駝血多肽對運動訓(xùn)練大鼠骨骼肌線粒體能量代謝及肌組織自由基代謝的影響

王 艷，李 潔

西北師范大學(xué)體育學(xué)院，蘭州 730070

目前國內(nèi)外一些具有強大生物活性的多肽分子不斷地被發(fā)現(xiàn)與鑒定，如腦肽與機體的學(xué)習(xí)記憶有密切關(guān)系，肌肽與抗氧化有關(guān)等。駱駝是我國新疆、青海、甘肅、寧夏、內(nèi)蒙古等地區(qū)的特殊珍貴動物，惡劣的生存環(huán)境使駱駝血中的白蛋白不僅明顯高于其他哺乳動物，且含有非常高的生理活性[1]。雙峰駝的血清蛋白總量中白蛋白的含量達73.2%，顯著高于牛、馬、羊等其他類似動物。應(yīng)用蛋白酶酶解技術(shù)從駝血中制備的駝血多肽，氨基酸(共18種)含量為88.25%，其中必需氨基酸44.82%，非必需氨基酸43.43%，支鏈氨基酸19.15%，必需氨基酸/總氨基酸50.79%，必需氨基酸/非必需氨基酸103.20%，支鏈氨基酸/必需氨基酸42.72%，支鏈氨基酸/總氨基酸21.7%[2]，遠超過WHO/FAO/UNU推薦的質(zhì)量比較好的蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)[3]。駝血多肽中44.82%的必需氨基酸還高于魚皮低聚肽(24.43%)[4]和鹿血低聚肽(36.87%)[5]。駝血多肽不僅可作為生物活性肽加以開發(fā)和利用，還具有作為運動營養(yǎng)補劑的前景。另外，運動與營養(yǎng)健康效應(yīng)的機制能通過線粒體結(jié)構(gòu)與功能及代謝調(diào)節(jié)發(fā)揮作用。因此，本研究擬通過補充駝血多肽以及復(fù)合運動訓(xùn)練，探討駝血多肽對大鼠骨骼肌線粒體三羧酸循環(huán)、呼吸鏈功能及骨骼肌自由基代謝的影響，為駝血多肽作為生物活性肽應(yīng)用于運動營養(yǎng)補劑的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗對象及分組

健康雄性2月齡Wistar大鼠65只，體重200±20 g，由甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供[動物合格證書：SCXK(甘)2015-0002]，國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料常規(guī)飼養(yǎng)。經(jīng)灌胃和跑臺適應(yīng)后，保留60只大鼠進行正式實驗。將60只大鼠隨機分為6組(n=10)：對照組(control，C)、運動訓(xùn)練組(exercise training，E)、駝血多肽組(camel blood polypeptide，P)、駝血多肽+運動訓(xùn)練組(camel blood polypeptide + exercise training group，PE)、?；撬峤M(taurine group，T)、?；撬?運動訓(xùn)練組(taurine + exercise training group，TE)，各組具體處理情況見表1。

表1 大鼠分組及處理情況Table 1 Grouping and treatment of rats

1.2 運動訓(xùn)練方案

參照文獻[6]，E組、PE和TE組大鼠進行遞增負(fù)荷水平跑臺運動。第1周：速度15 m/min，運動時間20 min/d；第2周：速度20 m/min，運動時間20 min/d；第3～4周：速度25 m/min，運動時間40 min/d；第5～6周：速度25 m/min，運動時間60 min/d。每周訓(xùn)練6天，共訓(xùn)練6周。

1.3 取材及線粒體的提取

運動訓(xùn)練計劃結(jié)束后，空腹?fàn)顟B(tài)下，按1 mL/100 g劑量腹腔注射0.4%的戊巴比妥鈉麻醉大鼠，腹主動脈取血，4 ℃、3 000 rpm離心10 min制備血清。同時在冰盤上迅速分離腓腸肌，去除脂肪、筋膜等結(jié)締組織后，用冷生理鹽水清洗，液氮冷凍數(shù)小時，-20 ℃低溫保存待用。

將腓腸肌樣本取出，0～4 ℃放置10 min左右融化，一部分腓腸肌按課題組前期文獻勻漿組織、提取和懸浮線粒體。其余腓腸肌按試劑盒操作勻漿，用于測定肌組織中的指標(biāo)。

1.4 測試指標(biāo)及方法

大鼠力竭跑臺運動速度27 m/min[7]，力竭判斷標(biāo)準(zhǔn):動物跟不上預(yù)定的速度，隨轉(zhuǎn)動皮帶后拖達30 s，連續(xù)給予聲、光、機械刺激后,大鼠不能繼續(xù)跑動，記錄各組大鼠跑臺至力竭的時間。血紅蛋白采用血常規(guī)儀測定，血氨、血尿素氮、血乳酸均采用檢測試劑盒進行測定。檸檬酸合酶(CS)、α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)、酶復(fù)合體Ⅰ(CⅠ)、Ⅳ(CⅣ)和Ⅴ(CⅤ)的活性均用酶聯(lián)免疫吸附檢驗法(ELISA法)進行測定。超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量均采用檢測試劑盒進行測定。活性氧自由基(ROS)熒光強度采用DCFH熒光法在激光共聚焦顯微鏡上檢測。

1.5 主要儀器及試劑

跑臺(DSPT-202，中國杭州錢江科工貿(mào)公司)；紫外分光光度計(G1115A，日本)；高速冷凍離心機(Allegra 64R，美國)；酶標(biāo)儀(680型，美國伯樂公司)；激光共聚焦顯微鏡(OLMPUS，美國)。

駝血多肽(中國科學(xué)院蘭州分院化學(xué)物理研究所)；?；撬帷⑴Ｑ灏椎鞍?Sigma公司)；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。血清尿素氮、血氨、血清乳酸、ROS、SOD、MDA、考馬斯亮藍試劑盒(南京建成生物工程研究所)；CS、α-KGDHC、CⅠ、CⅣ、CⅤ、GSH-Px、CAT檢測試劑盒(上海樊克生物科技有限公司)。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重、力竭時間及血液指標(biāo)的比較

實驗前各組大鼠體重均無顯著性差異，6周后大鼠體重均有不同程度的增加，與C組相比，TE組顯著下降10.48%(P﹤0.05)，E、P、PE和T組分別下降3.82%、5.21%、8.59%、2.76%，但均無顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無顯著性差異。6周后大鼠力竭時間、血紅蛋白、血氨、血尿素氮及血清乳酸含量各組組間均無顯著性差異，結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠體重、力竭時間、血紅蛋白、血尿素氮、血氨和血乳酸含量的比較Table 2 Comparison of body weight,exhaustion time,hemoglobin,blood urea nitrogen,blood ammonia,and blood lactate content of

2.2 各組大鼠腓腸肌線粒體三羧酸循環(huán)限速酶活性的比較

與C組相比，CS活性除P組降低(降低6.02%，無顯著性差異)外，其余各組均升高，其中PE和TE組顯著升高20.07%(P﹤0.01)和18.71%(P﹤0.05)，E組升高13.63%，T組升高2.45%，但均無顯著性差異；與E組相比，PE和TE組均無顯著性差異；與P組相比，PE組顯著升高27.76%(P﹤0.01)，T組無顯著性差異；與PE組相比，TE組無顯著性差異，與T組相比，TE組無顯著性差異，結(jié)果見表3。

與C組相比，各組α-KGDHC活性均升高，其中TE組顯著升高15.32%(P﹤0.01)，E、P、PE和T組分別升高8.18%、0.84%、9.39%和7.78%，但均無顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無顯著性差異，結(jié)果見表3。

表3 各組大鼠腓腸肌線粒體CS和α-KGDHC活性的比較Table 3 Comparison of activities of citrate synthase (CS) and α-ketoglutarate dehydrogenase(α-KGDHC) in gastrocnemius mitochondrial of rats in each

2.3 各組大鼠腓腸肌線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體活性的比較

與C組相比，各組CⅠ活性均升高，其中E和PE組顯著升高(P﹤0.01)，分別升高17.62%和20.97%，P、T和TE組分別升高5.76%、10.55%和11.62%，但均無顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無顯著性差異。結(jié)果見表4。

與C組相比，E、P、PE、T和TE組CⅣ活性均顯著升高，分別升高25.97%(P﹤0.01)、15.36%(P﹤0.05)、28.96%(P﹤0.01)、26.16%(P﹤0.01)，和27.73%(P﹤0.01)。E、P、PE、T和TE組組間無顯著性差異，結(jié)果見表4。

與C組相比，各組CⅤ活性除P組降低外，其余各組均升高，其中TE組顯著升高22.17%(P﹤0.01)，E、PE和T組分別升高2.27%、9.19%和8.97%，P組下降9.98%，但均無顯著性差異。與E組相比，PE和TE組均升高，TE組顯著升高19.46%(P﹤0.01)，PE組升高6.76%，但無顯著性差異；與P組相比，PE和T組均顯著升高(P﹤0.01)，分別升高21.3%和21.05%；與PE組相比，TE組顯著升高11.89%(P﹤0.05)，與T組相比，TE組顯著(P﹤0.05)升高12.11%，結(jié)果見表4。

表4 各組大鼠腓腸肌線粒體酶復(fù)合體Ⅰ、Ⅳ和Ⅴ活性的比較Table 4 Comparison of activities of mitochondrial complex enzymes Ⅰ,Ⅳ and Ⅴ ingastrocnemius of rats in each

2.4 各組大鼠腓腸肌自由基代謝相關(guān)指標(biāo)的比較

與C組相比，各組大鼠腓腸肌SOD活性均升高，其中PE組顯著升高43.27%(P﹤0.01)，E、P、T和TE組分別升高29.17%、25.89%、22.61%和23.02%，但均無顯著性差異。E、P、PE、T和TE組組間無顯著性差異，結(jié)果見表5。

與C組相比，各組大鼠腓腸肌GSH-Px活性均升高，其中PE、T和TE組顯著升高(P﹤0.01)，分別升高29.49%、16.7%和19.04%，E和P組分別升高8.99%，和2.56%，但均無顯著性差異；與E組相比，PE組顯著升高18.81%(P﹤0.01)，TE組升高9.22%，但無顯著性差異；與P組相比，PE和T組均顯著升高(P﹤0.05)，分別升高26.26%和13.79%；與PE組相比，TE組無顯著性差異；與T組相比，TE組無顯著性差異，結(jié)果見表5。

表5 各組大鼠腓腸肌SOD、GSH-Px和CAT活性的比較Table 5 Comparison of activities of SOD,GSH-Px and CAT in gastrocnemius of rats in each group

與C組相比，大鼠腓腸肌CAT活性除P組下降外，其余各組均升高，其中PE組顯著升高21.8%(P﹤0.01)，E、T和TE組分別升高13.58%、5.76%和15%，P組下降10.9%，但均無顯著性差異；與E組相比，PE和TE組分別升高7.23%，和1.24%，但均無顯著性差異；與P組相比，PE和T組均顯著升高(P﹤0.05)，分別升高36.7%和18.7%；與PE組相比，TE組下降5.59%，但無顯著性差異，與T組相比，TE組上升8.73%，但無顯著性差異，結(jié)果見表5。

與C組相比，各組腓腸肌ROS熒光強度均降低，除E組下降5.73%無顯著性外，P、PE、T和TE組均顯著下降，分別下降39.21%(P﹤0.05)、89.89%(P﹤0.01)、85.09%(P﹤0.01)和63.15%(P﹤0.01)；與E組相比，PE和TE組均顯著下降(P﹤0.01)，分別下降89.27%和60.91%；與P組相比，PE和T組均顯著下降(P﹤0.01)，分別下降83.36%和75.47%；與PE組相比，TE組顯著上升264.35%(P﹤0.05)，與T組相比，TE組顯著(P﹤0.05)升高147.08%，結(jié)果見表6和圖1。

圖1 大鼠腓腸肌ROS共聚焦顯微鏡照片F(xiàn)ig.1 ROS confocal microscope photomicrograph of rat gastrocnemius

與C組相比，各組腓腸肌MDA含量均降低，其中P、PE和T組顯著下降(P﹤0.05)，分別下降55.12%、57.6%和55.95%，E和TE組分別下降41.68%和46.85%，但均無顯著性差異；E、P、PE、T和TE組組間無顯著性差異，結(jié)果見表6。

表6 各組大鼠腓腸肌ROS熒光強度和MDA含量的比較Table 6 Comparison of Fluorescence Intensity of ROS and contents of MDA in gastrocnemius of rats in each

3 討論與結(jié)論

3.1 駝血多肽及運動訓(xùn)練對大鼠體重的影響

已有研究表明，服用大豆多肽可促進中長跑運動員體重和瘦體重增加[8]。本研究結(jié)果顯示，6周后各組大鼠體重均低于對照組，其中TE組具有顯著性差異。各組大鼠體重由低到高順序為：TE組﹤PE組﹤P組﹤E組﹤T組﹤C組，表明各干預(yù)手段均有控制體重的趨勢，補劑結(jié)合運動訓(xùn)練較單純補劑、單純運動訓(xùn)練效果要好，且補劑和運動訓(xùn)練在控制體重方面有協(xié)同效應(yīng)，其中牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳，其次為駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練。與其他氨基酸及多肽結(jié)合運動訓(xùn)練對控制體重的研究結(jié)果不盡一致，其原因可能與氨基酸種類、運動水平和運動負(fù)荷有關(guān)。

3.2 駝血多肽及運動訓(xùn)練對大鼠力竭運動時間的影響

大鼠跑臺力竭的時間是反映運動能力的最常用客觀指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，6周的牛磺酸和駝血多肽灌胃補充有延長大鼠力竭運動時間趨勢，這與羅非魚鱗膠原多肽[9]和豬血多肽[10]能顯著延長小鼠負(fù)重或力竭游泳時間的研究結(jié)果類似，提示駝血多肽補充可能對延緩運動型疲勞具有功效。駝血多肽或?；撬嵫a充結(jié)合有氧運動對力竭運動時間雖有延長趨勢，但效果不顯著，可能由于跑臺力竭運動不同于游泳運動研究，駝血多肽促進肌肉組織蛋白合成，大鼠體重雖未明顯增加，但瘦體重可能增加，跑臺運動下肢負(fù)荷過大，還需配合游泳運動訓(xùn)練評價駝血多肽的抗疲勞效果。

3.3 駝血多肽及運動訓(xùn)練對大鼠血液指標(biāo)的影響

已有研究表明，補充大豆多肽對運動員血紅蛋白含量無顯著影響[8]。本研究結(jié)果相似，各組間血紅蛋白含量均無顯著性差異，各組血紅蛋白含量由高到低順序為：E組>TE組>PE組>P組>C組>T組。由此可以看出，單純運動訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練、駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練、單純補充駝血多肽均有升高血紅蛋白含量的趨勢，其中單純運動訓(xùn)練效果最好，單純補充?；撬嵊薪档脱t蛋白的趨勢。本研究中各干預(yù)手段均不能顯著影響血紅蛋白含量,可能與運動訓(xùn)練方案、血紅蛋白的主要成分——亞鐵離子等因素有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，各組間血氨含量均無顯著性差異，各組血氨含量由低到高順序為：T組﹤TE組﹤P組﹤C組﹤E組﹤PE組，提示，?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練、單純補充?；撬?、單純補充駝血多肽有降低血氨的趨勢，運動訓(xùn)練、駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練有升高血氨的趨勢，但各干預(yù)手段對大鼠安靜狀態(tài)時血氨含量無顯著影響，提示各干預(yù)手段均不會對機體氨基酸代謝產(chǎn)生顯著影響，機體氨的產(chǎn)生和消除之間仍保持動態(tài)平衡。

本研究結(jié)果顯示，各組間血尿素氮含量均無顯著性差異，各組血尿素氮含量由低到高順序為：TE組﹤P組﹤T組﹤E組﹤PE組﹤C組，表明各干預(yù)手段使大鼠血尿素氮有下降趨勢，但不會顯著影響機體蛋白質(zhì)代謝。已有類似的研究表明，補充大豆多肽可使運動員血尿素氮略有下降但不顯著[8]。另有研究表明，補充牡蠣多肽緩解游泳力竭大鼠BUN的升高[11]。提示運動訓(xùn)練、駝血多肽、?；撬帷Ⅰ勓嚯慕Y(jié)合運動訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練均不會顯著增加機體蛋白質(zhì)分解過程。

本研究結(jié)果顯示，血清乳酸含量各組間均無顯著性差異，各組血清乳酸含量由低到高順序為：TE組﹤T組﹤C組﹤P組﹤E組﹤PE組。已有研究表明，補充牡蠣多肽緩解游泳力竭大鼠BLA的升高[11]。提示，牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練和單純補充?；撬嵊薪档脱迦樗岬内厔?，運動訓(xùn)練、單純補充駝血多肽和駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練有升高血清乳酸的趨勢，但各干預(yù)手段對大鼠安靜狀態(tài)時血清乳酸含量無顯著影響，不會顯著影響機體糖的無氧代謝。

以上研究結(jié)果表明，駝血多肽、?；撬?、運動訓(xùn)練、駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練、牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練對機體安靜時氨基酸代謝，蛋白質(zhì)合成和分解，糖的無氧代謝均無顯著性影響。

3.4 駝血多肽及運動訓(xùn)練對大鼠腓腸肌線粒體三羧酸循環(huán)功能的影響

已有研究表明，運動訓(xùn)練通過誘導(dǎo)骨骼肌適應(yīng)，從而提高機體運動能力和健康水平。在此過程中，線粒體具有顯著的可塑性，對骨骼肌收縮所引發(fā)的一系列信號刺激做出相應(yīng)的應(yīng)答反應(yīng)，以適應(yīng)骨骼肌對代謝的需求[12]。耐力訓(xùn)練可以顯著提高田徑運動員肌肉CS活性。13周65%VO2max持續(xù)中等強度訓(xùn)練顯著提高股薄肌CS活性[13]。還有研究表明，多肽類制劑能夠被機體快速吸收，且吸收效果比蛋白質(zhì)好，加快葡萄糖、氨基酸和蛋白質(zhì)的利用速率。本研究結(jié)果表明，運動訓(xùn)練、牛磺酸、駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練、牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練均能提高大鼠腓腸肌線粒體CS活性，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練、牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練顯著性提高，單純補充駝血多肽使大鼠腓腸肌CS活性降低，但無顯著性差異，各組CS活性由高到低順序為：PE組>TE組>E組>T組>C組>P組。表明，補劑結(jié)合運動訓(xùn)練在改善三羧酸循環(huán)關(guān)鍵酶CS活性方面效果較佳，且駝血多肽要好于牛磺酸。這可能與駝血多肽中富含的氨基酸及支鏈氨基酸碳骨架被機體吸收作為能源底物，從而提高了三羧酸循環(huán)酶的活性，增加肌肉的產(chǎn)能速率，滿足機體運動中對能量的需求有關(guān)。本研究結(jié)果還顯示，在提高CS活性方面駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練顯著高于單純補充駝血多肽，提示，擬通過相關(guān)補劑更好地提高三羧酸循環(huán)速率，結(jié)合運動訓(xùn)練是必要的。

已有研究表明，長期有氧運動有利于骨骼肌α-KGDHC活性和有氧工作能力的提高[14]。本研究結(jié)果顯示，各組α-KGDHC活性均有所升高，其中只有?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練具有顯著性，且效果最佳，其次為駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練。各組α-KGDHC活性由高到低順序為TE組>PE組>E組>T組>P組>C組。提示，擬通過相關(guān)補劑更好地提高三羧酸循環(huán)速率，結(jié)合運動訓(xùn)練是必要的。另外，駝血多肽與?；撬釋θ人嵫h(huán)關(guān)鍵酶活性的影響程度是有差異的。

3.5 駝血多肽及運動訓(xùn)練對大鼠腓腸肌線粒體呼吸鏈功能的影響

已有研究表明，大強度耐力運動能顯著提高大鼠骨骼肌線粒體呼吸鏈CⅠ活性[15]。補充牡蠣多肽緩解游泳力竭大鼠骨骼肌呼吸鏈復(fù)合體CⅠ～Ⅳ活性的降低[11]。補充支鏈氨基酸(branched chain amino acid,BCAA)能減少游泳運動后大鼠骨骼肌線粒體K+、Ca2+和Mg2+含量的下降，改善運動后線粒體功能，有利于提高大鼠運動能力。本研究結(jié)果顯示，各組CⅠ活性均有所升高，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練和單純運動訓(xùn)練具有顯著性，各組CⅠ活性由高到低順序為PE組>E組>TE組>T組>P組>C組，表明，在提高大鼠腓腸肌線粒體呼吸鏈CⅠ活性方面，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。這可能與駝血多肽富含BCAA，為適應(yīng)機體運動對能量的需求，增加了三羧酸循環(huán)速率，使呼吸鏈底物NADH增多，從而使CⅠ活性提高有關(guān)。

本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)[6]，肉堿結(jié)合運動訓(xùn)練能顯著提高大鼠骨骼肌線粒體呼吸鏈CⅣ活性。本研究結(jié)果顯示，各組線粒體呼吸鏈CⅣ活性均顯著升高，CⅣ活性由高到低順序為PE組>TE組>T組>E組>P組>C組，表明各干預(yù)手段均可顯著提高呼吸鏈CⅣ活性，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。已有研究表明，線粒體呼吸鏈超級復(fù)合體(mitochondrial respiratory chain supercomplex,mitoSC)mito SCI1+III2+IV1-4是哺乳動物線粒體中最豐富的，且肌肉組織中mitoSC具有特異性，CⅠ幾乎全部存在于mitoSC中[16]。運動能促進mito SCI1+III2+IV1-4含量和活性的提高[17]。駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練提高了CⅠ活性，由于骨骼肌線粒體呼吸鏈超級復(fù)合體的存在，從而促使CⅣ活性也得到提高。CⅠ與CⅣ活性的提高可能還與mito SCI1+III2+IV1-4的組裝增多有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，CⅤ活性除補充駝血多肽不及安靜組(無顯著性差異)外，其余各組CⅤ活性均升高，其中只有?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練具有顯著性差異，牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練還顯著高于駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練和單純運動訓(xùn)練，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練顯著高于單純補充駝血多肽，單純補充?；撬犸@著高于單純補充駝血多肽。各組CⅤ活性由高到低順序為TE組>PE組>T組>E組>C組>P組，表明，補劑結(jié)合運動訓(xùn)練在提高呼吸鏈CⅤ方面要好于單純補劑和單純運動訓(xùn)練，且牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳，其次為駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練。這可能與補劑結(jié)合運動訓(xùn)練提高了呼吸鏈CⅠ、CⅣ活性，在氧供充足的情況下，CⅣ不僅可促進下游的氧代謝，還能提高線粒體膜電位[18]，進而激活CⅤ活性有關(guān)。以上研究表明，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練和牛磺酸結(jié)合運動訓(xùn)練在提高大鼠骨骼肌線粒體呼吸鏈功能方面，效果較好，擬通過相關(guān)補劑提高線粒體呼吸鏈功能，結(jié)合運動訓(xùn)練是必要的。

3.6 駝血多肽及運動訓(xùn)練對大鼠腓腸肌抗氧化酶活性的影響

已有研究表明，強度較低的有氧運動可提高機體的抗氧化能力，有氧運動可提高大鼠骨骼肌SOD和GSH-Px的活性，補充BCAA有利于抗氧化酶活性的提高以及機體運動后自由基的減少。本研究結(jié)果顯示，各組腓腸肌SOD活性均升高，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練具有顯著性差異。各組SOD活性由高到低順序為：PE組>E組>P組>TE組>T組>C組，說明，各干預(yù)手段均可提高大鼠腓腸肌SOD活性，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。已有研究表明，BCAA能夠抑制小鼠脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，清除生成的過量自由基。本研究結(jié)果顯示，各組大鼠腓腸肌GSH-Px活性均升高，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練、?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練和單純補充牛磺酸具有顯著性差異，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練還顯著高于單純運動訓(xùn)練和單純補充駝血多肽，單純補充?；撬犸@著高于單純補充駝血多肽，各組GSH-Px活性由高到低順序為PE組>TE組>T組>E組>P組>C組，說明，各干預(yù)手段均可提高大鼠腓腸肌GSH-Px活性，補劑結(jié)合運動訓(xùn)練在提高骨骼肌GSH-Px活性方面要好于單純補劑和單純運動訓(xùn)練，且駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。

已有研究表明，運動訓(xùn)練能夠提高青年大鼠體內(nèi)的CAT活性。本研究結(jié)果顯示，除單純補充駝血多肽CAT活性有所降低(無顯著性差異)外，其余各組均升高，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練具有顯著性差異，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練和單純補充?；撬徇€顯著高于單純補充駝血多肽，CAT活性由高到低順序為PE組>TE組>E組>T組>C組>P組。說明，補劑結(jié)合運動訓(xùn)練在提高骨骼肌CAT活性方面要好于單純的運動訓(xùn)練和單純的補劑，其中駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。以上研究表明，在提高大鼠骨骼肌抗氧化能力方面，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。其機制可能與駝血多肽富含BCAA有關(guān)，這是因為已有研究認(rèn)為，BCAA通過某些通路調(diào)節(jié)蛋白的合成，增加機體SOD等抗氧化酶的合成以消除運動產(chǎn)生的自由基。

3.7 駝血多肽及運動訓(xùn)練對氧自由基及脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物的影響

已有研究表明，6周中等強度運動大鼠腓腸肌·OH生成率顯著低于安靜對照大鼠[19]。已知大豆多肽抗氧化能力強，作為營養(yǎng)補充劑緩解運動性疲勞[20]。本研究結(jié)果也顯示，各干預(yù)手段均可降低大鼠腓腸肌ROS熒光強度。除單純運動訓(xùn)練無顯著性差異外，單純補充駝血多肽和牛磺酸、補充駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練和補充?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練均具有顯著性差異，補劑結(jié)合運動訓(xùn)練還顯著低于單純運動訓(xùn)練，補充駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練和單純補充牛磺酸顯著低于單純補充駝血多肽，補充?；撬峤Y(jié)合運動訓(xùn)練顯著高于單純補充牛磺酸和駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練。各組大鼠腓腸肌ROS熒光強度由低到高順序為PE組﹤T組﹤TE組﹤P組﹤E組﹤C組，提示，在降低大鼠腓腸肌ROS方面，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。已有研究表明，有氧運動能降低機體或組織的MDA水平，牛磺酸具有抗疲勞功效，也可以降低機體MDA水平。服用支鏈氨基酸、?；撬岷蛷?fù)合氨基酸可有效降低骨骼肌MDA含量。本研究結(jié)果顯示，各干預(yù)手段均可降低大鼠腓腸肌MDA含量，其中補充駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練、單純補充駝血多肽和?；撬峋哂酗@著性差異，各組MDA含量由低到高順序為：PE組﹤T組﹤P組﹤TE組﹤E組﹤C組。說明，在降低大鼠腓腸肌MDA含量方面，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。其機制可能與本研究結(jié)果顯示的駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練增強了腓腸肌抗氧化酶活性有關(guān)。以上研究表明，在減少大鼠腓腸肌氧自由基產(chǎn)生、降低脂質(zhì)過氧化方面，駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練效果最佳。

駝血多肽結(jié)合運動訓(xùn)練可提高骨骼肌線粒體三羧酸循環(huán)和呼吸鏈功能，提高骨骼肌抗氧化能力，減少自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化損傷，且效果優(yōu)于單純補充駝血多肽或單純運動訓(xùn)練。

致謝：感謝中國科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所邸多隆、劉永峰和李云春研究員為本研究提供的資源和技術(shù)幫助。