白毛七乙酸乙酯萃取部位的化學(xué)成分研究

劉 霞，李 靜，李蘊(yùn)哲，劉 倩，李路軍，劉孜翰

(1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061；2.藥物高通量篩選技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程研究中心，武漢 430062；3.甘肅百草中藥材種植有限公司，蘭州 730102)

金粟蘭科(Chloranthaceae)金粟蘭屬(Chloranthus)植物有17種，分布于亞洲的溫帶和熱帶，中國(guó)有13種和5變種，其多種種類(lèi)在民間作為藥用植物，主治跌打損傷和風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛等癥[1-3]。白毛七為金粟蘭科金粟蘭屬多穗金粟蘭(ChloranthusmultistachysPei.)的干燥根及根莖，又名四塊瓦、四大天王、四葉七，是重要的陜西民間七藥之一，具有祛風(fēng)散寒、理氣活血、散瘀解毒等功效，民間主治跌打損傷、腰腿痛等癥?，F(xiàn)代藥理研究表明，白毛七提取物具有抑菌、抗炎、抗腫瘤等活性[4-6]。文獻(xiàn)報(bào)道[7-8]，白毛七的化學(xué)成分多為倍半萜、二萜類(lèi)化合物。為了進(jìn)一步研究白毛七的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)白毛七的化學(xué)成分進(jìn)行研究，從其乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分離鑒定出8個(gè)化合物，其中化合物2～8為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Bruker Avance Ⅲ HD 600 MHz型核磁共振波譜儀(瑞士Bruker公司)；半制備型HPLC色譜儀(美國(guó)Waters公司)；EYELAN-1100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)朗儀器有限公司)；ZF-C型三用紫外分析儀(上海康禾光電儀器有限公司)。

1.2試藥 白毛七藥材，采自陜西省柞水縣，植物標(biāo)本由西安交通大學(xué)牛曉峰教授鑒定為ChloranthusmultistachysPei.，存放于西安交通大學(xué)藥學(xué)院(標(biāo)本證號(hào)20120623)；薄層色譜硅膠(GF254)和柱色譜硅膠(200～300目)，均購(gòu)自青島海洋化工廠；Sephadex LH-20(美國(guó)GE Healthcare公司)；氘代氯仿(CDCl3)、氘代二甲基亞砜(DMSO-d6)，均購(gòu)自杭州歐爾柏維科技有限公司；石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮和正丁醇，均購(gòu)自天津科密歐化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1提取與分離 稱(chēng)取陰干粉碎的白毛七藥材6.5 kg，用乙醇冷浸7 d，提取3次，提取液減壓濃縮得到總浸膏1.2 kg，將總浸膏懸浮于水中，依次用石油醚(60～90 ℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓濃縮并回收溶劑后得到石油醚部分120 g，乙酸乙酯部分150 g，正丁醇部分90 g。

取乙酸乙酯萃取部位經(jīng)硅膠柱色譜(200～300目，1 500 g)分離，以石油醚-乙酸乙酯(40∶1、20∶1、15∶1、10∶1、5∶1、3∶1、1∶1)梯度洗脫，等份接樣，薄層檢測(cè)，合并相同流份，得到7個(gè)組分(Fr.A～Fr.G)。Fr.B部分經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜、反相 HPLC法制備純化得到化合物1(23 mg)和化合物3(33 mg)。Fr.C部分經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用二氯甲烷-丙酮(20∶1)、石油醚-丙酮(15∶1)洗脫，得到化合物2(4 mg)和化合物8(11 mg)。Fr.E部分經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜分離，得到Fr.E1和Fr.E2 2個(gè)部分，F(xiàn)r.E1經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離，得到化合物4(9 mg)和化合物5(4 mg)；Fr.E2經(jīng)硅膠柱色譜分離，石油醚-丙酮(15∶1)洗脫，得到化合物6(14 mg)。Fr.F部分經(jīng)硅膠柱色譜分離、反相HPLC法制備純化得到化合物7(65 mg)。

2.2結(jié)構(gòu)鑒定 化合物1淡黃色粉末狀固體，分子式為C18H18O5。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：7.86(1H，d，J=15.6 Hz，H-α)，7.82(1H，d，J=15.6 Hz，H-β)，7.58(2H，dd，J=1.6，8.4 Hz，H-2，6)，6.94(2H，dd，J=1.6，8.4 Hz，H-3，5)，6.13(1H，d，J=2.4 Hz，H-3′)，6.98(1H，d，J=2.4 Hz，H-5′)，3.94，3.87，3.86(3OCH3，4，4′，6′-OCH3)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：192.7(C，C=O)，125.2(C-α)，142.6(C-β)，128.4(C-1)，130.2(C-2)，114.5(C-3)，161.5 (C-4)，114.5(C-5)，130.2(C-6)，106.5(C-1′)，162.5(C-2′)，93.9 (C-3′)，168.5(C-4′)，91.4(C-5′)，168.1(C-6′)，56.0，55.7，55.5(3OCH3，4，4′，6′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，故鑒定化合物1為2′-羥基-4，4′，6′-三甲氧基查爾酮。

化合物2橙黃色粉末狀固體，分子式為C19H20O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：7.79(1H，d，J=15.6 Hz，H-α)，7.77(1H，d，J=15.6 Hz，H-β)，7.57(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，6.93(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，6.02(1H，s，H-5′)，14.04(1H，s，2′-OH)，3.85(3H，s，4-OCH3)，3.86(3H，s，3′-OCH3)，3.96(6H，s，4′，6′-OCH3)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：193.2(C，C=O)，125.0(C-α)，142.8(C-β)，128.2(C-1)，130.9(C-2)，114.4(C-3)，161.4(C-4)，114.4(C-5)，130.2(C-6)，106.9(C-1′)，158.2(C-2′)，130.9(C-3′)，158.5(C-4′)，87.0(C-5′)，159.4(C-6′)，55.4，56.0，56.1，60.8(4OCH3，4，3′，4′，6′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定化合物2為2′-羥基-4，3′，4′，6′-四甲氧基查爾酮。

化合物3白色針狀結(jié)晶，分子式為C16H14O4。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：3.80(3H，s，7-OCH3)，7.38～7.40(5H，m，H-2′，3′，4′，5′，6′)，6.08(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.05(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，5.40(1H，dd，J=2.8，12.8 Hz，H-2)，3.08(1H，dd，J=12.8，17.2 Hz，H-3a)，2.81(1H，dd，J=2.8，17.2 Hz，H-3b)，12.02(1H，s，5-OH)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：79.3(C-2)，43.5(C-3)，195.9(C-4)，164.3(C-5)，94.4(C-6)，168.1(C-7)，95.2(C-8)，162.9(C-9)，103.3(C-10)，138.5(C-1′)，129.0(C-3′，4′，5′)，126.3(C-2′，6′)，55.8(7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定化合物3為球松素。

化合物4白色針狀結(jié)晶，分子式為C28H44O3。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：3.97(1H，m，H-3)，6.50(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，6.24(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，5.21(1H，dd，J=15.2，7.2 Hz，H-22)，5.13(1H，dd，J=15.2，8.4 Hz，H-23)，0.81(3H，s，H-18)，0.88(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=7.2 Hz，H-21)，0.80(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，1.01(3H，d，J=6.0 Hz，H-28)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：34.7(C-1)，30.1(C-2)，66.5(C-3)，37.0(C-4)，82.2(C-5)，135.4(C-6)，130.8(C-7)，79.4(C-8)，51.1(C-9)，36.9 (C-10)，23.4(C-11)，39.3(C-12)，44.6(C-13)，51.7(C-14)，20.6 (C-15)，28.7(C-16)，56.2 (C-17)，12.9(C-18)，18.2(C-19)，39.8(C-20)，20.9(C-21)，135.2(C-22)，132.3(C-23)，42.8(C-24)，33.1(C-25)，19.6(C-26)，20.0(C-27)，17.6(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物4為5α，8α-環(huán)二氧-(22E，24R)麥角甾-6，22-二烯-3β-醇。

化合物5白色針狀結(jié)晶，分子式為C29H48O2。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：0.68(3H，s，H-18)，1.00(3H，s，H-19)，0.93(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，0.84(3H，d，J=6.6 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，0.85(3H，m，H-29)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：38.1(C-1)，39.4(C-2)，209.2(C-3)，37.0(C-4)，57.5(C-5)，211.3(C-6)，46.5(C-7)，37.4(C-8)，53.5(C-9)，41.3 (C-10)，21.7(C-11)，38.0(C-12)，43.0(C-13)，56.0(C-14)，24.0 (C-15)，28.1(C-16)，56.6 (C-17)，12.6 (C-18)，12.0(C-19)，36.1(C-20)，18.7(C-21)，33.8(C-22)，26.0(C-23)，45.8(C-24)，29.1(C-25)，19.8(C-26)，19.0(C-27)，23.1(C-28)，12.0(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定化合物5為5α-豆甾烷-3，6-二酮。

化合物6白色粉末，分子式為C20H20O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：6.89(1H，s，H-2)，6.85(1H，s，H-3)，6.82(1H，m，H-6)，6.79(1H，s，H-2′)，6.80(1H，s，H-5′)，6.81(1H，s，H-6′)，4.73(2H，d，J=4.4 Hz，H-7，7′)，3.08(2H，m，H-8，8′)，3.87(4H，m，H-9，9′)，3.91(3H，s，3′-OCH3)，5.95(2H，s，-OCH2O-)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：132.9(C-1)，108.2(C-2)，146.7(C-3)，145.2(C-4)，114.2(C-5)，119.0(C-6)，85.9(C-7)，54.2(C-8)，71.7(C-9)，135.1(C-1′)，106.5(C-2′)，148.0(C-3′)，147.1(C-4′)，108.6(C-5′)，119.4(C-6′)，85.9(C-7′)，54.3(C-8′)，71.6(C-9′)，56.0(3′-OCH3)，101.1(-OCH2O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故鑒定化合物6為xanthoxyol。

化合物7白色粉末，分子式為C26H32O11。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：7.04(1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，6.96(1H，s，H-2)，6.89(1H，s，H-2′)，6.85(1H，d，J=7.8 Hz，H-6)，6.75(1H，d，J=7.2 Hz，H-6′)，6.72(1H，d，J=7.2 Hz，H-5′)，4.88(1H，d，J=6.6 Hz，H-1″)，4.66(1H，d，J=3.6 Hz，H-7)，4.61(1H，d，J=3.6 Hz，H-7′)，4.13(2H，dd，J=3.6，7.2 Hz，H-9a，9′a)，3.76(6H，s，3，3′-OCH3)，3.73(2H，m，H-9b，9′b)，3.04(2H，m，H-8，8′)，8.90(1H，s，4′-OH)。13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δC：135.1(C-1)，110.3(C-2)，148.9(C-3)，145.8(C-4)，115.0(C-5)，118.1(C-6)，84.8(C-7)，53.6(C-8)，70.8(C-9)，132.1(C-1′)，110.3(C-2′)，147.4(C-3′)，145.7(C-4′)，115.0(C-5′)，118.5(C-6′)，85.0(C-7′)，53.4(C-8′)，70.9(C-9′)，100.0(C-1″)，73.1(C-2″)，76.7(C-3″)，69.6(C-4″)，76.9(C-5″)，60.6(C-6″)，55.6(3-OCH3)，55.5(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故鑒定化合物7為(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物8淡黃色油狀物，分子式為C19H24O3。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δH：7.34(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，H-6)，6.78(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，H-5)，7.55(1H，d，J=15.6 Hz，H-7)，6.26(1H，d，J=15.6 Hz，H-8)，4.94(1H，m，H-2′)，0.98(1H，m，H-3′a)，2.34(1H，m，H-3′b)，1.60(1H，m，H-4′)，1.72(1H，m，H-5′a)，1.28(1H，m，H-5′b)，1.20(1H，m，H-6′a)，1.98(1H，m，H-6′b)，0.80(3H，s，H-10′)，0.86(3H，s，H-8′)，0.83(3H，s，H-9′)。13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δC：126.2(C-1)，128.9(C-2，6)，114.9(C-3，C-5)，156.8(C-4)，143.2(C-7)，115.0(C-8)，47.9(C-1′)，79.1(C-2′)，35.8(C-3′)，43.9(C-4′)，26.2(C-5′)，27.0(C-6′)，46.8(C-7′)，17.9(C-8′)，17.9(C-9′)，12.5(C-10′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，故鑒定化合物8為望春玉蘭素C。

3 討論

民間藥是我國(guó)寶貴的文明成果，是人民群眾在長(zhǎng)期與疾病斗爭(zhēng)中積累的醫(yī)藥財(cái)富，應(yīng)當(dāng)繼承和發(fā)揚(yáng)[17]。陜西七藥是我國(guó)民間藥的重要組成部分，在陜西大部分地區(qū)廣為流傳，主治多種疾病，療效顯著，具有重要的研究?jī)r(jià)值[18]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)陜西七藥之一白毛七乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離得到8個(gè)化合物，包括3個(gè)黃酮：2′-羥基-4，4′，6′-三甲氧基查爾酮(1)、2′-羥基-4，3′，4′，6′-四甲氧基查爾酮(2)和球松素(3)；2個(gè)甾體：5α，8α-環(huán)二氧-(22E，24R)麥角甾-6，22-二烯-3β-醇(4)和5α-豆甾烷-3，6-二酮(5)；2個(gè)木質(zhì)素：xanthoxyol(6)和(+)-松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)；1個(gè)莰烷型單萜：望春玉蘭素C(8)。其中，化合物2～8為首次從該植物中分離得到。本研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了白毛七化學(xué)成分的多樣性，可為陜西七藥的深入開(kāi)發(fā)利用提供參考。