• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    芥菜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)研究

    2013-09-03 02:55:58顧祥昆張淑江章時(shí)蕃孫日飛
    中國(guó)蔬菜 2013年12期
    關(guān)鍵詞:胚狀體靠邊單核

    顧祥昆 李 菲 張淑江 章時(shí)蕃 張 慧 孫日飛

    (中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所,北京 100081)

    小孢子培養(yǎng)技術(shù)是利用植物的未成熟花粉在一定誘導(dǎo)條件下改變正常的花粉發(fā)育途徑,即由配子體發(fā)育途徑轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育途徑,進(jìn)而形成胚狀體的過程。通過小孢子培養(yǎng)可獲得大量單倍體或雙單倍體植株(DH系),在純化親本、突變體篩選、遺傳研究等方面應(yīng)用廣泛。目前,該技術(shù)已經(jīng)成為育種的重要手段之一。Lichter(1982)首次報(bào)道了甘藍(lán)型油菜小孢子培養(yǎng)獲得了胚狀體再生植株;日本學(xué)者Sato等(1989)首次利用游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)從1個(gè)大白菜品種中得到了小孢子胚和再生植株。隨后,小孢子培養(yǎng)技術(shù)在蕓薹屬蔬菜中得到廣泛應(yīng)用,目前已經(jīng)涉及蕓薹屬的3個(gè)基本種和3個(gè)復(fù)合種(牛永超 等,2010)。

    芥菜〔Brassica juncea(L.)Czern. et Coss.〕是十字花科蕓薹屬一年或二年生植物,是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物。隨著消費(fèi)水平的提高,人們對(duì)芥菜品質(zhì)、產(chǎn)量等提出了更高的要求。利用小孢子培養(yǎng)技術(shù)可以快速獲得純合的DH材料,大大縮短育種周期,提高育種效率,為芥菜高效優(yōu)質(zhì)育種獲得純合目標(biāo)材料提供了新的途徑。但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)技術(shù)的研究較少,且主要集中在油用芥菜上,對(duì)鮮食或加工用芥菜的研究甚少,芥菜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)體系尚不完善。本試驗(yàn)擬通過研究基因型、熱激誘導(dǎo)條件、供體植株生長(zhǎng)條件對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)的影響,探討適宜芥菜小孢子培養(yǎng)的主要條件,為完善芥菜小孢子培養(yǎng)技術(shù)體系、提高胚胎誘導(dǎo)率奠定理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    選取12份不同基因型的芥菜栽培種為試驗(yàn)材料(表1),分屬于葉用芥菜、莖用芥菜、根用芥菜3個(gè)變種,均由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所提供。2011年1月播種于本所玻璃溫室內(nèi),常規(guī)管理,3月初定植于日光溫室,4~6月初取蕾進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)。

    表1 供試芥菜品種名稱及類型

    1.2 方法

    1.2.1 芥菜游離小孢子提取和培養(yǎng) 早上8:00~9:00取材,在顯微鏡下對(duì)不同基因型不同長(zhǎng)度的芥菜花蕾進(jìn)行鏡檢,確定大部分小孢子處于單核靠邊期時(shí)所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度,進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)。

    用75%的酒精消毒花蕾30 s,再用8%次氯酸鈉溶液消毒15 min,無(wú)菌水沖洗3次,每次1 min。將無(wú)菌花蕾置于消毒研缽中,并加入一定量的B5洗滌培養(yǎng)液,擠壓花蕾,分離小孢子,用300目消毒濾網(wǎng)過濾,收集濾液于10 mL離心管中,離心3次,轉(zhuǎn)速為1 200 r·min-1,每次4 min,之后棄上清液,用NLN-13培養(yǎng)基制成小孢子懸浮液,用血球計(jì)數(shù)板調(diào)節(jié)小孢子密度為8×104~1×105個(gè)·mL-1。將其分裝于直徑為60 mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿中,每個(gè)培養(yǎng)皿中倒入約4 mL,用封口膜封口。

    根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì),將分裝好的小孢子懸浮液置于恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行熱激誘導(dǎo)后,轉(zhuǎn)入25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)暗培養(yǎng),至胚狀體出現(xiàn)。培養(yǎng)25 d后統(tǒng)計(jì)小孢子出胚數(shù)目。

    1.2.2 花粉發(fā)育時(shí)期的熒光顯微觀察 以A12959、V03B0097、V03C0021為試材,在生長(zhǎng)健壯的植株花序上選取不同長(zhǎng)度的花蕾進(jìn)行DAPI染色觀察,染色液的配制參照李菲(2006)的方法。將不同長(zhǎng)度花蕾中的花藥剝離出來,取2~3個(gè)花藥置于載玻片上,并滴1~2滴DAPI染液,用鑷子擠壓花藥,使小孢子分離出來,剔除花藥殘片,蓋上蓋玻片并烤片。室溫下暗處理15 min后置于熒光顯微鏡下觀察、照相,并記錄處于不同發(fā)育時(shí)期的小孢子外部形態(tài)。

    1.2.3 單核靠邊期與花蕾長(zhǎng)度的對(duì)應(yīng)關(guān)系 根據(jù)DAPI染色結(jié)果,得知處于不同時(shí)期的小孢子外部形態(tài)。將12份芥菜品種不同長(zhǎng)度花蕾中的花藥剝離出來,取2~3個(gè)花藥置于載玻片上,滴1~2滴清水,用鑷子擠壓花藥,使小孢子分離出來,剔除花藥殘片,蓋上蓋玻片,置于顯微鏡下觀察小孢子的外部形態(tài),測(cè)量大部分小孢子處于單核靠邊期時(shí)對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度并記錄。

    1.2.4 小孢子發(fā)育過程的形態(tài)學(xué)觀察 培養(yǎng)小孢子,每天于倒置顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。

    1.2.5 熱激誘導(dǎo)條件 設(shè)置3個(gè)熱激溫度:32、33、35 ℃,并分別處理1、2、3 d,熱激后置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中靜止暗培養(yǎng)。以25 ℃暗培養(yǎng)為對(duì)照。培養(yǎng)25 d后統(tǒng)計(jì)小孢子出胚數(shù)目,計(jì)算出胚率。

    1.2.6 供體植株生長(zhǎng)條件 以A12959、V03B0097、V03C0021為試材,分3個(gè)不同播期播種,常規(guī)栽培管理,使每批材料抽薹開花的日期分別為4月底~5月初、5月底~6月初、6月底~7月初。取材進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)的熱激處理?xiàng)l件為35 ℃、3 d。對(duì) 比不同生長(zhǎng)溫度下供體植株的出胚狀況,探討供體植株生長(zhǎng)條件對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)的影響。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同發(fā)育時(shí)期花粉的DAPI染色觀察

    對(duì)不同發(fā)育時(shí)期的花粉進(jìn)行DAPI染色并進(jìn)行細(xì)胞學(xué)觀察,結(jié)果見圖1。芥菜小孢子發(fā)育過程為四分體時(shí)期→單核中期→單核靠邊期→雙核期→三核期。

    四分體時(shí)期(圖1-a):小孢子母細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂后會(huì)形成4個(gè)子細(xì)胞粘連在一起的時(shí)期,稱為四分體時(shí)期,經(jīng)熒光染色后有4個(gè)核出現(xiàn)。此時(shí)小孢子的外部形態(tài)呈明顯的四裂狀。單核中期(圖1-b):小孢子的核只有1個(gè)且處于細(xì)胞中間。此時(shí)小孢子的外部形態(tài)呈近圓形,三棱形初步顯露但不是很明顯。單核靠邊期(圖1-c):細(xì)胞核處于細(xì)胞的邊緣處,靠近細(xì)胞壁。小孢子的外部形態(tài)呈明顯的三棱形,可以看見有3條萌發(fā)溝,并且從總體上看,單核靠邊期的小孢子要比單核中期的小孢子體積要大。雙核期(圖1-d):小孢子經(jīng)第一次有絲分裂在胞壁內(nèi)形成營(yíng)養(yǎng)核和生殖核,其中營(yíng)養(yǎng)核染色較淺,生殖核染色較深。此時(shí)小孢子的外部形態(tài)呈圓形。三核期(圖1-e):隨著小孢子的繼續(xù)發(fā)育,生殖核分裂為2個(gè)精子,此時(shí)小孢子內(nèi)有3個(gè)核,即1個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和2個(gè)精子核。精子核較小,營(yíng)養(yǎng)核較大。此時(shí)小孢子的外部形態(tài)呈近圓形至橢圓形。由DAPI染色結(jié)果可知:小孢子隨著不斷地生長(zhǎng)發(fā)育,細(xì)胞體積不斷增大。處于單核靠邊期的小孢子可見明顯的3條萌發(fā)溝,呈三棱形,可作為單核靠邊期的形態(tài)指標(biāo)。

    2.2 小孢子處于單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度

    對(duì)于芥菜,適于培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時(shí)期一般是單核靠邊期。劉冬等(1997)以芥菜為試材進(jìn)行小孢子培養(yǎng),結(jié)果顯示單核晚期的小孢子培養(yǎng)效果最好。Prem等(2005)選取單核晚期占較大比例的花蕾進(jìn)行小孢子培養(yǎng),培養(yǎng)效果較好。

    對(duì)供試的12份芥菜材料的不同長(zhǎng)度花蕾中的小孢子進(jìn)行鏡檢,依據(jù)單核靠邊期小孢子的細(xì)胞學(xué)特征,找出大部分小孢子處于單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度,即為適宜小孢子培養(yǎng)的花蕾長(zhǎng)度。從表2可以看出,除了南平大頭芥(V03B0001)小孢子單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度是3.0~3.5 mm外,其余芥菜材料小孢子單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度為2.0~3.0 mm。但不同基因型的芥菜材料,其小孢子單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度也有所不同。如包心芥(A12959)的小孢子單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度為2.5~3.0 mm,而兒菜(V03B0109)的小孢子單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度為2.0~2.5 mm。在實(shí)際應(yīng)用中,應(yīng)根據(jù)基因型選擇適宜長(zhǎng)度的花蕾進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng),在分離提取小孢子之前用顯微鏡快速鏡檢,找到大部分小孢子為三棱形時(shí)所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度即為適宜的花蕾長(zhǎng)度。

    圖1 不同發(fā)育時(shí)期芥菜小孢子的DAPI熒光染色結(jié)果(10×20)

    表2 不同基因型芥菜小孢子單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度

    2.3 小孢子培養(yǎng)過程中的細(xì)胞學(xué)觀察

    在小孢子培養(yǎng)過程中,用倒置顯微鏡觀察小孢子各個(gè)發(fā)育時(shí)期的形態(tài)。經(jīng)熱激處理24 h后,部分小孢子明顯膨大,細(xì)胞呈圓球形,細(xì)胞直徑增大到原來的2~3倍(圖2-a);3 d后,部分膨大的小孢子發(fā)生第一次分裂,大部分為均等分裂(圖2-b),也有極個(gè)別的為不均等分裂(圖2-c),不均等分裂的小孢子一般不能發(fā)育成胚;5 d后,較多的小孢子發(fā)生第二次均等分裂(圖2-d);7 d后,可觀察到分裂多次的細(xì)胞團(tuán)(圖2-e);9 d后,可觀察到球形幼胚(圖2-f);第10~11天時(shí),可觀察到球形胚(圖2-g)和心形胚(圖2-h),第12~15天時(shí),可觀察到魚雷形胚和子葉形胚(圖2-i,j,k)。

    此外,還觀察到不同基因型芥菜的小孢子胚胎發(fā)生均具有不同步性,在1個(gè)培養(yǎng)皿中可以同時(shí)觀察到球形胚、心形胚、魚雷形胚和子葉形胚并存(圖2-l)。

    2.4 熱激條件對(duì)芥菜小孢子出胚率的影響

    圖2 芥菜小孢子離體發(fā)育過程

    表3 不同熱激條件對(duì)芥菜小孢子出胚率的影響

    從表3可以看出,V03B0012和B92975-201在35 ℃、2 d的熱激處理下出胚率較高,V03C0021在35 ℃、1 d的熱激處理下出胚率較高,其余6份出胚的芥菜材料均在35 ℃、3 d的熱激條件下產(chǎn)胚量最多??傮w來說,35℃、3 d是本試驗(yàn)條件下大多數(shù)芥菜材料小孢子培養(yǎng)較為適宜的熱激誘導(dǎo)條件。

    表4 不同基因型對(duì)芥菜小孢子出胚率的影響

    2.5 基因型對(duì)芥菜小孢子胚產(chǎn)量的影響

    由表4可見,供試的12份芥菜材料中有9份誘導(dǎo)出胚,其中V03B0097和A12959出胚率較高,達(dá)5.87胚·蕾-1和5.54胚·蕾-1;A12960、V03C0001、V03B0012、V03B0109、V03A0223、B92975-201的出胚率相對(duì)較低,均在0.5胚·蕾-1以下;而V03A0235、V03B0001、V03C0004很難誘導(dǎo)出胚。由此可見,不同基因型的芥菜小孢子胚胎發(fā)生能力有很大的差異,基因型是影響芥菜小孢子培養(yǎng)成功與否的重要因素。

    2.6 供體植株生長(zhǎng)條件對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)的影響

    為探討不同溫度條件下生長(zhǎng)的供體植株對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)的影響,本試驗(yàn)以A12959、V03B0097、V03C0021為試材,分3批播種,常規(guī)栽培管理,每批材料抽薹開花的日期分別為4月底~5月初、5月底~6月初、6月底~7月初,取材進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng),并統(tǒng)計(jì)同種材料在不同抽薹開花日期的出胚情況。4月底~5月初平均氣溫為25.7 ℃/14.25 ℃(平均最高氣溫/平均最低氣溫,下同),5月底~6月初為29.8 ℃/17.95 ℃,6月底~7月初為30.25 ℃/21.95 ℃。結(jié)果顯示:只有4月底~5月初抽薹開花的材料進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)后可誘導(dǎo)出胚,其余兩批材料均沒有誘導(dǎo)成胚??梢?,供體植株的生長(zhǎng)溫度對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)有較大的影響。在運(yùn)用小孢子培養(yǎng)技術(shù)時(shí),應(yīng)盡量確保供體植株處于較低的溫度環(huán)境中生長(zhǎng)。但由于本試驗(yàn)沒有進(jìn)行多年多點(diǎn)重復(fù)試驗(yàn),還需進(jìn)一步設(shè)計(jì)詳細(xì)的試驗(yàn)進(jìn)行研究。

    2.7 芥菜小孢子胚狀體的繼代培養(yǎng)

    將培養(yǎng)25 d后的胚狀體(圖3-a)轉(zhuǎn)接到B5固體培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng),待胚狀體萌發(fā)分化后轉(zhuǎn)接到MS培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)(圖3-b),大部分的子葉形胚均能正常發(fā)育、分化,并形成健全的植株(圖3-c),而球形胚、心形胚和魚雷形胚均褐化死亡。表明幼期胚狀體不容易成活,子葉形胚易于進(jìn)行繼代培養(yǎng)。為了使更多的胚狀體得以應(yīng)用,還需要進(jìn)一步探究繼代培養(yǎng)中各種條件對(duì)胚狀體發(fā)育的影響,以優(yōu)化芥菜繼代培養(yǎng)體系。

    圖3 芥菜小孢子胚狀體的萌發(fā)與植株再生

    3 結(jié)論與討論

    在游離小孢子培養(yǎng)中,小孢子發(fā)育時(shí)期與誘導(dǎo)胚胎發(fā)生能力密切相關(guān),選擇合適發(fā)育時(shí)期的小孢子至關(guān)重要。對(duì)于芥菜,單核靠邊期的小孢子易于誘導(dǎo)啟動(dòng)胚狀體發(fā)生途徑(劉冬 等,1997;Prem et al.,2005)。本試驗(yàn)采用DAPI染色法確定了單核靠邊期小孢子的細(xì)胞形態(tài),對(duì)12份芥菜材料不同長(zhǎng)度花蕾的小孢子進(jìn)行顯微觀察,找到了單核靠邊期的小孢子所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度。三棱形是單核靠邊期小孢子最為明顯的細(xì)胞學(xué)形態(tài)特征,可以作為此發(fā)育時(shí)期的形態(tài)學(xué)標(biāo)志。本試驗(yàn)選取的12份芥菜小孢子處于單核靠邊期所對(duì)應(yīng)的花蕾長(zhǎng)度主要在2~3 mm的范圍內(nèi),但適宜的花蕾長(zhǎng)度隨基因型的不同而有差異,在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)基因型確定適宜長(zhǎng)度的花蕾進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)。

    很多作物小孢子培養(yǎng)過程中,高溫?zé)峒な钦T導(dǎo)小孢子胚胎發(fā)生的關(guān)鍵步驟。其作用機(jī)理是通過脅迫改變小孢子的發(fā)育途徑,阻止小孢子向成熟花粉粒方向發(fā)展,促進(jìn)其沿胚胎發(fā)育途徑發(fā)展,最后形成小孢子胚(栗根義 等,1993a,1993b)。目前高溫?zé)峒ぬ幚硪呀?jīng)廣泛地運(yùn)用于十字花科作物小孢子培養(yǎng)中。芥菜小孢子培養(yǎng)同樣需要熱激誘導(dǎo),但目前所采用的熱激條件各有不同,難以統(tǒng)一。劉冬等(1997)的研究中只有在33 ℃、3 d熱激處理下有芥菜小孢子胚形成;牛永超等(2010)認(rèn)為32 ℃、5 d熱激處理對(duì)大多數(shù)芥菜小孢子再生成胚狀體較為有效;Hiramatsu等(1995)對(duì)24份葉用芥菜材料進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng),采用的熱激條件為32.5 ℃、1~3 d,只有7份材料出胚,對(duì)于出胚情況最好的Hsueh Li Hung來說,最佳的熱激條件是32.5 ℃、2 d;Pradeep等(2006)的研究表明35 ℃、2 d的熱激條件最好,比32、33 ℃處理2 d后的產(chǎn)胚量高10~15倍。本試驗(yàn)探究了熱激溫度和熱激天數(shù)對(duì)12份芥菜小孢子培養(yǎng)的影響,35 ℃、3 d是大多數(shù)材料較為適宜的熱激條件。這與Pradeep等(2006)的研究結(jié)果較為一致。為了進(jìn)一步確定適于芥菜小孢子培養(yǎng)的熱激條件,今后還需要增加芥菜基因型的種類和數(shù)量進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證。

    目前,小孢子培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于蕓薹屬的很多作物中,在探究大白菜(曹鳴慶 等,1993;栗根義 等,1993a;趙俊 等,2008)、甘藍(lán)型油菜(余鳳群和劉后利,1995;王漢中 等,2004)、花椰菜(張曉芬 等,2005;趙前程 等,2007)、蘿卜(張麗,2004)等小孢子培養(yǎng)的影響因素試驗(yàn)中,基因型仍是決定小孢子培養(yǎng)成功與否的關(guān)鍵因素。在本試驗(yàn)中,基因型亦是影響芥菜小孢子培養(yǎng)的關(guān)鍵因素,這與前人的研究結(jié)果相同(Hiramatsu et al.,1995;Agnihotri et al.,1996;Lionneton et al.,2001;Prem et al.,2005;Deepak et al.,2008;牛永超 等,2010),不同基因型芥菜的小孢子胚胎發(fā)生能力有很大的差異。

    在探討基因型對(duì)芥菜小孢子胚產(chǎn)量的影響時(shí),本試驗(yàn)綜合了所有條件下的出胚情況進(jìn)行探討。因?yàn)榻娌说倪z傳背景較為復(fù)雜,可能存在較多的內(nèi)在因素影響芥菜小孢子胚胎發(fā)生能力,沒有較為統(tǒng)一的熱激條件。本試驗(yàn)中,雖然35 ℃、3 d的熱激條件對(duì)大多數(shù)芥菜材料而言是較為適宜的誘導(dǎo)條件,但并不是對(duì)所有的基因型都適用,有的在其他熱激條件下出胚的材料在35 ℃、3 d熱激后并不出胚。如V03B0097和A12959在任何熱激條件下均能誘導(dǎo)出胚,是易出胚材料;而B92975-201只有在35 ℃熱激2 d后有胚狀體發(fā)生,V03C0004、V03B0001和V03A0235在任何熱激條件下均不能誘導(dǎo)出胚,由此表現(xiàn)出基因型差異。此外,本試驗(yàn)所用的基因型較少,很可能隨著基因型的增加,會(huì)表現(xiàn)出依賴于基因型的熱激條件多樣性,因此需要考慮在一定熱激條件范圍內(nèi)的出胚總體情況進(jìn)行基因型影響的探討。今后也應(yīng)當(dāng)增加芥菜的種類和數(shù)量作進(jìn)一步的研究。

    本試驗(yàn)也初步探究了供體植株生長(zhǎng)條件尤其是溫度條件對(duì)芥菜小孢子培養(yǎng)的影響,發(fā)現(xiàn)4月底~5月初抽薹開花的材料小孢子易于誘導(dǎo)出胚,說明供體植株在較低的溫度環(huán)境下生長(zhǎng)有利于小孢子培養(yǎng)。在常規(guī)栽培管理中,應(yīng)盡量使芥菜抽薹開花時(shí)的氣溫相對(duì)較低。

    曹鳴慶,李巖,劉凡.1993.基因型和供體植株生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)大白菜游離小孢子胚胎發(fā)生的影響.華北農(nóng)學(xué)報(bào),8(4):1-6.

    栗根義,高睦槍,趙秀山.1993a.大白菜游離小孢子培養(yǎng).園藝學(xué)報(bào),20(2):167-170.

    栗根義,高睦槍,趙秀山.1993b.高溫預(yù)處理對(duì)大白菜游離小孢子培養(yǎng)的效果(簡(jiǎn)報(bào)).實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào),26(2):165-166.

    李菲.2006.大白菜游離小孢子培養(yǎng)及其胚胎發(fā)生和加倍機(jī)理的研究〔碩士論文〕.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院.

    劉冬,郭平仲,劉凡,李巖,曹鳴慶.1997.芥菜(Brassica junceaL.)小孢子胚發(fā)生和植株再生.首都師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,18(1):76-81.

    牛永超,李加納,殷家明,林吶,徐新福,韓甫,周清元.2010.基因型和處理溫度對(duì)芥菜型油菜游離小孢子培養(yǎng)的影響.西南大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,32(8):23-28.

    王漢中,王新發(fā),劉貴華,鄭元本,楊慶.2004.甘藍(lán)型雜交油菜親本的小孢子培養(yǎng)技術(shù)研究.中國(guó)油料作物學(xué)報(bào),26(1):1-4.

    余鳳群,劉后利.1995.供體材料和培養(yǎng)基成份對(duì)甘藍(lán)型油菜小孢子胚狀體產(chǎn)量的影響.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),14(4):327-332.

    張麗.2004.蘿卜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)初探.園藝學(xué)報(bào),34(5):676-678.

    張曉芬,王曉武,張延國(guó),劉運(yùn)霞,王永清.2005.花椰菜游離小孢子培養(yǎng)再生植株研究.中國(guó)蔬菜,(1):16-17.

    趙俊,巫東堂,趙軍良,董曉飛,趙美華,王秀英,李改珍.2008.影響大白菜游離小孢子培養(yǎng)若干因素的研究.山西農(nóng)業(yè)科學(xué),36(8):26-28.

    趙前程,吉立柱,蔡榮旗,劉莉莉,佟志強(qiáng),孫德嶺.2007.花椰菜游離小孢子培養(yǎng)及植株再生研究.華北農(nóng)學(xué)報(bào),22(6):65-68.

    Agnihotri A,Seguin-Swartz G,Downey R K.1996. Microspore embryogenesis inB. juncea//Pareek L K.ed.Trends in plant tissue culture and biotechnology.Rajasthan:Agrobotanical Publishers:218-221.

    Deepak P,Kadambari G,Gautam S,Abha A.2008.Activated charcoal induced high frequency microspore embryogenesis and efficient doubled haploid production inBrassica juncea.Plant Cell Tissue and Organ Culture,93(3):269-282.

    Hiramatsu M,Odahara K,Matsue Y.1995.A survey of microspore embryogenesis in leaf mustard (Brassica juncea).Acta Hort,392:139-145.

    Lichter R.1982.Induction of haploid plants from isolated pollen ofBrassica napus.Z Pflanzenphysiol,105:427-434.

    Lionneton E,Beuret W,Delaitre C,Ochatt S,Rancillae M.2001.Improved microspore culture and doubled haploid plant regeneration in the brown condiment mustard(B. juncea).Plant Cell Rep,20:126-130.

    Pradeep K A,Parinita A,Jan B M C,Liu C M,Bhojwani S S.2006.PCIB an antiauxin enhances microspore embryogenesis in microspore culture ofBrassica juncea.Plant Cell Tissue and Organ Culture,86(2):201-210.

    Prem D,Gupta K,Agnihotri A.2005.Effect of various exogenous and endogenous factors on microspore embryogenesis in Indian mustard〔Brassica juncea(L.)Czern and Coss.〕.In Vitro Cell Dev Biol Plant,41:266-273.

    Sato T,Nishio T,Hirai M.1989.Plant regeneration from isolated microspore cultures of Chinese cabbage (Brassica campestrisssp.pekinensis).Plant Cell Rep,8:486-488.

    猜你喜歡
    胚狀體靠邊單核
    日本落葉松胚狀體干化處理對(duì)萌發(fā)的影響
    黃瓜胚狀體高頻再生體系的建立及優(yōu)化
    花椰菜雪劍4號(hào)合子胚增殖體系的建立
    開了雨刷器
    一種簡(jiǎn)單的分離、培養(yǎng)及鑒定小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞方法的建立
    VC靠邊!社群股權(quán)眾籌來了
    天使進(jìn)化——VC靠邊!社群股權(quán)眾籌來了
    單核Ru(Ⅲ)-edta類配合物的合成﹑結(jié)構(gòu)及性質(zhì)研究
    苯并咪唑衍生的單核鈷(Ⅱ)和單核鎳(Ⅱ)配合物與DNA和蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)性及細(xì)胞毒活性研究
    納米免疫磁珠富集單核增生李斯特菌
    www.色视频.com| 亚洲精品aⅴ在线观看| tube8黄色片| 啦啦啦啦在线视频资源| 久久久久网色| 国产免费一区二区三区四区乱码| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成人漫画全彩无遮挡| 国产男女内射视频| www.色视频.com| 最黄视频免费看| 亚洲精品,欧美精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产成人免费观看mmmm| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲精品日本国产第一区| 一区二区av电影网| 国产精品一区二区在线观看99| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 男人狂女人下面高潮的视频| 视频中文字幕在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 高清av免费在线| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲av福利一区| 少妇的逼好多水| 国产精品人妻久久久影院| 丰满人妻一区二区三区视频av| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费黄频网站在线观看国产| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 免费av中文字幕在线| 国产精品成人在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美性感艳星| 99热网站在线观看| 国产精品无大码| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av有码第一页| 另类亚洲欧美激情| av线在线观看网站| 久久99热6这里只有精品| 久久久久网色| 国产免费一区二区三区四区乱码| 成人影院久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品久久久久久久久av| 日韩中文字幕视频在线看片| 一级片'在线观看视频| 亚洲自偷自拍三级| 国产成人精品婷婷| 午夜久久久在线观看| 国产永久视频网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 99久久精品一区二区三区| 亚洲三级黄色毛片| 99久久精品一区二区三区| 欧美97在线视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 妹子高潮喷水视频| 久热久热在线精品观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 涩涩av久久男人的天堂| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美日本中文国产一区发布| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 人人妻人人看人人澡| 免费看日本二区| 国产黄片视频在线免费观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产在线免费精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 女人精品久久久久毛片| 精华霜和精华液先用哪个| 国产亚洲5aaaaa淫片| 观看av在线不卡| 亚洲av男天堂| 91久久精品国产一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 一级二级三级毛片免费看| 精品少妇久久久久久888优播| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 高清欧美精品videossex| 在线 av 中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 91精品国产九色| 久久精品久久精品一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品视频女| 久久久久久久久久成人| av专区在线播放| 少妇精品久久久久久久| 国产深夜福利视频在线观看| 香蕉精品网在线| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲人与动物交配视频| a 毛片基地| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品一区www在线观看| 最近手机中文字幕大全| 黄色毛片三级朝国网站 | 久热久热在线精品观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 熟女人妻精品中文字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 韩国高清视频一区二区三区| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲第一av免费看| 国产午夜精品一二区理论片| 岛国毛片在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久婷婷青草| 国产精品99久久99久久久不卡 | 一级毛片久久久久久久久女| 久久99热这里只频精品6学生| 国产成人免费无遮挡视频| av天堂久久9| 在线观看美女被高潮喷水网站| 美女cb高潮喷水在线观看| 好男人视频免费观看在线| 久久韩国三级中文字幕| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本午夜av视频| 国产精品免费大片| 国产精品久久久久成人av| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本欧美视频一区| 国产在线免费精品| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 午夜免费鲁丝| 97精品久久久久久久久久精品| 特大巨黑吊av在线直播| h视频一区二区三区| 精品酒店卫生间| 国产精品一区二区性色av| 亚洲精品aⅴ在线观看| 永久网站在线| 免费观看在线日韩| 欧美xxⅹ黑人| 永久免费av网站大全| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久精品国产自在天天线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲成人av在线免费| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲内射少妇av| av一本久久久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 99九九在线精品视频 | 免费观看在线日韩| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 大香蕉久久网| 精品酒店卫生间| 看十八女毛片水多多多| h日本视频在线播放| 久久国产精品大桥未久av | 嫩草影院新地址| 久久青草综合色| 大片免费播放器 马上看| 午夜91福利影院| 美女cb高潮喷水在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲av免费高清在线观看| 曰老女人黄片| 亚洲人与动物交配视频| 婷婷色av中文字幕| 欧美日韩亚洲高清精品| 99久久人妻综合| 日韩视频在线欧美| 日本黄色日本黄色录像| 寂寞人妻少妇视频99o| 黄片无遮挡物在线观看| 日韩中字成人| 日日撸夜夜添| 精品午夜福利在线看| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲情色 制服丝袜| 六月丁香七月| 国产片特级美女逼逼视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 青春草国产在线视频| 18禁动态无遮挡网站| 免费看日本二区| 男人添女人高潮全过程视频| 久热这里只有精品99| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久亚洲国产成人精品v| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 女性生殖器流出的白浆| 熟女电影av网| 三级国产精品欧美在线观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美日韩精品成人综合77777| 成人国产麻豆网| 黑人高潮一二区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 免费大片18禁| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久国内精品自在自线图片| 曰老女人黄片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人二区视频| 自线自在国产av| 国内精品宾馆在线| a 毛片基地| 在线观看www视频免费| 国产 精品1| 一本久久精品| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 一级av片app| 久久久久久久久久久丰满| 99热这里只有精品一区| 97在线视频观看| 成人影院久久| 少妇人妻精品综合一区二区| 一个人免费看片子| 91精品一卡2卡3卡4卡| 黄色一级大片看看| 99视频精品全部免费 在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品国产一区二区久久| 男女边吃奶边做爰视频| 国产成人免费无遮挡视频| 人妻少妇偷人精品九色| 丝袜在线中文字幕| 国产淫语在线视频| 日本免费在线观看一区| 黄片无遮挡物在线观看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 青春草国产在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av天堂中文字幕网| 久久久午夜欧美精品| 成人国产av品久久久| 日本-黄色视频高清免费观看| 一级毛片 在线播放| 人人澡人人妻人| 能在线免费看毛片的网站| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲三级黄色毛片| 国产在线视频一区二区| 永久网站在线| 国产 一区精品| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 精品少妇内射三级| 亚洲精品日本国产第一区| 免费看av在线观看网站| 日本91视频免费播放| 尾随美女入室| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩三级伦理在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产深夜福利视频在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲真实伦在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 久久6这里有精品| 在线免费观看不下载黄p国产| 精品亚洲成国产av| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 日韩人妻高清精品专区| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 男女边吃奶边做爰视频| 99久久精品国产国产毛片| av在线app专区| 麻豆成人av视频| 大话2 男鬼变身卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日韩av免费高清视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 人妻少妇偷人精品九色| av线在线观看网站| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲电影在线观看av| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 在现免费观看毛片| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久精品免费免费高清| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久99精品国语久久久| 国产精品人妻久久久影院| 久久 成人 亚洲| a级毛色黄片| 国产淫语在线视频| 大陆偷拍与自拍| 日本av免费视频播放| 高清av免费在线| 最后的刺客免费高清国语| 香蕉精品网在线| 97超碰精品成人国产| 欧美区成人在线视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产综合精华液| 免费看av在线观看网站| 欧美+日韩+精品| 国产永久视频网站| 亚州av有码| 春色校园在线视频观看| 中文在线观看免费www的网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 欧美精品一区二区大全| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲情色 制服丝袜| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美 日韩 精品 国产| av视频免费观看在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 少妇人妻一区二区三区视频| 18禁在线播放成人免费| 下体分泌物呈黄色| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品久久久久成人av| 如何舔出高潮| 亚洲在久久综合| 一区二区三区精品91| 久久精品久久精品一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 蜜桃在线观看..| 日日啪夜夜撸| 精品一区在线观看国产| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲av成人精品一二三区| 高清不卡的av网站| 如何舔出高潮| 亚洲国产日韩一区二区| 日本色播在线视频| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品熟女久久久久浪| 一级爰片在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 日本vs欧美在线观看视频 | 午夜影院在线不卡| 国产熟女欧美一区二区| 精品一区二区免费观看| 毛片一级片免费看久久久久| 中文字幕制服av| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美精品一区二区免费开放| 精品一区在线观看国产| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产亚洲5aaaaa淫片| 夫妻午夜视频| 国产亚洲一区二区精品| 免费大片黄手机在线观看| 成人国产av品久久久| 成人国产av品久久久| 成人影院久久| 免费看av在线观看网站| 国产成人精品福利久久| 极品人妻少妇av视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 伊人久久国产一区二区| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲伊人久久精品综合| 高清欧美精品videossex| av在线app专区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 少妇的逼好多水| 韩国高清视频一区二区三区| 久久久久久久久久久免费av| 久久久久视频综合| 国产69精品久久久久777片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美性感艳星| 欧美丝袜亚洲另类| 99re6热这里在线精品视频| 国产真实伦视频高清在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 国产片特级美女逼逼视频| 久久狼人影院| 日本av免费视频播放| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日韩电影二区| 99视频精品全部免费 在线| 桃花免费在线播放| 国产精品熟女久久久久浪| 久久狼人影院| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品女同一区二区软件| 如何舔出高潮| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产男人的电影天堂91| 最近的中文字幕免费完整| 色5月婷婷丁香| 国产 一区精品| 嫩草影院入口| 日本91视频免费播放| 日产精品乱码卡一卡2卡三| av卡一久久| 中文在线观看免费www的网站| 国产有黄有色有爽视频| 日韩三级伦理在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| kizo精华| 观看av在线不卡| 久久午夜福利片| 日本欧美视频一区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美性感艳星| 国产91av在线免费观看| 熟女电影av网| 多毛熟女@视频| 婷婷色av中文字幕| 亚洲成色77777| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美精品亚洲一区二区| 国产毛片在线视频| 免费高清在线观看视频在线观看| av国产精品久久久久影院| 97在线人人人人妻| 91久久精品电影网| 亚洲伊人久久精品综合| 精品少妇内射三级| 91成人精品电影| 久久热精品热| 91久久精品国产一区二区三区| 国产免费一区二区三区四区乱码| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲在久久综合| 欧美精品一区二区免费开放| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产日韩欧美亚洲二区| 伊人亚洲综合成人网| 午夜免费鲁丝| 欧美精品高潮呻吟av久久| 男女啪啪激烈高潮av片| 精品久久久久久久久亚洲| 久久国产乱子免费精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩av在线免费看完整版不卡| 免费大片18禁| 91成人精品电影| 国产永久视频网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产色爽女视频免费观看| av网站免费在线观看视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产综合精华液| 午夜激情福利司机影院| 亚洲电影在线观看av| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产精品国产三级国产专区5o| a级片在线免费高清观看视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 欧美国产精品一级二级三级 | 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久这里有精品视频免费| 国产真实伦视频高清在线观看| 在线观看免费高清a一片| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲国产精品一区三区| av在线老鸭窝| 国产熟女午夜一区二区三区 | 亚洲高清免费不卡视频| 日韩成人伦理影院| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品一区二区在线观看99| 在线观看国产h片| av在线老鸭窝| 一区在线观看完整版| 人妻人人澡人人爽人人| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 九色成人免费人妻av| 中文字幕制服av| 午夜日本视频在线| 春色校园在线视频观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日本色播在线视频| 国产熟女午夜一区二区三区 | 一边亲一边摸免费视频| 久久久久久久国产电影| 久久免费观看电影| 丰满少妇做爰视频| 亚洲国产日韩一区二区| 精品午夜福利在线看| 性色av一级| 亚洲av日韩在线播放| 男男h啪啪无遮挡| 麻豆成人av视频| 欧美国产精品一级二级三级 | 成人国产麻豆网| 日本黄色片子视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| av在线播放精品| 久久这里有精品视频免费| 少妇人妻 视频| 午夜激情福利司机影院| 国产熟女欧美一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 在线观看人妻少妇| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品久久久久成人av| 久久鲁丝午夜福利片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 伊人亚洲综合成人网| 18禁在线无遮挡免费观看视频| kizo精华| 亚洲国产欧美在线一区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | av福利片在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲美女黄色视频免费看| 老司机影院成人| 色94色欧美一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 人妻 亚洲 视频| 日日撸夜夜添| 国产精品伦人一区二区| 国产成人精品无人区| 一本久久精品| 国产成人精品福利久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久久久久久成人| 欧美少妇被猛烈插入视频| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产91av在线免费观看| 亚洲精品自拍成人| 婷婷色综合www| av天堂中文字幕网| 国产高清有码在线观看视频| 午夜免费观看性视频| 日日撸夜夜添| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久韩国三级中文字幕| 99re6热这里在线精品视频| 一级片'在线观看视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 观看av在线不卡| 国产视频内射| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产黄色视频一区二区在线观看| 制服丝袜香蕉在线| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲在久久综合| 天堂8中文在线网| 中国美白少妇内射xxxbb| 91久久精品国产一区二区三区| a级一级毛片免费在线观看| 大码成人一级视频| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 国产真实伦视频高清在线观看| 韩国av在线不卡| 亚洲一区二区三区欧美精品| av女优亚洲男人天堂| 精品熟女少妇av免费看| 国模一区二区三区四区视频| 国产成人精品福利久久| 免费观看性生交大片5| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品,欧美精品| 国产淫片久久久久久久久| 波野结衣二区三区在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产探花极品一区二区| 五月玫瑰六月丁香| 久久精品久久久久久久性| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 精品久久久精品久久久| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲国产精品专区欧美| 成年av动漫网址| 久久精品国产自在天天线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片 | 性色av一级| 国产精品无大码| 亚洲不卡免费看| 黑人高潮一二区| 久久婷婷青草| 啦啦啦在线观看免费高清www| 在线观看一区二区三区激情| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片|