氯沙坦對大鼠急性心肌梗死的保護作用及其機制

劉 振, 韓明磊, 崔佳佳, 侯永蘭, 徐光翠

（1.河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院心血管內(nèi)科，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學院公共衛(wèi)生學院毒理學教研室，河南 新鄉(xiāng) 453000）

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是全球范圍內(nèi)導致死亡的心血管疾病的首要原因，據(jù)估計，2030年中國患AMI 的人數(shù)將增加至2 300萬，并傾向于在年輕個體中發(fā)生［1-2］。AMI病情發(fā)展迅速，病死率高，且預后較差，給患者和社會均帶來了沉重負擔［3］。研發(fā)有效緩解AMI 進展的藥物、提高梗死后心肌損傷的修復和改善心功能等對于AMI患者來說均具有重要的臨床意義及價值。

腎素-血管緊張素系統(tǒng)作為應激激素反應系統(tǒng)，調(diào)節(jié)血壓和電解質(zhì)穩(wěn)態(tài)，血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）是該系統(tǒng)中的主要效應物，參與了多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，例如高血壓、心力衰竭和心肌梗死等［4］。Ang Ⅱ受體阻斷劑可有效減小血管阻力、防止血管鈣化以減緩相關(guān)心血管疾病的進程［5］?？贵w硫氧還蛋白（thioredoxin，Trx）是存在于生物體內(nèi)的氧化還原系統(tǒng)，由Trx、硫氧還蛋白還原酶1（thioredoxin reductase 1，TrxR1）和NADPH 三者組成，參與機體內(nèi)細胞生長代謝、信號傳導與氧化還原反應［6］，與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。已有研究［7］顯示：Trx 具有抗細胞凋亡和抗細胞損傷的作用，TrxR 直接介導Trx 的生成，從而發(fā)揮抗氧化應激并維持機體過氧化物穩(wěn)定的作用。但關(guān)于Trx 系統(tǒng)是否參與AMI后心肌損傷修復的過程尚未見報道。本研究基于Trx 系統(tǒng)的效應，將血管緊張素Ⅱ受體1（angiotensin Ⅱtype 1 receptor，AT1R）阻斷劑氯沙坦作用于AMI 大鼠模型后觀察大鼠心肌損傷和修復情況，并初步探討Trx 系統(tǒng)是否參與AMI 發(fā)病，以期為AMI 的診治提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要試劑和儀器40只健康清潔級SD 雄性大鼠，6～8周齡，體質(zhì)量為180～230 g，由新鄉(xiāng)醫(yī)學院實驗動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（豫）2017-0002，飼養(yǎng)溫度23℃～25℃、濕度為40%～60%、飼養(yǎng)于光照周期為12 h： 12h的清潔恒溫箱中。氯沙坦購自美國Sigma 公司（批號：20170105），卡維地洛購自齊魯制藥有限公司（國藥準字H20000100），胎牛血清（fatal bovine serun，F(xiàn)BS）購自上海北諾生物科技有限公司，ELISA 檢測試劑盒南京建成生物工程研究所，免疫組織化學染色試劑盒購自武漢博士德生物公司，HE 染色試劑盒和TUNEL 凋亡試劑盒購自上海碧云天生物研究所，2，3，5-三苯基氯化四氮唑（2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC）購自美國Roche 公司，DAB 顯色試劑購自北京中杉金橋公司，BCA 蛋白檢測試劑盒購自北京華夏遠洋科技有限公司，ECL 發(fā)光液購自北京百奧萊博科技有限公司，Trx1 和TrxR1購自美國Cell Signal 公司，抗體煙酰腺嘌呤二核苷磷酸（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH）、裂解的Caspase 3（cleaved Caspase 3）、B細胞淋巴瘤2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）和Bcl-2 相關(guān)X 蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）購自美國Santa Cruz 公司，辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標記的山羊抗兔和GAPDH 購自武漢博士德生物公司，其余試劑均為市售國產(chǎn)分析純。Multiskan Sky 全波長酶標儀購自美國MD 公司，RZ-hrv 小動物心電儀購自美國Harvard Apparatus 公司，R407 動物呼吸機購自深圳市瑞沃德生命科技有限公司，高速冷凍離心機購自美國Beckman Coulter 公司，電泳系統(tǒng)購自美國BioRad 公司。

1.2 大鼠AMI 模型制備通過腹腔注射10% 水合氯醛麻醉SD 大鼠，消毒后胸部備皮，仰臥位固定于小型動物手術(shù)臺，行氣管插管連接呼吸機輔助呼吸，于左側(cè)第4、5 肋間打開胸腔，剪開心包并暴露心臟，在距左冠狀動脈起點約2 mm 處進行左冠狀動脈前降支結(jié)扎，觀察到心電圖ST 段明顯抬高、心臟收縮功能減弱和左心室發(fā)白等現(xiàn)象，此時提示造模成功，假手術(shù)組大鼠只做手術(shù)不結(jié)扎冠狀動脈，術(shù)后關(guān)閉胸腔，縫合胸壁，給予大鼠腹腔注射青霉素（40 000 U·d－1）防止感染。

1.3 實驗分組和處理將45只SD 大鼠構(gòu)建AMI模型，在造模過程中有6只大鼠死亡，將剩余39只大鼠根據(jù)隨機數(shù)字表法分為模型組、AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組，每組13只，另取13只大鼠只做手術(shù)不結(jié)扎冠狀動脈作為假手術(shù)組。造模后第2天，AT1R 阻斷劑組大鼠給予10 mg·kg－1灌胃氯沙坦，卡維地洛組大鼠給予10 mg·kg－1灌胃卡維地洛，每日上午8 時給藥1次，假手術(shù)組和模型組大鼠同時給予等量生理鹽水灌胃，持續(xù)8周。

1.4 各組大鼠心功能檢測給藥治療結(jié)束后，將大鼠以10% 水合氯醛腹腔麻醉，右側(cè)臥位固定于手術(shù)臺上，采用小型動物超聲診斷系統(tǒng)測定心功能參數(shù)：左心室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end systolic dimension，LVESD）、左心室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic diamension，LVEDD）和左心室射血分數(shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.5 各組大鼠血清心肌損傷標志物水平檢測給藥治療結(jié)束后，經(jīng)大鼠尾靜脈采血2 mL，室溫靜置2h后，通過離心機以3 000 r·min－1離心10 min，取上清液，采用ELISA 法檢測各組大鼠血清肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase isoenzyme-MB，CK-MB）、心肌肌鈣蛋白I（recombinant cardiac troponin I，cTnI）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和腦鈉肽前體（pro-brain natriuretic peptide，Pro-BNP）水平，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，采用酶標儀檢測波長450 nm處吸光度（A）值，以A值代表各標志物水平。

1.6 各組大鼠心肌梗死面積百分率檢測采血結(jié)束后，將各組大鼠頸椎脫臼處死，取大鼠心臟，采用生理鹽水沖洗干凈，將左心室置于－20℃下凍存30 min，沿垂直其長軸方向平行切片，置入2%TTC 緩沖液（pH 7.4）中，在37℃下避光孵育30min，染色后心肌梗死區(qū)呈白色至灰白色，非梗死區(qū)呈紅色至深紅色，采用Image ProPlus 5.0圖像分析系統(tǒng)計算心肌梗死面積百分率。

1.7 HE 染色檢測各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)取各組大鼠左心室心肌組織，置入4% 多聚甲醛中固定24 h，通過梯度乙醇脫水和二甲苯透明后，常規(guī)石蠟包埋，采用切片機制成5 μm 厚的石蠟切片。切片脫蠟水化，無菌蒸餾水沖洗，采用HE染色法進行染色觀察各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)，依次進行蘇木精染色5 min，流水沖洗干凈后，伊紅染色液染色3 min，再經(jīng)過乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片，光學顯微鏡下觀察各組大鼠心肌組織損傷情況并采集圖片。

1.8 TUNEL 染色檢測各組大鼠心肌組織中TUNEL 陽性細胞率將大鼠左心室心肌組織固定切片后，按照TUNEL 凋亡試劑盒檢測各組大鼠心肌細胞凋亡率。心肌組織石蠟切片置于58℃烘箱烤片2 h，置于20 mg·L－1蛋白酶K 中，室溫孵育15 min。PBS 緩沖液將切片沖洗干凈（3次，每次3 min），加入50 μL TUNEL 檢測液，置于37℃孵育1 h，再加入過氧化物酶轉(zhuǎn)化劑，37℃繼續(xù)孵育30 min，PBS緩沖液沖洗切片（3次，每次3 min），滴加DAB 進行顯色，蘇木素復染，經(jīng)乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片，通過光學顯微鏡下觀察并計數(shù)TUNEL 陽性細胞數(shù)，TUNEL陽性細胞核呈棕褐色，隨機選擇6個視野計數(shù)，計算TUNEL 陽性細胞率。TUNEL 陽性細胞率=TUNEL 陽性細胞數(shù)/視野中總細胞數(shù)×100%。

1.9 免疫組織化學染色檢測各組大鼠心肌組織中Trx1 和TrxR1 蛋白表達強度將大鼠左心室心肌組織固定切片后，石蠟切片脫蠟至水，采用0.01 mol·L－1枸椽酸鹽緩沖液進行抗原修復，置于3% H2O2溶液中去除內(nèi)源性過氧化物酶，10% 羊血清 室 溫 封閉30 min，加 入一抗Trx1（1∶50）和TrxR1（1∶50），4℃下孵育過夜。次日，PBS 沖洗（3次，每次3 min），加入對應的二抗，室溫孵育20 min。PBS 再次沖洗（3次，每次3 min），滴加DAB 顯色，經(jīng)蘇木素復染、乙醇脫水、二甲苯透明后，中性樹膠封片，通過光學顯微鏡觀察并進行圖像采集，染色后隨機選擇6個切片進行觀察，切片陽性細胞著色強度計分：無著色為0分；淡黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。各組得分取其平均值代表目的蛋白表達強度。

1.10 Western blotting 法檢測各組大鼠心肌組織中Trx1、TrxR1、NADPH、cleaved Caspase 3、Bcl-2和Bax 蛋白表達水平將各組大鼠心肌組織剪碎，加入液氮將其研磨，采用RIPA 裂解緩沖液進行裂解，BCA 法測量總蛋白水平。采用10% SDSPAGE 電泳（120 V、90 min）分離各樣品等量的總蛋白，將分離的蛋白切膠電轉(zhuǎn)移至PVDF 膜上，使用含5% 脫脂牛奶的封閉液室溫封閉2 h。將膜與一抗Trx1（1∶1 000）、TrxR1（1∶1 000）、NADPH（1∶1 000）、cleaved Caspase 3（1∶1 000）、Bcl-2（1∶1 000）、Bax（1∶1 000）共同置于4℃下孵育過夜，次日，TBST 漂洗PVDF 膜（3次，每次3 min），然后加入二抗HRP 標記的山羊抗兔（1∶5 000），室溫下孵育1 h。使用ECL 發(fā)光液可視化各蛋白條帶，采用Image ProPlus 5.0 圖像分析軟件對蛋白條帶灰度進行定量，以GAPDH 作為內(nèi)參蛋白，計算目的蛋白表達水平。目的蛋白表達水平=目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參條帶灰度值。

1.11 統(tǒng)計學分析采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。采用Graphpad 8.3.0 繪制統(tǒng)計圖，各組大鼠LVESD 、LVEDD 和LVEF ，血清中CK-MB、cTnI、LDH 和Pro-BNP 水平，心肌梗死面積百分率，心肌組織中TUNEL 陽性細胞率，心肌組織中Trx1、TrxR1、NADPH、cleaved Caspase 3、Bcl-2 和Bax 蛋白表達水平，均符合正態(tài)分布，以±s 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠LVESD 、LVEDD 和LVEF治療8周后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠LVESD 和LVEDD 明顯升高（P＜0.05），LVEF 明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠LVESD和LVEDD明顯降低（P＜0.05），LVEF明顯升高（P＜0.05）。見圖1和表1。

圖1 各組大鼠超聲心動圖Fig.1 Echocardiograms of rats in various groups

表1 各組大鼠LVESD、LVEDD 和LVEFTab.1 LVESD, LVEDD, and LVEF of rats in various groups（n=10,±s）

表1 各組大鼠LVESD、LVEDD 和LVEFTab.1 LVESD, LVEDD, and LVEF of rats in various groups（n=10,±s）

*P＜0.05 compared with sham operation group;△P＜0.05 compared with model group.

Group Sham operation Model AT1R blocker Carvedilol LVESD（l/mm）3.49±0.31 7.17±0.59*5.27±0.43△4.35±0.40△LVEDD（l/mm）5.87±0.52 8.19±0.72*6.90±0.59△6.38±0.60△LVEF（η/%）88.21±6.99 28.48±1.78*58.56±5.02△67.49±6.33△

2.2 各組大鼠血清中心肌損傷標志物水平ELISA 法檢測各組大鼠血清中相關(guān)指標結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中CK-MB、cTnI、LDH和Pro-BNP 水平均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠血清中CK-MB、cTnI、LDH 及Pro-BNP 水平均明顯降低（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血清中CK-MB、cTnⅠ、LDH 和Pro-BNP 水平Tab.2 Serum CK-MB, cTnI, LDH, and Pro-BNP levels of rats in various groups（n=10,±s）

表2 各組大鼠血清中CK-MB、cTnⅠ、LDH 和Pro-BNP 水平Tab.2 Serum CK-MB, cTnI, LDH, and Pro-BNP levels of rats in various groups（n=10,±s）

*P＜0.05 compared with sham operation group;△P＜0.05 compared with model group.

Group Sham operation Model AT1R blocker Carvedilol CK-MB [ρB/(mg·L－1)]0.21±0.02 0.67±0.06*0.46±0.05△0.37±0.03△CTnI [ρB/(ng·L－1)]7.95±0.74 34.87±4.01*26.32±2.66△19.67±2.03△LDH [λB/(U·L－1)]315.83±23.55 1645.48±124.17*765.02±50.56△598.27±41.98△Pro-BNP [ρB/(ng·L－1)]86.51±7.36 432.09±27.82*210.67±18.54△200.11±16.95△

2.3 各組大鼠心肌梗死面積百分率各組大鼠心肌梗死面積檢測結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌梗死面積百分率明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R阻斷劑組和卡維地洛組大鼠心肌梗死面積百分率均明顯降低（P＜0.05）。見圖2和3。

圖2 各組大鼠心肌梗死面積情況Fig.2 Areas of myocardium infarction of rats in various groups

圖3 各組大鼠心肌梗死面積百分率Fig.3 Percentages of myocardium infarction areas of rats in various groups

2.4 各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)HE 染色結(jié)果顯示：假手術(shù)組大鼠心肌細胞核排列整齊，結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維緊密，未觀察到心肌纖維或膠原組織增生；模型組大鼠心肌細胞排列紊亂，心肌纖維變大且與膠原組織增生，且大多數(shù)心肌纖維斷裂，有大量炎性細胞的浸潤；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠心肌細胞和心肌纖維損傷程度均減小，心肌組織病理形態(tài)得到明顯改善。見圖4。

圖4 各組大鼠心肌組織病理形態(tài)表現(xiàn)（HE，×100）Fig.4 Pathomorphology of myocardium tissue of rats in various groups (HE, ×100)

2.5 各組大鼠心肌組織中TUNEL 陽性細胞率與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中TUNEL陽性細胞率明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠心肌組織中TUNEL陽性細胞率明顯降低（P＜0.05）。見圖5和6。

圖5 各組大鼠心肌組織中凋亡細胞形態(tài)表現(xiàn)（TUNEL，×100）Fig.5 Morphology of apoptotic cells in myocardium tissue of rats in various groups（TUNEL, ×100）

2.6 免疫組織化學檢測各組大鼠心肌組織中Trx1和TrxR1 蛋白表達強度與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中Trx1 蛋白表達強度明顯降低（P＜0.05），而TrxR1蛋白表達強度明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠心肌組織中Trx1 蛋白表達強度明顯升高（P＜0.05），TrxR1 蛋白表達強度明顯降低（P＜0.05）。見圖7 和8。

圖7 各組大鼠心肌組織中Trx1 和TrxR1 表達（免疫組織化學，×40）Fig.7 Expressions of Trx1 and TrxR1 in myocardium tissue of rats in various groups（Immunohistochemistry, ×40）

2.7 Western blotting 法檢測各組大鼠心肌組織中Trx1 和TrxR1 蛋白表達水平與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織中Trx1 和NADPH 蛋白表達水平均明顯降低（P＜0.05），TrxR1 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠心肌組織中Trx1和NADPH蛋白表達水平均明顯升高（P＜0.05），而TrxR1 蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05）。見圖9 和10。

圖9 Western blotting 法檢測各組大鼠心肌組織中Txr1、TrxR1 和NADPH 蛋白表達電泳圖Fig.9 Electrophoregram of expressions of Trx1,TrxR1 and NADPH proteins in myocardium tissue of rats in various groups detected by Western blotting method

2.8 各組大鼠心肌組織中cleaved Caspase 3、Bcl-2和Bax 蛋白表達水平與對照組比較，模型組大鼠心肌組織中cleaved Caspase 3 和Bax 蛋白表達水平均明顯升高（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，AT1R 阻斷劑組和卡維地洛組大鼠心肌組織中cleaved Caspase 3 和Bax 蛋白表達水平均明顯降低（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）。見圖11和12。

圖11 Western blotting 法檢測各組大鼠心肌組織中cleaved Caspase 3、Bcl-2 和Bax 蛋白表達水平電泳圖Fig.11 Electrophoregram of expressions of cleaved Caspase 3, Bcl-2, and Bax proteins in myocardium tissue of rats in various groups detected by Western blotting method

3 討 論

AMI 的病理機制十分復雜，該疾病發(fā)生后可導致心肌缺血，微循環(huán)受阻，進而出現(xiàn)心肌細胞凋亡與梗死區(qū)域壞死，從而促使心臟纖維化［3，8］。AMI 常常伴有心肌損害與心律失常，然而任何形式的心肌缺血再灌注均會導致心律失常，發(fā)生率高達80% 左右，特別是室性心律失常，可通過改變患者的血流動力學而加劇心臟性猝死，且在AMI的慢性期也常伴有心功能下降［9］。因此，臨床上治療AMI 的關(guān)鍵是開通梗死相關(guān)血管，從而恢復心肌灌注。目前，一些藥物如血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（angiotension converting enzyme inhibitors，ACEI）類、醛固酮拮抗劑和β 受體阻滯劑等，均可在一定程度上延緩AMI 進程，但這些藥物也會產(chǎn)生不良反應，如低血壓、高鉀血癥和急性心功能障礙等。因此，仍需探索防治AMI 更有效和更安全的措施。

圖8 各組大鼠心肌組織中Trx1(A)和TrxR1(B)蛋白表達強度Fig.8 Expression intensities of Trx1 (A) and TrxR1(B) proteins in myocardium tissue of rats in various groups

Ang Ⅱ是具有血管收縮作用的多肽，其受體包括AT1R 型與AT2R 型，Ang Ⅱ主要通過介導AT1R 發(fā)揮作用，不僅可以調(diào)節(jié)血管收縮，誘導心肌細胞凋亡，還能夠調(diào)控炎性細胞因子和相關(guān)信號通路，參與心血管疾病及其他疾病的發(fā)生發(fā)展。采用AT1R 阻斷劑如氯沙坦、厄貝沙坦、替米沙坦和纈沙坦，可以有效減少器質(zhì)性心臟病和快速性心律失常的發(fā)生，目前已用于降壓治療中［10］。以往關(guān)于AT1R 阻斷劑治療其他相關(guān)疾病的研究也取得了理想效果。研究［11］顯示：采用AT1R 阻斷劑氯沙坦作用于鈣化大鼠后，發(fā)現(xiàn)氯沙坦能有效抑制大鼠主動脈血管鈣化形成；ZIZZO 等［12］采用2，4-二硝基苯磺酸誘導大鼠結(jié)腸炎模型后，給予Ang Ⅱ受體拮抗劑PD123319 治療后發(fā)現(xiàn)大鼠結(jié)腸損傷明顯改善，結(jié)腸功能有所恢復，且抗氧化防御機制也得到了改善；OGBADU 等［13］發(fā)現(xiàn)：Ang Ⅱ受體1 阻斷劑氯沙坦可通過減輕炎癥介質(zhì)如白細胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細胞介素17（interleukin-17，IL-17）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）的水平，從而減輕幼年大鼠的急性腎損傷。本研究結(jié)果顯示：心肌梗死后，大鼠LVESD、LVEDD 升高而LVEF 降低，心肌發(fā)生損傷，心肌梗死面積較大，表明大鼠心功能明顯下降；給予氯沙坦治療的大鼠，LVESD 和LVEDD 降低，LVEF 有所升高，心肌損傷現(xiàn)象得到明顯改善，心肌梗死面積也明顯減少。由以上結(jié)果推測：AT1R阻斷劑可改善大鼠心肌梗死后心肌損傷。

心肌細胞凋亡是心肌梗死后引發(fā)心肌損傷進一步發(fā)展的主要機制，心肌細胞凋亡增加將導致心臟重塑與心功能衰竭［14-15］，因此，減輕心肌細胞凋亡也是治療心肌梗死的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究結(jié)果顯示：心肌梗死大鼠心肌組織中TUNEL 陽性細胞率增加，心肌組織中促凋亡蛋白cleaved Caspase 3 和Bax 表達均上調(diào)，而抑凋亡蛋白Bcl-2 表達下調(diào)，說明心肌細胞凋亡嚴重。采用AT1R 阻斷劑氯沙坦治療后，AMI 大鼠心肌細胞凋亡現(xiàn)象明顯改善，TUNEL 陽性細胞率降低，心肌組織中cleaved Caspase 3 和Bax 蛋白表達均下調(diào)，Bcl-2 蛋白表達上調(diào)，由此說明使用AT1R 阻斷劑可抑制大鼠AMI 后心肌細胞凋亡，從而減輕心肌損傷程度。

圖10 Western blotting 法檢測各組大鼠心肌組織中Trx1(A)、TrxR1(B)和NADPH(C)蛋白表達水平Fig.10 Expression levels of Trx1(A), TrxR1(B), and NADPH (C) proteins in myocardium tissue of rats in various groups detected by Western blotting method

圖12 Western blotting 法檢測各組大鼠心肌組織中cleaved Caspase 3(A)、Bcl-2(B)和Bax(C)蛋白表達水平Fig.12 Expression levels of cleaved Caspase 3(A), Bcl-2(B), and Bax(C) proteins in myocardium tissue of rats in various groups detected by Western blotting method

本研究結(jié)果顯示：AMI 大鼠心肌組織中Trx1系統(tǒng)相關(guān)蛋白表達發(fā)生變化，經(jīng)免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)AMI 大鼠心肌組織中Trx1 表達減少，而TrxR1 陽性表達增加，Western blotting 法檢測結(jié)果也顯示AMI 大鼠心肌組織中Trx1 和NADPH 蛋白表達下調(diào)，TrxR1 蛋白表達上調(diào)，而給予AT1R 阻斷劑氯沙坦治療的AMI 大鼠，心肌組織中Trx1 和NADPH 蛋白上調(diào)，TrxR1 蛋白表達下調(diào)。Trx1 系統(tǒng)不僅可以發(fā)揮抗氧化作用，也具有細胞保護和抗炎作用［16］，Trx1 還可作為生長因子調(diào)控細胞內(nèi)多種信號分子途徑。研究［17］顯示：Trx 能減輕腦缺血-再灌注損傷，Trx 系統(tǒng)功能降低則會引起心肌受損。此外，TrxR 和Trx 還是腫瘤進程的重要調(diào)控分子，調(diào)控腫瘤細胞增殖、凋亡、耐藥性和腫瘤免疫微環(huán)境［18-21］。

綜上所述，AT1R 阻斷劑氯沙坦可有效減輕AMI 大鼠心肌損傷，抑制心肌細胞凋亡，對心肌組織起到保護作用，其作用機制可能與Trx 系統(tǒng)有關(guān)，這為AMI 的治療提供了新思路。但本研究只是初步探討了Trx 系統(tǒng)相關(guān)蛋白表達的變化，而在該過程中AT1R 阻斷劑是否涉及介導其他下游信號途徑機制尚不明確，有待后續(xù)深入探討。