卒中后認(rèn)知功能障礙患者外周血miR-96血清IGF-1的相關(guān)性及診斷價值

吳冠瑾， 徐 軍， 黑丹丹， 岳亞男， 馮靜靜， 李 學(xué)

腦卒中后認(rèn)知障礙(PSCI)是指急性腦血管疾病發(fā)生后導(dǎo)致患者出現(xiàn)不同程度認(rèn)知功能減退，可嚴(yán)重影響患者的工作及生活甚至導(dǎo)致情緒障礙性疾病發(fā)生[1,2]。明確PSCI發(fā)生的機(jī)制、早期確診疾病并采取針對性治療手段，可能是優(yōu)化PSCI患者治療預(yù)后及生活質(zhì)量的關(guān)鍵所在。miRNAs是單鏈非編碼的小分子RNA，通過與信使RNA結(jié)合對mRNAs的翻譯實現(xiàn)促進(jìn)或者抑制作用，最終對機(jī)體各個功能產(chǎn)生調(diào)節(jié)。不少研究[3,4]指出miRNAs可能在認(rèn)知功能障礙的發(fā)生過程中扮演重要角色，且最新基礎(chǔ)研究[5]指出miRNA-96可通過抑制胰島素樣生長因子1類受體(IGF-1R)而參與七氟醚麻醉新生大鼠發(fā)生認(rèn)知功能障礙，推測miRNA-96/IGF-1R途徑功能變化參與了認(rèn)知功能障礙的發(fā)生發(fā)展，但具體其是否在PSCI的病情演進(jìn)過程中也發(fā)揮一定作用尚未有研究明確。本次研究以此為切入點探討PSCI發(fā)生的可能機(jī)制，及其對疾病的輔助診斷價值，旨在為PSCI的早期確診及治療方案選擇等提供新依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2018年1月-2020年6月在本院神經(jīng)內(nèi)科一、二病區(qū)招募的178例缺血性腦卒中恢復(fù)期患者作為研究對象，年齡40～75歲之間，根據(jù)蒙特利爾認(rèn)知評估量表(MoCA)評分將其分為PSCI組(n=61)、非PSCI組(n=117)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)神經(jīng)影像學(xué)證據(jù)提示患者存在腦血管疾病，且梗死部位位于基底節(jié)區(qū)、額葉皮質(zhì)、內(nèi)側(cè)顳葉、腦干、小腦，無廣泛大面積病灶，患者生命體征穩(wěn)定；(2)MoCA評分值<26分；(3)本次涉及的卒中為患者首次,且在研究開展前2 w～1 y內(nèi)發(fā)生；(4)配合相關(guān)檢查及研究，本人簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他可能影響認(rèn)知功能的疾病，如阿爾茲海默癥、額顳葉癡呆等；(2)既往其他腦部疾患，如腦外傷、腦腫瘤等；(3)卒中發(fā)生前即存在智力、認(rèn)知功能異常；(4)合并基礎(chǔ)性嚴(yán)重語言、聽力、視力、精神異常，可能影響患者的認(rèn)知功能；(5)卒中發(fā)生前即存在抑郁癥、焦慮癥、精神分裂癥等精神疾患。本院倫理委員會審核批準(zhǔn)此次研究計劃。

1.2 外周血miR-96表達(dá)水平、血清IGF-1水平測定 178例缺血性腦卒中恢復(fù)期患者在完善MoCA同時留取空腹外周靜脈血標(biāo)本5 ml。(1)使用miRNA純化試劑盒分離提取miRNA，使用分光光度計測定其濃度及純度，使用miRNA cDNA試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。以U6作為內(nèi)參，使用實時熒光定量PCR檢測miRNAs表達(dá)量。引物序列如下：U6 上游引物5’-ATCGGATGCGAGCTGGATC-3’，下游引物5’-TAACGATGCGAAGCTGAGC-3’；miR-96上游引物5’-GCGATCGAATGCGAGCGAAT-3’，下游引物5’-CGTAAGCTAATGCTGAGCTG-3’。反應(yīng)條件包括：95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性15 s,60 ℃退火1 min，共計40各循環(huán)。使用2-△△Ct計算miRNA-96的相對表達(dá)量。(2)外周血標(biāo)本分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法測定其中胰島素樣生長因子-1(IGF-1)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 使用軟件SPSS 20.0對文中數(shù)據(jù)進(jìn)行計算，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。計量資料的比較采用t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson檢驗；診斷價值分析采用受試者工作特征(ROC)曲線。

2 結(jié) 果

2.1 PSCI組、非PSCI組外周血miR-96、血清IGF-1水平的比較及其相關(guān)性 PSCI組患者外周血miR-96表達(dá)水平(0.83±0.12)、血清IGF-1水平(38.38±7.14)ng/ml；非PSCI組患者外周血miR-96表達(dá)水平(0.69±0.14)、血清IGF-1水平(54.29±8.03)ng/ml。PSCI組患者外周血miR-96表達(dá)水平高于非PSCI組，血清IGF-1水平低于非PSCI組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Pearson檢驗發(fā)現(xiàn)，PSCI患者外周血miR-96表達(dá)水平與血清IGF-1水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

2.2 不同miR-96、IGF-1水平腦卒中患者M(jìn)oCA評分值比較 根據(jù)178例腦卒中恢復(fù)期患者入院時miR-96、IGF-1水平中位數(shù)，將其分為高miR-96組、低miR-96組；高IGF-1組、低IGF-1組各89例。高miR-96組、低IGF-1組患者的MoCA評分值分別為(24.12±5.09)分、(23.77±3.19)分;低于低miR-96組、高IGF-1組患者的MoCA評分值(27.34±1.87)分、(27.15±2.08)分，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 miR-96、IGF-1對PSCI的診斷效能 ROC曲線顯示，miR-96診斷PSCI的最佳截斷值為0.745，AUC為0.877(95%CI0.823～0.932)，對應(yīng)的靈敏度、特異度分別為81.82%、84.85%；IGF-1診斷PSCI的最佳截斷值為45.33 ng/ml，AUC為0.817(95%CI0.745～0.889)，對應(yīng)的靈敏度、特異度分別為77.38%、77.61%(見圖1～圖2)。

圖1 miR-96診斷PSCI的ROC曲線

圖2 IGF-1診斷PSCI的ROC曲線

3 討 論

目前我國腦卒中發(fā)病率逐年增高，其中PSCI可影響卒中預(yù)后及生活質(zhì)量，但部分患者早期無法得到客觀有效診斷從而導(dǎo)致病情貽誤[6～8]。MoCA是公認(rèn)的認(rèn)知障礙篩查重要工具，已經(jīng)獲得國際專家認(rèn)可，其在早期診斷PSCI中的作用明顯,但可能受年齡、性別、教育水平等因素影響而導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏倚。尋找其他可為PSCI診斷提供幫助的指標(biāo)可增加早期診斷敏感性及準(zhǔn)確性，對患者治療預(yù)后改善具有重要意義。

miRNAs可在血循環(huán)中穩(wěn)定存在，且隨機(jī)體病理生理改變其表達(dá)水平發(fā)生上調(diào)或下調(diào)。最新研究[9～11]顯示miRNAs參與學(xué)習(xí)、記憶等腦高級功能的調(diào)控，且與神經(jīng)元突觸可塑性、認(rèn)知相關(guān)疾病相關(guān)。徐暢[5]的研究指出miR-96上調(diào)可促使海馬神經(jīng)元凋亡并參與認(rèn)知功能障礙發(fā)生，且具體途徑與其下調(diào)IGF-1R相關(guān)。劉艷菊[12]的研究指出中成藥治療PSCI可引起患者血清IGF-1水平增加、認(rèn)知功能改善；基礎(chǔ)研究[13]更指出腹腔注射補充IGF-1可改善睡眠剝奪后認(rèn)知功能下降小鼠的認(rèn)知功能。文中結(jié)果發(fā)現(xiàn)PSCI患者外周血miR-96表達(dá)上調(diào)并與血清IGF-1水平呈負(fù)相關(guān)，這與既往基礎(chǔ)研究結(jié)果吻合。同時高miR-96組、低IGF-1組患者的MoCA評分值較低，進(jìn)一步證明miR-96高表達(dá)、IGF-1低水平可引起認(rèn)知功能障礙。關(guān)于該調(diào)控模式對機(jī)體認(rèn)知功能的影響途徑，可能與IGF-1水平下調(diào)后PI3K/Akt信號通路功能被抑制，凋亡相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)被激活[14,15]。

鑒于miR-96、IGF-1對PSCI患者認(rèn)知功能的影響，推測其在輔助診斷該疾病方面也有一定功能。經(jīng)ROC曲線顯示，miR-96表達(dá)水平>0.745、IGF-1水平<45.33 ng/ml在輔助診斷PSCI中具有較高的靈敏度、特異度，可能在日后疑似PSCI患者的早期診斷中具有幫助。

綜上所述，可得出結(jié)論：PSCI患者外周血miR-96表達(dá)水平上調(diào)、血清IGF-1水平下調(diào)，且miR-96對IGF-1存在負(fù)性調(diào)控作用。早期測定miR-96表達(dá)量及IGF-1水平可能在準(zhǔn)確診斷PSCI方面具有重要的輔助價值。