中華稻蝗免疫反應(yīng)研究

駱 雪 俞偉輝

（岳陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 岳陽(yáng) 414000）

稻蝗是對(duì)直翅目、斑腿蝗科、稻蝗屬昆蟲所有種類的統(tǒng)稱。在我國(guó)分布有無(wú)齒稻蝗、山稻蝗、擬山稻蝗、中華稻蝗、海南稻蝗等14種。一般是出現(xiàn)在多項(xiàng)農(nóng)作物中，分別表現(xiàn)為水稻、玉米、高粱、豆類等，對(duì)農(nóng)作物產(chǎn)生的危害性是非常高的。一般情況下，稻蝗將植物的莖桿咬斷，無(wú)法正常生長(zhǎng)，甚至嚴(yán)重的情況下還會(huì)吃光稻葉。針對(duì)于此種情況，在本篇文章中，結(jié)合稻蝗感染顆粒物、細(xì)菌以及農(nóng)藥等，采取合理的方式重點(diǎn)檢驗(yàn)稻蝗血細(xì)胞形態(tài)以及數(shù)量變化情況，明確血細(xì)胞內(nèi)的參與免疫細(xì)胞類型，科學(xué)合理的評(píng)價(jià)稻蝗體液免疫能力。本文以中華稻蝗的特征體現(xiàn)為主，結(jié)合實(shí)際情況引進(jìn)了合理的方式，得出了基本的實(shí)驗(yàn)結(jié)論。

1 中華稻蝗的特征體現(xiàn)

在1982年提出了有關(guān)于中華稻蝗的分類特征，同時(shí)相關(guān)研究人員對(duì)蝗蟲展開了分類處理，分別表現(xiàn)為昆蟲綱、直翅目以及蝗亞目等。中華稻蝗的組成結(jié)構(gòu)為頭、胸以及腹，顏色呈現(xiàn)出了綠色和黃綠色，對(duì)于齒雌成蟲來(lái)講，和雄性長(zhǎng)蟲相比較來(lái)看自身的長(zhǎng)度是非常長(zhǎng)的，個(gè)頭是非常小的。在胸部三體節(jié)中相互連接到一起，成為一項(xiàng)整體，不過(guò)存在著連接的痕跡，需要明確認(rèn)識(shí)到的一方面是，難以單獨(dú)的進(jìn)行活動(dòng)，腹部的體節(jié)涉及到多個(gè)，其中就屬混合體腔最為明顯。所謂混合體腔，是指稻蝗的體壁和內(nèi)臟之間相互組合形成，被稱之為混合體腔，而在有著諸多血液的情況下叫做血體腔。一般情況下，在長(zhǎng)江流域內(nèi)的稻區(qū)中出現(xiàn)概率極高，其除了對(duì)水稻產(chǎn)生不良影響之外，同時(shí)還直接危害著其他農(nóng)作物。通常來(lái)講，中華稻蝗一年發(fā)生一次，成蟲產(chǎn)卵期間普遍是處于相對(duì)潮濕和向陽(yáng)以及堤岸等領(lǐng)域，在冬季的時(shí)候氣溫處于干燥狀態(tài)，可以為卵化存活提供可能性，秋天的時(shí)候雨水比較少，成蟲產(chǎn)卵的概率非常高。稻蝗每年出現(xiàn)一次，一般是處于五月份的時(shí)候進(jìn)行發(fā)育，五次蛻皮子到七月下旬發(fā)育成成蟲，每一次蛻皮屬于一項(xiàng)齡期，長(zhǎng)江流域以南的區(qū)域出現(xiàn)蝗災(zāi)的現(xiàn)象極為嚴(yán)峻，稻蝗是植食水稻葉，直接威脅著玉米和小麥等方面的正常生長(zhǎng)。

2 采取的方法

2.1 顆粒物感染

其一，顆粒物感染。取出一百只中華稻蝗，首先，認(rèn)真的清理蝗蟲腹部，特別是第一腹結(jié)位置，配置相應(yīng)比例的乙醇，將腹節(jié)處徹底清理干凈，保持整潔性，同時(shí)添加相應(yīng)的溶液，提升溶液的均勻程度，將該項(xiàng)溶液注射到蝗蟲體內(nèi)，注射以后的4h、8h、12h以及24h進(jìn)行取血，每一次取二十只稻蝗的血，檢驗(yàn)酶活。

其二，受細(xì)菌方面感染因素的影響，針對(duì)于細(xì)菌感染情況，要想有效治理，就需要有效的對(duì)濃度加以制備，添加細(xì)菌溶液，以100只中華稻蝗成蟲為主，和以上流程是一樣的，也是全面處理蝗蟲的腹節(jié)位置，采取合理比例的乙醇對(duì)腹結(jié)位置的雜物進(jìn)行清除干凈，添加相關(guān)的溶液，注射于蝗蟲腹節(jié)處。注射以后的4h、8h、12h以及24h進(jìn)行取血，每一次取二十只稻蝗的血，檢驗(yàn)酶活。該項(xiàng)操作流程和顆粒物感染是一樣的。

其三，農(nóng)藥感染。結(jié)合濃度實(shí)際情況將100只中華稻蝗成蟲取出，對(duì)蝗蟲的腹節(jié)處進(jìn)行清洗，清洗的方式為清水，具體流程和以上相同。

2.2 制備和觀察光學(xué)顯微鏡樣品

當(dāng)注射了外源物4h、8h、24h、48h以后，需要將中華稻蝗成蟲取出，數(shù)量為20只，其次，采取清水的方式將稻蝗的腹部以及胸部徹底清理干凈，定期對(duì)稻蝗內(nèi)部實(shí)施相關(guān)的消毒作業(yè)，扎破稻蝗的胸部以及腹部，從中將血液取出，滴入載玻片內(nèi)，涂片處理，將剩下的稻蝗血壓放置在PC管內(nèi)，檢驗(yàn)酶活，等到載玻片內(nèi)的血膜徹底干燥以后，采取染液進(jìn)行染色處理，完成染色工作以后，洗凈干載玻片，進(jìn)行封片處理。最后采取光學(xué)顯微鏡的方式加以檢驗(yàn)。

2.3 酶活檢測(cè)方式

在處理樣品期間，需要提前取出從冰箱內(nèi)存放稻蝗血液的PC管，使血液處于融化的狀態(tài)，然后在低溫冷凍離心機(jī)中加以處理，達(dá)到離心的目的，放置上清液，為后期留做備用。

2.4 處理圖片以及分析數(shù)據(jù)

在實(shí)際實(shí)驗(yàn)開展過(guò)程中，需要采取統(tǒng)計(jì)學(xué)的方式獲取準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的完善性，動(dòng)態(tài)性的實(shí)施差異顯著性，分析開展差異性檢驗(yàn)工作。

3 基本的實(shí)驗(yàn)結(jié)論

3.1 當(dāng)中華稻蝗感染了外源物以后血細(xì)胞呈現(xiàn)出了變化狀態(tài)

當(dāng)前階段，通過(guò)相關(guān)分析來(lái)看，采取顯微鏡的方式認(rèn)識(shí)到了中華稻蝗血細(xì)胞涉及到了諸多方面，類型多種多樣，具體表現(xiàn)為原細(xì)胞漿血包等多種類型，當(dāng)受到了外源物的感染之后，稻蝗血細(xì)胞將會(huì)呈現(xiàn)出一系列的轉(zhuǎn)變狀態(tài)，具體情況如下所示。

其一，呈現(xiàn)出空泡化狀態(tài)。通常來(lái)講，細(xì)胞中普遍存在著空泡現(xiàn)象，對(duì)于有的細(xì)胞來(lái)講，將會(huì)形成諸多透明的大面積空泡，逐漸的對(duì)細(xì)胞核造成擠壓。而有的細(xì)胞也會(huì)隨之分離，形成諸多的空泡現(xiàn)象，這些空泡的數(shù)量隨之增加。

其二，粒細(xì)胞脫粒情況。對(duì)于粒細(xì)胞內(nèi)的顆粒物來(lái)講，通常是從細(xì)胞質(zhì)內(nèi)留出，彌散于細(xì)胞周圍，細(xì)胞核將會(huì)增加溶血現(xiàn)象出現(xiàn)概率。

其三，細(xì)胞核出現(xiàn)了變形情況。正常細(xì)胞的細(xì)胞核變巖有著光滑性特征，除了處于蠕形狀態(tài)下的細(xì)胞形狀為梭形以外，其他的細(xì)胞核表現(xiàn)為圓形狀態(tài)。當(dāng)外源物對(duì)細(xì)胞核產(chǎn)生感染以后，細(xì)胞核出現(xiàn)了嚴(yán)重的變形現(xiàn)象，周圍邊緣不再呈現(xiàn)出光滑性特征，逐漸發(fā)生了凹凸不平的情況，自身形狀變化規(guī)則性缺失，甚至還會(huì)移動(dòng)到細(xì)胞一側(cè)。

其四，產(chǎn)生了凋亡小體。通常表現(xiàn)為漿血胞內(nèi)，漿血胞內(nèi)的細(xì)胞核逐漸形成了逐個(gè)小圓球，在相關(guān)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，將從細(xì)胞質(zhì)內(nèi)逐漸分離。

3.2 當(dāng)中華稻蝗感染了外源物以后血細(xì)胞出現(xiàn)了吞噬和包囊等情況

第一，蝗蟲的血細(xì)胞呈現(xiàn)出了免疫現(xiàn)象。當(dāng)感染了C粉以后，清楚的了解到參與吞噬的細(xì)胞類型是漿血包，在4h的情況下發(fā)現(xiàn)了漿血包逐漸吞噬了C粉顆粒，同時(shí)伴隨著包囊出現(xiàn)，經(jīng)過(guò)了12h以后，了解到了吞噬C粉顆粒的漿血包慢慢的縮小，血細(xì)胞中包含的胞囊和結(jié)節(jié)也隨之消失。C粉以及Fe粉和Si粉三者有著相似性特征，只不過(guò)結(jié)節(jié)和包囊出現(xiàn)以及消失的時(shí)間不一樣。

第二，在受到了農(nóng)藥影響以后，漿血細(xì)胞發(fā)生了變化，日益固縮，經(jīng)過(guò)固縮狀態(tài)下的漿血包顏色較黑。而處于正常狀態(tài)下的漿血包因?yàn)榘斯炭s的漿血包，所以形成了結(jié)節(jié)以及包囊。

第三，感染大腸桿菌以后蝗蟲血細(xì)胞的免疫情況。從稻蝗漿血胞以及粒血胞實(shí)際情況來(lái)看，這兩方面具備相同的效果，都可以將大腸桿菌徹底吞噬，當(dāng)大腸桿菌進(jìn)入了漿細(xì)胞內(nèi)，并不會(huì)發(fā)生不良的破裂情況，經(jīng)過(guò)4h以后，漿血胞子能夠吞噬大腸桿菌，在形成結(jié)節(jié)和包囊的基礎(chǔ)上產(chǎn)生了漿血胞和粒血胞。8h以后，稻蝗血細(xì)胞內(nèi)的結(jié)節(jié)以及包囊隨之消除。12h以后，大腸桿菌被消化，呈現(xiàn)出了圓形。

第四，當(dāng)感染了枯草芽孢桿菌之后蝗蟲血細(xì)胞受到的相關(guān)影響以及產(chǎn)生的一系列反應(yīng)。從稻蝗免疫枯草芽孢桿菌實(shí)際情況來(lái)看，包含的環(huán)節(jié)是非常多的，具體表現(xiàn)為三方面。分別是吞噬、附著以及消化。通過(guò)分析來(lái)看，血細(xì)胞內(nèi)芽孢桿菌的菌體消化流程是。首先，在初期推入階段中，菌體顏色發(fā)生了變化，逐漸為深藍(lán)色，菌體狀態(tài)也發(fā)生了改變，朝著小型狀態(tài)發(fā)展，或者是轉(zhuǎn)變?yōu)榱似渌愋偷臓顟B(tài)。即便發(fā)生了變化也可以處于染色狀態(tài)。當(dāng)枯草芽孢桿菌周圍生存環(huán)境不符合要求的情況下，將會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的保護(hù)結(jié)構(gòu)芽孢，無(wú)論是在稻蝗的體內(nèi)還是血細(xì)胞期間都會(huì)增加芽孢出現(xiàn)的概率。其次，血細(xì)胞中芽胞逐漸消化方面如下所示，當(dāng)從菌體中形成了芽孢以后，可以發(fā)現(xiàn)芽孢處于無(wú)法染色的狀態(tài)，不過(guò)需要注意的一方面是，菌體可以染上色，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間以后，菌體隨之消失，不過(guò)無(wú)法染上色的芽孢并不會(huì)消失，對(duì)于該項(xiàng)芽孢來(lái)講，體積慢慢的縮小，隨后消失，與此同時(shí)，在稻蝗血液內(nèi)包含的芽孢也處于消化狀態(tài)。通過(guò)檢查體液來(lái)看，可以查看到染不上色的芽孢。

第五，當(dāng)感染了金黃色葡萄球菌之后蝗蟲血細(xì)胞形成了一系列反應(yīng)。在感染了金黃色葡萄球菌之后，稻蝗血細(xì)胞免疫呈現(xiàn)出了吞噬和消化狀態(tài)，從實(shí)質(zhì)情況來(lái)看，血細(xì)胞形態(tài)變化其實(shí)和大腸桿菌浸泡環(huán)節(jié)是一致的，主要表現(xiàn)為形成血細(xì)胞結(jié)節(jié)和包囊的現(xiàn)象，并且還表現(xiàn)為處于細(xì)胞中細(xì)菌慢慢的消失。

3.3 中華稻蝗血淋巴中P450和CES的活性變化情況探究

其一，感染顆粒物以后中華稻蝗血淋巴內(nèi)P450的活性變化。結(jié)合稻蝗血淋巴中P450酶活性變化可以看出，C粉在4h時(shí)P450活性明顯低于溶劑對(duì)照組（P<0.05），在12h和24h時(shí)P450的活性則是遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于溶劑對(duì)照組（P<0.01），和空白對(duì)照組相互比較分析，P450活性在4h-24h的情況下逐漸升高（P<0.01）。自從感染Fe粉后以后的P450活性和溶劑對(duì)照組間并沒(méi)有十分明顯的差異性（P>0.05）。

其二，感染細(xì)菌后中華稻蝗血淋巴中P450的活性變化。在感染大腸桿菌后，血淋巴中P450的活性在4h和24h時(shí)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于溶劑對(duì)照組（P<0.05），在48h時(shí)低于溶劑對(duì)照組（P<0.01）。其次，在4h和8h的情況下顯著高出了空白對(duì)照組（P<0.05），在2h和48h中明顯高于空白對(duì)照組（P<0.01）。當(dāng)感染了枯草芽孢桿菌后，稻蝗血淋巴內(nèi)包含的P450活性處于24h時(shí)有效低于溶劑對(duì)照組（P<0.05），

4 結(jié)語(yǔ)

以上所述，結(jié)合中華稻蝗特征進(jìn)行了分析，從而獲取了準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，了解了差異之處。