經(jīng)典名方質(zhì)量研究及其量值傳遞關(guān)鍵技術(shù)

黃仕文，顏媛媛，嵇晶，王琪，張曉云，何瑞欣，程建明

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院·中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，江蘇 南京 210023；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210023)

2016年12月《中華人民共和國中醫(yī)藥法》(簡稱《中醫(yī)藥法》)的頒布，確定了來源于古代經(jīng)典名方的中藥復(fù)方制劑的法律地位，此后隨著《古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑簡化注冊審批管理規(guī)定》等各項經(jīng)典名方政策的出臺，由于具有投入少、周期短、風(fēng)險小等優(yōu)點(diǎn)，很多制藥企業(yè)、高校、科研院所紛紛投入經(jīng)典名方的研發(fā)熱潮，為低迷的中藥新藥研發(fā)市場注入了生機(jī)與活力。2020年9月國家藥監(jiān)局發(fā)布了新的《藥品注冊管理辦法》和《中藥注冊分類及申報資料要求》，將古代經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑按第三類中藥新藥管理，并將其細(xì)分為“3.1按古代經(jīng)典名方目錄管理的中藥復(fù)方制劑(簡稱3.1類)”及“3.2其他來源于古代經(jīng)典名方的中藥復(fù)方制劑(簡稱3.2類)”?！吨兴幾苑诸惣吧陥筚Y料要求》(簡稱申報資料)對古代經(jīng)典名方中藥材、飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)和復(fù)方制劑等的研究內(nèi)容和研究方法進(jìn)行了基本闡述，但仍有不少關(guān)鍵細(xì)節(jié)并未落到實處。作者所在課題組目前承擔(dān)多個經(jīng)典名方產(chǎn)品的研發(fā)工作，現(xiàn)就經(jīng)典名方的質(zhì)量研究方法及其量值傳遞關(guān)鍵技術(shù)談?wù)剛€人看法。

1 藥材及飲片質(zhì)量研究

1.1 選擇優(yōu)質(zhì)藥材，打造精品傳承經(jīng)典

現(xiàn)行版《中華人民共和國藥典》(簡稱藥典)中的藥材和飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是保證藥材和飲片有效和安全的最低限度的標(biāo)準(zhǔn)，因此僅靠藥典標(biāo)準(zhǔn)很難評估不同批次藥材的質(zhì)量一致性和優(yōu)質(zhì)性。對經(jīng)典名方的質(zhì)量研究應(yīng)根據(jù)經(jīng)典名方的具體情況，首先要采用道地和主產(chǎn)區(qū)的優(yōu)質(zhì)藥材，其次應(yīng)在藥典基礎(chǔ)上，增加和完善質(zhì)量控制項目，建立高于藥典的企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)。

經(jīng)典名方要求每味藥材至少確定3個產(chǎn)地，就產(chǎn)地如何選擇的問題我們應(yīng)給出一個標(biāo)準(zhǔn)。對此，文獻(xiàn)考證與市場相結(jié)合是非常重要的，道地產(chǎn)區(qū)和主產(chǎn)區(qū)應(yīng)作為選擇的重點(diǎn)，建立道地產(chǎn)區(qū)藥材指紋圖譜，將其與其他產(chǎn)區(qū)的藥材圖譜進(jìn)行對比，以與經(jīng)典方適應(yīng)癥相關(guān)的共有峰個數(shù)及含量為指標(biāo)，形成藥材產(chǎn)地間質(zhì)量差異分析報告，以此為依據(jù)初步確定藥材產(chǎn)地，再對所定產(chǎn)地的多批次藥材進(jìn)行研究，確定優(yōu)質(zhì)藥材標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 闡明藥材和飲片的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，建立全面反映藥材質(zhì)量的檢測項目

《申報資料》中所要求的藥材的質(zhì)量評價指標(biāo)通常包含性狀、鑒別、檢查(如水分、雜質(zhì)等，必要時列入農(nóng)殘、有害元素、真菌毒素等外源性污染物檢查)、浸出物、含量測定(有效/指標(biāo)成分)、指紋圖譜或特征圖譜等。飲片的質(zhì)量研究需根據(jù)飲片所含成分特征，結(jié)合相關(guān)性研究結(jié)果，合理確定飲片的關(guān)鍵質(zhì)量屬性和飲片標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控指標(biāo)。

對于收錄在2020版藥典中的藥材及飲片，如白果、山藥、茯苓、芡實等[1]有效成分不明確且無含量測定指標(biāo)的并不在少數(shù)，對此研究人員需考慮增加含量測定指標(biāo)。一般的研究思路是通過LC-MS、GC-MS等分析手段找出其與復(fù)方功效相關(guān)的有效成分，如運(yùn)用各種現(xiàn)代分析手段均未能檢測出有效成分或有效成分含量過低(低于萬分之五)，可提供相關(guān)研究結(jié)果闡明不增加指標(biāo)的理由。

現(xiàn)行版藥典中有含量測定指標(biāo)的藥材和飲片占多數(shù)，但這并不意味著標(biāo)準(zhǔn)的完善性。首先藥典所列指標(biāo)成分較為單一且僅規(guī)定含量下限，無法全面反映藥材/飲片質(zhì)量好壞；如一些含揮發(fā)性成分的藥材，含量測定項下?lián)]發(fā)油含量及揮發(fā)性成分均未控制，比如川芎含量測定項僅規(guī)定阿魏酸含量下限，事實上其中揮發(fā)性成分藁本內(nèi)酯也是其藥效物質(zhì)成分之一，且含量較高，對此可根據(jù)實際數(shù)據(jù)分析是否需加入標(biāo)準(zhǔn)。本課題組承擔(dān)的經(jīng)典名方易黃湯的開發(fā)中，研究人員按照藥典方法對15批黃柏(3個產(chǎn)地5個批次)中小檗堿含量進(jìn)行了測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其含量平均達(dá)到7.0%，遠(yuǎn)高于藥典所規(guī)定的3.0%[1]，經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)不以某些成分高低論質(zhì)量好壞，強(qiáng)調(diào)傳統(tǒng)的才是最好的，故為了保證多批次物質(zhì)基準(zhǔn)及制劑之間質(zhì)量的一致性，筆者認(rèn)為含量測定指標(biāo)應(yīng)同時設(shè)立上限。

其次經(jīng)典名方實行一方一標(biāo)準(zhǔn)，藥典所列指標(biāo)成分并不一定與復(fù)方適應(yīng)癥有很好的相關(guān)性。如藥典規(guī)定蒼術(shù)的指標(biāo)成分為蒼術(shù)素，其具有促進(jìn)胃排空、抗炎、抗腫瘤、降血糖、利尿等藥理活性[2]，而在經(jīng)典名方清上蠲痛湯中，這一指標(biāo)顯然與頭痛這一適應(yīng)癥關(guān)聯(lián)度較低，根據(jù)文獻(xiàn)研究，β-桉葉油醇和蒼術(shù)酮作為蒼術(shù)揮發(fā)油主要成分，具有顯著的鎮(zhèn)痛作用[3]。筆者認(rèn)為可根據(jù)文獻(xiàn)研究結(jié)合現(xiàn)代分析手段，進(jìn)行多批次樣品測定，補(bǔ)充完善清上蠲痛湯中蒼術(shù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；對于文獻(xiàn)研究較少的情況，具體參照無含量測定指標(biāo)藥材/飲片研究方法。

《申報資料》中明確要求對處方中藥材進(jìn)行飲片炮制研究，主要包括炮制品種類的選擇、炮制工藝及參數(shù)的確定和飲片的質(zhì)量評價三方面內(nèi)容。炮制品種類選擇主要依靠文獻(xiàn)考證遵循經(jīng)典，但古籍中記載的炮制工藝參數(shù)往往并不明確，炮制輔料也未見標(biāo)準(zhǔn)，但它們很大程度上影響著飲片質(zhì)量。可選擇與處方適應(yīng)癥相關(guān)的有效成分為指標(biāo)篩選炮制工藝參數(shù)，使得藥材中有效成分盡可能多地轉(zhuǎn)移到飲片中，保證用于制備對應(yīng)實物的飲片質(zhì)量上乘。如清上蠲痛湯中的當(dāng)歸，可采用揮發(fā)油、阿魏酸和藁本內(nèi)酯等與鎮(zhèn)痛密切相關(guān)的成分作為指標(biāo)綜合篩選酒洗工藝參數(shù)，確定炮制用酒種類、用量及來源，再以多批次炮制后的飲片作為研究對象建立飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，需要多批次的樣品數(shù)據(jù)積累，3個產(chǎn)地各5個批次(共15批)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。此外，對于藥典中未提供指紋圖譜或特征圖譜的藥材/飲片，可酌情提供。選擇指標(biāo)或增加指標(biāo)時應(yīng)綜合考慮藥材-飲片-物質(zhì)基準(zhǔn)的相關(guān)性，據(jù)此建立相應(yīng)的質(zhì)量評價指標(biāo)和評價方法，確定科學(xué)合理的藥材/飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并且對于藥典標(biāo)準(zhǔn)的提高不應(yīng)過度，以免產(chǎn)生大生產(chǎn)時藥材選擇的限制。

2 物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量控制

經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)是指以古代醫(yī)籍中記載的古代經(jīng)典名方制備方法為依據(jù)制備而得的中藥藥用物質(zhì)，《申報資料》中規(guī)定經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)應(yīng)能全面反映對應(yīng)實物的質(zhì)量信息，需囊括化學(xué)成分及關(guān)鍵質(zhì)量屬性研究，藥材、飲片、中間體與對應(yīng)實物的相關(guān)性研究，分析方法研究(包括有效成分、指標(biāo)成分、大類成分、指紋圖譜及分析方法學(xué)驗證)及對應(yīng)實物的質(zhì)量分析。

其中，指標(biāo)成分的選擇不僅要典型，更要全面，典型是指選擇的指標(biāo)成分應(yīng)當(dāng)功效明確，與全方適應(yīng)癥息息相關(guān)；全面是指成分應(yīng)當(dāng)多樣，對于含揮發(fā)油的處方，由于不宜采用水蒸氣蒸餾法得到揮發(fā)油再進(jìn)行包合，且揮發(fā)性成分具有久煮易損失的共性，故可從中選擇具有代表性的有效成分作為指標(biāo)控制全方揮發(fā)性成分群，除此之外，具有同類性質(zhì)的成分(如有機(jī)酸類、苷類等)可每種酌情選擇1～2個，較為全面地控制全方質(zhì)量。

在此基礎(chǔ)上，指紋圖譜/特征圖譜作為反映全方整體性的一種技術(shù)手段，用于控制中藥以及制劑整體質(zhì)量具有優(yōu)勢，多批次飲片制備而成的對應(yīng)實物通過指紋圖譜共有峰及相似度的研究，以共有峰相對保留面積為指標(biāo)，確定物質(zhì)基準(zhǔn)可變異范圍，如此，物質(zhì)基準(zhǔn)質(zhì)量控制才能脫離傳統(tǒng)的單一質(zhì)控指標(biāo)，做到整體、優(yōu)質(zhì)。

3 制劑及其質(zhì)量控制

制劑是直接面向患者的終端產(chǎn)品，《申報資料》中提及湯劑可制成顆粒劑，為達(dá)到成型性高、溶化性好、口感好等目標(biāo)，研究人員需得對輔料種類和用量、制粒方法、成型工藝參數(shù)等方面進(jìn)行合理的篩選。

生產(chǎn)中廣泛運(yùn)用的制粒方法有干法制粒和濕法制粒，制劑原料的物理性質(zhì)對干法制粒有著重要的影響，含多糖、黏液質(zhì)、皂苷類成分較多的制劑原料干法制粒過程中會黏附于滾輪上，使得制粒困難[4]。中藥中多含有大量多糖、果膠、黏液質(zhì)等黏性成分，對于經(jīng)典名方來說，出于對古代制備方法的還原，水煎液不經(jīng)過醇沉工序，無法去除上述成分，且干法制粒具有一次得率不高的缺點(diǎn)，故筆者認(rèn)為，經(jīng)典名方制劑制粒方式不宜采用干法制粒。

濕法制粒制得的顆粒粒度均勻，流動性和成型性好，還具有一定的掩味矯味的作用[5]。濕法制粒技術(shù)包括擠壓過篩制粒、轉(zhuǎn)動制粒、高速攪拌制粒，流化床制粒等。在選擇制粒技術(shù)的時候應(yīng)以顆粒成型性、流動性、指標(biāo)成分保留率等為指標(biāo)進(jìn)行對比，作出合理的篩選；如有必要添加輔料，需對輔料進(jìn)行優(yōu)選，使其滿足成型性高、溶化性好、口感好等要求。

在制劑質(zhì)量控制這一塊，除藥典顆粒劑通則項下的規(guī)定檢查項不可忽視外，應(yīng)另將重點(diǎn)放在制劑與“經(jīng)典名方物質(zhì)基準(zhǔn)”的對比研究上，除成型工藝外，物質(zhì)基準(zhǔn)與制劑的其余質(zhì)量控制指標(biāo)均基本一致。

4 經(jīng)典名方“關(guān)鍵質(zhì)量屬性”

關(guān)鍵質(zhì)量屬性是指對藥材、飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)及制劑的質(zhì)量與療效具有較大影響的屬性。經(jīng)典名方的關(guān)鍵質(zhì)量屬性在每個階段都有所不同，如基源、產(chǎn)地、采收期、產(chǎn)地加工、生長年限等對藥材質(zhì)量影響較大；炮制規(guī)格、炮制輔料及炮制工藝等對飲片質(zhì)量影響較大。

4.1 藥材“關(guān)鍵質(zhì)量屬性”

藥材作為起始原料，對成品質(zhì)量影響超過30%[6]，其重要性不言而喻?；吹拇_定、產(chǎn)地的選擇、采收期的比較研究、產(chǎn)地加工方式的確定等均是經(jīng)典名方藥材研究中非常重要的環(huán)節(jié)。在產(chǎn)地加工方面，本身含糖苷酶的藥材需經(jīng)過“殺酶保苷”的步驟，如黃芩，藥典規(guī)定的煮后切片工藝費(fèi)工費(fèi)時，有效成分流失較多，不宜采用;而蒸后切片工藝對干燥要求較低，大大降低了烘干成本，且有效成分流失也相對較少，故生產(chǎn)選擇的產(chǎn)地加工方式宜為蒸后切片[7]。另外，課題組對35批人參藥材進(jìn)行了藥典項下的質(zhì)量研究，其中23批四年生人參合格率52%，12批五年生人參合格率75%，雖然藥典未對人參的生長年限作出規(guī)定，但其確實對人參藥材的質(zhì)量有明顯的影響，由此可見，生長年限可作為人參的關(guān)鍵質(zhì)量屬性之一。

4.2 飲片“關(guān)鍵質(zhì)量屬性”

不同炮制規(guī)格的飲片所對應(yīng)的適應(yīng)癥不同，其相應(yīng)的質(zhì)量控制指標(biāo)也有所差異，經(jīng)典名方炮制規(guī)格的確定應(yīng)有明確的出處及理由。此外，市場上很少有炮制輔料的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，如不進(jìn)行完善，可能導(dǎo)致不同批次輔料炮制而得的飲片質(zhì)量的不均一性?！渡陥筚Y料》中規(guī)定加輔料炮制的需明確輔料的名稱、用量、來源及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。炮制輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究思路應(yīng)是：對于有文獻(xiàn)表明某些成分對炮制藥材起到減毒增效等作用的輔料，如生姜汁、甘草汁、膽汁等，應(yīng)明確所加輔料與炮制作用的相關(guān)性，對相關(guān)成分進(jìn)行定性或定量研究，并通過多批次測定確定其上下限。如半夏厚樸湯中的半夏，原方并未注明炮制方法，施錚等[8]通過對半夏厚樸湯方義演變以及結(jié)合如今主流認(rèn)同的姜半夏解毒機(jī)制進(jìn)行研究，建議半夏厚樸湯中使用符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的“姜半夏”，既遵從了經(jīng)典“減毒”本意，又符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。但藥典也并未對輔料生姜汁作出質(zhì)量上的規(guī)定，文獻(xiàn)研究表明，姜辣素能抑制多種炎癥介導(dǎo)因子，降低半夏所致刺激性炎癥作用，使半夏毒性癥狀減輕[9]，故在半夏炮制輔料生姜汁的含量測定項下應(yīng)將姜辣素的含量納入考察指標(biāo)。

5 全方量值傳遞研究

經(jīng)典名方從“物質(zhì)基準(zhǔn)”到制劑只需濃縮(干燥)制粒，并且經(jīng)典名方制劑在符合相關(guān)要求的前提下，可免報藥效與臨床試驗資料，這就對質(zhì)量可控性提出了一個極高的要求，中成藥質(zhì)量一致性一直是中藥質(zhì)量控制的難點(diǎn)，單純依靠終端制劑標(biāo)準(zhǔn)檢驗具有很大的局限性。為保證經(jīng)典名方制劑質(zhì)量療效一致，需要建立從藥材源頭到飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)、制劑全鏈條的質(zhì)量控制措施。

5.1 建立量值傳遞關(guān)系

《申報資料》中提出關(guān)于藥材、飲片、中間體、對應(yīng)實物之間主要物質(zhì)群量值傳遞研究的概念[5]，研究人員應(yīng)以浸出物、含量測定、指紋圖譜等為指標(biāo)評價其相關(guān)性。

其中指紋圖譜/特征圖譜技術(shù)是中藥及其復(fù)方質(zhì)量評價中非常重要的一種手段，通過這一手段能較為全面地表征其中復(fù)雜的化學(xué)成分信息。在首批經(jīng)典名方目錄中，含1～5味藥材的方子有37首，占目錄的37%；含6～10味藥材的48首，占48%，10味以上15首，占15%，由此可見，藥味多的大方(n>5)占比多達(dá)63%，由于大復(fù)方成分的復(fù)雜性，建立同時符合藥材、飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)的指紋圖譜/特征圖譜并不容易，研究人員可對檢測波長、流動相系統(tǒng)、梯度洗脫程序等色譜條件進(jìn)行考察，建立合理的指紋圖譜檢測方法。HPLC-UV由于其靈敏度高、選擇性高等優(yōu)點(diǎn)被廣泛使用，但如HPLC-UV中單波長或多波長無法完全反映處方中所有藥材，則可借助HPLC-ELSD等其他輔助手段做補(bǔ)充。

對于含揮發(fā)油類中藥，由于揮發(fā)性成分的不穩(wěn)定性，其不僅應(yīng)在煎煮、濃縮、干燥、制劑工藝中作為指標(biāo)成分參與工藝篩選，在全方量值傳遞過程中也應(yīng)有所體現(xiàn)，通過半定量的指紋圖譜技術(shù)研究有效成分在藥材-飲片-中間體-對應(yīng)實物中的轉(zhuǎn)移率，如揮發(fā)性成分轉(zhuǎn)移率過低，則考慮增加前期各階段工藝過程中揮發(fā)性成分所占權(quán)重等手段，以期解決揮發(fā)性成分這一難點(diǎn)問題。

5.2 建立質(zhì)量可溯源體系

質(zhì)量追溯體系可以提高供應(yīng)鏈間的效率，提高企業(yè)競爭力，同時也是市場發(fā)展的必然趨勢。對于經(jīng)典名方來說，除了追蹤質(zhì)量問題并進(jìn)行問題產(chǎn)品實時召回外，質(zhì)量追溯體系更能促進(jìn)質(zhì)量評價體系的完善化。追溯體系的核心是信息錨定的過程，如何建立信息與實物的對應(yīng)關(guān)系并保證中藥信息與實物不脫離，使其從產(chǎn)地到消費(fèi)者流通過程中處于監(jiān)管狀態(tài)下，是中藥質(zhì)量追溯的重點(diǎn)和難點(diǎn)[10]。

國家中藥材流通追溯體系和中國藥品電子監(jiān)管碼管理系統(tǒng)是現(xiàn)階段與中藥質(zhì)量相關(guān)的追溯體系。經(jīng)典名方制劑需要的溯源體系須是將藥材、飲片、對應(yīng)實物、制劑相聯(lián)系的系統(tǒng)，對此，相關(guān)部門可在完善中藥材質(zhì)量體系的基礎(chǔ)上，借鑒或者依托電子監(jiān)管系統(tǒng)平臺，構(gòu)建中藥產(chǎn)業(yè)鏈全程追溯和質(zhì)量控制體系[10]。

經(jīng)典名方質(zhì)量追溯系統(tǒng)的形成必須依托各環(huán)節(jié)的銜接，每個環(huán)節(jié)設(shè)有“輸入質(zhì)量”與“輸出質(zhì)量”，通過各環(huán)節(jié)加工、炮制、煎煮、濃縮、制劑成型等處理進(jìn)行轉(zhuǎn)變，各環(huán)節(jié)的輸入質(zhì)量和輸出質(zhì)量要以科學(xué)合理的指標(biāo)進(jìn)行評估。

6 展望

與日本漢方藥的評價對象僅為生藥與浸膏制劑不同，我國經(jīng)典名方評價對象涉及中藥材、中藥飲片、物質(zhì)基準(zhǔn)、對應(yīng)實物、制劑的質(zhì)量研究及全方的量值傳遞研究等，質(zhì)量控制層層把關(guān)、更為全面，定位較漢方藥更為高端，我們需樹立研發(fā)信心，合理借鑒漢方藥中值得學(xué)習(xí)的內(nèi)容，如制劑成型技術(shù)等。經(jīng)典名方研發(fā)具有跨時代的意義，古為今用，古今結(jié)合，筆者相信我們的中成藥市場定會因經(jīng)典名方制劑的出現(xiàn)而更加規(guī)范，更加蓬勃發(fā)展。