微生態(tài)療法對(duì)輪狀病毒腹瀉病兒內(nèi)皮糖萼及炎癥反應(yīng)的影響：一項(xiàng)隨機(jī)、對(duì)照、開(kāi)放研究

董中茂，孫蓓蓓，王晗晶，鞏露，王光猛作者單位：徐州市兒童醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 徐州 221002

輪狀病毒引起的嬰幼兒腹瀉臨床較為常見(jiàn)，目前尚無(wú)特效藥物和治療方法。輪狀病毒感染會(huì)引起腸黏膜損傷，導(dǎo)致腸黏膜屏障功能降低，進(jìn)而造成腸黏膜通透性升高、組織水腫、滲出等反應(yīng)引發(fā)腹瀉。內(nèi)皮糖萼是覆蓋在內(nèi)皮細(xì)胞表面的一種多糖蛋白類(lèi)復(fù)合物，腸黏膜內(nèi)皮糖萼對(duì)于維持腸道內(nèi)環(huán)境及水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝具有重要作用。目前關(guān)于內(nèi)皮糖萼的研究主要為基礎(chǔ)研究，關(guān)于糖萼在腹瀉發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中的研究未見(jiàn)報(bào)道。研究報(bào)道，微生態(tài)療法可修復(fù)腸道內(nèi)皮損傷，保護(hù)腸黏膜，推測(cè)作用機(jī)制可能與降低炎癥反應(yīng)，保護(hù)內(nèi)皮糖萼有關(guān)。本研究系統(tǒng)觀察了微生態(tài)療法對(duì)輪狀病毒病兒內(nèi)皮糖萼、腸黏膜屏障功能及炎性因子的影響，初步探討分析微生態(tài)療法治療輪狀病毒腹瀉的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用微生態(tài)療法治療輪狀病毒腹瀉提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2018年6月在徐州市兒童醫(yī)院接受治療的輪狀病毒感染腹瀉病兒180例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①輪狀病毒抗原檢查結(jié)果呈陽(yáng)性；②糞便常規(guī)及致病性腸桿菌培養(yǎng)結(jié)果呈陰性；③就診前3個(gè)月內(nèi)未接受抗生素和微生態(tài)制劑治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他疾病或存在藥物過(guò)敏史的病兒；②伴有嚴(yán)重并發(fā)癥的病兒；③無(wú)法配合治療的病兒。采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組，每組各90例。兩組研究對(duì)象一般資料比較見(jiàn)表1。本研究經(jīng)徐州市兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（院字〔2016〕7 號(hào)），所有病兒監(jiān)護(hù)人或近親屬知情并簽署知情同意書(shū)。

表1 兩組輪狀病毒感染腹瀉病兒一般資料比較

1.2 治療方法

所有研究對(duì)象均接受補(bǔ)液、糾正酸堿失衡及電解質(zhì)紊亂治療，在此基礎(chǔ)上對(duì)照組給予蒙脫石散[博福-益普生（天津）制藥有限公司，批次20151211，批號(hào)H2000690，規(guī)格：3 g×10 袋］治療（＜1歲，1 袋/天；1～3 歲，1～2 袋/天。溫水沖服）；觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合給予金雙歧（雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片，內(nèi)蒙古雙奇藥業(yè)股份有限公司，批次20160215，批號(hào)S19980004，規(guī)格：0.5 g×24 片）治療（＜1 歲，1 片/天；1～3 歲，2 片/天。嚼服或碾碎后沖服）。兩組均連續(xù)治療7 d。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1

內(nèi)皮糖萼觀察 測(cè)定治療前和治療后1 d、3 d、5 d、7 d 時(shí)血清糖萼損傷標(biāo)志物[多配體蛋白聚糖-1（syndecan-1）、硫酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸］水平，利用側(cè)流暗場(chǎng)成像技術(shù)測(cè)定舌下微循環(huán)血管內(nèi)皮糖萼厚度。

1.3.2

炎性因子水平 采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定治療前和治療后血清炎性因子（腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-17）水平。

1.3.3

D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原水平 采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定治療前和治療后血清D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原水平。

1.3.4

治療效果 比較兩組研究對(duì)象嘔吐癥狀消失時(shí)間、止瀉時(shí)間及退熱時(shí)間；接受藥物治療72 h根據(jù)病兒臨床癥狀進(jìn)展療效評(píng)估，療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：顯效：糞便性狀及次數(shù)恢復(fù)正常，發(fā)熱、嘔吐、脫水等臨床癥狀完全消失；有效：糞便性狀及次數(shù)好轉(zhuǎn)，臨床癥狀改善；無(wú)效：糞便性狀、次數(shù)及臨床癥狀均無(wú)明顯變化甚至加重。總有效率=（顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/該組總例數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 微生態(tài)療法對(duì)內(nèi)皮糖萼損傷的影響

兩組研究對(duì)象接受治療1 d 時(shí)血漿中內(nèi)皮糖萼損傷標(biāo)志物syndecan-1、硫酸乙酰肝素、透明質(zhì)酸水平與治療前相比無(wú)變化（

P

＞0.05），之后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)（與治療前相比，

P

＜0.05）；觀察組接受治療3 d、5 d、7 d 時(shí)損傷標(biāo)志物水平均低于對(duì)照組（

P

＜0.05）。兩組研究對(duì)象接受治療1 d 時(shí)舌下微循環(huán)血管內(nèi)皮糖萼厚度與治療前相比無(wú)變化（

P

＞0.05），之后舌下微循環(huán)血管內(nèi)皮糖萼厚度逐漸增加（與治療前相比，

P

＜0.05）；觀察組接受治療3 d、5 d、7 d 時(shí)舌下微循環(huán)血管內(nèi)皮糖萼厚度高于對(duì)照組（

P

＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 微生態(tài)療法對(duì)輪狀病毒腹瀉病兒內(nèi)皮糖萼損傷的影響/±s

2.2 兩組研究對(duì)象治療前后腸黏膜屏障功能比較

與治療前比較，兩組研究對(duì)象治療后D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原水平均降低（

P

＜0.05）；與對(duì)照組比較，觀察組治療后D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原水平均較低（

P

＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組輪狀病毒腹瀉病兒治療前后腸黏膜屏障功能比較/±s

2.3 兩組研究對(duì)象治療前后腫瘤壞死因子

-α

、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-17水平比較

兩組研究對(duì)象接受7 d治療后，與治療前比較，病兒壞死因子α、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-17 水平均降低（

P

＜0.05），觀察組低于對(duì)照組（

P

＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 兩組輪狀病毒腹瀉病兒治療前后壞死因子α、白細(xì)胞介素-6、白細(xì)胞介素-17水平比較/（μg/L，±s）

2.4 兩組研究對(duì)象治療效果比較

與對(duì)照組相比，觀察組嘔吐癥狀消失時(shí)間、止瀉時(shí)間及退熱時(shí)間均縮短（

P

＜0.05），見(jiàn)表5。接受治療3 d 后，觀察組55例停止腹瀉，對(duì)照組36 例停止腹瀉，接受治療5 d后，觀察組均停止腹瀉，對(duì)照組仍存在19 例腹瀉病兒。治療72 h 后，觀察組顯效53 例，有效28 例，無(wú)效9 例，總有效率為90.00%；對(duì)照組顯效34 例，有效26 例，無(wú)效30 例，總有效率為66.67%，觀察組治療總有效率高于對(duì)照組（

χ

=14.435，

P

＜0.001）。

表5 兩組輪狀病毒腹瀉病兒治療效果比較/（d，±s）

3 討論

糖萼覆蓋于內(nèi)皮細(xì)胞表面，是內(nèi)皮屏障的重要組成部分，腸黏膜內(nèi)皮細(xì)胞表面的糖萼層對(duì)于維持腸道內(nèi)環(huán)境、電解質(zhì)平衡及腸道通透性具有重要作用。腸黏膜內(nèi)皮糖萼層的損傷會(huì)引起腸道內(nèi)菌群失衡，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，造成腸黏膜對(duì)水、鈉重吸收功能降低，導(dǎo)致腸腔積聚大量液體，引發(fā)腹瀉。糖萼損傷部位還會(huì)伴有炎癥反應(yīng)發(fā)生，產(chǎn)生大量炎性因子，炎性因子會(huì)加劇腸黏膜上皮細(xì)胞糖萼損傷，引起腸黏膜屏障功能紊亂，加重腹瀉癥狀。臨床研究顯示，輪狀病毒腹瀉病兒體內(nèi)炎性因子水平升高，腸黏膜屏障功能受損，本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)病兒血清中糖萼損傷標(biāo)志物水平升高。

微生態(tài)療法治療1 d 后，糖萼損傷未發(fā)生改變，與治療前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

P

＞0.05），治療3 d后糖萼損傷情況得到改善，治療5 d 后糖萼損傷情況進(jìn)一步改善，治療7 d 后糖萼厚度與血漿糖萼損傷標(biāo)志物水平趨于穩(wěn)定；并且經(jīng)微生態(tài)療法治療后血清炎性因子水平下降，說(shuō)明微生態(tài)療法可修復(fù)糖萼損傷，減輕炎癥反應(yīng)。其治療機(jī)制可能是微生態(tài)療法中雙歧桿菌和乳桿菌為腸道內(nèi)皮定植菌，由腸上皮杯狀細(xì)胞所分泌的黏液包裹，黏附于腸道上皮細(xì)胞，可誘導(dǎo)腸道上皮細(xì)胞分泌黏液蛋白，增加黏液黏度，修復(fù)腸黏膜內(nèi)皮糖萼。同時(shí)雙歧桿菌和乳桿菌為腸道益生菌可提高機(jī)體免疫因子水平，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，活化腸道上皮免疫細(xì)胞，誘導(dǎo)其分泌抗炎因子，降低炎性因子水平，進(jìn)而減輕炎性因子對(duì)腸道內(nèi)皮糖萼的損傷，加速內(nèi)皮糖萼修復(fù)，從而提高腸黏膜屏障功能，緩解腹瀉癥狀。腸道穩(wěn)態(tài)由腸道內(nèi)環(huán)境、代謝產(chǎn)物及腸道黏膜屏障等組成，其中腸黏膜屏障對(duì)于維持腸道功能具有重要作用，可維持腸道內(nèi)菌群平衡，營(yíng)養(yǎng)及水分代謝等，輪狀病毒等病原體會(huì)破壞腸黏膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致腸黏膜上皮細(xì)胞脫落。D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原是臨床常用的反映腸黏膜屏障功能的指標(biāo)，腸黏膜屏障功能正常時(shí)，只有少量進(jìn)入血液循環(huán)，而腸黏膜功能受損時(shí)，D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原會(huì)透過(guò)腸黏膜屏障進(jìn)入血液。輪狀病毒腹瀉病兒體內(nèi)D-乳酸、內(nèi)毒素及降鈣素原水平較高，經(jīng)微生態(tài)療法治療后，上述指標(biāo)降低

P

＜0.05，表明經(jīng)微生態(tài)治療后腸黏膜屏障功能得到修復(fù)，其與腸黏膜內(nèi)皮糖萼的修復(fù)和炎癥反應(yīng)的降低密切相關(guān)。

綜上所述，微生態(tài)療法可有效減輕臨床癥狀，縮短治療時(shí)間，其治療機(jī)制為雙歧桿菌、乳桿菌通過(guò)定植、黏附于腸道上皮細(xì)胞，誘導(dǎo)其分泌黏液蛋白修復(fù)受損的糖萼層，同時(shí)微生態(tài)療法可通過(guò)誘導(dǎo)腸黏膜上皮細(xì)胞分泌抗炎因子，減輕炎癥反應(yīng)對(duì)糖萼的損傷，加快糖萼層修復(fù)，從而提高腸黏膜屏障功能，達(dá)到治療目的。