紫紅長茄根、莖、葉的化學(xué)成分及其含量測定

盧海莎， 晏 晨， 孫貴萍， 洪開文

(1.安順職業(yè)技術(shù)學(xué)院， 貴州 安順 561000； 2.安順市人民醫(yī)院， 貴州 安順 561000)

茄(SolanummelongenaL.)為茄科茄屬植物，在我國大部分地區(qū)均有種植。植物學(xué)將茄劃分為圓茄、長茄和矮茄3個變種，其顏色有白色、紅色及紫色等類型。茄是我國大宗種植的農(nóng)產(chǎn)品，目前主要將其果作為蔬菜食用，而其根、莖和葉則作為農(nóng)業(yè)垃圾廢棄，未進行有效利用。已有研究[1-4]表明，茄莖中含有黃酮醇及其苷類，茄根中含有蘆丁，二者中還均含有生物堿類和甾體皂苷類成分，可在延緩衰老、抗炎、鎮(zhèn)痛、止血等方面發(fā)揮一定作用。目前鮮見針對紫紅長茄根、莖、葉化學(xué)成分的系統(tǒng)研究報道。因此，對紫紅長茄根、莖、葉的化學(xué)成分進行定性和定量分析，探明該品種根、莖、葉的化學(xué)成分狀況，為進一步研究茄根、莖、葉的化學(xué)成分提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，進而為茄根、莖、葉相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)提供支撐，以提高茄的資源利用率和經(jīng)濟價值、減少農(nóng)業(yè)廢棄物。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 紫紅長茄，種子由貴州科美種子有限公司提供(批號：4418821B00000022)，種植于安順市平壩區(qū)樂平鎮(zhèn)塘約村。分別于2019年12月和2020年12月從53.33 hm2種植地中采收約500 kg茄，分揀出根、莖、葉，經(jīng)水洗、晾曬，粉碎成粗粉，于2～8℃冷藏備用。2019年12月收集的樣品記為根1、莖1、葉1；2020年12月收集的樣品記為根2、莖2、葉2。

1.1.2 儀器 液相系統(tǒng):Dionex Ultimate 3000 RSLC (HPG)，質(zhì)譜系統(tǒng):Thermo Scientific Q Exactive Focus,離子源:HESI-II，制造商均為Thermo Fisher Scientific。HPLC儀器：Agilent 1100 HPLC；分光光度計：Agilent Cary 60 UV-Vis，均為安捷倫科技(中國)有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 試劑 分析純試劑和色譜純試劑，均為市售；對照品為成都格力普生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 定性檢測 參考文獻資料[5-6]，將根2、莖2、葉2采用以下2種方法制備供試液，并將方法1制備的供試液記為供試液根2-1、供試液莖2-1、供試液葉2-1，方法2制備的供試液記為供試液根2-2、供試液莖2-2、供試液葉2-2。

方法1：取樣品粉末約4 g，分別與70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇按1∶10的質(zhì)量與體積比率混合→40℃下超聲波提取60 min→抽濾→濾液減壓濃縮至浸膏→2%HCl溶解，并調(diào)pH至2～3→20℃12 000 r/min離心20 min→取上清液→用Na2CO3調(diào)pH至10～11→產(chǎn)生生物堿沉淀→20℃12 000 r/min離心20 min→生物堿沉淀加對應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶解并定容→待測。

方法2：取樣品粉末約4 g，精密稱定，置150 mL帶塞錐形瓶中，加50 mL甲醇，精密稱定，超聲提取40 min，放冷，加甲醇補足減失的重量，混勻，過濾，待測。

各供試液均采用高分辨液質(zhì)聯(lián)用方法定性檢測其所含成分。檢測儀器參數(shù)設(shè)置分別為：1) 色譜柱類型，ACE Ultracore2.5 SuperC18(制造商：菲羅門)，規(guī)格100*2.1 mm，柱溫40℃。2) 離子源，Spray Voltage：3.0 kV (+)/2.5 kV (-)；Capillary Temperature：320℃；Sheath Gas：35 arb；AUX Gas：10 arb；Sweep Gas：0 arb；Probe Heater Temperature：350℃；S-Lens60。3) 質(zhì)譜掃描，Scan mode：Full MS-ddms2；Full MS scan range：100 to 1 500 m/z；Spectrum data type：Profile；Resolution：Full MSO(70 000)，MS/MS(17 500)；AGC target：Full MS(1e6)，MS/MS(2e5)；Maximum IT：Full MS(100 ms)，MS/MS(50 ms)；Loop count：3；MSX count：1；Isolation width：1.5 m/z；NCE (Stepped NCE)：20, 40, 60；Minimum AGC target：8e3；Intensity Threshold：1.6e5；Dynamic exclution：5 s。4) 梯度洗脫，Time (min)：0，2，42，47，47.1，50；Flow (mL/min)：0.3，0.3，0.3，0.3，0.3，0.3；C(有機相)乙腈(0.1%甲酸)：5，5，95，95，5，5；B(水相)0.1%甲酸水：95，95，5，5，95，95。

1.2.2 定量檢測 參考文獻資料[7-9]，對樣品根1、莖1、葉1、根2、莖2、葉2中的α-茄堿、總黃酮、總皂苷、蘆丁、齊墩果酸、皂苷類成分(原薯蕷皂苷、原纖細薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、薯蕷皂苷、纖細薯蕷皂苷、薯蕷皂苷元)、東莨菪內(nèi)酯、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A進行定量檢測，相應(yīng)的對照品溶液設(shè)置、成分提取方法、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和色譜條件等分別如下。

1)α-茄堿含量測定

對照品α-茄堿溶液：1.115 0 mg/mL。

成分提取方法：各樣品分別與70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇按1∶10的質(zhì)量與體積比率混合→40℃下超聲波提取60 min→抽濾→濾液減壓濃縮至浸膏→2%HCl溶解，并調(diào)pH至2～3→20℃12 000 r/min離心20 min→取上清液→用Na2CO3調(diào)pH至10～11→產(chǎn)生生物堿沉淀→20℃12 000 r/min離心20 min→生物堿沉淀加對應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶解并定容，待測。

色譜條件：Agilent 1100 HPLC，Agilent SB-C18 5μm 4.6*250 mm。乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(pH 4.5，24:76)，流速0.8 mL/min，波長205 nm，柱溫30℃，進樣量10 μL。

2) 總黃酮含量測定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對照品溶液(0.2 mg/mL)1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)試劑為空白，立即以UV-VIS法在500 nm處測定。

成分提取及測定方法：分別取各樣品約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)回流提取至提取液無色(約8 h)，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇提取至無色(約4 h)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，得供試液貯備液，過濾，精密量取濾液1 mL，置25 mL刻度試管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備中自“加水至6 mL”起的操作方法進行測定。

3) 總皂苷含量測定

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對照品溶液(0.192 mg/mL)0 μL、50 μL、100 μL、200 μL、400 μL、800 μL、1 600 μL，分別加入干燥具塞試管中，揮干溶劑(水浴)，分別加入新配的8%香草醛-冰醋酸溶液0.5 mL，濃硫酸5 mL，于60℃恒溫水浴15 min取出，流水冷卻。以相應(yīng)試劑為空白，立即以UV-VIS法在537 nm處測定。

成分提取及測定方法：分別取各樣品約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)回流提取至提取液無色(約8 h)，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色(約4 h)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，得供試液貯備液，濾過，精密量取濾液1 mL，置20 mL刻度試管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備中自“水浴揮干溶劑”起的操作方法進行測定。

4) 蘆丁含量測定

對照品蘆丁溶液：0.220 0 mg/mL。

供試液：分別取各樣品約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)回流提取至提取液無色(約8 h)，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色(約4 h)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，得供試液。

色譜條件：Agilent 1260 HPLC，CAPCELL PAK C18 5 μm 4.6*250 mm。甲醇-1%冰醋酸(45∶55)，流速0.9 mL/min，波長257 nm，柱溫30℃，進樣量5 μL。

5)齊墩果酸的含量測定

對照品溶液：0.192 mg/mL。

供試液：分別取各樣品約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)回流提取至提取液無色(約8 h)，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色(約4 h)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，得供試液。

色譜條件：Agilent 1260 HPLC，CAPCELL PAK C18 5 μm 4.6*250 mm。甲醇-1%冰醋酸(82∶18)，流速0.9 mL/min，波長，210 nm，柱溫20℃，進樣量5 μL。

6) 皂苷類成分含量測定

對照品溶液：以甲醇為溶劑，原薯蕷皂苷：0.517 mg/mL；原纖細薯蕷皂苷：0.414 mg/mL；偽原薯蕷皂苷：0.808 mg/mL；薯蕷皂苷：0.467 mg/mL；纖細薯蕷皂苷：0.391 mg/mL；薯蕷皂苷元：0.590 mg/mL。

供試液：分別取各樣品約2 g，精密稱定，置150 mL帶塞錐形瓶中，加50%甲醇50 mL，精密稱定，超聲提取20 min，放冷，加50%甲醇補足減失的重量，混勻。

色譜條件：Agilent 1100 HPLC，Agilent SB-C18 5 μm 4.6*250 mm。乙腈-水(70∶30)，流速1 mL/min，波長202 nm，柱溫30℃，進樣量10 μL。

7) 東莨菪內(nèi)酯含量測定

對照品東莨菪內(nèi)酯溶液：0.446 mg/mL。

供試液：分別取各樣品約4 g，精密稱定，置150 mL具塞錐形瓶中，加50 mL甲醇，精密稱定，超聲提取40 min，放冷，加甲醇補足減失的重量，混勻。

色譜條件：Agilent 1260 HPLC，CAPCELL PAK C18 5 μm 4.6*250 mm。甲醇-0.5%冰醋酸(32∶78)，流速1 mL/min，波長298 nm，柱溫30℃，進樣量5 μL。

8) 綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A含量測定

對照品溶液：以甲醇為溶劑，綠原酸0.301 mg/mL；隱綠原酸，0.511 mg/mL；異綠原酸A，0.300 mg/mL。

對照品混標(biāo)：精密量取對照品儲備液各1～10 mL量瓶中，用甲醇定容。

供試液：分別各樣品約4 g，精密稱定，置150 mL具塞錐形瓶中，加50 mL甲醇，精密稱定，超聲提取40 min，放冷，加甲醇補足減失的重量，混勻，過濾，待測。

色譜條件：Agilent 1260 HPLC，Agilent Zorbax SB-C18 5 μm 4.6*250 mm。乙腈(A)-1%磷酸(B)，梯度：0～20 min，A 11%；20～25 min，A 11%～50%；25～34 min，50%；流速1 mL/min，波長328 nm，柱溫30℃，進樣量5 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫紅長茄根、莖、葉的化學(xué)成分

由表1可知，供試液根2-1檢測出右旋奎寧酸、L-脯氨酸、檸檬酸等32種成分；供試液莖2-1檢測出右旋奎寧酸、L-脯氨酸、蔗糖等27種成分；供試液葉2-1檢測出蔗糖、右旋奎寧酸、鹽酸胡蘆巴堿等23種成分?？傮w上，按方法1制備的根、莖、葉的供試液均含有多種苷類、有機酸類、黃酮類成分。

從表2可知，供試液根2-2檢測出1-咖啡?？鼘幩?、異綠原酸A、澳洲茄邊堿等33種成分；供試液莖2-2檢測出隱綠原酸、1-咖啡?？鼘幩?、山奈酚-3-O-蕓香糖苷等31種成分；供試液葉2-2檢測出隱綠原酸、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、壬二酸等39種成分?？傮w上，按方法2制備的根、莖、葉的供試液均含有多種苷類、有機酸類、黃酮類成分。

表2 供試液根2-2、莖2-2、葉2-2檢出的化學(xué)成分

2.2 紫紅長茄根、莖、葉中部分化學(xué)成分的含量

從表3可知各紫紅長茄根、莖、葉樣本中部分化學(xué)成分的檢測含量。

表3 紫紅長茄根、莖、葉樣品中部分化學(xué)成分的檢測含量 %

2.2.1α-茄堿含量 樣品根1、莖1、葉1、根2、莖2、葉2均未檢出α-茄堿。

2.2.2 總黃酮含量 樣品根1、莖1、葉1、根2的特征圖譜不明顯，莖2檢出少量總黃酮，含量為0.7%，葉2中總黃酮含量較大，為3.6%。

2.2.3 總皂苷含量 樣品根1、莖1、葉1、根2、莖2、葉2圖譜特征均不明顯。

2.2.4 蘆丁含量 樣品根1、莖1、葉1、根2、莖2、葉2圖譜特征均不明顯。

2.2.5 齊墩果酸含量 樣品根1、莖1、葉1、根2、莖2、葉2均未檢出齊墩果酸。

2.2.6 皂苷類成分含量 樣品根2、莖2、葉2均未檢出皂苷類成分。

2.2.7 東莨菪內(nèi)酯含量 樣品根2、莖2、葉2 均未檢出東莨菪內(nèi)酯。

2.2.8 綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A含量 樣品根2、莖2、葉2中綠原酸、隱綠原酸的平均含量分別為0.066%、0.131%、0.529%。異綠原酸A未檢出。

綜上表明，檢測成分含量較顯著的樣品均為2020年采收，2019年采收的樣品檢測數(shù)據(jù)不顯著，可能是因樣本儲存時間長，其相應(yīng)成分的含量下降較多導(dǎo)致。其他成分的檢測圖譜特征均不明顯，可視為在試驗檢測條件下未檢出，在今后的研究中，可考慮調(diào)整提取方法或檢測條件。

3 結(jié)論與討論

通過高分辨液質(zhì)檢測法和高效液相色譜法對紫紅長茄根、莖、葉的化學(xué)成分進行提取，并對其部分化學(xué)成分的含量進行檢測得出，紫紅長茄根、莖、葉含有的化學(xué)成分較多，主要為黃酮類、有機酸類、苷類等成分。黃酮類成分在當(dāng)年采收紫紅長茄的莖、葉中含量較顯著，綠原酸、隱綠原酸在當(dāng)年采收紫紅長茄的根、莖、葉中含量較顯著，其他成分含量均不明顯。由于當(dāng)年采收的樣品中黃酮類、綠原酸、隱綠原酸成分的含量顯著高于上一年采收的樣品，因此，若對此類化學(xué)成分進行開發(fā)利用，建議原料選擇當(dāng)年采收的紫紅長茄，并在采收后及時使用其根、莖、葉。

對于紫紅長茄根、莖、葉中的生物堿類成分，本研究雖經(jīng)多次、多樣品的反復(fù)測試，但其含量均不明顯，可視為在研究的試驗條件下未檢出。這一結(jié)果與現(xiàn)有研究[1-4，10]不相符，原因可能與茄的產(chǎn)地、采收方法、采收季節(jié)、品種等因素有關(guān)。因此，在今后的研究中，可綜合考慮上述因素的影響，進一步研究紫紅長茄根、莖、葉的化學(xué)成分特征，以更好地對其根、莖、葉的化學(xué)成分進行利用。