鹿血鑒別方法研究進展※

●韓歡勝 徐 馨 黃 翠 柴孟龍

（1.哈爾濱博蒙生物科技有限公司 黑龍江 哈爾濱 150030；2.黑龍江普惠特產(chǎn)有限公司 黑龍江 哈爾濱 150030；3.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全研究所 黑龍江 哈爾濱 150086）

鹿血是我國傳統(tǒng)名貴中藥，具有增強免疫力、抗疲勞、補血益精等保健功效。鹿血產(chǎn)量極少，在古代是王公貴族和達官貴人的專屬保健品，隨著人們生活水平和大健康意識的提高，鹿血逐漸走進百姓生活，但價格較高。新鮮鹿血不易保存，所以經(jīng)常被制成各種鹿血產(chǎn)品，常見的鹿血產(chǎn)品有鹿血粉、鹿血顆粒、鹿血酒、鹿血膠囊、鹿血口服液和鹿血晶等。但因鹿血產(chǎn)品很難直觀辨別真?zhèn)?，容易被不法商家利用其他動物血液制成假冒偽劣產(chǎn)品。傳統(tǒng)的鹿血鑒別方法是通過外觀性狀鑒別及一些理化方法進行鑒別，但對性狀十分相似的血液樣本卻無法準(zhǔn)確有效地鑒別。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們將其應(yīng)用到鹿血鑒別中，具有精準(zhǔn)鑒別鹿血真?zhèn)蔚膬?yōu)勢，為鹿血產(chǎn)品的開發(fā)提供了保障。本文對常用的幾種鹿血鑒別方法進行總結(jié)，以供參考。

1 外觀性狀鑒別法

新 鮮 鹿 血 在0～4℃可 保 存10～15 d，在-10℃～-20℃可保存15～90 d。新鮮鹿血與其他動物血從顏色、基本性狀等外觀方面無法進行準(zhǔn)確辨別，而參照行業(yè)團體標(biāo)準(zhǔn)T/CAAA 045—2020和T/CAAA 046—2020，可以對凍干鹿血粉和干燥鹿血粉進行外觀性狀鑒別。具體方法：取適量鹿血粉樣品，置于潔凈的白色瓷盤中，在自然光下觀察、鼻嗅和口嘗，純正鹿血粉為粉末狀、無結(jié)塊，無可見異物，深棕色，有光澤，稍有鐵腥味，無其他異味。假的鹿血粉顏色發(fā)黑，沒有光澤。

2 溶解法

溶解法也是鑒別鹿血粉的一種常用方法，一些經(jīng)驗豐富的養(yǎng)鹿人常使用這種方法進行鑒別。具體方法：取一杯清水，再取少量鹿血粉樣品撒入水中，純正的鹿血粉會呈直線形墜入杯底，并出現(xiàn)一條紅色血帶。而假的鹿血粉則呈擴散型慢慢落入杯底。因溶解法需要有豐富經(jīng)驗的專業(yè)人員才能夠操作，局限性強。

3 免疫沉淀法

免疫沉淀法是一種將蛋白質(zhì)作為抗原，利用抗原與抗體特異性結(jié)合的特性，使可溶性抗原與相應(yīng)抗體在特定條件下結(jié)合，通過觀察是否出現(xiàn)沉淀物進行判定的鑒別方法。張振學(xué)等[1]根據(jù)法醫(yī)血清學(xué)抗原抗體沉淀反應(yīng)的理論，使用抗鹿Hb（血紅蛋白）血清為抗體，對鹿血粉進行了鑒別試驗。在無菌條件下制備抗鹿Hb血清并測定效價，確保抗鹿Hb血清特異性良好。將鹿血粉裝入試管中，加入適量生理鹽水?dāng)嚢璨⒊浞纸?，離心取血清千倍稀釋后，加入抗鹿Hb血清，進行沉淀試驗，15 min后在日光下觀察沉淀結(jié)果，出現(xiàn)白色沉淀環(huán)則為抗鹿陽性反應(yīng)，不出現(xiàn)白色沉淀環(huán)則為假鹿血粉。抗原抗體法較傳統(tǒng)方法鑒別結(jié)果更加客觀，可以準(zhǔn)確地鑒別鹿血粉的真?zhèn)?，但需制備多種抗體，實驗操作比較復(fù)雜。

4 聚丙烯酰胺凝膠電泳法

聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）是一種以聚丙烯凝膠作為載體的區(qū)帶電泳技術(shù)。聚丙烯酰胺凝膠為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)和電荷效應(yīng)，利用凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和電泳物的大小形狀不同形成分子篩效應(yīng)，電泳物所帶電荷的差異性形成電荷效應(yīng)。聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）可以分為非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（native-PAGE）和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE），SDS-PAGE比較常用，在凝膠和樣品中加入十二烷基苯磺酸鈉（SDS）和強還原劑，使分子被解聚成多肽鏈,并消除不同分子間原有的電荷差異與結(jié)構(gòu)差異，因此只根據(jù)亞基分子量即可分離并測定蛋白質(zhì)的分子量。郭月秋等[2]采用SDS-PAGE方法，對鹿、牛、雞、羊和豬5種動物全血進行了電泳檢測，結(jié)果表明，各種動物全血的條帶均有差異，鹿全血有13條條帶，而牛、雞、羊全血條帶分別為8條、5條和6條，與鹿全血條帶數(shù)差異顯著。豬全血有11條條帶，但在條帶級數(shù)（顏色深淺）與鹿全血也有差異，易于區(qū)別。5次重復(fù)試驗結(jié)果穩(wěn)定一致，說明SDS-PAGE可以作為鹿血與其他動物血液鑒別的依據(jù)。聚丙烯酰胺凝膠電泳還可以對動物血清進行鑒別，不同種動物血清中蛋白質(zhì)種類和含量不同。倉公敖等[3]用聚丙烯酰胺凝膠電泳對鹿、牛、豬、羊4種動物的血清蛋白進行了分離和鑒別，結(jié)果表明鹿血清蛋白的條帶與羊、豬存在明顯差異，牛和鹿的血清蛋白條帶也不同，牛血清有3條區(qū)帶，鹿血清有2條顏色較深的條帶，不同動物血清蛋白電泳條帶差異顯著，可以將鹿血與其他動物血液進行區(qū)別鑒定。聚丙烯酰胺凝膠電泳法可以對新鮮血液進行檢測，彌補了其他傳統(tǒng)方法的局限性，但需要專業(yè)技術(shù)設(shè)備和試劑。

5 近紅外光譜法

近紅外光譜分析技術(shù)是基于有機分子的近紅外吸收，從樣品的背景變化中提取弱信息[4]，利用近紅外光譜技術(shù)對樣品進行鑒定的方法，具有方便、快速、高效、無污染等優(yōu)點。目前，近紅外光譜技術(shù)逐漸從農(nóng)業(yè)應(yīng)用推廣到食品、化學(xué)、醫(yī)藥等領(lǐng)域。尹冬冬[5]應(yīng)用PLS法結(jié)合NIR技術(shù)建立了鹿血真?zhèn)巫R別模型，PLS鹿血判別模型可以實現(xiàn)對鹿血真?zhèn)蔚目焖贆z測，可對定標(biāo)集鹿血樣本和未知鹿血樣本進行檢測，準(zhǔn)確率分別可達100%和93.3%。近紅外光譜法應(yīng)用范圍廣、污染小，但需要特定光譜儀和較為專業(yè)的操作人員。

6 分子生物學(xué)方法

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的的快速發(fā)展，利用特異性引物對微量樣本進行快速檢測的PCR技術(shù)，是當(dāng)前很多物種真?zhèn)舞b別的有效方法之一。PCR技術(shù)利用特異性引物對特定DNA片段進行擴增，是一種生物體體外擴增的方式，具有簡單快速、靈敏度高、特異性強、對樣本純度要求低等優(yōu)點。PCR技術(shù)在鹿血鑒別中可以彌補傳統(tǒng)鑒別方法的不足，從源頭上對鹿血質(zhì)量進行把關(guān)。并且對新鮮血液、鹿血粉、鹿血晶等均可進行鑒定。黨平等[6]應(yīng)用PCR技術(shù)對豬、馬、驢、牛、羊、兔、雞、鴨、鵝等常見家畜新鮮血液和鹿血精樣本進行了特異性檢測，鑒定用引物根據(jù)各物種線立體DNA（mtDNA）的特定序列進行設(shè)計，血樣DNA提取后進行PCR反應(yīng)，結(jié)果表明，以鹿的特異性引物對10種動物血液總DNA模板進行擴增，僅在鹿血中擴增出特異條帶，其他物種DNA模板無擴增條帶。沈海英等[7]用線粒體DNA特異性引物對鹿血、牛血、豬血和鹿血晶基因組CNA進行了PCR擴增，結(jié)果表明與黨平的試驗結(jié)果一致。PCR擴增后根據(jù)條帶便可以確定血液樣本物種歸屬，無需進行測序。但該方法無法對鹿科動物的不同種屬及亞種進行鑒定，因此周辰杰等[8]進一步使用特異性引物對東北梅花鹿、東北馬鹿、塔河馬鹿、坡鹿、白唇鹿、鹿血晶進行了血液種屬來源鑒定，結(jié)果表明東北梅花鹿、東北馬鹿、塔河馬鹿的引物都能夠從鹿血晶DNA模板中擴增出特異性條帶，說明名貴中藥鹿血晶的鹿血來源于一種或多種鹿科動物的血液。

隨著基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，通過高通量、高分辨率的分析檢測技術(shù)，在整體上分析探討生命活動在代謝層面的特征和規(guī)律[9-11]，基因與蛋白質(zhì)表達的微小變化在代謝產(chǎn)物上放大，可以通過代謝組學(xué)技術(shù)進行檢測，應(yīng)用在鹿血檢測中，可以更精確地對鹿全血、鹿茸血、鹿心血等進行檢測。張然然等[13]利用鹿全血與鹿茸血之間的小分子代謝物組分差異，對鹿全血和鹿茸血進行比較和定量分析，結(jié)果表明，鹿全血和鹿茸血小分子代謝物組分在種類上沒有差異，但在含量上有差別，試驗共篩選出28種顯著差異代謝產(chǎn)物，鹿茸血中脂類、核苷酸及天然抗氧化劑麥角硫因含量較高。該研究證明了利用代謝組學(xué)技術(shù)可以對鹿血進行精準(zhǔn)定位鑒別，為鹿血產(chǎn)品的分類開發(fā)提供了依據(jù)。

7 總結(jié)

鹿血是珍貴的動物類中藥，營養(yǎng)價值高，保健功效顯著，價格相對昂貴，但市場發(fā)展空間很大。由于鹿血產(chǎn)品多種多樣，質(zhì)量良莠不齊，國家沒有統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗鑒定標(biāo)準(zhǔn)，消費者對鹿血產(chǎn)品的真?zhèn)螣o法辨別。隨著各種新興技術(shù)的運用和中藥現(xiàn)代化的發(fā)展，科研人員也在不斷嘗試使用新技術(shù)對鹿血及其產(chǎn)品進行鑒別，經(jīng)過多年的探索和發(fā)現(xiàn)，以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)，根據(jù)鹿血自身特有的DNA序列，目前基本可以實現(xiàn)鹿血產(chǎn)品真?zhèn)蔚目焖?、便捷、有效鑒定。

更正聲明：發(fā)表在本刊2020年第23卷第12期第56～57頁的題為《撫順寒地藍莓產(chǎn)業(yè)化栽培技術(shù)集成》一文，作者為趙明。由于作者原因，作者信息提供有誤。應(yīng)趙明本人要求，將作者信息更正如下。作者姓名：何明莉1徐貴軒1杜俊臣2劉景峰2孫憲波3方天成4孫秀旭3。單位信息：1. 遼寧省果樹科學(xué)研究所 遼寧 熊岳 115009；2. 遼寧省新賓縣北四平鄉(xiāng)政府 遼寧 新賓 113200；3. 撫順豐晟農(nóng)產(chǎn)品有限公司 遼寧 新賓 113201；4. 大連隆豐達生物科技發(fā)展有限公司 遼寧 大連 116300?；痦椖浚簱犴樖腥嗣裾↘JGJ-2016-08）；新賓特色藍莓產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)示范與推廣（2016年）。作者簡介：何明莉（1970-），女，滿族，推廣碩士，副研究員，現(xiàn)從事蘋果育種研究與區(qū)域示范工作。