苗研發(fā)的熱點(diǎn)之一。本文擬對CpG ODN 佐劑的相關(guān)研究進(jìn)展作一報(bào)道，并從技術(shù)審評角度對其藥學(xué)研究提出一些思考。

1 CpG ODN 佐劑的概述

CpG ODN（CpG 基序的寡核苷酸，以下簡稱CpG）中文名稱為非甲基化胞嘧啶和鳥嘌呤二核苷酸為核心的寡聚脫氧核苷酸，是人工合成的18 ~ 30 bp 的具有免疫刺激活性的非甲基化胞嘧啶-鳥嘌呤二核苷酸的DNA 重復(fù)序列，其中為提高其穩(wěn)定性并延長其體內(nèi)半衰期，部分或全部磷酸二酯鍵被硫代磷酸二酯鍵取代。CpG 根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征，可不同程度誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫，增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答。

CpG 的早期研究源于對癌癥的治療。TOKUNAGA 等［1］通過對牛減毒分枝桿菌提取結(jié)核素，證實(shí)了細(xì)菌DNA 具有抗腫瘤和提高NK 活性的功能，能夠誘導(dǎo)Ⅰ、Ⅱ型干擾素的產(chǎn)生。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，非甲基化的CpG DNA（即CpG 基序）也具有免疫刺激作用［2］。非甲基化CpG 廣泛存在于原核生物如細(xì)菌基因組中，人和脊椎動(dòng)物的CpG 絕大多數(shù)被甲基化，僅有非甲基化的CpG 具有免疫刺激效應(yīng)。

人B 細(xì)胞及pDC 細(xì)胞是表達(dá)TLR9 并直接對CpG 刺激產(chǎn)生應(yīng)答的細(xì)胞。CpG 與TLR9 結(jié)合后，通過MYD88、IRAK 和TRAF6 最終激活多種轉(zhuǎn)錄因子，包括 NF-κB、AP1、CEBP 和 CREB。這些轉(zhuǎn)錄因子直接上調(diào)細(xì)胞因子和趨化因子基因表達(dá)。CpG 通過激活這些細(xì)胞啟動(dòng)免疫刺激，最終導(dǎo)致自然殺傷細(xì)胞（NK）間接成熟、分化和增殖的級聯(lián)反應(yīng)，T 細(xì)胞和單核細(xì)胞／ 巨噬細(xì)胞一起分泌細(xì)胞因子和趨化因子，產(chǎn)生促炎癥因子（IL-1、IL-6、IL-18 及 TNF）和Th1偏向性免疫（IFNγ、IL-12）［3］。通過上調(diào) pDC 細(xì)胞CD80、CD86、CD40 和 MHC 分子的表達(dá)，增加抗原處理／提呈和CD8+T 細(xì)胞反應(yīng)，驅(qū)動(dòng)Th1 型免疫和CD8+CTL 細(xì)胞毒性。而TLR9 依賴的B 細(xì)胞激活導(dǎo)致抗原特異性體液反應(yīng)增加和IgG 類別轉(zhuǎn)換。CpG-DNATLR9-介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路見圖1。CpG 促進(jìn)的先天免疫與適應(yīng)性免疫應(yīng)答免疫機(jī)制見圖2。

圖1 CpG-DNA-TLR9-介導(dǎo)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

圖2 CpG 促進(jìn)的先天免疫與適應(yīng)性免疫應(yīng)答免疫機(jī)制

根據(jù)結(jié)構(gòu)、生物學(xué)性質(zhì)以及體外活化免疫細(xì)胞情況，可將CpG 分為3 個(gè)型別。在硫代磷酸酯主鏈上的多個(gè)CpG 基序被歸類為K 型ODN（也稱為B型），是B 細(xì)胞活化、pDC 細(xì)胞和單核細(xì)胞成熟的強(qiáng)誘導(dǎo)因子。D 型ODN（也稱為A 型）通常含有單一以天然磷酸二酯鍵鏈接的CpG 基序，主鏈為磷酸二酯 ／ 硫代磷酸二酯混合骨架，基序兩側(cè)有回文序列及 3′和 5′-末端的 poly-G 尾，這種結(jié)構(gòu)特征可導(dǎo)致CpG 分子在溶液中形成復(fù)雜多聚體。該型CpG 可激活NK 細(xì)胞，促進(jìn)pDC 細(xì)胞成熟并分泌IFNα，但對B 細(xì)胞無影響。第3 類C 型 ODN 在核苷酸單元上與K 型相似，完全由硫代磷酸核苷酸組成，結(jié)構(gòu)上含有與D 型CpG 類似的回文CpG 基序，因此可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)或二聚體。C 型ODN 可誘導(dǎo)B 細(xì)胞和 pDC 細(xì)胞活化及 IFNα 產(chǎn)生［4］。K 型 ODN 對 DNA酶的敏感性相對低，可在動(dòng)物體內(nèi)存留更長時(shí)間而發(fā)揮持久作用［5］。不同CpG 基序作用于不同物種引起的免疫刺激效應(yīng)有所差異，具有種屬特異性，同時(shí)CpG 的核心序列、回文結(jié)構(gòu)等均對其活性有顯著影響［6］。其主要原因可能是不同種屬的TLR9 受體蛋白結(jié)構(gòu)不相同。

CpG 可通過改善抗原遞呈細(xì)胞的抗原攝取，激活抗原遞呈細(xì)胞的功能性成熟，產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子從而增加抗原的免疫原性。CpG 具有穩(wěn)定、低成本、易合成、高效低毒等優(yōu)點(diǎn)［7］，具有誘導(dǎo)Th1免疫反應(yīng)的偏好性，并可延長產(chǎn)生抗體的持久性［8］，是疫苗研究中應(yīng)用廣泛的佐劑。

2 CpG ODN 佐劑的臨床應(yīng)用情況

目前國內(nèi)外已獲批上市或處于臨床試驗(yàn)階段的CpG 種類主要包括 CpG7909（別稱 CpG2006，CpG-2006）、ISS-1018、CpG684 等。其中 Dynavax 公司采用CpG 類佐劑（ISS-1018）的增效乙肝疫苗（Heplisav?）于2017 年9 月在美國批準(zhǔn)上市。已有超百種含CpG 佐劑的治療性疫苗及預(yù)防性疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，30 多個(gè)品種使用了CpG7909。而在預(yù)防用疫苗制品中，佐劑使用情況主要包括CpG 單佐劑、CpG 佐劑加氫氧化鋁或MF59 佐劑等，不同品種疫苗中CpG 臨床用量為100 ~ 3 000 μg 不等，使用量集中在 250 ~ 1 000 μg ／ 劑，最大使用量為目前已批準(zhǔn)上市的乙肝疫苗（Heplisav?），其臨床用量為3 000 μg ／ 劑［9-15］。國內(nèi)尚無已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品，已批準(zhǔn)上臨床的產(chǎn)品包括增效乙肝預(yù)防性疫苗等。

CpG 能顯著增強(qiáng)抗乙肝、炭疽和流感等傳染病的含鋁佐劑類疫苗的免疫原性和加速免疫反應(yīng)［4，16-17］。但CpG 佐劑會(huì)引起輕微至中度的副反應(yīng)，包括注射位點(diǎn)疼痛、腫脹、硬結(jié)、紅疹等局部反應(yīng)以及流感樣癥狀等系統(tǒng)癥狀，幾天內(nèi)會(huì)得到緩解，可能是由其免疫刺激特性導(dǎo)致的［18-20］。

3 預(yù)防用疫苗中CpG ODN 佐劑研究的整體考慮

CpG 作為一種新型佐劑，可參照歐盟及WHO 公布的《人用疫苗佐劑研究技術(shù)指南》、《含佐劑疫苗及疫苗佐劑技術(shù)指南》等［21-22］開展藥學(xué)、臨床前及臨床研究。立題依據(jù)方面，疫苗開發(fā)過程中對CpG類別（序列）及用量的選擇，可從CpG 免疫機(jī)制、臨床應(yīng)用及抗原特性、佐劑-抗原相互作用等方面進(jìn)行綜合考慮。免疫作用機(jī)制方面，可能需要考慮的因素包括疫苗可能發(fā)揮藥效的作用機(jī)制（體液免疫、細(xì)胞免疫）及對應(yīng)的佐劑類型、基序等，如TLR9 特異性識別的CpG 核心基序是由6 個(gè)堿基組成的，不同CpG 含有的核心基序存在差異，核心基序及其數(shù)量、間隔序列、整體長度和CpG 種屬特異性的差異會(huì)導(dǎo)致免疫刺激活性的差別，從而影響制劑中佐劑用量。建議對設(shè)計(jì)的CpG 序列與人類基因組序列同源性進(jìn)行比對研究，尤其是同源性對安全性的影響。臨床應(yīng)用方面，可參考已上市或臨床試驗(yàn)階段產(chǎn)品中使用情況，基于已獲得的安全有效性數(shù)據(jù)進(jìn)行評估選擇。特定抗原方面，理論上不同的抗原表面電荷等性質(zhì)可能會(huì)影響CpG-抗原間的相互作用，需結(jié)合免疫原性、吸附率、穩(wěn)定性等方面進(jìn)行綜合考慮。作為疫苗佐劑CpG，應(yīng)關(guān)注序列設(shè)計(jì)涉及的知識產(chǎn)權(quán)問題，應(yīng)不構(gòu)成專利侵權(quán)。

對于含CpG 佐劑的制劑處方、配制工藝、終產(chǎn)品質(zhì)量特性、質(zhì)量放行標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性等研究，可參考《預(yù)防用含鋁佐劑疫苗技術(shù)指導(dǎo)原則》［23］及國外佐劑相關(guān)技術(shù)指南等要求開展。作為一種新型佐劑，通常需要考慮單獨(dú)的佐劑非臨床研究及制劑非臨床研究，也需考慮完整的臨床設(shè)計(jì)，包括劑量、免疫程序探索等。非臨床研究階段除常規(guī)非臨床安全性、有效性研究外，建議考慮對CpG 在機(jī)體中的藥代動(dòng)力學(xué)等進(jìn)行評估。在臨床劑量探索及免疫原性研究中，建議針對抗原劑量、CpG 含量等進(jìn)行體液和細(xì)胞免疫兩方面的評估。

產(chǎn)品注冊申報(bào)階段，按照《生物制品注冊分類及申報(bào)資料要求》［24］提供相關(guān)研究資料。作為佐劑應(yīng)提供佐劑概述、佐劑完整的藥學(xué)研究信息，包括原材料、工藝、質(zhì)量屬性、檢測方法、穩(wěn)定性等。非臨床研究中如有藥代、毒理學(xué)研究，按照ICH M4 基本框架在相應(yīng)部分提交使用佐劑類型、添加佐劑必要性及佐劑／ 抗原配比合理性、佐劑機(jī)制等研究內(nèi)容。

4 CpG ODN 佐劑的藥學(xué)研究考慮

4.1 生產(chǎn)工藝開發(fā) CpG 人工合成時(shí)為使其能夠抵抗核酸酶，延長其在體內(nèi)的作用時(shí)間，合成過程將對其進(jìn)行全硫代化修飾，即骨架磷酸基團(tuán)上的非橋氧原子替換為硫原子。CpG 生產(chǎn)工藝流程可能包括固相合成（包括耦合反應(yīng)、硫化反應(yīng)及乙?；磻?yīng)等）、氨解反應(yīng)、純化精制、脫鹽濃縮等步驟及可能的凍干工藝。其中固相反應(yīng)采用核酸合成儀按照設(shè)定的工藝參數(shù)自動(dòng)完成。

CpG 生產(chǎn)應(yīng)符合GMP 要求，生產(chǎn)過程中應(yīng)研究確定關(guān)鍵工藝參數(shù)、中間品控制項(xiàng)目及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等。對關(guān)鍵原材料如固相載體、核苷酸、合成用化學(xué)原料等來源和質(zhì)量進(jìn)行控制。應(yīng)確定生產(chǎn)工藝及生產(chǎn)規(guī)模，關(guān)注生產(chǎn)規(guī)模與擬研制的疫苗生產(chǎn)規(guī)模的匹配性。根據(jù)研究擬定合理的產(chǎn)品放行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并在臨床開發(fā)階段不斷予以完善，實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)做好規(guī)范的制檢記錄。

4.2 質(zhì)量特性研究 開發(fā)者應(yīng)根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)工藝及產(chǎn)品預(yù)期特性進(jìn)行全面的研究。一般情況下，質(zhì)量研究包括CpG 佐劑結(jié)構(gòu)特性、理化性質(zhì)、生物學(xué)活性及雜質(zhì)譜等。

對于疫苗類制品，應(yīng)對非目標(biāo)成分進(jìn)行控制?！吨袊幍洹啡浚?020 版）中已明確要求，生產(chǎn)過程中應(yīng)盡可能減少使用對人體有毒、有害的材料，必須使用時(shí)，應(yīng)驗(yàn)證后續(xù)工藝的去除效果［25］。除非驗(yàn)證結(jié)果提示工藝相關(guān)雜質(zhì)的殘留量遠(yuǎn)低于規(guī)定要求，且低于檢測方法的檢測限，通常應(yīng)在成品檢定或適宜的中間產(chǎn)物控制階段設(shè)定該殘留物的檢定項(xiàng)。應(yīng)通過工藝研究、工藝表征確定產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)／雜質(zhì)產(chǎn)生、去除的階段及最終含量，并采用適宜的分析方法予以鑒定。應(yīng)在成品檢定或適宜的中間產(chǎn)物控制階段進(jìn)行制品相關(guān)物質(zhì)／雜質(zhì)的檢測并設(shè)定可接受的限度要求。

根據(jù)CpG 生產(chǎn)工藝情況，雜質(zhì)可能來自原料如原料單體 dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 以及保護(hù)劑和溶劑等，也可能來自反應(yīng)副產(chǎn)物如非目標(biāo)序列（如縮短的序列，延長或者多聚的序列以及硫代不完全序列）及生產(chǎn)或貯存過程中的降解產(chǎn)物等。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)方面，可考慮采用液相色譜-質(zhì)譜（liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS）法對雜質(zhì)譜進(jìn)行分析，全面收集信息，明確出現(xiàn)的各峰歸屬，以此為基礎(chǔ)建立合理的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。工藝相關(guān)雜質(zhì)方面，雜質(zhì)類別主要可能包括細(xì)菌內(nèi)毒素、元素雜質(zhì)及工藝步驟中添加的各種有機(jī)溶劑。應(yīng)對熱原、元素雜質(zhì)、殘留有機(jī)溶劑等進(jìn)行研究分析。

另外，考慮到殘留核酸酶和甲醛可能導(dǎo)致CpG的降解和交聯(lián)，且抗原生產(chǎn)過程中工藝相關(guān)雜質(zhì)、各種緩沖液可能引起CpG 相關(guān)雜質(zhì)改變等，應(yīng)開展充分的穩(wěn)定性考察，重點(diǎn)關(guān)注是否存在降解、生物學(xué)活性下降等。

此外，還需對添加CpG 佐劑后的制劑開展充分的質(zhì)量特性研究。包括CpG 佐劑與抗原及其他佐劑的相互作用情況（如是否吸附等），抗原及疫苗配方系統(tǒng)對CpG 的影響（如是否引起降解產(chǎn)生雜質(zhì)，使生物學(xué)活性下降等），同時(shí)應(yīng)研究CpG 佐劑與抗原的相互作用情況，在疫苗成品中的含量情況等。作為單鏈DNA，CpG 通常帶負(fù)電，其與抗原的相互作用取決于抗原表面電荷、佐劑表面電荷（如配方中含其他佐劑）、緩沖液類型等因素。關(guān)于抗原相互作用研究，建議采用多種檢測方法在多種條件下進(jìn)行CpG與抗原相互作用的研究。檢測方法包括還原／ 非還原電泳、毛細(xì)管電泳、層析及細(xì)胞檢測法等，檢測條件可考慮不同pH、離子強(qiáng)度、溫度等因素。

4.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 目前尚無CpG 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)被國內(nèi)外藥典收載。開發(fā)者應(yīng)根據(jù)質(zhì)量研究情況建立合理的原液、半成品及成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

結(jié)合已有臨床研究產(chǎn)品中對CpG 建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)情況，質(zhì)控項(xiàng)目建議包括但不限于特性鑒別，如序列測定（測序或質(zhì)譜法）、相對分子質(zhì)量（質(zhì)譜法）、硫代率（核磁共振法）、元素分析（C、H、N、P、S、Na 等主要元素）；理化特性，如顏色及外觀、pH、紫外最大吸收波長；純度；雜質(zhì)殘留，如有機(jī)溶劑殘留量、熱原檢查、微生物限度；生物學(xué)活性測定。此外，需關(guān)注疫苗成品中增加的相關(guān)檢定項(xiàng)目，如CpG 含量測定、吸附率（如有吸附）及成品生物學(xué)活性等。

檢定方法學(xué)方面，應(yīng)參照國內(nèi)外相關(guān)原則進(jìn)行全面的方法學(xué)驗(yàn)證。以下對幾種較為關(guān)鍵的檢測方法進(jìn)行討論：

序列測定可采用核酸測序法及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatography-mass spectrometry／mass spectrometry，LC-MS ／ MS），但由于 CpG 序列中核苷酸的重復(fù)序列較多，采用LC-MS ／ MS 法的測定結(jié)果并不能準(zhǔn)確反映CpG 序列的正確性，更宜結(jié)合TA克隆核酸測序法進(jìn)行綜合的測序分析。硫代率影響CpG 的穩(wěn)定性，是評價(jià)CpG 質(zhì)量的重要指標(biāo)，采用的檢測方法應(yīng)可區(qū)分硫代完全與硫代不完全的產(chǎn)品，如采用核磁磷譜法進(jìn)行分析。元素雜質(zhì)分析可參照ICH Q3D，采用ICPMS 法。純度方法應(yīng)充分驗(yàn)證，CpG 的潛在雜質(zhì)包括氧化、硫代不完全等帶來的雜質(zhì)，不同色譜對不同雜質(zhì)的分離效果不同，對于潛在雜質(zhì)應(yīng)進(jìn)行多種原理的純度控制，如廣泛應(yīng)用于核酸藥物研究和純度分析的強(qiáng)陰離子交換色譜法（strong anion exchange-high performance liquid chromatography，SAX-HPLC）［26］、反相高效液相色譜法等。

殘留有機(jī)溶劑通常采用氣相色譜法分析，依照《中國藥典》四部（2020 版）等進(jìn)行殘留和毒性評估。對于《中國藥典》四部（2020 版）已收載的溶劑，可參考相關(guān)溶劑分析方法及殘留限度進(jìn)行控制。對于《中國藥典》四部（2020 版）、ICH 等指導(dǎo)文件中無限度規(guī)定和未收載的有機(jī)溶劑，可考慮通過查閱化學(xué)物質(zhì)毒性數(shù)據(jù)庫等資料，獲得試劑的毒性研究數(shù)據(jù)，建立合適的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行控制。通常，有機(jī)溶劑殘留質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)限度與工藝能力應(yīng)在同一數(shù)量級。

生物學(xué)活性測定方面，目前采用的方法包括基于免疫機(jī)理構(gòu)建的HEK-Blue hTLR9 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞進(jìn)行的報(bào)告基因法［27-28］及CpG 體外活化免疫細(xì)胞功能等方法，后一種方法是采用人樹突狀細(xì)胞系GEN細(xì)胞作為效應(yīng)細(xì)胞，ELISA 法檢測細(xì)胞分泌至上清中細(xì)胞因子情況，從而反映CpG 體外活化免疫細(xì)胞功能。在保證上述方法條件一致的情況下，特定細(xì)胞因子對應(yīng)的CpG 半數(shù)有效濃度也可作為CpG 種類和序列篩選對比的臨床前參考依據(jù)。對于體內(nèi)免疫學(xué)活性測定，根據(jù)免疫學(xué)原理，Th2 細(xì)胞促進(jìn)IgG1亞型抗體的分泌，Th1 細(xì)胞促進(jìn)IgG2a 亞型抗體的分泌，因此IgG2a 亞型抗體水平在一定程度上可反映出機(jī)體免疫應(yīng)答過程中Tn（naive T）細(xì)胞分化為Th1 細(xì)胞的趨勢。如常用的鋁佐劑主要增強(qiáng)Th2 細(xì)胞介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答，CpG 佐劑主要介導(dǎo)Th1 細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答，通過檢測免疫小鼠IgG2a 亞型抗體表達(dá)量情況，可反映CpG 佐劑體內(nèi)活性情況。對CpG 的活性測定，重點(diǎn)關(guān)注建立的方法應(yīng)盡可能反映作用機(jī)制及顯著的量效關(guān)系，如納入質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)還需考慮檢測方法的敏感度、精密度、耐用性等，最終綜合評定，必要時(shí)建議開展檢測方法與體內(nèi)活性的相關(guān)性研究。

疫苗成品中CpG 含量測定為重要指標(biāo)，應(yīng)考慮采用專屬性強(qiáng)的檢測方法，如采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜（inductively coupled plasma-atomic emission spectrometry，ICP-AES）或電感耦合等離子體質(zhì)譜（inductively coupled plasma mass spectrometry，ICPMS）等方法，通過測定S、P 等的含量確定CpG 含量。如通過抗原相作用研究證明CpG 在疫苗系統(tǒng)中以吸附狀態(tài)存在，需檢測吸附率。

對于CpG 佐劑及含有CpG 佐劑的成品，其保存條件、運(yùn)輸方法及效期等需根據(jù)穩(wěn)定性考察研究數(shù)據(jù)確定。穩(wěn)定性考察方案總體上可參照《生物制品穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則》，并根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)結(jié)合保存、包裝和運(yùn)輸?shù)染唧w情況合理設(shè)計(jì)。建議考察生產(chǎn)工藝相關(guān)雜質(zhì)、配制佐劑用溶液及疫苗成品緩沖液性質(zhì)（如鹽類別及濃度、pH、其他組分）對CpG 穩(wěn)定性的影響，根據(jù)CpG 特性，選擇的檢測方法靈敏度應(yīng)能足夠監(jiān)測CpG 降解情況，重點(diǎn)建議關(guān)注純度、硫代率、含量、生物學(xué)活性、降解情況及吸附完全性等指標(biāo)。

5 小 結(jié)

隨著臨床研究及應(yīng)用數(shù)據(jù)的積累，CpG 類佐劑免疫機(jī)制得到越來越多的證實(shí)，成為疫苗研究的熱點(diǎn)之一。不同于傳統(tǒng)生物制品，CpG 佐劑多以化學(xué)合成方式生產(chǎn)，其生產(chǎn)和質(zhì)控是合成、免疫、生物學(xué)等專業(yè)的綜合體現(xiàn)，隨著研究的廣泛、深入開展，將更加關(guān)注對不同來源CpG 佐劑的安全性、有效性和質(zhì)量可控性，研究數(shù)據(jù)的不斷積累也將提升研究者與監(jiān)管方對CpG 的認(rèn)知。