納豆激酶的溶栓作用及其機(jī)制研究

閆泉香，馮 利，徐 峰，吳 浩,

（1.沈陽(yáng)開(kāi)放大學(xué)理工學(xué)院, 遼寧沈陽(yáng) 110003；

2.國(guó)家開(kāi)放大學(xué)醫(yī)藥學(xué)院, 北京 100039；

3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院, 遼寧沈陽(yáng) 110016）

血栓性疾病嚴(yán)重威脅人類的生命健康，是當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)之一[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)[2]，因血栓導(dǎo)致的死亡人數(shù)占全球死亡總?cè)藬?shù)的1/3～1/2。隨著我國(guó)居民生活水平的持續(xù)提高，其生活方式和飲食習(xí)慣也發(fā)生了巨大變化，血栓相關(guān)性疾病的發(fā)病率和死亡率也不斷攀升。在過(guò)去的30多年里，我國(guó)心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率迅猛增長(zhǎng)[3-4]，我國(guó)心腦血管疾病的總死亡率遠(yuǎn)高于高收入和中等收入國(guó)家，是鄰國(guó)日本的3倍多。因此，積極預(yù)防和治療血栓疾病是我國(guó)健康事業(yè)的當(dāng)務(wù)之急。

目前，臨床上使用的抗血栓藥物主要有抗凝血藥、抗血小板聚集藥和溶栓藥三類[5]。雖然可供選擇的抗血栓藥物較多，但其不能溶解陳舊血栓，且直接作用弱，有出血、過(guò)敏反應(yīng)等不良反應(yīng)[6]。日本學(xué)者從納豆中發(fā)現(xiàn)的納豆激酶是一種具有強(qiáng)效溶栓作用的絲氨酸蛋白酶[7]。納豆激酶源自我國(guó)的傳統(tǒng)食物，具有安全性高、分子量小、可被腸道吸收、起效快、溶栓效果持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，且可溶解陳舊血栓等優(yōu)點(diǎn)[8-9]，有望開(kāi)發(fā)成為具有市場(chǎng)潛力的抗血栓藥物。目前對(duì)納豆激酶的研究大多停留在發(fā)酵條件優(yōu)化[10]、分離純化[11]、藥效學(xué)[12]等層面，缺乏對(duì)其抗血栓作用及其機(jī)制的深入研究。

本文采用體外和體內(nèi)試驗(yàn)相結(jié)合的方法，研究了納豆激酶對(duì)陳舊血栓、靜脈和動(dòng)脈血栓的溶栓作用，并進(jìn)一步從抑制血栓形成和溶解血栓兩方面研究了納豆激酶抗血栓作用的可能的分子機(jī)制。深入研究納豆激酶的抗血栓作用及其機(jī)制，為納豆激酶開(kāi)發(fā)成為新型抗血栓藥物提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

SPF級(jí)雄性SD大鼠 150只，2～3月齡，遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司（動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK2010-0001），大鼠飼養(yǎng)于溫度為 24±1 ℃，相對(duì)濕度為50%～60%，12 h 光照（08:00～20:00），12 h黑暗，隔音的SPF級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)，大鼠自由攝食、飲水；納豆激酶（20000 FU/g） 廣東雙駿生物科技有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：120306130518140110）；三氯化鐵（分析純） 天津大茂化學(xué)試劑廠；水合氯醛（10% w/v） 中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。

STAT FAX 2100全自動(dòng)酶免儀 美國(guó)阿尼朗斯公司；VARIOSKAN FLASH多功能酶標(biāo)儀 北京博儀恒業(yè)科技發(fā)展有限公司；BI-2000微循環(huán)觀測(cè)系統(tǒng) 成都泰盟科技有限公司；邁瑞B(yǎng)C-2900型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀 深圳邁瑞醫(yī)療公司；MVIS-2015型全自動(dòng)血液流變分析儀 重慶天海醫(yī)療設(shè)備有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 納豆激酶對(duì)陳舊血栓的體外溶解實(shí)驗(yàn) 取9只大鼠，每只大鼠尾靜脈取血1.5 mL，置于2 mL EP管中于4 ℃靜置，1 d后，待血液凝固成膠凍狀，切割成均勻大小血栓（約125 mm3），用生理鹽水沖洗血塊表面，稱重，置于試管中，立即分別加入1 mL不同劑量（20、50、100、500、1000、2000 FU/kg）的NK溶液、不同劑量（1000、10000 FU/kg）的尿激酶（Urokinase，UK）溶液（陽(yáng)性對(duì)照藥）和生理鹽水（空白對(duì)照），于37 ℃恒溫箱中密封靜置，分別于0.5、2、4、8、16、24、36、48 h，取出血塊，用濾紙吸凈表面水分，稱重[13]。

1.2.2 納豆激酶對(duì)三氯化鐵誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈血栓的作用 將80只大鼠分為假手術(shù)組（注射生理鹽水）、模型組（注射生理鹽水）、五個(gè)NK劑量組（125、250、500、1000、2000 FU/kg）及UK 組（10000 IU/kg）（預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在體內(nèi)1000 IU/kg尿激酶完全無(wú)效，不能作為陽(yáng)性藥，10000 IU/kg，能出陽(yáng)性結(jié)果，所以選擇該劑量），每組10只，一次給藥后（尾靜脈注射），用 10% 水合氯醛麻醉（0.3 mL/100 g），備皮，分離兩側(cè)頸動(dòng)脈，左側(cè)分離約2 cm，其下置小片塑料薄膜，用于保護(hù)血管周圍組織，用含35%三氯化鐵20 μL（假手術(shù)組使用等量的生理鹽水）的小片定量濾紙（1 cm×1 cm）敷于其上，右側(cè)頸總動(dòng)脈埋線待用，30 min后去除濾紙片，去除濾紙片1.5 h后，于右側(cè)頸總動(dòng)脈插管取血，置于肝素浸潤(rùn)的EP管中，4 ℃ 3000 r/min離心15 min，取上層血漿，用于血液指標(biāo)測(cè)定。結(jié)扎左側(cè)頸動(dòng)脈并取出血栓，用濾紙片吸干并稱重。

1.2.3 納豆激酶對(duì)大鼠下腔靜脈結(jié)扎血栓形成的影響 將大鼠稱重并分為6組，每組10只，尾靜脈注射給予納豆激酶高（2000 FU/kg）、中（1000 FU/kg）、低（500 FU/kg）劑量，模型組和假手術(shù)組給與等量的生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組給與尿激酶（10000 IU/kg）。給藥1 h后，腹腔注射3.5%水合氯醛溶液（1 mL/100 g）麻醉大鼠。將麻醉后的大鼠仰臥固定，于腹正中線切開(kāi)皮膚約1.5 cm，從腹白線切開(kāi)腹膜，分離下腔靜脈，于左腎靜脈下方用粗絲線完全結(jié)扎下腔靜脈（假手術(shù)組不結(jié)扎），縫合腹膜。4 h后重新打開(kāi)腹腔，在結(jié)扎線下方2 cm處用止血鉗夾住血管，剪斷取出該段血管，檢查是否有血栓形成，若形成，則將血栓取出，用濾紙輕輕擦干后稱重。

1.2.4 大鼠血清血液指標(biāo)測(cè)定 將100只大鼠分為正常對(duì)照組（注射生理鹽水）、模型組（注射生理鹽水）、7 個(gè)NK 劑量組（67.5、100、125、250、500、1000、2000 FU/kg）及UK 10000 IU/kg組。每組10只，一次給藥后（尾靜脈注射），用10%水合氯醛麻醉（0.3 mL/100 g），備皮，分離兩側(cè)頸動(dòng)脈，左側(cè)分離約2 cm，其下置小片塑料薄膜，用于保護(hù)血管周圍組織，用含35%三氯化鐵20 μL（假手術(shù)組使用等量的生理鹽水）的小片定量濾紙（1 cm×1 cm）敷于其上，右側(cè)頸總動(dòng)脈埋線待用，30 min后去除濾紙片，去除濾紙片1.5 h后，于右側(cè)頸總動(dòng)脈插管取血，置于肝素浸潤(rùn)的EP管中，4 ℃ 3000 r/min離心15 min，取血，采用放射免疫法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中的操作步驟和試藥劑量測(cè)定大鼠血漿中的血栓素B2（TXB2），6-酮前列腺素 F1α（6-K-PGF1α）、前列腺素 E2（PGE2）、羥自由基（·OH）、LF（脂褐素）、超氧陰離子（）、黃嘌呤氧化酶（XOD）水平、組織纖溶酶原激活物（t-PA）。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件（11.0版）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。各組數(shù)據(jù)均用（±SD）表示，實(shí)驗(yàn)采用One-Way ANOVA進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。使用LSD進(jìn)行組間兩兩比較（當(dāng)方差齊時(shí)），使用Dunnett’s T3進(jìn)行組間兩兩比較（當(dāng)方差不齊時(shí)）。

2 結(jié)果與分析

2.1 納豆激酶對(duì)陳舊血栓的體外溶解實(shí)驗(yàn)

納豆激酶對(duì)陳舊血栓的體外溶解實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，0～4 h內(nèi)，NK 100 FU/kg的溶栓作用和UK 10000 IU/kg幾乎相當(dāng)，大于UK 1000 IU/kg的溶解速率；在8 h時(shí)后，NK100 FU/kg 對(duì)血栓的溶解作用明顯強(qiáng)于UK 1000 IU/kg。給與NK 2000 FU/kg，2 h后，血栓完全溶解；給與100 FU/kg NK 12 h后血栓完全溶解；給與UK，需要48 h才能將血栓完全溶解。生理鹽水對(duì)血栓作用不明顯，血栓在48 h后仍沒(méi)完全溶解，由于血栓的自然收縮，析出血清，血栓重量也有所降低。因此，NK對(duì)體外大鼠陳舊血栓的溶解作用與NK的劑量及作用時(shí)間成正比，NK劑量越大、作用時(shí)間越長(zhǎng)，溶解效果越好，且NK的溶栓效果遠(yuǎn)好于同等劑量的UK。

表1 納豆激酶對(duì)1 d大鼠血栓的影響（n=10±SD）Table 1 Effect of NK on 1 d old thrombus of rat in vitro(n=10，±SD)

表1 納豆激酶對(duì)1 d大鼠血栓的影響（n=10±SD）Table 1 Effect of NK on 1 d old thrombus of rat in vitro(n=10，±SD)

組別 劑量 （NK，F(xiàn)U/kg；UK，IU/kg）血栓重量（mg）0 h 0.5 h 2 h 4 h 8 h 12 h 24 h 36 h 48 h NaCl - 213.81±3.33210.51±4.82205.42±3.71202.40±1.90192.41±0.80191.70±1.12186.31±2.50176.40±2.20174.01±2.61 NK 20 252.91±1.62214.61±2.32193.82±2.21153.11±2.50123.50±1.7179.12±6.23 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 NK 50 251.52±1.70193.30±1.71103.40±4.4123.91±2.01 22.50±2.80 12.81±1.82 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 NK 100 254.91±3.92222.21±1.70213.01±2.62175.32±2.7114.32±2.41 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 NK 500 255.42±1.50196.22±1.9092.62±3.93 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 NK 1000 249.01±1.71166.81±6.8222.42±2.41 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 NK 2000 257.62±3.30124.33±1.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 UK 1000 252.83±3.81213.81±1.62193.90±3.11153.60±1.60133.01±1.7192.50±1.21 13.90±2.20 3.71±1.72 0.00±0.00 UK 10000 241.83±1.92232.01±2.33223.02±2.80203.11±3.71173.21±1.81142.41±0.8293.21±2.50 40.62±1.70 0.00±0.00

2.2 納豆激酶對(duì)動(dòng)脈血栓形成的作用

納豆激酶對(duì)動(dòng)脈血栓作用的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，與模型組相比，假手術(shù)組未形成明顯血栓。NK在125 FU/kg劑量時(shí)沒(méi)有明顯溶栓效果，從250 FU/kg劑量開(kāi)始起效，劑量達(dá)到2000 FU/kg時(shí)，血栓溶解超過(guò)一半，且溶栓效果與劑量成正比，劑量越大，溶栓效果越好。因此，納豆激酶250 FU/kg可顯著（P＜0.05）降低三氯化鐵誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈血栓重量，明顯抑制血栓形成，且NK 500 FU/kg抗血栓作用的效果優(yōu)于UK 10000 IU/kg。

表2 靜脈注射NK對(duì)三氯化鐵誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈血栓的作用（n=10，±SD）Table 2 Effect of NK injected on carotid arterial thrombosis induced by FeCl3 in rats(n=10, ±SD)

表2 靜脈注射NK對(duì)三氯化鐵誘導(dǎo)的大鼠頸動(dòng)脈血栓的作用（n=10，±SD）Table 2 Effect of NK injected on carotid arterial thrombosis induced by FeCl3 in rats(n=10, ±SD)

注：##P＜0.01，與空白對(duì)照組相比；*P＜0.05，**P＜0.01，與模型組相比；NK：納豆激酶；UK：尿激酶；表3～表6同。

組別 劑量（NK，F(xiàn)U/kg；UK，IU/kg） 血栓重量（mg）假手術(shù)組 - 0.00±0.00模型組 - 4.91±0.62##NK 125 5.01±0.31 NK 250 4.42±0.31*NK 500 3.62±0.11**NK 1000 3.01±0.22**NK 2000 2.31±0.42**UK 10000 4.31±0.54*

2.3 納豆激酶對(duì)靜脈血栓形成的作用

納豆激酶對(duì)靜脈血栓作用的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，與模型組相比，假手術(shù)組未形成明顯血栓。給予NK 500 FU/kg后開(kāi)始起效，且效果強(qiáng)于10000 IU/kg 的UK；低、中、高三個(gè)劑量的NK均可極顯著（P＜0.01）降低結(jié)扎法誘導(dǎo)的大鼠下腔靜脈血栓重量，劑量達(dá)到2000 FU/kg時(shí)，血栓重量比模型組減少約73%。因此，納豆激酶可明顯抑制下腔靜脈血栓的形成，且抗血栓效果優(yōu)于尿激酶。

表3 靜脈注射NK對(duì)腹靜脈結(jié)扎導(dǎo)致血栓的作用（n=10， ±SD）Table 3 Effect of NK on abdominal vein thrombosis induced by ligation in rats(n=10,±SD)

表3 靜脈注射NK對(duì)腹靜脈結(jié)扎導(dǎo)致血栓的作用（n=10， ±SD）Table 3 Effect of NK on abdominal vein thrombosis induced by ligation in rats(n=10,±SD)

組別 劑量 （NK，F(xiàn)U/kg；UK，IU/kg） 血栓重量 （mg）假手術(shù)組 - 0.00±0.00模型組 - 11.51±5.30##NK 500 5.62±3.31**NK 1000 5.62±3.41**NK 2000 3.10±1.71**UK 10000 7.71±1.82*

綜上，納豆激酶在體內(nèi)對(duì)動(dòng)、靜脈血栓的形成均具有良好的對(duì)抗作用，且其作用效果優(yōu)于傳統(tǒng)抗血栓藥物尿激酶。

2.4 納豆激酶對(duì)大鼠血清血液指標(biāo)的影響

2.4.1 納豆激酶對(duì)血小板聚集的影響 TXB2、6-KPGF1α和PGE2是參與血小板聚集和炎癥反應(yīng)的重要因子[14-15]。納豆激酶對(duì)血小板聚集影響的試驗(yàn)結(jié)果如表4所示。

由表4可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠血漿中的TXB2及PGE2水平明顯升高，6-K-PGF1α水平明顯降低，說(shuō)明建模成功。與模型組大鼠相比，納豆激酶500和67.5 FU/kg可分別極顯著（P＜0.01）降低大鼠血漿中的PGE2和TXB2的水平，納豆激酶在 100～500 FU/kg 范圍內(nèi)，可顯著（P＜0.05）升高大鼠血漿中的6-K-PGF1α水平，并呈劑量依賴性。10000 FU/kg的尿激酶對(duì)模型組大鼠血漿中升高的PGE2及TXB2水平無(wú)明顯效果。

表4 納豆激酶對(duì)大鼠血漿TXB2、6-K-PGF1α和PGE2水平的影響（n=10，±SD）Table 4 Effect of NK on the level of TXB2、6-K-PGF1α, and PGE2(n=10, ±SD)

表4 納豆激酶對(duì)大鼠血漿TXB2、6-K-PGF1α和PGE2水平的影響（n=10，±SD）Table 4 Effect of NK on the level of TXB2、6-K-PGF1α, and PGE2(n=10, ±SD)

組別 劑量 （NK，F(xiàn)U/kg；UK，IU/kg） 6-K-PGF1α（pg/mL） PGE2 （pg/mL） TXB2 （pg/mL）空白對(duì)照組 - 73.32±14.53 20.54±4.55 91.29±25.97模型組 - 66.64±14.69## 27.61±3.81## 131.11±15.19##NK 67.5 - - 71.29±4.64**NK 100 74.00±15.20** - -NK 125 87.09±15.27* - 75.62±5.06*NK 250 95.27±27.64* - 71.10±12.48**NK 500 109.92±34.57* 18.18±3.40** 78.67±7.66*NK 1000 - 18.68±3.62** 76.94±14.44*NK 2000 - 18.42±1.79** 77.72±4.86*UK 10000 125.74±8.05** 32.10±4.10 132.16±36.94

表5 納豆激酶對(duì)大鼠血液中的、·OH及LF水平的影響（n=10，±SD）Table 5 Effect of NK on the level of , ·OH, LF, and XOD(n=10,±SD)

表5 納豆激酶對(duì)大鼠血液中的、·OH及LF水平的影響（n=10，±SD）Table 5 Effect of NK on the level of , ·OH, LF, and XOD(n=10,±SD)

組別 劑量 （NK，F(xiàn)U/kg；UK，IU/kg） images/BZ_352_1095_2817_1145_2855.png（U/mL） ·OH （U/mL） LF （μg/mL） XOD （U/mL）空白對(duì)照組 - 131.31±10.67 453.65±305.31 7.50±2.79 4.14±0.19模型組 - 179.73±21.98## 603.26±228.48## 16.64±2.82## 5.78±1.02##NK 67.5 168.79±19.11 654.73±327.55 5.21±1.30** 4.63±0.21**NK 125 162.24±7.32* 737.23±161.97** 5.52±0.81** 4.55±1.04**NK 250 157.93±15.12* 762.26±213.13** 5.43±0.57** 4.10±0.46**NK 500 153.11±26.44* 774.64±199.28** 6.38±1.21** 3.98±0.65**NK 1000 151.91±13.71** 791.79±102.81** 6.92±0.31** 3.72±0.25**NK 2000 12.13±12.71** 858.66±82.29** 5.76±0.51** 3.52±0.26**UK 10000 163.95±16.10 496.50±165.09 5.08±2.86** 4.85±0.24**

2.4.3 納豆激酶對(duì)t-PA的影響 組織型纖溶酶原激活物（t-PA）可激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶。納豆激酶對(duì)大鼠血漿中的t-PA水平影響的試驗(yàn)結(jié)果如表6所示。

由表6可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠血漿中的t-PA的含量極顯著（P＜0.01）降低；與模型組相比，納豆激酶所有給藥組的t-PA水平均有所升高，納豆激酶的較低劑量組（125 FU/kg）即表現(xiàn)出顯著性（P＜0.05）地升高t-PA水平效應(yīng)，效果與陽(yáng)性藥尿激酶相仿。因此，納豆激酶可明顯增加t-PA含量，直接激活纖溶酶原，發(fā)揮間接溶栓作用。

表6 納豆激酶對(duì)大鼠血漿中t-PA水平的影響（n=10，±SD）Table 6 Effect of NK on the level of t-PA(n=10, ±SD)

表6 納豆激酶對(duì)大鼠血漿中t-PA水平的影響（n=10，±SD）Table 6 Effect of NK on the level of t-PA(n=10, ±SD)

組別 劑量 （NK，F(xiàn)U/kg；UK，IU/kg） t-PA （ng/mL）空白對(duì)照組 - 4.58±0.24模型組 - 3.39±0.26##NK 100 5.00±0.59 NK 125 5.66±0.41*NK 250 5.75±1.06*NK 500 5.53±0.54*UK 10000 5.61±0.69*

3 討論

3.1 納豆激酶抑制血栓形成的機(jī)制

3.1.1 抑制血小板的聚集 血小板聚集是凝血的起始步驟，而集聚狀態(tài)的血小板是血栓的主要組成部分之一[16]。血栓素（TXB2）是引發(fā)血小板聚集，促進(jìn)血栓形成的重要物質(zhì)；生理劑量的前列腺素E2（PGE2）也可以促進(jìn)血小板聚集；而6-酮-前列腺素（6-K-PGF1α）可以抑制血小板的聚集。在本研究中，納豆激酶可以降低模型組動(dòng)物血漿中升高的TXB2、PGE2的水平，提升6-K-PGF1α水平從而阻止血小板聚集，抑制血栓的形成。因此，納豆激酶可使炎癥反應(yīng)代謝途徑發(fā)生偏轉(zhuǎn)，花生四烯酸原來(lái)可以直接生成TXB2，現(xiàn)在變?yōu)樯?-K-PGF1α，從而使TXB2生成減少。這與文獻(xiàn)[17]的報(bào)道是一致的。

3.1.2 納豆激酶對(duì)炎癥代謝途徑的影響 本文首次發(fā)現(xiàn)，納豆激酶可使炎癥反應(yīng)代謝途徑發(fā)生偏轉(zhuǎn)，由花生四烯酸直接生成TXB2，改變成生成6酮前列腺素，而使TXB2生成減少（詳見(jiàn)圖1），這與經(jīng)典的非甾體抗炎藥完全不同。

圖1 NK的抗炎機(jī)制Fig.1 Anti-inflammatory mechanism of NK

3.1.3 降低氧化損傷 血管內(nèi)皮氧化損傷是血栓形成的重要原因之一[18]，損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞暴露出膠原蛋白，激活血小板，啟動(dòng)凝血系統(tǒng)。自由基與活性氧是重要的生物活性物質(zhì)，具有很強(qiáng)的氧化性，是造成組織細(xì)胞損傷的元兇[19]。血管中存在氧化與抗氧化兩種系統(tǒng)，當(dāng)血管中氧化程度超出細(xì)胞對(duì)氧化物的清除能力，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，就會(huì)導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，逐漸形成血栓[20-21]。脂褐素（LF）是老年斑的主要成分，可沉積在血管壁導(dǎo)致血管損傷，血栓形成，動(dòng)脈粥樣硬化等疾病[22]。黃嘌呤氧化酶（XOD）可催化自由基的產(chǎn)生，從而造成血管損傷，血栓形成[23]。在本研究中，納豆激酶可以降低、·OH、LF、XOD的水平，從而減輕氧化損傷和過(guò)氧化物堆積，抑制血栓的形成，對(duì)治療動(dòng)脈粥樣氧化等疾病具有潛在應(yīng)用價(jià)值[24-25]。

3.2 納豆激酶溶解血栓的機(jī)制

3.2.1 直接溶栓 纖維蛋白是血栓的主要成分之一[26]，纖維蛋白單體由纖維蛋白原激活產(chǎn)生。隨后，纖維蛋白單體聚集并與血小板一起形成血栓。已有實(shí)驗(yàn)通過(guò)纖維蛋白平板法，發(fā)現(xiàn)納豆激酶可在加熱和未加熱的纖維蛋白平板上產(chǎn)生溶解圈，證明了納豆激酶可直接溶解纖維蛋白[27]。在本研究的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，也得出類似結(jié)果，且納豆激酶對(duì)纖維蛋白的溶解作用大于尿激酶。此外，在體內(nèi)，納豆激酶也可以發(fā)揮纖溶作用[28-29]。

3.2.2 間接溶栓 纖溶酶為體內(nèi)溶解血栓的重要物質(zhì)，可將不溶性的纖維蛋白降解為可溶性的產(chǎn)物。組織型纖溶酶原激活物（t-PA）在體內(nèi)纖溶系統(tǒng)調(diào)控中起重要作用[30]，其可激活纖溶酶原生成纖溶酶而溶解血栓。與文獻(xiàn)[31]報(bào)道一致，在本研究中，納豆激酶可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生t-PA，增加機(jī)體內(nèi)t-PA的含量，從而發(fā)揮間接溶栓作用。

纖溶酶原激活物抑制物（PAI-1）也是體內(nèi)調(diào)控纖溶系統(tǒng)的重要物質(zhì)，PAI-1可抑制t-PA從而抑制纖溶酶原的激活[32]。有研究[33-35]表明納豆激酶可降低PAI-1活性，促進(jìn)t-PA激活纖溶酶原，產(chǎn)生纖溶酶，溶解血栓。

4 結(jié)論

本研究顯示，納豆激酶具有良好的體內(nèi)外溶栓作用，對(duì)陳舊血栓、靜脈、動(dòng)脈血栓均有良好的溶栓效果。納豆激酶的溶栓機(jī)制可能與其抑制血小板聚集，減輕氧化損傷而抑制血栓形成有關(guān)。還可能與其可以通過(guò)提高t-PA的水平或抑制PAI-1而間接發(fā)揮溶栓作用有關(guān)。