強力枇杷露質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進

宋勝男 李勝楠

摘 ?要：目的：改進和優(yōu)化強力枇杷露的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法，通過改變提取方法、點樣量梯度變化、薄層板的更換，對強力枇杷露中主要藥效成分進行定性鑒別。結(jié)果：枇杷葉鑒別中采用水飽和正丁醇兩次提取，薄層板的斑點更加明亮;罌粟殼鑒別中采用水飽和正丁醇提取更加方便，用色譜級甲醇作為溶劑溶解供試品，在青島海洋化工廠生產(chǎn)的硅膠G薄層板上點樣斑點更易出現(xiàn)且清晰;薄荷腦鑒別中點樣量10-20 μl比較合適。結(jié)論：本文建立的方法準(zhǔn)確、可靠，可提高強力枇杷露的質(zhì)量控制水平。

關(guān)鍵詞：強力枇杷露;枇杷葉;罌粟殼;薄荷腦;薄層鑒別

強力枇杷露主要由枇杷葉、罌粟殼、薄荷腦、百部、桑白皮、白前、桔梗七味中藥成分及有關(guān)輔料（蔗糖、枸櫞酸、桔子香精、乙醇、苯甲酸鈉防腐劑）制成，具有止咳祛痰、養(yǎng)陰斂肺的功效[1]。強力枇杷露的成分測定報道很多，其中薄層色譜鑒別法具有操作簡單、專屬性強、重現(xiàn)性好等特點。但不同研究中所用的提取方法、展開劑、薄層板各有不同[2-5]，因此在實際操作中存在不出點或出點不明顯等情況。本文通過改變提取方法、薄層板和點樣量進行研究，所用試劑的不同進行對比考察，確定最佳方案，選擇最佳判別依據(jù)，以便于質(zhì)量控制，為強力枇杷露的進一步研究提供依據(jù)。

1 ?儀器與試藥

MS105DU電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）;YOKO-PN薄層電動噴霧器（武漢藥科生物技術(shù)有限公司）;WGL-125B電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）;TG16-203離心機（湖南平凡科技有限公司）;DK-98-11數(shù)顯恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司）。

罌粟殼對照藥材（ 批號：120957-201507） 、枇杷葉對照藥材（ 批 號： 121261-201804 ） 、薄荷腦對照藥材（批號：110728-201707）、嗎啡對照品（ 批號：171201-201324） 、磷酸可待因?qū)φ掌罚?批號：671-9402） 均由中國食品藥品檢定研究院提供;自制薄層板、青島海洋化工廠生產(chǎn)薄層板、煙臺大學(xué)生物科學(xué)與工程研究所生產(chǎn)薄層板，自制超純水，其他為分析純試劑。

2 ?方法與結(jié)果

2.1 ?枇杷葉的薄層鑒別

取本品30 ml，加30 ml水飽和的正丁醇振搖提取1次，用氨試液30 ml洗滌，水浴蒸干，殘渣加甲醇1ml（少量多次進行溶解，下同）使其溶解，作為供試品溶液1。用水飽和正丁醇提取2次，制備供試品溶液2。另取枇杷葉對照藥材4.035 g，加水150 ml，加熱回流1小時，濾過，取濾液，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并正丁醇液，用氨試液洗滌，正丁醇層液蒸干，殘渣加甲醇溶解，作為對照藥材溶液。依照薄層色譜法[6]試驗，吸取上述溶液各2-8 μl，于同一塊硅膠G薄層板上點樣，展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（8：4：0.1），展開晾干后，噴上10%的硫酸乙醇溶液，用吹風(fēng)機吹干后，放置到烘箱中在105℃加熱約3-5min，直至斑點顯色清晰。在強力枇杷露供試品色譜中，在與枇杷葉對照藥材色譜相應(yīng)位置上，日光下顯相同顏色的主斑點。放置到紫外燈（365 nm）下檢視，顯相同顏色的主斑點，見圖1、2。

圖1和圖2中從左到右依次為樣1（2 μl）、樣1（4 μl）、樣1（6 μl）、樣1（8 μl）、枇杷葉對照藥材、樣2（8 μl）、樣2（6 μl）、樣2（4 μl）、樣2（2 μl），由梯度點樣所得圖譜可以看出右邊顯現(xiàn)的斑點比左邊顯現(xiàn)的斑點更加整齊，且在同樣點樣量的情況下右邊斑點更加清晰。

枇杷葉鑒別中，用水飽和正丁醇提取兩次比提取一次更好，斑點顯現(xiàn)更加明亮，且斑點對齊情況更好，根據(jù)斑點清晰程度判斷，樣品的點樣量控制在2-8μl皆可，自制薄層板跑的相應(yīng)斑點跑的更高，更快，硅膠G板則是每次跑板斑點各不相同，且大部分情況下，斑點對齊程度不佳。

2.2罌粟殼的薄層鑒別

取樣品20 ml，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至11～13，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20 ml，合并正丁醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液1。取樣品40 ml，加水20 ml，加氨試液調(diào)至pH至 11～13，用三氯甲烷40 ml強力振搖提取，分取三氯甲烷液（三氯甲烷層能自行分出來，但存在大量樣品在里面，并未分層徹底，為提高提取效率，可以進行離心分離），水浴蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液2。另取取罌粟殼對照藥材1.0021 g，加甲醇20 ml，加熱回流30 min，趁熱濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為對照藥材溶液。再取嗎啡對照品（4.46 mg）、磷酸可待因?qū)φ掌罚?.46 mg）和鹽酸罌粟堿對照品（4.42 mg），加甲醇4.4 ml制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[6]試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，于硅膠G薄層板、1% NaOH制備的硅膠G薄層板上點樣，展開劑為甲苯-丙酮-乙醇-濃氨試液（20：20：3：1），展開晾干后，先噴以稀碘化鉍鉀試液，再噴以亞硝酸鈉乙醇試液，于日光下檢視。在強力枇杷露供試品色譜中，在與罌粟殼對照藥材色譜和嗎啡對照品、磷酸可待因?qū)φ掌飞V相應(yīng)位置上，顯相同顏色的棕褐色斑點。

圖3中從左到右依次為樣1（4 μl）;罌粟殼對照藥材;罌粟殼對照液;樣2（24 μl，點到點不進去為止）;樣2（9 μl）;樣1（3 μl），此時所用的薄層板為硅膠G板，跑板時間為1.5 h，跑板距離為12 cm。圖4中從左到右依次為為罌粟殼對照混合液;罌粟殼對照藥材;樣1（2 μl）;樣1（1 μl）;罌粟殼對照液;樣1（0.5 μl），此時所用的薄層板為青島海洋化工廠生產(chǎn)的1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板，跑板時間為1.5 h，跑板距離為12 cm。

罌粟殼鑒別中，用水飽和正丁醇提取和用三氯甲烷提取都可以出點，但用三氯甲烷提取并不是很好分層，造成分離不徹底的現(xiàn)象，故仍然選用水飽和正丁醇提取，其優(yōu)點為易分層。對供試品提取回收溶劑至干后，分別用分析純級別的甲醇和色譜級甲醇溶解，通過觀察現(xiàn)象發(fā)現(xiàn)，溶解后的供試品易出現(xiàn)結(jié)晶，采取兩種方法進行處理，第一種在結(jié)晶的離心管里去掉大型結(jié)晶，將溶液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，進行稀釋，之后進行點樣。第二種是將離心管中結(jié)晶的供試品溶液直接用針管和濾頭進行過濾，過濾后得到的溶液，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，進行點樣。用提取好的供試品溶液分別在自制薄層板和硅膠G板1%氫氧化鈉板進行點樣比較，發(fā)現(xiàn)自制薄層板不出點，其可能原因為自制薄層板松且板子厚，不易出點。而用硅膠G板進行點樣跑板對比，用分析純級別的甲醇有一個點雖會出現(xiàn)，但非常模糊，且供試品溶液極易析出結(jié)晶。用色譜級甲醇雖會析出結(jié)晶，但結(jié)晶是一大塊，不會被稀釋，薄層板上的斑點更容易出現(xiàn)，用1%的氫氧化鈉板點樣需要在噴了顯色劑之后，等待很長時間才會陸續(xù)出現(xiàn)斑點，且斑點不是特別明顯。

2.3薄荷腦的薄層鑒別

取樣品20 ml，在30～60℃的條件下，用石油醚40 ml強力振搖提?。ǚ謱蝇F(xiàn)象不明顯，可用離心機進行分層），揮干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取薄荷腦對照品4.56 mg，加乙醇4.5 ml制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各10-30 μl，于同一塊硅膠G薄層板上點樣，展開劑為石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（5：1）（25：5），展開晾干后，噴以香草醛硫酸試液-乙醇（1：4）的混合溶液，在100℃烘箱中加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。

圖5中從左到右依次為供試品進樣量10 μl、20 μl、30 μl、薄荷腦對照品溶液（30 μl）、薄荷腦對照品溶液（20 μl）、薄荷腦對照品溶液（10 μl）、樣品（40 μl），由圖7可知，樣品的最佳點樣量為20-30 μl，薄荷腦對照品的最佳點樣量為30 μl，樣品點樣量越多，其主斑點下方尖頭越高。此時所用薄層板為硅膠G板，跑板時間為1.5h，跑板距離為13 cm。圖6中從左到右依次為薄荷腦對照品溶液、供試品溶液，此時所用薄層板為自制薄層板，跑板時間為30 min，跑板距離為12 cm。

薄荷腦鑒別中，薄荷腦對照品溶液點樣量控制在20-30 μl最佳，樣品點樣量控制在10-20 μl即可，跑板子后，在烘箱中加熱3-5 min即可出點明顯。用三種板子都可出點明顯，區(qū)別在于點樣量、跑板時間和在烘箱中烘烤時間的不同。

在進行薄荷腦薄層鑒別提取供試品時，在分層不好分的情況下，建議用離心機離心分層，取上層溶液、移入蒸發(fā)皿中、揮干，用乙醇溶解供試品殘渣時，若溶解出的供試品溶液有一定程度的顏色，則表示提取的很好，若供試品溶液無顏色，在點樣時，需注意增加點樣量，保證斑點可以出現(xiàn)。三種板子都可以使用，但用自制薄層板進行點樣時，需適當(dāng)增加點樣量。通過大量點板子得出，在出現(xiàn)相同程度的清晰斑點的情況下，點樣量為自制薄層板>硅膠G板>煙臺薄層板。

3 結(jié)論

經(jīng)過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進研究，實驗結(jié)果表明用 TLC 法鑒別罌粟殼、枇杷葉和薄荷腦的是可行的。在各自試驗條件下， 供試品色譜、對照品色譜或?qū)φ账幉纳V的色譜特征均較為明顯，斑點清晰，分離度較好，可有效地控制強力枇杷露的內(nèi)在質(zhì)量。

參考文獻

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通訊作者：李勝楠（1992-），女，碩士，山東菏澤人。研究方向：基礎(chǔ)藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究