槲皮素對(duì)人宮頸鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞 SiHa/DDP的逆轉(zhuǎn)作用研究

馮磊 楊建敏 楊然 孫麗 董莉麗 張清偉

中圖分類號(hào) R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）23-2875-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.23.10

摘 要 目的：研究槲皮素對(duì)人宮頸鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞SiHa/DDP的逆轉(zhuǎn)作用。方法：測(cè)定順鉑對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)以及槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù);考察槲皮素（0.005 μg/mL）、順鉑（2.5 μg/mL）、順鉑聯(lián)合槲皮素（2.5 μg/mL順鉑+0.005? ? μg/mL槲皮素）、槲皮素聯(lián)合通路抑制劑（0.005 μg/mL槲皮素+20 nmol/L雷帕霉素）對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞凋亡率及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路相關(guān)蛋白[PI3K、Akt、mTOR、腫瘤多藥耐藥蛋白（P-gp）、p70核糖體S6激酶（p70S6K）]表達(dá)的影響。結(jié)果：順鉑對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)為5.19，槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)為4.00。與單用順鉑和單用槲皮素比較，順鉑聯(lián)合槲皮素、槲皮素聯(lián)合雷帕霉素均可顯著升高SiHa/DDP細(xì)胞的凋亡率（P<0.05），顯著降低Akt、mTOR、p70S6K蛋白的磷酸化水平和P-gp蛋白的表達(dá)水平（P<0.05）。結(jié)論：槲皮素可逆轉(zhuǎn)SiHa/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性，其作用機(jī)制可能與抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 槲皮素;宮頸鱗癌;SiHa/DDP細(xì)胞;PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路;耐藥性;逆轉(zhuǎn)

Study on Reversal Effect of Quercetin on Human Cervical Squamous Carcinoma Cisplatin-resistant Cell Line SiHa/DDP

FENG Lei1，YANG Jianmin1，YANG Ran1，SUN Li1，DONG Lili1，ZHANG Qingwei2（1. Dept. of Gynaecology， Nanyang Municipal Central Hospital， Henan Nanyang 473000， China; 2. Dept. of Gynaecology， the First Affiliated Hospital of Luohe Medical College， Henan Luohe 462000， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the reversal effect of quercetin on human cervical squamous carcinoma cisplatin-resistant cell line SiHa/DDP. METHODS： The drug resistance index of cisplatin to SiHa/DDP cells， and the reversal resistance multiple of quercetin to SiHa/DDP cells were determined. The effects of quercetin （0.005 μg/mL）， cisplatin （2.5 μg/mL）， cisplatin combined with quercetin （2.5 μg/mL cisplatin+0.005 μg/mL quercetin）， quercetin combined with pathway inhibitor （0.005 μg/mL quercetin+20 nmol/L rapamycin） on the apoptotic rate of SiHa/DDP cells were investigated， as well as its effects on the expression of phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/protein kinase B（Akt）/mammalian rapamycin target protein （mTOR） signaling pathway related proteins （PI3K， Akt， mTOR， P-gp， p70S6K）. RESULTS： The resistance index of cisplatin to SiHa/DDP cells was 5.19， and reversal resistance multiple of quercetin to SiHa/DDP cells was 4.00. Compared with cisplatin alone and quercetin alone， cisplatin combined with quercetin， quercetin combined with rapamycin could significantly increase the apoptotic rate of SiHa/DDP cells （P<0.05）， while decreased the phosphorylation of Akt， mTOR and p70S6K protein as well as the expression of P-gp protein （P<0.05）. CONCLUSIONS： Quercetin can effectively reverse drug resistance of SiHa/DDP cells to cisplatin， which may be associated with inhibiting the expression of the protein related to PI3K/Akt/mTOR signaling pathway.

KEYWORDS? ?Quercetin; Cervical squamous carcinoma; SiHa/DDP cells; PI3K/Akt/mTOR signaling pathway; Drug resistance; Reversal

宮頸癌是較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)生、發(fā)展與人乳頭瘤病毒（HPV）密切相關(guān);在宮頸癌的病理分類中，宮頸鱗癌是最主要的類型，約占80%[1]。有研究提示，以順鉑為基礎(chǔ)的輔助化療對(duì)宮頸鱗癌的副作用小、療效確切，可改善患者局部病灶，提高患者生存率;但順鉑易產(chǎn)生耐藥性，降低腫瘤化療的效果[2]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，在多數(shù)耐藥腫瘤細(xì)胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號(hào)通路常處于異常激活的狀態(tài)[3]。PI3K/Akt/mTOR信 號(hào)通路相關(guān)蛋白是調(diào)控細(xì)胞增殖及分裂的關(guān)鍵信號(hào)分子，可影響腫瘤多藥耐藥蛋白（P-gp）、p70核糖體S6激酶（p70S6K）等蛋白的表達(dá)，從而激活腫瘤細(xì)胞的耐藥作用[4-5]。

槲皮素是黃酮類化合物，對(duì)多種惡性腫瘤均具有抑制作用，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制其遷移和侵襲，同時(shí)還可增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性[3]。但槲皮素是否可逆轉(zhuǎn)宮頸癌細(xì)胞的耐藥性，尚不明確。為此，本研究基于PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路探討槲皮素對(duì)人宮頸鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞 SiHa/DDP的逆轉(zhuǎn)作用，以期為宮頸癌的臨床治療提供新的思路。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用MR-96A型自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，CytoFLEX型流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Beckman Coulter公司，DGENETM型自動(dòng)電泳凝膠成像分析儀購(gòu)自日本Olympus公司，CCL-170B-8型細(xì)胞培養(yǎng)箱購(gòu)自上海必寶生物科技有限公司。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用DMEM 培養(yǎng)基、胎牛血清（批號(hào)分別為17M483、1967839）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;青霉素-鏈霉素溶液、CCK-8試劑、AnnexinⅤ-FITC 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（批號(hào)分別為1936917、C0038、C1062L、P0012）均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;順鉑（批號(hào)H37021358）購(gòu)自山東齊魯制藥有限公司;槲皮素、兔抗小鼠Akt單克隆抗體、兔抗小鼠磷酸化Akt（p-Akt）單克隆抗體、兔抗小鼠mTOR 單克隆抗體、兔抗小鼠磷酸化mTOR（p-mTOR）單克隆抗體（批號(hào)分別為Q4951、SAB4500796、SAB4504331、SAB4501038、SAB4504476） 均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;兔抗小鼠p70S6K單克隆抗體、兔抗小鼠P-pg單克隆抗體、兔抗小鼠GAPDH單克隆抗體（批號(hào)分別為14485-1-AP、2236-1-AP、16825-1-AP）均購(gòu)自美國(guó)Proteintech公司;兔抗小鼠磷酸化p70S6K（p-p70S6K）多克隆抗體（批號(hào)RS-2602R）購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling公司;辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔免疫球蛋白G（二抗）（批號(hào)20000258）購(gòu)自美國(guó)CST公司;高效ECL顯色試劑（批號(hào)1515601）購(gòu)自美國(guó)Millipore公司;雷帕霉素（批號(hào)H12J10J79598，純度99%）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;其余試劑為實(shí)驗(yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

1.3 細(xì)胞

人宮頸鱗癌細(xì)胞SiHa 購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心，人宮頸鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞 SiHa /DDP購(gòu)自湖南豐暉生物科技有限公司。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將SiHa細(xì)胞和SiHa/DDP細(xì)胞以含有10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基（以下簡(jiǎn)稱“完全培養(yǎng)基”），于37 ℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。在細(xì)胞狀態(tài)良好、融合度達(dá)80%～90%時(shí)，以磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗后，進(jìn)行傳代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)檢測(cè)

采用CCK-8法進(jìn)行檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa細(xì)胞和SiHa/DDP細(xì)胞，按2×105 mL-1接種于96孔板中，每孔100 μL，常規(guī)培養(yǎng)12 h后，將細(xì)胞分為對(duì)照組和不同濃度順鉑組（順鉑終質(zhì)量濃度分別為 0.625、1.25、2.5、5、7.5 μg/mL，參考文獻(xiàn)[6]設(shè)置），每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組加入完全培養(yǎng)基200 μL，不同濃度順鉑組加入含相應(yīng)質(zhì)量濃度順鉑的完全培養(yǎng)基100 μL，常規(guī)培養(yǎng)24 h;棄去培養(yǎng)基，每孔加入CCK-8 試劑10 μL，于室溫孵育2 h后，采用酶標(biāo)儀于450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔光密度（OD）值。計(jì)算細(xì)胞抑制率[細(xì)胞抑制率=（對(duì)照組OD值-給藥組OD值）/對(duì)照組OD值×100%]和順鉑的半抑制濃度（IC50），再在此基礎(chǔ)上計(jì)算SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)（耐藥指數(shù)=SiHa/DDP細(xì)胞的IC50/SiHa細(xì)胞的IC50]。

2.3 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用考察

2.3.1 槲皮素對(duì)SiHa細(xì)胞、SiHa/DDP細(xì)胞的抑制作用考察 采用CCK-8法進(jìn)行考察。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa細(xì)胞和SiHa/DDP細(xì)胞，按2×105 mL-1接種于96孔板中，每孔100 μL，常規(guī)培養(yǎng)12 h后，將兩種細(xì)胞均分別分為對(duì)照組、不同濃度槲皮素組（槲皮素的終質(zhì)量濃度分別為 0.005、0.01、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15 μg/mL，參考文獻(xiàn)[6]設(shè)置），每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組加入200 μL完全培養(yǎng)基，不同濃度槲皮素組加入含相應(yīng)質(zhì)量濃度槲皮素的完全培養(yǎng)基100 μL，常規(guī)培養(yǎng)24 h;棄去培養(yǎng)基，每孔加入CCK-8試劑10 μL，于室溫孵育2 h后，采用酶標(biāo)儀于450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔OD值，按“2.2”項(xiàng)下方法計(jì)算槲皮素對(duì)SiHa、SiHa/DDP細(xì)胞的抑制率。

2.3.2 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)檢測(cè) 采用CCK-8法進(jìn)行檢測(cè)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa/DDP細(xì)胞，按2×105 mL-1接種于96孔板中，每孔100 μL，常規(guī)培養(yǎng)12 h后，將細(xì)胞分為對(duì)照組、不同濃度順鉑組、順鉑+不同濃度槲皮素組，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。對(duì)照組加入完全培養(yǎng)基200 μL，不同濃度順鉑組加入含順鉑的完全培養(yǎng)基100 μL（順鉑終質(zhì)量濃度分別為0.625、1.25、2.5、5、7.5 μg/mL），順鉑+不同濃度槲皮素組加入含順鉑和槲皮素的完全培養(yǎng)基100 μL（固定順鉑的終質(zhì)量濃度為 2.5? μg/mL，槲皮素的終質(zhì)量濃度分別為0.005、0.01、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15 μg/mL，參考“2.2”項(xiàng)下結(jié)果以及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置），常規(guī)培養(yǎng)24 h;棄去培養(yǎng)基，每孔加入CCK-8試劑10 μL，于室溫孵育2 h后，采用酶標(biāo)儀于450 nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔OD值，按“2.2”項(xiàng)下方法計(jì)算細(xì)胞抑制率和藥物的IC50，并計(jì)算槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)[逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)=順鉑組的IC50/（順鉑+不同濃度槲皮素組的IC50）][7-8]。

2.4 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞凋亡率的影響考察

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa/DDP細(xì)胞，按2×105 mL-1接種于96孔板中，每孔100 μL，常規(guī)培養(yǎng)12 h后，將細(xì)胞分為對(duì)照組、槲皮素組（0.005 μg/mL）、順鉑組（2.5 μg/mL）、順鉑+槲皮素組（2.5 μg/mL順鉑+0.005 μg/mL槲皮素）、槲皮素+通路抑制劑組（0.005 μg/mL槲皮素+20 nmol/L雷帕霉素），每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。各組給藥濃度參考預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置。對(duì)照組加入完全培養(yǎng)基200 μL，各給藥組加入含相應(yīng)藥物的完全培養(yǎng)基200 μL，常規(guī)培養(yǎng)24 h;收集細(xì)胞，以4 ℃的PBS洗滌2次，并調(diào)整細(xì)胞密度為1×105 mL-1，以1 000 r/min 離心5 min;棄上清液，下層細(xì)胞加入Annexin Ⅴ-FITC結(jié)合液重懸;取細(xì)胞懸液100 μL，加入Annexin Ⅴ-FITC試劑5 μL以及碘化吡啶10 μL，于室溫避光孵育15 min后，加入PBS至500 μL，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。

2.5 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞中Akt、mTOR、p70S6K、P-gp蛋白表達(dá)的影響考察

采用Western bolt法進(jìn)行考察。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SiHa/DDP細(xì)胞，按2×105 mL-1接種于96孔板中，每孔100 μL，常規(guī)培養(yǎng)12 h后，按“2.4”項(xiàng)下方法分組、給藥和培養(yǎng)，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。收集細(xì)胞，加入含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液于冰上裂解30 min，以12 000 r/min離心10 min 后收集總蛋白，采用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。將蛋白煮沸10 min進(jìn)行變性，然后取50 μg變性蛋白，進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳;轉(zhuǎn)膜，以5%脫脂奶粉封閉1 h，分別加入 Akt（稀釋度為1 ∶? ?1 000）、p-Akt（稀釋度為1 ∶ 1 000）、 mTOR（稀釋度為 1 ∶ 1 000）、p-mTOR（稀釋度為1 ∶ 1 000）、p-p70S6K（稀釋度為1 ∶ 1 000）、p70S6K（稀釋度為1 ∶ 2 000）、P-gp（稀釋度為1 ∶ 1 000）、GAPDH （稀釋度為1 ∶ 2 000）一抗，于4 ℃下孵育過(guò)夜;以PBST緩沖液洗滌10 min×3次，加入相應(yīng)二抗（稀釋度為1 ∶ 1 000），于室溫孵育 2 h;以PBST緩沖液洗滌10 min×3次，加入ECL顯色試劑顯色，置于凝膠成像分析儀中成像。采用Image J v1.7.0軟件分析，以p-Akt與Akt、p-mTOR與mTOR、p-p70S6K與p70S6K的灰度值比值分別表示Akt、mTOR、p70S6K的蛋白磷酸化水平，以P-gp與內(nèi)參GAPDH的灰度值比值表示P-gp蛋白的表達(dá)水平。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié)果

3.1 SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)

順鉑對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的IC50為14.81 μg/mL，顯著高于其對(duì)SiHa細(xì)胞的IC50（2.86 μg/mL，P<0.01）;SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥指數(shù)為5.19。

3.2 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用

不同濃度的槲皮素對(duì)SiHa細(xì)胞和SiHa/DDP細(xì)胞均具有抑制作用，且細(xì)胞抑制率隨著槲皮素濃度的增加呈逐漸升高的趨勢(shì)。另外，與同一劑量作用于SiHa細(xì)胞比較，槲皮素（0.005～0.025 μg/mL除外）對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的抑制作用顯著增強(qiáng)（P<0.05或 P<0.01），結(jié)果見(jiàn)表1。另經(jīng)計(jì)算，順鉑聯(lián)合槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的IC50為3.71 μg/mL，槲皮素的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)為4.00。

3.3 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞凋亡的影響

與對(duì)照組比較，槲皮素組、順鉑組、順鉑+槲皮素組、槲皮素+通路抑制劑組的細(xì)胞凋亡率均顯著升高（P<0.05）;與槲皮素組和順鉑組分別比較，順鉑+槲皮素組、槲皮素+通路抑制劑組的細(xì)胞凋亡率均顯著升高（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖1、表2。

3.4 槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞中Akt、mTOR、p70S6K、P-gp蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組比較，槲皮素組細(xì)胞中Akt、mTOR、p70S6K、P-gp蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05）;與槲皮素組和順鉑組分別比較，順鉑+槲皮素組、槲皮素+通路抑制劑組細(xì)胞中上述蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖2、表3。

4 討論

宮頸癌是世界范圍內(nèi)對(duì)女性影響最大的常見(jiàn)惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響女性生命健康和生活質(zhì)量。在宮頸癌患者群體中，約13%的患者在疾病晚期才得到診斷，從而大大降低了患者生存率[9]。順鉑作為治療宮頸癌最常用的治療藥物之一，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，然而耐藥性卻嚴(yán)重影響其治療質(zhì)量[10]。宮頸癌細(xì)胞可以通過(guò)很多途徑對(duì)順鉑產(chǎn)生耐藥，例如降低順鉑的攝入并增加外排，對(duì)抗順鉑對(duì)DNA的損傷作用以及抑制細(xì)胞凋亡信號(hào)通路等[11]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，天然藥物中的成分不僅可以單獨(dú)產(chǎn)生抗腫瘤作用，還可與順鉑產(chǎn)生協(xié)同作用，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑產(chǎn)生的耐藥作用：黃芪多糖和順鉑聯(lián)用可降低肺癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性[12];柚皮苷和順鉑聯(lián)用可大大提高順鉑對(duì)耐藥A549/DDP細(xì)胞株的抑制作用[13]。因此，聯(lián)合用藥為解決順鉑耐藥性的問(wèn)題提供了新的思路。

劉玉瓊[14]研究發(fā)現(xiàn)，青蒿素能通過(guò)抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的活性，抑制宮頸癌細(xì)胞的擴(kuò)散;王書(shū)惠等[15]研究發(fā)現(xiàn)，紫草素能通過(guò)抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路活性，誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞的凋亡和自噬，從而抑制宮頸癌細(xì)胞增殖。由此可知，PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路對(duì)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展具有重要影響。

有研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可通過(guò)多條信號(hào)通路抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)其凋亡[16-19];還能大大降低乳腺癌MCF-7細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥性，并抑制耐藥相關(guān)蛋白的活性[20-21]。但目前關(guān)于槲皮素逆轉(zhuǎn)宮頸癌耐藥方面的研究較少?；诖?，本研究探討了槲皮素對(duì)人宮頸鱗癌順鉑耐藥細(xì)胞 SiHa/DDP的逆轉(zhuǎn)作用。結(jié)果顯示，槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞具有抑制作用，且呈一定的濃度依賴趨勢(shì)，提示槲皮素單獨(dú)應(yīng)用可對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞產(chǎn)生一定的抑制作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素對(duì)SiHa/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)為4.00，表明槲皮素對(duì)順鉑耐藥細(xì)胞SiHa/DDP具有一定逆轉(zhuǎn)作用。這與杜春雙等[7]的研究結(jié)果相吻合。

p70S6K是mTOR蛋白的下游底物，被p-mTOR蛋白激活后可調(diào)控細(xì)胞內(nèi)p70S6K mRNA的表達(dá)，從而影響乳腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[22]。P-gp是一種腺嘌呤核苷三磷酸依賴性跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，人體中P-gp越多則癌細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性的能力就越強(qiáng)，因此抑制P-gp蛋白的表達(dá)和功能是逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的重要途徑[23]。其次，有研究表示，mTOR是PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的下游成分之一，其抑制劑雷帕霉素可通過(guò)抑制該信號(hào)通路活性降低宮頸癌細(xì)胞的遷移與侵襲[24]。因此，本研究采用雷帕霉素作為本實(shí)驗(yàn)的抑制劑。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)槲皮素聯(lián)合順鉑處理后，SiHa/DDP細(xì)胞中的Akt、mTOR、p70S6K的蛋白磷酸化水平和P-gp蛋白表達(dá)水平均顯著降低，這與槲皮素聯(lián)合抑制劑雷帕霉素處理后的結(jié)果一致，進(jìn)一步表明槲皮素可通過(guò)抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，逆轉(zhuǎn)SiHa/DDP細(xì)胞的耐藥性。

綜上所述，槲皮素可逆轉(zhuǎn)SiHa/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性，其作用機(jī)制與抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。

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（收稿日期：2021-05-18 修回日期：2021-10-25 ）

（編輯：唐曉蓮）