• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    次氯酸消毒液對(duì)豬源病原體的消殺效果

    2021-12-09 16:41肖琦趙霞玲錢雯嫻朱家平張馮禧尹力鴻溫立斌何孔旺
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2021年21期
    關(guān)鍵詞:次氯酸細(xì)菌消毒

    肖琦 趙霞玲 錢雯嫻 朱家平 張馮禧 尹力鴻 溫立斌 何孔旺

    摘要:為評(píng)價(jià)次氯酸消毒液(以下簡(jiǎn)稱消毒液)對(duì)豬源病原體的消殺作用,以豬場(chǎng)常見的5種病原菌和5種病毒為研究對(duì)象,測(cè)試消毒液在不同濃度和不同作用時(shí)間下的消殺效果。懸液定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果表明,消毒液原液(次氯酸含量為210 mg/L)和1 ∶2倍稀釋消毒液(次氯酸含量為105 mg/L),作用30 s即可殺滅豬鏈球菌2型(SS2)、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)、副豬嗜血桿菌(HPS)、豬丹毒桿菌(ER)和豬大腸桿菌(ETEC);1 ∶4倍稀釋消毒液(次氯酸含量為52.5 mg/L)作用1 min能殺滅HPS、ER和ETEC,作用5 min能殺滅SS2和APP,殺滅對(duì)數(shù)值均>7.00,殺滅率均為100%。病毒滅活試驗(yàn)結(jié)果表明,消毒液原液作用1 min對(duì)豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬細(xì)小病毒(PPV)的平均滅活對(duì)數(shù)值均≥5.00,殺滅率均≥99.999%;1 ∶2倍稀釋消毒液作用1 min對(duì)PEDV的平均滅活對(duì)數(shù)值為4.00、殺滅率為99.990%;消毒液原液作用5 min和10 min,對(duì)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的殺滅率為99.899%,對(duì)豬偽狂犬病病毒(PRV)的殺滅率為92.921%,對(duì)豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的殺滅率為90.00%。表明次氯酸消毒液在推薦濃度下對(duì)豬場(chǎng)常見病原菌有快速高效的消殺效果,對(duì)PEDV和PPV等病毒亦有良好的消殺作用。

    關(guān)鍵詞:次氯酸;豬;細(xì)菌;病毒;消毒

    中圖分類號(hào):S855.99 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A

    文章編號(hào):1002-1302(2021)21-0170-04

    收稿日期:2021-05-15

    基金項(xiàng)目:江蘇現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(生豬)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生物安全創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(編號(hào):JATS[2020]382);江蘇省農(nóng)業(yè)重大技術(shù)協(xié)同推廣計(jì)劃(編號(hào):2019-SJ-009-04-01)。

    作者簡(jiǎn)介:肖 琦(1980—),女,遼寧丹東人,博士,助理研究員,主要從事豬病與人獸共患病防控研究。E-mail:xiaoqi_2122@163.com。

    通信作者:何孔旺,碩士,研究員,主要從事豬病與人獸共患病防控研究。E-mail:kwh2003@263.net。

    消毒是豬場(chǎng)重要的生物安全措施之一。豬場(chǎng)常用的消毒方法有物理消毒法、化學(xué)消毒法和生物消毒法等,其中化學(xué)消毒法最為常用[1]。化學(xué)消毒劑的正確選擇和使用是決定豬場(chǎng)消毒效果的關(guān)鍵。含氯類消毒劑是一種高效消毒劑,對(duì)細(xì)菌和病毒有強(qiáng)大的殺滅作用[2]。臨床常用的含氯消毒劑包括次氯酸鈉(如84消毒液)、次氯酸鈣(漂白粉)、二氯異氰尿酸鈉、三氯異氰尿酸鈉等[3]。次氯酸消毒液是一種新型的含氯消毒劑,不僅具有廣譜抗菌、殺菌效率高的特點(diǎn),而且具有腐蝕性小、極少刺激性氣味、高安全性、不污染環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)[4-5],有望替代刺激性較強(qiáng)的次氯酸鈉、二氯異氰尿酸鈉等傳統(tǒng)含氯消毒劑。高曉東等使用次氯酸消毒液對(duì)社區(qū)及醫(yī)院內(nèi)皮膚軟組織感染的病原體殺滅率進(jìn)行了檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、真菌、分枝桿菌和厭氧菌均能達(dá)到7個(gè)lg值的殺滅率[6]。劉文等在規(guī)?;i舍內(nèi)用次氯酸消毒液(微酸性電解水,有效氯濃度為90 mg/L)噴霧消毒,可有效減少空氣中金黃色葡萄球菌的數(shù)量,消毒后的豬舍內(nèi)空氣微生物在3 d內(nèi)能維持較低的水平[7]。但目前次氯酸消毒液在豬場(chǎng)的使用還不廣泛,也缺乏次氯酸消毒液對(duì)豬源病原菌和病毒殺滅效果的相關(guān)研究。本試驗(yàn)以次氯酸含量為210 mg/L的消毒液為研究對(duì)象,在試驗(yàn)條件下研究其對(duì)豬場(chǎng)常見的豬鏈球菌2型(SS2)、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌5型(APP5)、副豬嗜血桿菌4型(HPS4)、豬丹毒桿菌(ER)、豬大腸桿菌(ETEC)等5種病原菌和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬偽狂犬病毒(PRV)、豬流行性腹瀉病毒(PEDV)、豬細(xì)小病毒(PPV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)等5種病毒的殺滅作用,為豬場(chǎng)消毒劑的選擇和使用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 次氯酸消毒液

    易凱歐次氯酸消毒液(以下簡(jiǎn)稱消毒液)由鶴鳴(上海)環(huán)境科技有限公司生產(chǎn)并提供,生產(chǎn)日期為2020年9月6日,次氯酸含量為210 mg/L,pH值為6.2。

    1.2 菌株、毒株及細(xì)胞

    豬鏈球菌2型ZY05株(SS2 ZY05株)、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌5型KL株(APP5 KL株)、副豬嗜血桿菌4型JS株(HPS4 JS株)、豬丹毒桿菌ES株(ER ES株)、豬大腸桿菌O139株(ETEC O139株)、豬圓環(huán)病毒2型P58株(PCV2 P58株)、豬偽狂犬病毒B株(PRV B株)、豬流行性腹瀉病毒JS2012株(PEDV JS2012株)、豬細(xì)小病毒BJ株(PPV BJ株)以及PK15細(xì)胞、Marc145細(xì)胞、ST細(xì)胞、Vero細(xì)胞,均由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所保存;豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗毒GDr180株(PRRSV GDr180株)由廣東永順生物制藥股份有限公司提供。

    1.3 主要試劑

    Todd Hewitt肉湯(THB)培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)BD公司,THB培養(yǎng)基、THB+0.01%NAD培養(yǎng)基、THB+0.01%NAD+5%小牛血清培養(yǎng)基、THB+5%小牛血清培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基按照配方配制;高糖DMEM培養(yǎng)液、胰酶購(gòu)自Gibico公司;新生牛血清購(gòu)自浙江天杭生物科技股份有限公司;Champagne Taq DNA Polymerase、2×AceQ qPCR Probe Master Mix、Green Taq Mix購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司;Premix Ex Taq(Probe qPCR)購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司;HiPure Total RNA Mini Kit 總RNA小提試劑盒(雙柱型)、HiPure Universal DNA Kit 通用型DNA抽提試劑盒購(gòu)自廣州美基生物科技有限公司;硫代硫酸鈉購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司,用無(wú)菌ddH2O將硫代硫酸鈉配制成終濃度為10.5%的中和劑原液,用0.22 μm的濾膜過(guò)濾,備用。

    1.4 懸液定量殺菌試驗(yàn)

    試驗(yàn)在室溫下進(jìn)行,所有液體使用前恢復(fù)至室溫。參照文獻(xiàn)[8-9]設(shè)計(jì)試驗(yàn)。每組重復(fù)3次,取平均值。

    1.4.1 菌種復(fù)蘇 取50 μL凍存菌液,接種到 5 mL 液體培養(yǎng)基中,置于37 ℃ 200 r/min培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,進(jìn)行菌液計(jì)數(shù)。

    1.4.2 試驗(yàn)組 每種受試菌共設(shè)9個(gè)消毒液+菌懸液的試驗(yàn)組。1~3組為消毒液原液,4~6組為用無(wú)菌ddH2O進(jìn)行1 ∶2倍稀釋的消毒液,7~9組為用無(wú)菌ddH2O進(jìn)行1 ∶4倍稀釋的消毒液,每組取消毒液4.5 mL,加入0.5 mL菌液,在混勻儀上混勻,作用一定時(shí)間后(1、4、7組作用30 s,2、5、8組作用1 min,3、6、9組作用5 min),加入250 μL中和劑原液,使中和劑的終濃度為0.5%,混勻,作用 10 min 后,菌液計(jì)數(shù)。

    1.4.3 對(duì)照組 共設(shè)4個(gè)對(duì)照組。稀釋液+菌懸液對(duì)照組(陽(yáng)性對(duì)照):取無(wú)菌ddH2O 4.5 mL,加入0.5 mL菌液,作用5 min后,加入250 μL無(wú)菌ddH2O,作用10 min后,菌液計(jì)數(shù)。

    中和劑+菌懸液對(duì)照組:取無(wú)菌ddH2O 4.5 mL,加入0.5 mL菌液,作用5 min后,加入 250 μL 中和劑原液,混勻,作用10 min后,菌液計(jì)數(shù)。

    (消毒液+中和劑)+菌懸液對(duì)照組:取消毒液原液4.5 mL,加入0.5 mL無(wú)菌ddH2O,加入250 μL中和劑原液,混勻,作用10 min后,加入0.5 mL菌懸液,作用5 min后,菌液計(jì)數(shù)。

    稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基對(duì)照組(陰性對(duì)照):取無(wú)菌ddH2O 4.5 mL,加入0.5 mL培養(yǎng)基,加入250 μL中和劑原液,作用10 min后,菌液計(jì)數(shù)。

    1.5 病毒滅活試驗(yàn)

    試驗(yàn)在室溫下進(jìn)行,所有液體使用前恢復(fù)至室溫。參照文獻(xiàn)[8]設(shè)計(jì)試驗(yàn)。每組重復(fù)3次,取平均值。

    1.5.1 病毒培養(yǎng) 將PCV2、PRV、PEDV、PPV、PRRSV毒株分別在PK15細(xì)胞、ST細(xì)胞、Vero細(xì)胞、PK15細(xì)胞、Marc145細(xì)胞上培養(yǎng),并測(cè)定各毒株的TCID50。

    1.5.2 試驗(yàn)組 每種病毒共設(shè)9個(gè)試驗(yàn)組。1~3組使用消毒液原液,4~6組使用用無(wú)血清高糖DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行1 ∶2倍稀釋的消毒液,7~9組使用用無(wú)血清高糖DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行1 ∶4倍稀釋的消毒液,每組取消毒液40 μL,加入40 μL病毒原液,在混勻儀上混勻,作用一定的時(shí)間后(1、4、7組作用1 min,2、5、8組作用5 min,3、6、9組作用 10 min),迅速加入9倍體積(720 μL)病毒培養(yǎng)液,作為10-1稀釋組,然后用病毒培養(yǎng)液依次做10倍倍比稀釋,每個(gè)稀釋度接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的4個(gè)孔,每孔150 μL,置于37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),測(cè)TCID50。

    1.5.3 對(duì)照組 共設(shè)3個(gè)對(duì)照組。

    病毒對(duì)照組(陽(yáng)性對(duì)照):取40 μL病毒培養(yǎng)液,加入40 μL病毒原液,加入9倍體積(720 μL)病毒培養(yǎng)液,作為10-1稀釋組,然后用病毒培養(yǎng)液依次做10倍倍比稀釋,每個(gè)稀釋度接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的4個(gè)孔,每孔150 μL,置于37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),測(cè)TCID50。

    消毒液對(duì)照組:取消毒液原液40 μL,加入 40 μL 病毒培養(yǎng)液,加入9倍體積(720 μL)病毒培養(yǎng)液,接種96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的4個(gè)孔,每孔 150 μL,置于37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

    空白細(xì)胞對(duì)照組(陰性對(duì)照):驗(yàn)證不接毒細(xì)胞是否可以正常生長(zhǎng)。未接種病毒的細(xì)胞,在含有2%小牛血清的高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 懸液定量殺菌試驗(yàn)

    由表1可見,消毒液原液(次氯酸含量為 210 mg/L)和1 ∶2倍稀釋消毒液(次氯酸含量為 105 mg/L),作用30 s、1 min、5 min,對(duì)SS2 ZY05株、APP5 KL株、HPS4 JS株、ER ES株和ETEC O139株的殺滅對(duì)數(shù)值均>7.00,殺滅率均為100%;1 ∶4倍稀釋消毒液(次氯酸含量為52.5 mg/L)作用 1 min 對(duì)HPS4 JS株、ER ES株和ETEC O139株,作用 5 min 對(duì)SS2ZY05株和APP5 KL株,殺滅對(duì)數(shù)值亦均>7.00,殺滅率均為100%。

    2.2 病毒滅活試驗(yàn)

    由表2可見,消毒液原液(次氯酸含量為 210 mg/L)與病毒液作用1、5、10 min對(duì)PEDV JS2012株和PPV BJ株的平均滅活對(duì)數(shù)值均≥5.0、殺滅率≥99.999%;1 ∶2倍稀釋的消毒液(次氯酸含量為105 mg/L)作用5 min和10 min、1 ∶4 倍稀釋的消毒液(次氯酸含量為52.5 mg/L)作用10 min對(duì)PEDV JS2012株的平均滅活對(duì)數(shù)值亦均為5.00、殺滅率為99.999%;1 ∶2倍稀釋的消毒液作用 1 min 對(duì)PEDV JS2012株的平均滅活對(duì)數(shù)值為4.00、殺滅率為99.990%。而消毒液原液作用 5 min 和10 min對(duì)PRRSV GDr180株的平均滅活對(duì)數(shù)值為3.00,殺滅率為99.899%;對(duì)PRV B株的平均滅活對(duì)數(shù)值為1.15,殺滅率為92.921%;對(duì)PCV2 P58株的平均滅活對(duì)數(shù)值為1.00,殺滅率為90.00%。

    3 討論

    豬場(chǎng)常用的化學(xué)消毒劑主要有堿類消毒劑、含氯消毒劑、含碘消毒劑、季銨鹽類消毒劑、醛類消毒劑、過(guò)氧化物類消毒劑、酚類消毒劑、醇類消毒劑等[1]。其中,含氯消毒劑是指以次氯酸(有效氯)為主要?dú)⒕煞值囊活愊緞?,主要包括次氯酸鈉、次氯酸鈣、 液氯、二氯異氰脲酸鈉、三氯異氰脲酸和次氯酸等[3]。次氯酸消殺病原微生物的作用原理主要包括:對(duì)微生物細(xì)胞壁、細(xì)胞膜造成一定程度的破壞;破壞細(xì)胞內(nèi)存在的大量蛋白類物質(zhì),同時(shí),也可對(duì)細(xì)胞核中的核苷酸造成破壞;通過(guò)破壞微生物的電子傳遞鏈及各種代謝中的關(guān)鍵酶, 對(duì)微生物的代謝造成嚴(yán)重的影響;次氯酸與微生物反應(yīng)后可生成活性氧物質(zhì)、氯胺,這些物質(zhì)同樣可對(duì)微生物造成殺滅作用[10]。但由于次氯酸鈉、二氯異氰脲酸鈉等傳統(tǒng)含氯消毒劑均具有較強(qiáng)的刺激性和腐蝕性,對(duì)消毒對(duì)象有一定的毒性,從而限制了含氯消毒劑的臨床廣泛應(yīng)用。因此,一種新型的含氯消毒劑——次氯酸消毒劑應(yīng)運(yùn)而生。次氯酸消毒劑又叫弱酸性次氯酸水或微酸性次氯酸水,中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《含氯消毒劑衛(wèi)生要求》中明確次氯酸消毒劑的定義為“消毒液原液中含有穩(wěn)定的次氯酸的消毒劑”[11],它可以廣譜抵抗微生物,在有效的抗菌濃度范圍內(nèi),對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞無(wú)刺激性、無(wú)致敏、細(xì)胞毒性較低,而且環(huán)境友好[4]。而易凱歐次氯酸消毒液就是一種次氯酸消毒劑。

    一種消毒劑的殺滅效果,通常以殺滅對(duì)數(shù)值或殺滅率來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià),殺滅對(duì)數(shù)值是指當(dāng)微生物的數(shù)量以對(duì)數(shù)表示時(shí),消毒前后微生物減少的對(duì)數(shù)值;而殺滅率是指在微生物殺滅試驗(yàn)中,用百分率表示微生物數(shù)量減少的值。一種消毒劑在懸液定量殺菌試驗(yàn)中,細(xì)菌各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥5.00,相當(dāng)于傳染性喪失程度為99.999%時(shí),可判定該消毒劑對(duì)細(xì)菌消毒合格;而病毒消殺試驗(yàn)中,病毒各次試驗(yàn)的平均滅活對(duì)數(shù)值≥4.00時(shí),相當(dāng)于傳染性喪失程度為99.99%時(shí),可判定該消毒劑對(duì)病毒消毒合格。而殺滅率為99.9%、99%、和90%時(shí),則表明消毒劑的消殺能力依次降低[8,12]。而殺滅率低于90%時(shí)則表明該消毒劑消殺病原微生物能力很低,不能用于臨床消毒。本研究中,易凱歐次氯酸消毒液在次氯酸含量為105 mg/L時(shí),能在30 s內(nèi)高效殺滅所試5種常見豬源病原菌,殺滅對(duì)數(shù)值均≥7.00,而當(dāng)次氯酸含量為52.5 mg/L時(shí),延長(zhǎng)作用時(shí)間至1~5 min亦能高效殺滅常見豬源病原菌;而對(duì)5種豬源病毒,易凱歐次氯酸消毒液的滅活效果卻存在一定的差異,次氯酸含量為210 mg/L時(shí)消毒液可快速高效滅活PEDV和PPV,平均滅活對(duì)數(shù)值亦≥5.0;而對(duì)PRRSV、PRV和PCV2則表現(xiàn)為中效或低效滅活作用。表明次氯酸消毒液在推薦濃度下對(duì)豬場(chǎng)常見病原菌有快速高效的殺滅效果,對(duì)PEDV和PPV等病毒亦有良好的消殺作用,可用于豬場(chǎng)日常消毒。

    參考文獻(xiàn):

    [1]祁夢(mèng)南,孫 元,仇華吉. 消毒劑的抗病毒研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào),2021,43(9):972-977,1007.

    [2]王鳳書.消毒劑及殺滅微生物效能研究現(xiàn)狀[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐,2007,20(6):657-659.

    [3]丁建華,云田田,夏慶勛,等. 次氯酸消毒劑的研究動(dòng)態(tài)及應(yīng)用[J]. 中國(guó)洗滌用品工業(yè),2020(增刊1):214-218.

    [4]黃育紅,林立旺,陳路瑤,等. 弱酸性次氯酸消毒液殺菌性能和腐蝕性的試驗(yàn)研究[J]. 預(yù)防醫(yī)學(xué)論壇,2014,20(9):691-692,704.

    [5]王 勝,李其松,吳春陽(yáng),等. 非洲豬瘟壓力下的豬場(chǎng)消毒劑的選擇[J]. 豬業(yè)科學(xué),2020,37(5):136-139.

    [6]高曉東,胡必杰,鮑 容.次氯酸消毒液對(duì)皮膚軟組織感染常見病原體體外殺菌試驗(yàn)效果分析[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2017,

    27(8):1714-1716.

    [7]劉 文,蒲施樺,林保忠,等. 微酸性電解水對(duì)豬場(chǎng)空氣消毒效果的研究[J]. 豬業(yè)科學(xué),2015,32(2):89-90.

    [8]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 消毒技術(shù)規(guī)范:衛(wèi)法監(jiān)發(fā)[2002]282號(hào)[S]. 2002:15-29,32-37.

    [9]國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).消毒劑實(shí)驗(yàn)室殺菌效果檢驗(yàn)方法:GB/T 38502—2020[S]. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2020.

    [10]程亞光,辛鵬舉,蘇 靜,等. 次氯酸對(duì)微生物作用的研究現(xiàn)狀[J]. 中國(guó)消毒學(xué)雜志,2019,36(6):470-474.

    [11]國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).含氯消毒劑衛(wèi)生要求:GB/T 36758—2018[S]. 北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2018.

    [12]Juszkiewicz M,Walczak M,Mazur-Panasiuk N,et al. Effectiveness of chemical compounds used against African swine fever virus in commercial available disinfectants[J]. Pathogens ,2020,9(11):878.

    猜你喜歡
    次氯酸細(xì)菌消毒
    如何做好家庭消毒
    次氯酸水在消毒領(lǐng)域的應(yīng)用及注意事項(xiàng)
    多功能熒光探針用于次氯酸及微環(huán)境檢測(cè)
    微酸性次氯酸對(duì)番茄灰霉病和灰葉斑病的抑制作用
    偉大而隱秘的細(xì)菌
    專家建議這樣消毒
    細(xì)菌大作戰(zhàn)
    消毒攻略大派送
    細(xì)菌大作戰(zhàn)
    “次氯酸分解的數(shù)字化實(shí)驗(yàn)”設(shè)計(jì)說(shuō)明
    在线观看国产h片| 亚洲伊人色综图| 日韩视频在线欧美| 99国产综合亚洲精品| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 有码 亚洲区| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品在线美女| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 精品福利永久在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩欧美精品免费久久| 18禁观看日本| 伦理电影大哥的女人| 黄片无遮挡物在线观看| 制服人妻中文乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 精品一区二区三卡| 天堂中文最新版在线下载| 又大又黄又爽视频免费| 天美传媒精品一区二区| 久热久热在线精品观看| 午夜福利,免费看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲av免费高清在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产黄频视频在线观看| 久久影院123| 午夜激情av网站| 少妇精品久久久久久久| 国产成人精品久久久久久| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲成人手机| 亚洲av在线观看美女高潮| 91精品三级在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 精品久久蜜臀av无| 中文字幕精品免费在线观看视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品aⅴ在线观看| 成人国语在线视频| 久久国内精品自在自线图片| 成年女人在线观看亚洲视频| videosex国产| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 黑人猛操日本美女一级片| av女优亚洲男人天堂| 免费少妇av软件| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 99热国产这里只有精品6| 国产精品女同一区二区软件| 欧美亚洲日本最大视频资源| 亚洲视频免费观看视频| 伊人亚洲综合成人网| 在线观看三级黄色| 欧美日韩精品网址| 美女中出高潮动态图| 成年美女黄网站色视频大全免费| av网站在线播放免费| 一级毛片我不卡| 18禁观看日本| 五月开心婷婷网| 国产一区二区三区av在线| 男女边吃奶边做爰视频| 韩国av在线不卡| 欧美变态另类bdsm刘玥| 大香蕉久久成人网| 青春草亚洲视频在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 午夜福利视频在线观看免费| 久久久国产精品麻豆| 69精品国产乱码久久久| 国产免费视频播放在线视频| 久久精品国产亚洲av天美| 性高湖久久久久久久久免费观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 欧美97在线视频| 国产成人精品久久二区二区91 | 色哟哟·www| 欧美日韩av久久| 在线观看免费视频网站a站| 边亲边吃奶的免费视频| 9色porny在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| av.在线天堂| av免费在线看不卡| av免费在线看不卡| 99香蕉大伊视频| 波多野结衣一区麻豆| 91aial.com中文字幕在线观看| 精品午夜福利在线看| 一边亲一边摸免费视频| 少妇的丰满在线观看| 国产成人精品久久二区二区91 | 精品一区二区三卡| 国产成人一区二区在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频| av在线观看视频网站免费| 国产成人免费观看mmmm| 青青草视频在线视频观看| 超碰成人久久| 国产亚洲一区二区精品| 久久久国产欧美日韩av| 国产在线一区二区三区精| 18禁国产床啪视频网站| 男女边摸边吃奶| 亚洲av成人精品一二三区| 亚洲国产欧美在线一区| 夫妻午夜视频| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲av综合色区一区| 亚洲国产日韩一区二区| 精品久久蜜臀av无| 国产日韩欧美视频二区| 宅男免费午夜| 一区在线观看完整版| 亚洲av.av天堂| 国产精品三级大全| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲精品视频女| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲人成电影观看| 日日撸夜夜添| 色哟哟·www| 女性被躁到高潮视频| 亚洲国产精品国产精品| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人精品在线电影| 国产成人精品无人区| 午夜日本视频在线| 一级片'在线观看视频| 国产精品一区二区在线不卡| 91精品国产国语对白视频| 国产精品嫩草影院av在线观看| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 午夜福利视频精品| 国产亚洲一区二区精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 欧美日韩综合久久久久久| 日本wwww免费看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| av国产精品久久久久影院| 国产黄色视频一区二区在线观看| 青春草视频在线免费观看| 日韩一区二区视频免费看| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美日韩成人在线一区二区| 母亲3免费完整高清在线观看 | 波多野结衣av一区二区av| 国产免费福利视频在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲图色成人| 最近中文字幕2019免费版| 国产毛片在线视频| 青草久久国产| 在现免费观看毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 九草在线视频观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 成人二区视频| 欧美最新免费一区二区三区| 久久久久久伊人网av| 男人爽女人下面视频在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 老司机影院成人| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 精品国产乱码久久久久久男人| 人人妻人人澡人人看| 捣出白浆h1v1| 91aial.com中文字幕在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av.在线天堂| av免费在线看不卡| 久久午夜福利片| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美日本中文国产一区发布| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 男女下面插进去视频免费观看| 最黄视频免费看| 少妇的丰满在线观看| av电影中文网址| 国产成人精品一,二区| 亚洲久久久国产精品| 久久99精品国语久久久| 丰满乱子伦码专区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产精品久久久av美女十八| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲伊人久久精品综合| 在线观看免费高清a一片| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲av中文av极速乱| 欧美中文综合在线视频| 国产精品国产三级国产专区5o| 另类亚洲欧美激情| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产 精品1| 精品视频人人做人人爽| 成人手机av| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 精品第一国产精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产精品国产三级国产专区5o| 晚上一个人看的免费电影| 丰满乱子伦码专区| 午夜福利视频在线观看免费| 久久久久久人妻| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美少妇被猛烈插入视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲美女搞黄在线观看| 精品人妻在线不人妻| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 午夜福利网站1000一区二区三区| 黑人猛操日本美女一级片| 中文字幕亚洲精品专区| 捣出白浆h1v1| 欧美xxⅹ黑人| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 久久久久久人人人人人| 亚洲第一青青草原| 少妇被粗大的猛进出69影院| av视频免费观看在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品人妻偷拍中文字幕| 大码成人一级视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产一区有黄有色的免费视频| 黄色一级大片看看| 街头女战士在线观看网站| 亚洲国产精品一区三区| 水蜜桃什么品种好| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产精品无大码| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 中文字幕制服av| 91精品三级在线观看| 久久99蜜桃精品久久| xxxhd国产人妻xxx| 香蕉精品网在线| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产成人精品久久久久久| 在线观看国产h片| 国产又爽黄色视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 性色av一级| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 在线天堂中文资源库| 色吧在线观看| 自线自在国产av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| www日本在线高清视频| 久久鲁丝午夜福利片| 色哟哟·www| 久久精品国产a三级三级三级| 男女边摸边吃奶| 美国免费a级毛片| 午夜福利,免费看| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 丝袜喷水一区| 中国三级夫妇交换| 欧美日韩亚洲高清精品| 一区在线观看完整版| 国产成人aa在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 午夜福利一区二区在线看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| av在线观看视频网站免费| 国产精品熟女久久久久浪| 午夜免费观看性视频| 18在线观看网站| 99九九在线精品视频| 午夜福利,免费看| 国产精品欧美亚洲77777| 精品亚洲成国产av| 女人精品久久久久毛片| 乱人伦中国视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产 精品1| 亚洲欧美精品自产自拍| 99九九在线精品视频| 十八禁网站网址无遮挡| av天堂久久9| 久久久久久久亚洲中文字幕| 精品一区二区三区四区五区乱码 | av国产精品久久久久影院| 国产av一区二区精品久久| 久久久久久伊人网av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| a级毛片在线看网站| 亚洲精品国产av成人精品| 黄色一级大片看看| 久久97久久精品| 亚洲在久久综合| 大片电影免费在线观看免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| a 毛片基地| 校园人妻丝袜中文字幕| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 成人毛片a级毛片在线播放| 七月丁香在线播放| 高清欧美精品videossex| 精品一区二区三卡| 亚洲精品自拍成人| 久久热在线av| 飞空精品影院首页| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久久久久伊人网av| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 日本欧美视频一区| 日韩一本色道免费dvd| 青春草亚洲视频在线观看| 久热久热在线精品观看| 女性生殖器流出的白浆| av免费在线看不卡| 免费黄色在线免费观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美日韩一级在线毛片| 国产免费一区二区三区四区乱码| 丁香六月天网| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 国产一区二区三区av在线| 午夜日本视频在线| 成人国语在线视频| 我的亚洲天堂| 久久久精品区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 少妇的丰满在线观看| 免费黄色在线免费观看| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人91sexporn| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产 一区精品| 色播在线永久视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 在线看a的网站| 男女高潮啪啪啪动态图| 晚上一个人看的免费电影| 色网站视频免费| 国产成人精品婷婷| 久久久久网色| 国产淫语在线视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 极品人妻少妇av视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 少妇被粗大猛烈的视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | av视频免费观看在线观看| 国产男女内射视频| 亚洲第一av免费看| 大码成人一级视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产激情久久老熟女| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久久国产一区二区| 国产一区有黄有色的免费视频| 日韩大片免费观看网站| 国产成人精品一,二区| 少妇的丰满在线观看| 国产色婷婷99| 国产精品欧美亚洲77777| 另类亚洲欧美激情| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲久久久国产精品| 日韩成人av中文字幕在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 天堂8中文在线网| 亚洲国产精品999| 国产片内射在线| 免费看不卡的av| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲精品一二三| 中国国产av一级| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 青青草视频在线视频观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产av精品麻豆| 99九九在线精品视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 丰满少妇做爰视频| 国产免费福利视频在线观看| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲av国产av综合av卡| 韩国高清视频一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 深夜精品福利| 91在线精品国自产拍蜜月| 十八禁网站网址无遮挡| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| www日本在线高清视频| 中文天堂在线官网| 热re99久久精品国产66热6| 一区在线观看完整版| 久久久久久久国产电影| 亚洲av.av天堂| 久久久久久久亚洲中文字幕| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 宅男免费午夜| 国精品久久久久久国模美| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产精品熟女久久久久浪| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产亚洲欧美精品永久| 国产午夜精品一二区理论片| 一区二区三区四区激情视频| 波野结衣二区三区在线| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美精品一区二区免费开放| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 激情五月婷婷亚洲| 一区在线观看完整版| 亚洲五月色婷婷综合| 男女边摸边吃奶| 美女国产高潮福利片在线看| 国产成人精品在线电影| 精品第一国产精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩免费高清中文字幕av| 久久久久久久精品精品| 五月天丁香电影| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美变态另类bdsm刘玥| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产精品久久久av美女十八| 国产麻豆69| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 中文字幕人妻丝袜制服| av电影中文网址| 亚洲经典国产精华液单| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品.久久久| √禁漫天堂资源中文www| av在线app专区| 五月伊人婷婷丁香| 美女视频免费永久观看网站| freevideosex欧美| 在线 av 中文字幕| 精品国产露脸久久av麻豆| 美女福利国产在线| 99re6热这里在线精品视频| 国产精品免费大片| 一级爰片在线观看| 人人妻人人澡人人看| 成人二区视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 蜜桃国产av成人99| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久午夜福利片| 黄色配什么色好看| 免费观看性生交大片5| 黄片小视频在线播放| 欧美黄色片欧美黄色片| 成人国产av品久久久| 国产精品一国产av| 人人澡人人妻人| 欧美激情 高清一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美成人午夜精品| 久久精品亚洲av国产电影网| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产黄色免费在线视频| 一级a爱视频在线免费观看| 免费观看av网站的网址| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久国产精品麻豆| 一二三四中文在线观看免费高清| 久久久久久久久久久免费av| 男男h啪啪无遮挡| 欧美日本中文国产一区发布| 热re99久久国产66热| 国产熟女欧美一区二区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 欧美 日韩 精品 国产| 街头女战士在线观看网站| 久久久久国产精品人妻一区二区| 高清黄色对白视频在线免费看| 色播在线永久视频| 深夜精品福利| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩一区二区视频免费看| av网站在线播放免费| 国产又爽黄色视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| www.自偷自拍.com| 哪个播放器可以免费观看大片| 97精品久久久久久久久久精品| 男的添女的下面高潮视频| 免费日韩欧美在线观看| 国产有黄有色有爽视频| 色播在线永久视频| 女人久久www免费人成看片| 一区二区三区四区激情视频| 免费在线观看完整版高清| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产xxxxx性猛交| 桃花免费在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日日撸夜夜添| 新久久久久国产一级毛片| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产成人a∨麻豆精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 韩国高清视频一区二区三区| 女人精品久久久久毛片| 熟女av电影| 黄色毛片三级朝国网站| 男的添女的下面高潮视频| 国产精品久久久久久久久免| 久久久久视频综合| 久久鲁丝午夜福利片| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 少妇精品久久久久久久| 国产精品欧美亚洲77777| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美变态另类bdsm刘玥| 在线观看免费高清a一片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 老汉色∧v一级毛片| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 日韩av不卡免费在线播放| 十八禁高潮呻吟视频| 激情五月婷婷亚洲| 国产熟女欧美一区二区| 三级国产精品片| 欧美bdsm另类| 日韩欧美一区视频在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 日本-黄色视频高清免费观看| 超碰97精品在线观看| 日日撸夜夜添| 深夜精品福利| 久久精品久久精品一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲欧洲日产国产| 最近中文字幕2019免费版| 韩国高清视频一区二区三区| 久久久久视频综合| 国产精品二区激情视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 久久久久久久亚洲中文字幕| 天堂8中文在线网| 中文天堂在线官网| 999久久久国产精品视频| 久久ye,这里只有精品| 色网站视频免费| 999精品在线视频| 国产男女内射视频| 成人免费观看视频高清| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 成人毛片a级毛片在线播放| 国产深夜福利视频在线观看| av一本久久久久| 国产探花极品一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久99一区二区三区| 久久精品夜色国产| 久久久欧美国产精品| 日韩一本色道免费dvd| 韩国高清视频一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产成人免费观看mmmm| 午夜影院在线不卡| 一级毛片电影观看| 国产午夜精品一二区理论片| 久久久精品94久久精品| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲av福利一区| 日韩电影二区| 多毛熟女@视频|