耐甲氧西林金黃色葡萄球菌致華南虎皮膚潰爛的診治

林錫潘 福建梅花山華南虎繁育研究所 福建龍巖 364000

金黃色葡萄球菌為直徑1 μm 的球狀細(xì)菌，常存在于呼吸系統(tǒng)及皮膚表面，屬革蘭氏陽(yáng)性、溶血性、兼性厭氧菌，過(guò)氧化氫酶陽(yáng)性，氧化酶陰性，可在15～45 ℃條件下生長(zhǎng)，也可在15% 氯化鈉溶液中生長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致一系列化膿性感染、食物中毒及中毒休克綜合征，其化膿性感染可從輕微的皮膚性病變（如癤、癰等）發(fā)展成嚴(yán)重的繼發(fā)性炎癥感染（如肺炎、乳腺炎、靜脈炎、腦膜炎、泌尿系統(tǒng)炎癥等），并可感染到達(dá)組織臟器深部，引起骨髓炎、心內(nèi)膜炎等[1]。

1 患虎基本情況

1.1 發(fā)病前個(gè)體情況 華南虎，雄性，2011 年6 月1 日出生，體重約130 kg。與母虎一起在半野化散放區(qū)共同生活，散放區(qū)面積約600 m2，樹(shù)木茂盛，光照較少，區(qū)內(nèi)有人工虎穴、水渠。每天飼喂牛肉、解凍雞架6～7 kg。發(fā)病前采食和體表情況良好，與母虎有交配行為，無(wú)既往病史。

1.2 發(fā)病經(jīng)過(guò)與治療情況 2019 年5 月中旬飼養(yǎng)員發(fā)現(xiàn)患虎鼻尖部和左臀部各有一塊皮膚潰爛，潰爛面周?chē)灰?guī)則，并有蹭網(wǎng)墻的撓癢行為，遂將患虎調(diào)回籠舍進(jìn)行觀察治療。因患虎近期與母虎合區(qū)生活并有交配行為，懷疑患虎與母虎交配時(shí)，受母虎應(yīng)激反應(yīng)抓傷所致。5 月13 日采用磺胺間甲氧嘧啶鈉食物給藥，連續(xù)用藥5 d 后皮膚潰爛面擴(kuò)大，左臀部皮膚潰爛處旁新增一處皮膚潰爛。5 月18 日改用3 g 青霉素鉀和2 g 硫酸鏈霉素溶解于12 mL 滅菌注射用水后吹針肌注，并向潰爛面噴灑消毒液（聚維酮碘、過(guò)氧乙酸等輪換使用），連續(xù)用藥5 d 后，3 處皮膚潰爛面逐漸擴(kuò)大。5 月23 日改用抗真菌藥鹽酸特比萘芬溶液噴灑潰爛面，連續(xù)用藥5 d 后患虎原3 處皮膚潰爛面擴(kuò)大更為嚴(yán)重，且右臀部新增3 處皮膚脫毛（見(jiàn)圖1）。至5 月29 日對(duì)患虎麻醉采樣時(shí)，鼻尖部潰爛面呈周?chē)灰?guī)則燈泡狀長(zhǎng)20 mm×寬18 mm（見(jiàn)圖2），左臀部最早皮膚潰爛面呈周?chē)灰?guī)則等邊三角形底長(zhǎng)60 mm×高65 mm（見(jiàn)圖3），檢查患虎體表無(wú)蜱蟲(chóng)、虱子。

圖1

圖2

圖3

2 實(shí)驗(yàn)室檢查

2.1 螨蟲(chóng)檢查 刮取潰爛面與健康皮膚連接處皮膚組織鏡檢，未檢出螨蟲(chóng)。

2.2 血液檢查 采集虎股內(nèi)側(cè)隱靜脈血，用肝素鈉抗凝血做血常規(guī)檢查（見(jiàn)表1）；用非抗凝血分離血清做血清生化檢查（見(jiàn)表2）。血常規(guī)檢查結(jié)果表明，患虎單核細(xì)胞百分比顯著升高。血清生化檢查結(jié)果表明，患虎堿性磷酸酶顯著偏低，鈣離子降低，球蛋白略微升高。根據(jù)發(fā)病情況、實(shí)驗(yàn)室檢查初診為患虎感染微生物致皮膚潰爛不愈合，且患虎近期營(yíng)養(yǎng)不良（可能與近期用藥后采食情況較差有關(guān)）。

表1 血常規(guī)檢查結(jié)果

表2 血清生化檢查結(jié)果

2.3 細(xì)菌培養(yǎng)、鑒別、藥敏試驗(yàn)與診斷 用醫(yī)用無(wú)菌一次性棉拭子采集兩處潰爛面分泌物數(shù)份，經(jīng)細(xì)菌分離培養(yǎng)、顯微鏡檢查、細(xì)菌鑒別和藥敏試驗(yàn)，確診為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌所致的皮膚潰爛。

2.3.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)與鏡檢 將棉拭子放入含1 mL 生理鹽水的試管中進(jìn)行反復(fù)攪拌，采用斜線平板劃線法在血平板上劃線，36.5 ℃培養(yǎng)24 h 后，見(jiàn)直徑2 mm 左右，淡黃色、邊緣整齊的圓形菌落，周?chē)型该魅苎h(huán)。對(duì)菌落涂片、革蘭氏染色后鏡檢，見(jiàn)紫色葡萄狀排列的球菌。根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)特征和鏡檢結(jié)果，疑似為金黃色葡萄球菌。

2.3.2 細(xì)菌鑒別 挑取分離培養(yǎng)的單個(gè)菌落在血瓊脂平板上劃線接種進(jìn)行純培養(yǎng)后，再挑取單個(gè)菌落接種于胰酪胨大豆肉湯，36.5 ℃培養(yǎng)24 h 后，分別取0.5 mL 菌液和0.5 mL 25%新鮮兔血漿混合于新試管中，振蕩搖勻，36.5 ℃培養(yǎng)6 h 后，試管傾斜時(shí)出現(xiàn)凝塊，即血漿凝固酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性。綜合細(xì)菌培養(yǎng)特征、鏡檢結(jié)果和血漿凝固酶試驗(yàn)結(jié)果鑒定該細(xì)菌為金黃色葡萄球菌。

2.3.3 藥敏試驗(yàn) 前期采用青霉素治療無(wú)效，推測(cè)該金黃色葡萄球菌有耐藥性，因此先采用紙片擴(kuò)散法對(duì)該菌進(jìn)行耐藥性測(cè)定。將待檢菌液均勻涂抹于MH 瓊脂平板，在平板中央處貼上苯唑西林（含藥量為1 μg）藥敏紙片，35 ℃培養(yǎng)24 h 后，苯唑西林抑菌圈直徑達(dá)到2 mm，由于判定標(biāo)準(zhǔn)為小于10 mm的抑菌圈代表有耐藥，因此將該菌初步鑒定為耐甲氧西林金黃色葡萄球菌。同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)藥敏試驗(yàn)，氨芐西林、甲氧芐胺嘧啶、復(fù)方新諾明、阿莫西林、阿米卡星、鹽酸林可霉素、硫酸慶大霉素、替考拉寧、萬(wàn)古霉素等均表現(xiàn)出對(duì)該菌的抑菌效果。

3 確定治療方案

根據(jù)藥敏試驗(yàn)和血液檢查結(jié)果，以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)、抗菌消炎為治療原則，6 月6 日開(kāi)始采用對(duì)患虎吹針肌注1.2 g 鹽酸林可霉素、24 萬(wàn)U 硫酸慶大霉素、5 mL 復(fù)合維生素B，連用7 d，長(zhǎng)期在食物中添加礦物質(zhì)粉、維生素C；3 d 后患虎已無(wú)蹭墻網(wǎng)的撓癢行為；5 d 后皮膚潰爛處已無(wú)滲出液；7 d 后皮膚潰爛處開(kāi)始結(jié)痂且潰爛面縮?。? 月21 日繼續(xù)對(duì)患虎吹針肌注1.2 g 鹽酸林可霉素、24 萬(wàn)U 硫酸慶大霉素、5 mL 復(fù)合維生素B，連用7 d，皮膚潰爛處完全結(jié)痂。7 月6 日患部皮膚痊愈。

4 分析討論

4.1 感染耐藥菌的主要原因和控制建議 患虎發(fā)病前與母虎生活于一處散放區(qū)，2019 年4 月整月只有5 d 是晴天，其余都為雨霧天氣，散放區(qū)又地處深山，樹(shù)木茂盛，環(huán)境潮濕陰暗，光照嚴(yán)重不足，極有利于微生物生長(zhǎng)繁殖，并導(dǎo)致動(dòng)物免疫力降低，再結(jié)合患虎發(fā)病前的交配行為?；蓟⒖赡苁情L(zhǎng)期在光照不足的環(huán)境中生活，免疫力低下，又在交配時(shí)被母虎過(guò)激反應(yīng)抓傷，環(huán)境中的致病菌通過(guò)傷口感染機(jī)體。而母虎在同樣環(huán)境未發(fā)病，可能是因?yàn)槟富Ⅲw質(zhì)較好且沒(méi)有外傷缺少感染途徑，在發(fā)病前就已調(diào)離病區(qū)。華南虎是我國(guó)特有虎種，國(guó)家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物，大型猛獸。該虎未曾進(jìn)行進(jìn)夾籠行為訓(xùn)練，獸醫(yī)不能直接觸診和靜脈給藥，因此在針對(duì)華南虎藥物保健預(yù)防上，常采取廣譜性抗生素進(jìn)行預(yù)防、藥物診斷和治療。此次診療過(guò)程就是藥物診斷治療無(wú)效后轉(zhuǎn)為實(shí)驗(yàn)室診斷治療?；蓟l(fā)病初期皮膚潰爛面積小，根據(jù)飼養(yǎng)員的報(bào)告懷疑為外傷所致普通感染，開(kāi)始采用食物給藥磺胺間甲氧嘧啶鈉抗菌消炎，治療后病情漸進(jìn)發(fā)展，懷疑用藥途徑和方向有誤；改用吹針肌注青霉素、硫酸鏈霉素和對(duì)傷口噴灑消毒液，治療后病情加重，2 次抗生素用藥無(wú)效后，懷疑患虎感染真菌、寄生蟲(chóng)、耐藥菌、病毒等；遂先對(duì)患虎傷口噴灑抗真菌藥物鹽酸特比萘芬溶液，治療后病情繼續(xù)加重不受控制，遂決定將患虎麻醉后進(jìn)行體表寄生蟲(chóng)檢查，同時(shí)采集血液、皮膚潰爛面滲出液、潰爛皮膚與健康皮膚連接處組織等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查確診為感染耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，根據(jù)藥敏試驗(yàn)和血液生理生化數(shù)據(jù)制定治療方案，患虎痊愈。

有科學(xué)研究表明，由耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染引起的動(dòng)物性皮膚病與既往不正規(guī)用藥有密切關(guān)系[4]，感染是微生物與宿主免疫系統(tǒng)相互作用的結(jié)果，在采用抗生素治療的同時(shí)，也應(yīng)配合一些免疫調(diào)節(jié)藥物制劑，或中西獸醫(yī)結(jié)合治療，減少抗生素使用，從而減少抗生素耐藥性的產(chǎn)生[5]。

4.2 使用消毒劑殺滅環(huán)境耐藥性細(xì)菌 患虎出現(xiàn)耐藥性細(xì)菌感染，應(yīng)做好患病動(dòng)物的隔離和飼養(yǎng)場(chǎng)地環(huán)境消毒，避免耐藥菌株向人畜傳播感染。如同反復(fù)使用抗生素會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性一樣，在長(zhǎng)時(shí)間接觸同一類消毒劑，細(xì)菌也會(huì)對(duì)該類消毒劑產(chǎn)生抗性[6]，所以在日常消毒上要勤換不同種類的消毒劑。每月逢5 號(hào)輪換使用戊二醛、猛多力、次氯酸鈉、聚維酮碘、次氯酸鈉、過(guò)氧乙酸等消毒劑消毒籠舍和用石灰每半年消毒散放區(qū)后，至發(fā)稿時(shí)未發(fā)現(xiàn)類似病例。