大蒜有效部位組合物對(duì)模型大鼠胃癌前病變的療效和作用機(jī)制

那坤 張立石 王瑞海 柏冬 苗青 孫小鑫 劉麗梅

摘要 目的：研究大蒜油-大蒜皂苷-大蒜多糖組合物治療胃癌前病變的療效，闡明該組合物治療胃癌前病變的作用機(jī)制。方法：將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組（n=14）和造模組（n=144）。于造模22周時(shí)，將造模組大鼠再隨機(jī)分為6組：模型組（n=24）、大蒜油對(duì)照組（n=24）、胃復(fù)春對(duì)照組（n=24）、組合物高、中、低劑量組（3×24）。連續(xù)給藥13周后處死。取材后，在光鏡下觀察胃黏膜的病理學(xué)變化。同時(shí)，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)各組大鼠離心血漿中的3種腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199、CA724的水平。運(yùn)用Western Blotting和Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)胃癌前病變大鼠胃組織中TGF-β1和Smad4的蛋白和mRNA表達(dá)情況。結(jié)果：1）組合物高劑量（2.38 g/kg）組能夠顯著地改善胃癌前病變大鼠胃黏膜的病理變化。2）組合物高劑量（2.38 g/kg）組能夠明顯降低胃癌前病變大鼠血清中的CEA、CA199、CA724 3種腫瘤標(biāo)志物的水平。3）組合物高劑量（2.38 g/kg）組能夠下調(diào)TGF-β1 mRNA及其蛋白表達(dá)水平，而能夠上調(diào)Smad4 mRNA及其蛋白表達(dá)水平。結(jié)論：組合物高劑量（2.38 g/kg）組能夠顯著改善胃癌前病變大鼠胃黏膜的病理變化，降低血清腫瘤標(biāo)志物水平，調(diào)節(jié)TGF-β1和Smad4的蛋白表達(dá)，從而糾正TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常變化，有效地治療胃癌前病變。

關(guān)鍵詞 大蒜油;大蒜皂苷;大蒜多糖;組合物;甲基硝基亞硝基胍;大鼠;胃癌前病變;機(jī)制探討

Abstract Objective：To study the efficacy of garlic YZD composition in the treatment of gastric precancerous lesions，and to further clarify the mechanism of garlic YZD composition in the treatment of gastric precancerous lesions.Methods：The rats were randomly divided into 2 groups：a control group（14 rats） and a model group（144 rats）.After 22 weeks of modeling，the rats were randomly divided into 6 groups：a model group，a garlic oil control group，a Weifuchun control group，a garlic YZD composition high，a medium and low dose groups，with 24 rats in each group.They were killed after 13 weeks of continuous administration.After taking the material，the pathological changes of gastric mucosa were observed under light microscope.At the same time，the levels of three tumor markers CEA，CA199 and CA724 in the centrifuged plasma of rats in each group were detected by electrochemiluminescence.Western Blotting and Real-time PCR were used to detect the protein and mRNA expression of TGF-β1 and Smad4 in gastric tissues of rats with gastric precancerous lesions.Results：1）High dose group of garlic YZD composition（2.38 g/kg） could significantly improve the pathological changes of gastric mucosa in rats with gastric precancerous lesions.2）High dose group of garlic YZD composition（2.38g/kg） can significantly reduce the levels of CEA，CA199 and CA724 tumor markers in serum of rats with gastric precancerous lesions.3）High dose group of garlic YZD composition（2.38g/kg） can down regulate the expression level of TGF-β l mRNA and its protein，but up regulate the expression level of Smad4 mRNA and its protein.Conclusion：High dose group of garlic YZD composition（2.38 g/kg） can significantly improve the pathological changes of gastric mucosa in rats with gastric precancerous lesions，reduce the level of serum tumor markers，regulate the protein expression of TGF-β1 and Smad4，so as to correct the abnormal changes of TGF-β1/Smads signal transduction pathway，and effectively treat the precancerous lesions of gastric cancer.

Keywords Garlic oil;Garlic saponin;Garlic polysaccharide;Composition;MNNG;Rats;Precancerous lesion of gastric cancer;Mechanism discussion

中圖分類號(hào)：R273文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2021.19.015

胃癌前病變屬中醫(yī)學(xué)中的“胃脘痛”“痞滿”范疇。中醫(yī)專家對(duì)于胃癌前病變的中醫(yī)病因和病機(jī)目前尚無一致認(rèn)識(shí)。正氣可視為機(jī)體的免疫功能，邪氣為各種有害因素，可破壞人體內(nèi)部或人體與外界環(huán)境間的相對(duì)平衡狀態(tài)[1]。疾病的發(fā)生和發(fā)展過程大都是正氣與邪氣互相斗爭(zhēng)的結(jié)果，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)部功能失調(diào)或內(nèi)部與外部環(huán)境之間相互關(guān)系紊亂，器官、組織、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、基因的功能、代謝或形態(tài)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生較大改變[2]。正氣旺盛則機(jī)體免疫功能正常，正氣虛弱導(dǎo)致機(jī)體正常的免疫功能遭到破壞或抑制，進(jìn)而不能有效識(shí)別和殺傷體內(nèi)出現(xiàn)的少量異常細(xì)胞，即癌細(xì)胞，從而形成腫瘤。若邪氣勝過正氣，則可導(dǎo)致腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展[3]。由此可見治療胃癌前病變的中醫(yī)基本治療方法為扶正祛邪之法，本實(shí)驗(yàn)采用的藥物大蒜油-大蒜皂苷-大蒜多糖組合物（大蒜YZD）由大蒜提取純化得到的3個(gè)有效部位組成：大蒜油（大蒜油含有的二烯丙基二硫和二烯丙基三硫在組合物中含量為1.51%）、大蒜皂苷（在組合物中含量為8.49%）和大蒜多糖（在組合物中含量為38.86%）。經(jīng)篩選確定組方（專利號(hào)：ZL201110053280.9）治療胃癌前病變，本實(shí)驗(yàn)考察大蒜YZD治療胃癌前病變的治療效果，并探討大蒜YZD治療胃癌前病變的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選用4周齡Wistar大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，158只，體質(zhì)量55～70 g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK-（軍）2007-004，在中國中醫(yī)科學(xué)院基礎(chǔ)理論研究所清潔級(jí)動(dòng)物室喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室許可證號(hào)：SYXK（京）-2010-0032，動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過（倫理審批號(hào)：2010-046）。

1.1.2 藥物 大蒜YZD藥液、大蒜油、胃復(fù)春片、0.03%雷尼替丁、甲基硝基亞硝基胍（MNNG）溶液。

1.1.3 試劑與儀器 N-甲基-N′-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）（日本東京化成工業(yè)株式會(huì)社，CAS號(hào)：70-25-7，EINECS號(hào)：200-730-1）;胃復(fù)春片（杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字Z20040003）;大蒜油和大蒜YZD（中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所中醫(yī)方證基礎(chǔ)研究中心質(zhì)量分析室大蒜課題組提供）;E170免疫分析儀（羅氏公司，瑞士，型號(hào)：2009-18）;K15離心機(jī)（Sigma公司，德國，型號(hào)：3K15）;LeicaDM6000生物顯微鏡（Leica公司，德國，型號(hào)：M）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 1）分組：隨機(jī)分為空白對(duì)照組（n=14）和模型組（n=144）。于造模22周，將造模組大鼠再隨機(jī)分為6組：模型組、大蒜油對(duì)照組、胃復(fù)春對(duì)照組、大蒜YZD高、中、低劑量組，每組24只。2）造模方法：多因素聯(lián)合法：自由飲用100 μg/mL甲基硝基亞硝基胍（MNNG）溶液，MNNG溶液為每周用純凈水配制成1 g/L濃度的母液于4 ℃避光保存，臨時(shí)用純凈水配成所需濃度;0.03%雷尼替丁飼料喂食。3）造模檢測(cè)：自然死亡大鼠隨時(shí)檢測(cè);造模周期結(jié)束隨機(jī)從各組抽取1只處死并檢測(cè)。

1.2.2 給藥方法 造模35周后開始治療，大蒜YZD高、中、低劑量組分別灌胃給予濃度為0.238 g/mL、0.119 g/mL、0.059 5 g/mL的大蒜YZD藥液，給藥容積為1 mL/100 g體質(zhì)量，給藥劑量為2.38 g/kg、1.19 g/kg、0.595 g/kg體質(zhì)量;胃復(fù)春組和大蒜油組分別灌胃給予濃度為0.1 g/mL的胃復(fù)春混懸液和濃度為6.3 mg/mL的大蒜油乳濁液，給藥容積均為1 mL/100 g體質(zhì)量，給藥劑量分別為1.0 g/kg體質(zhì)量和63 mg/kg體質(zhì)量。以上給藥1次/d，連續(xù)6 d，停止給藥1 d后，再連續(xù)給藥6 d，如此給藥13周。空白對(duì)照組和模型組則按上法給予等容積的純凈水。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法 給藥13周后，將各組大鼠用戊巴比妥鈉注射液進(jìn)行麻醉，麻醉后腹主動(dòng)脈取血5 mL，血液離心20 min，2 500 r/min，離心半徑8 cm，離心完畢后取血清，分裝后放置-80 ℃冰箱儲(chǔ)存。將大鼠開腹后立即取出胃進(jìn)行稱重，取胃大彎部分，平均分為兩部分，一部分放在甲醛里固定，一部分放在液氮罐里保存。常規(guī)取材，胃經(jīng)固定后，取出約1.0 mm×2.0 mm大小胃組織塊，并迅速放置于4%多聚甲酸溶液中固定，經(jīng)過24 h后進(jìn)行石蠟包埋，連續(xù)切片6張，將切片進(jìn)行HE染色，光鏡下進(jìn)行胃黏膜的病理學(xué)觀察。大鼠胃黏膜異形增生、腸腺化生、萎縮按全國胃癌防治研究協(xié)作組病理組1978年制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。1）輕度不典型增生：鱗狀上皮增厚，有一定異形性，基底膜完整，腺體明顯增多，腺腔擴(kuò)大，腺細(xì)胞核亦增大，異形性不明顯;2）中度不典型增生：鱗狀上皮增厚，有一定異形性，基底膜完整，腺體明顯增多，腺腔擴(kuò)大，腺細(xì)胞核深染，有一定的異形性，未見核分裂;3）重度不典型增生及早期癌變：同中度，但可見核分裂;4）腸上皮化生：胃黏膜上皮細(xì)胞可見腸上皮的杯狀細(xì)胞[4]。同時(shí)，采用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)各組大鼠離心血漿中的3種腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199、CA724的水平。運(yùn)用Western Blotting和Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)胃癌前病變大鼠胃組織中TGF-β1和Smad4的蛋白和mRNA表達(dá)情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間多重比較采用Scheffe法，其中計(jì)數(shù)資料以百分率表示，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組實(shí)驗(yàn)大鼠的狀態(tài) 空白對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好、靈活喜動(dòng)、神態(tài)自如，行為未見異常，二便、飲食正常，毛發(fā)光澤，皮膚黏膜呼吸未見異常，五官未見異常分泌物;模型組大鼠少動(dòng)，精神萎靡，皮膚欠光澤，毛發(fā)凌亂;大蒜油組、大蒜YZD中劑量組、大蒜YZD低劑量組大鼠均有一定程度的飲食和活動(dòng)減少，皮毛無光澤，精神不振;大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組大鼠狀態(tài)較空白對(duì)照組大鼠活動(dòng)略少，精神狀態(tài)、精力欠佳，皮毛光澤度減低。

2.2 胃黏膜病理學(xué)變化

2.2.1 肉眼觀察 肉眼觀察可見模型組大鼠胃壁較薄，無黏液，無光澤，彈性較差，黏膜呈灰白色或蒼白色，局部黏膜可見細(xì)顆粒樣改變和散在出血點(diǎn);空白對(duì)照組大鼠胃壁彈性良好，被覆蓋黏液較多，黏膜呈粉紅色，有光澤，黏膜表面平整光滑;大蒜YZD高、中、低劑量組及大蒜油組和胃復(fù)春組大鼠胃壁彈性未見明顯異常，黏膜皺襞相對(duì)較深，可見少量黏液附著，黏膜呈暗紅色或淡紅。

2.2.2 HE染色后顯微鏡觀察 1）空白對(duì)照組：胃黏膜上皮完整，細(xì)胞的形態(tài)均勻一致，固有膜內(nèi)腺體排列整齊緊密，可見少量的嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，胃竇及胃體部未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤。未見有充血、水腫，黏膜肌層較薄。2）模型組：胃局部黏膜不完整部分腺體萎縮或消失，可見有不同程度的腺體結(jié)構(gòu)紊亂，或呈囊狀擴(kuò)張。表面可見脫落的變性、壞死的上皮細(xì)胞，上皮細(xì)胞核比例增大、濃染，有不同程度的異形性，有的見核分裂象。黏膜固有層內(nèi)可見較多淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞，少數(shù)嗜酸性粒細(xì)胞及嗜中性粒細(xì)胞浸潤。而且浸潤可深達(dá)黏膜肌層，黏膜肌層厚薄不勻，有的向固有膜延伸，在腺體之間可見平滑肌纖維，部分黏膜可見淋巴細(xì)胞聚集及淋巴濾泡形成，血管增生，可見有腫瘤形成。3）大蒜YZD低劑量組：胃體黏膜腺體排列相對(duì)較整齊，細(xì)胞形態(tài)未見異常，腺管和腺體上皮分界清楚，少部分腺體可見萎縮、腸化，炎癥細(xì)胞浸潤主要局限于黏膜淺層，固有腺體層仍保持完整。4）大蒜油組和大蒜YZD中劑量組：胃竇黏膜和胃體黏膜炎癥程度輕于模型組、大蒜YZD低劑量組，鏡下可見胃黏膜水腫、充血和上皮壞死細(xì)胞脫落，少量漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤，部分組織可見少量中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤。5）大蒜YZD高劑量組：大鼠胃黏膜上皮比模型組胃黏膜上皮完整，細(xì)胞形態(tài)較為較均，原有膜內(nèi)腺體排列較為整齊，可見較少量的淋巴細(xì)胞，腺上皮與腺管邊界清晰，炎癥細(xì)胞浸潤多分布在黏膜淺表層。6）胃復(fù)春組：胃竇和胃體部黏膜炎癥反應(yīng)輕于模型組，顯微鏡下可以看到黏膜水腫、充血以及上皮壞死細(xì)胞脫落，淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤，偶見胃黏膜糜爛，散見中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞，鏡下能夠見到核深染以及腸化生。7）模型組大鼠胃黏膜病理損傷程度明顯高于空白對(duì)照組（P<0.01），大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組與模型組比較（P<0.01）大鼠胃黏膜病理損傷程度明顯降低;大蒜油組、大蒜YZD中劑量組，大蒜YZD低劑量組大鼠胃黏膜病理損傷程度與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;大蒜YZD高劑量組與大蒜油組、大蒜YZD中劑量組、大蒜YZD低劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1，圖2。

2.3 各組腫瘤標(biāo)志物結(jié)果比較 治療后各組CEA、CA199、CA724腫瘤標(biāo)志物與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;其余各給藥組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;大蒜YZD高劑量組與大蒜YZD中、低劑量組和大蒜油組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4 各組TGF-β1和Smad4 mRNA表達(dá)情況比較

2.4.1 TGF-β1mRNA的表達(dá)情況 模型組中TGF-β1 mRNA高表達(dá)，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），其他給藥組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），大蒜YZD高劑量組中TGF-β1 mRNA表達(dá)水平低于大蒜YZD中、低劑量組和大蒜油組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖2～6。

2.4.2 Smad4 mRNA的表達(dá)情況 模型組中Smad4 mRNA的表達(dá)水平較低，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），其他各給藥組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），大蒜YZD高劑量組中Smad4 mRNA的表達(dá)水平較高，與大蒜YZD中、低劑量組和大蒜油組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖7～11。

2.5 各組TGF-β1和Smad4蛋白表達(dá)結(jié)果比較

2.5.1 TGF-β1蛋白表達(dá)結(jié)果 模型組的條帶表達(dá)最強(qiáng)，與β-actin接近;而空白對(duì)照組條帶表達(dá)最弱，其余各組條帶表達(dá)強(qiáng)弱介于空白對(duì)照組和模型組之間。模型組和各給藥組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），其他給藥組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），大蒜YZD高劑量組TGF-β1蛋白表達(dá)強(qiáng)度低于大蒜YZD中、低劑量組和大蒜油組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖12。

2.5.2 Smad4蛋白表達(dá)結(jié)果 空白對(duì)照組條帶表達(dá)最強(qiáng)，模型組條帶表達(dá)最弱，其余各組條帶表達(dá)強(qiáng)弱介于空白對(duì)照組和模型組之間。模型組和各給藥組與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），其他各給藥組與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），大蒜YZD高劑量組Smad4蛋白表達(dá)強(qiáng)于大蒜YZD中、低劑量組和大蒜油組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖13。

3 討論

大蒜在我國較早地使用在細(xì)菌和真菌感染以及病毒感染的治療中。近幾年來國內(nèi)外的流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)研究均證明，長時(shí)間食用一定量大蒜，胃癌發(fā)病率與死亡率都顯著下降[5]。大蒜能夠降低腫瘤發(fā)生率，具有抗腫瘤的藥理作用，作用機(jī)制可能和大蒜中含硫化合物影響細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞生長有關(guān)[6]。大蒜為天然的抗腫瘤藥物，對(duì)人體的不良反應(yīng)較小，可與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，增強(qiáng)抗腫瘤的作用，減少抗腫瘤藥物的耐藥性[7-9]。因此，本實(shí)驗(yàn)選取大蒜提取純化的3個(gè)有效部位，按照前期正交實(shí)驗(yàn)篩選的組方配比，將3個(gè)有效部位按照1∶10∶20的比例混合配制成大蒜YZD組合物溶液[10]，并將大蒜YZD組合物溶液分為高、中、低3種劑量給實(shí)驗(yàn)大鼠灌胃，觀察療效。

經(jīng)過13周藥物治療后，觀察到大蒜YZD高劑量組與模型組比較大鼠胃黏膜病理損傷程度明顯降低;大蒜油組、大蒜YZD中劑量組，大蒜YZD低劑量組大鼠胃黏膜病理損傷程度與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;大蒜YZD高劑量組與大蒜油組、大蒜YZD中劑量組、大蒜YZD低劑量組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明大蒜YZD高劑量組能夠有效的降低胃黏膜損傷程度，可能對(duì)損傷的胃黏膜有較好的修復(fù)作用。

CEA是大腸癌組織產(chǎn)生的一種糖蛋白，也是一種酸性蛋白，作為抗原可引起患者的免疫反應(yīng)，此種抗原稱為癌胚抗原，癌旁正常黏膜CEA含量很少或?yàn)殛幮?。CEA作為腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)廣泛應(yīng)用在胃腸道及其他上皮源性腫瘤的研究[11]。97%正常成人血清CEA濃度在2.5 ng/mL以下。根據(jù)文獻(xiàn)研究報(bào)道原發(fā)性結(jié)腸癌患者CEA增高占45%～80%，膽管癌、肺癌、食管癌、胰腺癌陽性率在50%～70%，胃癌CEA的敏感度為33.3%～70.4%，特異度為80%～90%[12]。CA199屬于低聚糖腫瘤相關(guān)蛋白，為細(xì)胞膜上的糖脂質(zhì)，分子量大于1 000 kD，在血清中它以唾液黏蛋白形式存在，其與CEA均是胃癌的重要標(biāo)志物，多用于病情的監(jiān)測(cè)及預(yù)后判斷[13]。有研究表明，血清CA199診斷胃癌的敏感度為26.3%～69.0%，特異度為52.0%～95.0%[14]。CA724是一種由cc49和B72.3兩株單抗識(shí)別的黏蛋白樣的大分子量糖蛋白，分子量為220～400 kD，正常人血清中含量<6 U/mL，對(duì)于胃癌檢測(cè)的特異度和敏感度較高，以>6 U/mL為臨界值，在臨床中與CEA、CA199同時(shí)檢測(cè)能夠大幅提高胃癌的診斷率[15]。CA724臨床診斷胃癌的敏感度為55%～90%，特異度為80%～95%[16]。

大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組在給予13周的藥物治療后，血清中CEA、CA199、CA724 3種腫瘤標(biāo)志物與模型組比較明顯降低，而且大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組療效明顯優(yōu)于其他給藥組。大蒜YZD高劑量組與大蒜YZD中、低劑量組、大蒜油組比較療效顯著，大蒜YZD中劑量組與大蒜YZD低劑量組和大蒜油組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大蒜YZD高劑量組能夠有效降低胃癌前病變大鼠血清中的CEA、CA199、CA724 3種腫瘤標(biāo)志物水平，且療效優(yōu)于大蒜YZD中、低劑量組。由此可見，大蒜YZD高劑量能夠抑制腫瘤黏蛋白和糖蛋白的合成，具有一定的抗腫瘤生長作用。

TGF-β1作為一種多功能的細(xì)胞因子，能夠主導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生與分化，細(xì)胞的移動(dòng)和黏附，同時(shí)在腫瘤的各個(gè)階段發(fā)展過程中具有主要作用[17]。TGF-β1能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖，細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生，同時(shí)TGF-β1具有負(fù)反饋調(diào)節(jié)功能，TGF-β1能夠誘導(dǎo)原癌蛋白SnoN的表達(dá)，大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SnoN是TGF-β1應(yīng)答基因，在TGF-β信號(hào)的負(fù)反饋調(diào)節(jié)中起著重要作用[18]。TGF-β1的高表達(dá)會(huì)直接誘導(dǎo)原癌基因SnoN的表達(dá)顯著增高，這可能是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的一個(gè)重要機(jī)制[19]。Smad4又稱DPC4，為抑癌基因，是從胰腺癌細(xì)胞中篩選出來的，它對(duì)正常及癌細(xì)胞具有生長抑制作用[20]。Smad4為TGF-β1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信使，將TGF-β1信號(hào)從細(xì)胞膜轉(zhuǎn)至細(xì)胞核，其表達(dá)異常，可使TGF-β1信號(hào)傳遞中斷，導(dǎo)致細(xì)胞不受TGF-β1信號(hào)的抑制[21]。R-Smads磷酸化后能與Smad 4形成異聚體，轉(zhuǎn)移入核內(nèi)調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄，活化的Smad4異聚體能活化對(duì)TGF-β1反應(yīng)的熒光素酶基因的轉(zhuǎn)錄[22]。TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是一個(gè)比較復(fù)雜的過程，通路中的任何一個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)生改變，都會(huì)導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路出現(xiàn)異常，進(jìn)而使正常細(xì)胞生長、分化失去控制，導(dǎo)致正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)變，同時(shí)促使正常細(xì)胞大量異常增殖，進(jìn)而致使癌癥出現(xiàn)[23]。

本研究發(fā)現(xiàn)TGF-β1和Smad4的蛋白表達(dá)水平與mRNA的表達(dá)水平基本上是一致的。大蒜YZD高劑量組和胃復(fù)春組下調(diào)TGF-β1蛋白和mRNA表達(dá)水平明顯優(yōu)于其他各給藥組。大蒜YZD高劑量組與大蒜YZD中、低劑量組、大蒜油組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大蒜YZD中劑量組與大蒜YZD低劑量組、大蒜油組比較三者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

大蒜YZD高劑量組與胃復(fù)春組上調(diào)Smad4的蛋白和mRNA表達(dá)水平明顯優(yōu)于其他各給藥組。大蒜YZD高劑量組與大蒜YZD中劑量組、大蒜YZD低劑量組、大蒜油組比較差異性顯著，大蒜YZD中劑量組與大蒜YZD低劑量組、大蒜油組比較三者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

本研究結(jié)果表明：大蒜YZD高劑量組通過靶向性下調(diào)TGF-β1的蛋白表達(dá)，上調(diào)Smad4的蛋白表達(dá)，改善Smad4的突變狀態(tài)，發(fā)揮其調(diào)控轉(zhuǎn)運(yùn)作用，與活化后的受體調(diào)節(jié)型Smads蛋白相結(jié)合，產(chǎn)生一種低聚體的復(fù)合物，在TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起到主要作用，可抑制原癌基因表達(dá)，減少腫瘤細(xì)胞的形成，從而改善胃黏膜病理變化，阻止胃癌前病變的發(fā)生和發(fā)展。大蒜YZD高劑量組通過調(diào)節(jié)TGF-β1和Smad4的蛋白表達(dá)，從而糾正TGF-β/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常變化，這可能是大蒜YZD高劑量組治療胃癌前病變的主要作用機(jī)制之一。本研究為大蒜3個(gè)有效部位組方，集合大蒜的水溶性和脂溶性成分于一體，各有效部位抗腫瘤機(jī)制作用不同，相互配伍可以提高人體免疫調(diào)節(jié)功能，能夠體現(xiàn)大蒜有效部位多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、整體調(diào)節(jié)的綜合治療特點(diǎn)，故大蒜YZD可能會(huì)成為治療胃癌前病變新的治療藥物。

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（2020-08-25收稿 責(zé)任編輯：吳珊）