組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A在直腸癌組織中的表達(dá)及對患者預(yù)后的判斷價值

王高翔 應(yīng)家祺 李秀庚

直腸癌是當(dāng)前臨床上常見的1種胃腸道惡性腫瘤，患者早期多數(shù)并沒有明顯的臨床癥狀，但是隨著病情的發(fā)展，患者會出現(xiàn)便秘、排血便、腹瀉以及腹痛等癥狀，晚期患者可出現(xiàn)體重下降和嚴(yán)重貧血等，死亡率較高[1-2]。當(dāng)前手術(shù)治療為直腸癌患者根治的唯一途徑。雖然當(dāng)前直腸癌的診斷與治療發(fā)展迅速，而且根治術(shù)與化療方案也在不斷更新，但是直腸癌患者的長期生存情況依然比較差，所以對直腸癌患者的病情診斷與預(yù)后判斷指標(biāo)具有重要臨床價值。相關(guān)研究表明[3]，組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶是一種甲級轉(zhuǎn)移酶活性的酶，生物學(xué)功能廣泛，而且在不同的細(xì)胞中發(fā)揮著生殖細(xì)胞發(fā)育、腫瘤演化、信號傳遞、染色質(zhì)重塑、翻譯調(diào)控、干細(xì)胞分化以及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等多種生物學(xué)功能。因此本文選取我院2016年3月到2019年3月共收治的60例直腸癌患者作為研究對象，分析組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A在直腸癌組織中的表達(dá)水平及對患者預(yù)后判斷價值。具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年3月到2019年3月收治的60例直腸癌患者作為研究對象，所有患者未接受過抗癌治療和術(shù)前放化療，在患者知情同意的情況下收取手術(shù)標(biāo)本，包含淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織、配對癌旁正常組織及直腸癌組織。為了保證組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A的原始狀態(tài)表達(dá)，所有患者未在術(shù)前接受過化療與相關(guān)腫瘤治療。納入標(biāo)準(zhǔn)：均知情并簽署同意書；麻醉風(fēng)險評分≥4分；無周圍組織廣泛浸潤；經(jīng)過病理學(xué)和影像學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在精神障礙的患者；免疫功能和凝血功能障礙的患者；出現(xiàn)嚴(yán)重腹腔黏連、嚴(yán)重感染和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的患者；既往有過腹腔部位手術(shù)史的患者。結(jié)直腸癌患者中男性34例，女性26例；年齡62～78歲，平均年齡(66.13±4.32)歲。

1.2 試驗(yàn)方法

免疫組織化學(xué)原理，免疫組織化學(xué)主要是應(yīng)用抗體特異性與抗原結(jié)合原理，利用化學(xué)反應(yīng)標(biāo)記抗體顯色劑顯色之后確定組織細(xì)胞之內(nèi)的抗原，并對其進(jìn)行定量、定性和定位研究。將所有標(biāo)本置于3.7%的重型甲醛溶液中進(jìn)行固定，隨后常規(guī)脫水處理，石蠟包埋組織塊進(jìn)行連續(xù)切片，切成3 μm厚，并將石蠟切片與溫水之上展平，隨后將切片轉(zhuǎn)移到處理過之后的玻璃片上，并在室溫下稍微進(jìn)行干燥，放入70 ℃恒溫烤箱之中，進(jìn)行60 min烘烤。免疫組織化學(xué)應(yīng)用瑞士羅氏公司的全自動免疫組織化學(xué)分析儀，并依照實(shí)驗(yàn)步驟的說明書對標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測。應(yīng)用的兔抗人SETD1A抗體(貨號PA5-54254，工作濃度1∶200)購自美國Thermo Fisher Scientific公司，用已知陽性組織作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A主要在細(xì)胞核中表達(dá)，通過染色后，陽性標(biāo)記為棕黃色顆粒或者黃色。依照切片之中陽性腫瘤細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞百分比進(jìn)行判定，其中陽性腫瘤占比>50%是3分，26%～50%是2分，1%～25%是1分，無腫瘤細(xì)胞陽性是0分。依照陽性強(qiáng)度進(jìn)行評分標(biāo)準(zhǔn)為：強(qiáng)陽性3分，中等強(qiáng)度陽性2分，微弱陽性1分。陽性強(qiáng)度評分×陽性百分比評分=最后總評分。其中總評分為6～9分屬強(qiáng)陽性，2～4分屬中-弱陽性，0～1分屬陰性[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A在不同組織中的表達(dá)分析

與正常組織相比組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A mRNA在腫瘤組織與轉(zhuǎn)移組織之中表達(dá)高于正常組織(P<0.05)；結(jié)直腸腫瘤Ⅰ～Ⅱ期患者組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A表達(dá)量明顯低于結(jié)直腸腫瘤Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，如圖1所示。

圖1 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A在不同組織中的表達(dá)分析

2.2 60例直腸癌患者的臨床病理學(xué)特征

通過對60例直腸癌患者的臨床病理學(xué)特征觀察發(fā)現(xiàn)，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM階段、T分期對比無明顯差異(P>0.05)，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者性別和腫瘤分化對比差異顯著(P<0.05)，見表1。

表1 60例直腸癌患者的臨床病理學(xué)特征/例

2.3 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A與患者臨床病理相關(guān)性分析

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示：患者性別、腫瘤分化與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A水平表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)，如表2所示。

表2 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A與患者臨床病理特征的相關(guān)性分析

2.4 影響直腸癌患者預(yù)后情況的多因素分析

多因素回歸分析顯示，后續(xù)治療、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A可作為直腸癌患者預(yù)后獨(dú)立因素(P<0.05)，如表3所示。

表3 影響直腸癌患者預(yù)后情況的多因素分析

3 討論

hSETD1A屬于組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶TrxG家族成員，它的甲基化位點(diǎn)在組蛋白H3第4位賴氨酸(H3K4)，而且H3K4的三甲基化(H3K4me3)是基因轉(zhuǎn)錄活躍的重要標(biāo)志[5-7]。因此本文針對于組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶的研究主要對hSETD1A進(jìn)行分析。SALZ等研究發(fā)現(xiàn)[8]，組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A可以利用和β-catenin相互作用招募到Wnt信號通路靶基因的啟動因子上，并對直腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為進(jìn)行調(diào)控。相關(guān)實(shí)體腫瘤研究中表明[9-10]，和癌旁組織相比較來說，乳腺癌、腸癌腫瘤組織中hSETD1A mRNA表達(dá)較高，并且其與乳腺癌患者的預(yù)后呈明顯相關(guān)性。

本研究結(jié)果表明，和正常組織相比組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A mRNA在腫瘤組織與轉(zhuǎn)移組織之中表達(dá)高于正常組織(P<0.05)，結(jié)直腸腫瘤Ⅰ～Ⅱ期患者組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A表達(dá)量明顯低于結(jié)直腸腫瘤Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，由此證明，直腸腫瘤組織中hSETD1A mRNA表達(dá)明顯高于正常組織。相關(guān)研究表明[11]，在患者癌癥不同階段，無論是局部還是全身，患者的H3K4me3表達(dá)水平會出現(xiàn)明顯變化，在一定程度上可以作為疾病復(fù)發(fā)預(yù)警。另由研究表明[12]，H3K4me3與hSETD1A兩者的mRNA表達(dá)在很多腸癌細(xì)胞中明顯增加，而且證實(shí)了組蛋白H3K4me3主要是hSETD1A作用的結(jié)果，與本研究結(jié)果相符；通過對60例直腸癌患者的臨床病理學(xué)特征觀察發(fā)現(xiàn)，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM階段、T分期對比無明顯差異(P>0.05)，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者的性別和分化水平對比差異顯著(P<0.05)；Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示：患者的性別、分化水平與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A水平表達(dá)正相關(guān)(P<0.05)由此證明，不同性別和不同分化水平的直腸癌患者中hSETD1A表達(dá)出現(xiàn)明顯差異。相關(guān)研究表明[13-14]，不同性別的直腸癌患者的發(fā)生了次和死亡率均存在差異，且中國男性直腸癌的放了從明顯高于女性患者。這種差異情況我們用技術(shù)來進(jìn)行解釋。SLATTERY等研究表明[15]，雌激素可能會對抗直腸癌之中微衛(wèi)星不穩(wěn)定型保護(hù)因子，與本研究結(jié)果相符，而且本研究還觀察到hSETD1A與分化程度相關(guān)，由于數(shù)據(jù)量較小，其結(jié)果還有待更多的研究驗(yàn)證；多因素回歸分析顯示，后續(xù)治療、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A可作為直腸癌患者預(yù)后獨(dú)立因素(P<0.05)，由此證明，可應(yīng)用淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、T分期與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶hSETD1A對患者的預(yù)后情況進(jìn)行判斷。綜上所述，組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶在腫瘤組織表達(dá)中高于正常組織，而且能夠作為判斷直腸癌患者預(yù)后情況的獨(dú)立因素。