免疫組織化學(xué)及特殊染色技術(shù)在法醫(yī)損傷病理學(xué)鑒定中的應(yīng)用

陳學(xué)士，褚俊，楊利軍，王濤，陶陸陽(yáng)

1.蘇州大學(xué)法醫(yī)學(xué)系（司法鑒定中心），江蘇 蘇州 215021；2.蘇州市公安局刑事警察支隊(duì)，江蘇 蘇州215131

常規(guī)組織病理學(xué)技術(shù)如甲醛溶液固定組織、石蠟切片制備、蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色在法醫(yī)病理學(xué)診斷中發(fā)揮了重要作用。然而在法醫(yī)損傷病理學(xué)鑒定實(shí)踐中[1-3]，常遇到損傷時(shí)間推斷、損傷并發(fā)癥鑒定等疑難問(wèn)題。損傷時(shí)間推斷主要包括生前傷與死后傷鑒別、皮膚損傷時(shí)間推斷、外傷性遲發(fā)性脾破裂（traumatic delayed rupture of spleen，TDRS）損傷時(shí)間推斷、血栓形成時(shí)間推斷、創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury，TBI）及硬腦膜下血腫（subdural hematoma，SDH）形成時(shí)間推斷等，損傷并發(fā)癥主要包括脂肪栓塞、擠壓綜合征及骨筋膜室綜合征的診斷等。免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）及特殊染色技術(shù)有助于解決上述問(wèn)題。由于IHC 和特殊染色技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、不需要昂貴儀器、可同時(shí)檢測(cè)多種指標(biāo)等優(yōu)勢(shì)，在法醫(yī)損傷病理學(xué)實(shí)踐中得到了廣泛應(yīng)用。本文綜述IHC 和特殊染色技術(shù)在法醫(yī)損傷病理學(xué)實(shí)踐檢案中損傷時(shí)間推斷和損傷并發(fā)癥鑒定的應(yīng)用和價(jià)值，以期為法醫(yī)工作者提供參考。

1 損傷時(shí)間推斷

損傷時(shí)間包括人體死亡前形成的損傷和活體上損傷所經(jīng)歷的時(shí)間[2]，法醫(yī)病理學(xué)中的損傷時(shí)間是指從受傷到死亡經(jīng)歷的時(shí)間，對(duì)損傷時(shí)間進(jìn)行推斷和認(rèn)定是判斷損傷與死亡關(guān)聯(lián)性的前提。損傷時(shí)間推斷的首要任務(wù)是鑒別生前傷與死后傷，進(jìn)一步推斷傷后存活時(shí)間。生活反應(yīng)是損傷局部及全身皆可出現(xiàn)的防衛(wèi)反應(yīng)，是確定生前損傷及推斷損傷后存活時(shí)間的基礎(chǔ)，可通過(guò)肉眼觀察和組織病理學(xué)技術(shù)檢測(cè)[1]。

1.1 生前傷與死后傷鑒別

生前傷是活體受暴力作用造成的損傷，死后傷是死后受暴力作用造成的損傷，鑒別生前傷與死后傷的意義在于判斷死者真正的致死因素[1]。生前傷與死后傷的鑒別主要基于生活反應(yīng)，如肉眼觀察到的出血、組織收縮、腫脹、痂皮形成、創(chuàng)口感染、異物移動(dòng)等，以及組織病理學(xué)變化，如血栓栓塞形成、炎癥反應(yīng)及損傷愈合等[1]。早在20 世紀(jì)60 年代初，RAEKALLIO[4]通過(guò)酶組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)人體皮膚切創(chuàng)中心區(qū)和周邊區(qū)酶活性變化對(duì)生前傷與死后傷進(jìn)行鑒別。國(guó)內(nèi)法醫(yī)學(xué)者亦通過(guò)特殊染色技術(shù)對(duì)生前傷與死后傷的鑒別進(jìn)行了一系列研究：盧慶林[5]對(duì)人體生前與死后皮膚切創(chuàng)進(jìn)行Hart 氏改良彈力纖維染色，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是不同時(shí)間的生前傷還是不同時(shí)間的死后傷，其真皮中彈力纖維均具有相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，如呈波浪狀、網(wǎng)狀、點(diǎn)狀及點(diǎn)片狀，因此，無(wú)法依據(jù)真皮中彈力纖維形態(tài)學(xué)變化鑒別生前與死后皮膚切創(chuàng)。李真等[6]對(duì)生前縊死、勒死13 例和死后懸尸5 例索溝處皮膚組織進(jìn)行彈力纖維染色，發(fā)現(xiàn)生前索溝處皮膚彈力纖維因收縮而變得粗細(xì)不均，斷端呈多形性改變，如卷曲、膨大、分叉或呈蝌蚪狀、球拍狀；死后索溝處皮膚彈力纖維粗細(xì)相差不懸殊，斷端多整齊、平直。因此，應(yīng)用彈力纖維染色有助于鑒別生前和死后索溝。趙樞泉等[7]報(bào)道，即使對(duì)水中腐敗尸體的鑒定，仍可通過(guò)緒方氏染色法鑒別頸部和踝部索溝處皮膚組織的生活反應(yīng)能力。牛文有等[8]報(bào)道了一種改良Poley’s 酸性復(fù)紅-甲基綠染色法在鑒別生前與死后索溝時(shí)，比Mallory’s三色法和緒方氏染色法效果更好，尤其是高度腐敗尸體，其鑒別能力更好。而IHC 染色與特殊染色技術(shù)聯(lián)合使用在鑒別生前傷與死后傷方面更具優(yōu)勢(shì)。國(guó)外有學(xué)者[9]報(bào)道了1 例被發(fā)現(xiàn)死于垃圾運(yùn)輸車內(nèi)的流浪漢，為鑒別死者的真正死因，法醫(yī)病理學(xué)家提取多處損傷頭皮組織進(jìn)行HE、Van Gieson（VG）及分化群（clusters of differentiation，CD）15 染色，盡管在損傷區(qū)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)纖維素滲出和中性粒細(xì)胞聚集，但發(fā)現(xiàn)P-選擇素在損傷區(qū)小血管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)膜上呈中度表達(dá)，E-選擇素?zé)o表達(dá)。VAN DER LAAN 等[10]發(fā)現(xiàn)，P-選擇素在生理?xiàng)l件下表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞桿狀細(xì)胞器Weibel-Palade小體膜上，在外傷或感染等條件下受組胺及凝血酶等刺激，迅速轉(zhuǎn)移表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)膜上（1～2 min開(kāi)始表達(dá)、10～15 min 達(dá)峰值，2～4 h 逐漸消失），并招募中性粒細(xì)胞聚集；而E-選擇素僅在外傷或受白介素（interleukin，IL）-1、腫瘤壞死因子-α 或脂多糖刺激后1～2 h 開(kāi)始合成、4～6 h 達(dá)峰值，并于8～10 h 完全消失。

1.2 皮膚損傷時(shí)間推斷

皮膚損傷愈合是一個(gè)復(fù)雜、規(guī)律的過(guò)程，包括炎癥期、增殖期和重塑期[11]，應(yīng)用IHC 染色技術(shù)檢測(cè)上述過(guò)程中的生物活性物質(zhì)，如膠原蛋白、炎癥因子、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等時(shí)程性表達(dá)，可用于皮膚損傷時(shí)間推斷[12]。在20 世紀(jì)80 年代，EISENMENGER 等[13]應(yīng)用IHC 染色技術(shù)檢測(cè)損傷區(qū)及周邊區(qū)皮膚組織不同類型膠原纖維的表達(dá)，用于皮膚損傷時(shí)間推斷。國(guó)內(nèi)法醫(yī)學(xué)者亦采用IHC 染色技術(shù)在人體皮膚損傷時(shí)間推斷方面進(jìn)行了系列研究。王慧君等[14]收集15 例交通事故傷和刀刺傷人體皮膚標(biāo)本，IHC 染色發(fā)現(xiàn)，損傷皮膚組織中均表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，并總結(jié)前人研究成果[15]，提出多種細(xì)胞因子聯(lián)合檢測(cè)有助于人體皮膚損傷早期時(shí)間推斷。官大威等[16]收集了52 例刺、切創(chuàng)人體皮膚標(biāo)本，經(jīng)IHC 染色發(fā)現(xiàn)損傷區(qū)皮膚組織中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中均表達(dá)IL-8，且具有時(shí)程性變化規(guī)律，因此，IL-8 可作為人體皮膚損傷時(shí)間推斷的候選指標(biāo)。劉寧國(guó)等[17]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，成功研制出纖維連接蛋白-EIIIA 金標(biāo)單克隆抗體試紙條，并初步應(yīng)用于人體皮膚損傷時(shí)間推斷。KONDO[12]總結(jié)了皮膚損傷時(shí)間推斷的研究成果，認(rèn)為參與皮膚損傷愈合過(guò)程的各類生物活性物質(zhì)如膠原蛋白、纖維蛋白、黏附分子、炎癥因子、趨化因子、血管生成因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、應(yīng)激蛋白、細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白、類花生酸類物質(zhì)等都可能成為皮膚損傷時(shí)間推斷的候選指標(biāo)，并建議利用IHC 染色技術(shù)系統(tǒng)研究多種類型細(xì)胞及多指標(biāo)時(shí)程性變化規(guī)律用于人體皮膚損傷時(shí)間推斷。

1.3 TDRS 損傷時(shí)間推斷

TDRS 系脾中央型破裂和包膜下破裂發(fā)展而形成的真性破裂，常在傷后有一段較長(zhǎng)時(shí)間的無(wú)典型癥狀和體征的“間歇”期，因此，TDRS 損傷時(shí)間推斷是確定脾破裂與外傷之間因果關(guān)系的關(guān)鍵依據(jù)[1]。萬(wàn)陽(yáng)等[18]對(duì)118 例人體外傷性脾破裂標(biāo)本進(jìn)行IHC 染色，檢測(cè)損傷中央?yún)^(qū)及周邊區(qū)髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、CD68 和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)傷后5 d 內(nèi)均有MPO 表達(dá)且于傷后12～24 h 達(dá)高峰，傷后6～14 d 均有CD68 表達(dá)且于傷后5～7 d 達(dá)高峰，傷后1～14 d 均有α-SMA 表達(dá)且于傷后14 d 達(dá)高峰。因此，采用多指標(biāo)IHC 染色并結(jié)合脾破裂組織病理學(xué)變化有助于人脾破裂損傷時(shí)間的精確推斷。國(guó)外有學(xué)者收集了80例鈍性脾破裂人體標(biāo)本[19]，根據(jù)損傷周圍組織纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）、CD61 及CD68 的IHC 染色結(jié)果，將外傷性脾破裂劃分為傷后1～3 d、4～10 d、11～16 d 和17～30 d 4 個(gè)時(shí)間階段，用于外傷性脾破裂損傷時(shí)間推斷。張富源等[20]在1 例TDRS 損傷時(shí)間推斷的案例中，聯(lián)合運(yùn)用HE、Mallory 及IHC 染色技術(shù)，發(fā)現(xiàn)Mallory 染色較HE 染色可更清晰地觀察到紫色條索狀纖維素樣物（新鮮出血區(qū)）與藍(lán)染膠原纖維（陳舊出血區(qū)），且陳舊出血區(qū)較新鮮出血區(qū)可表達(dá)更多的α-SMA，從而確定同時(shí)存在急性（12～24 h）與遲發(fā)性（8～14 d）脾破裂，為TDRS 損傷時(shí)間推斷的精準(zhǔn)鑒定提供了病理學(xué)依據(jù)。

1.4 血栓形成時(shí)間推斷

在鑒定損傷后因肺動(dòng)脈血栓栓塞癥（pulmonary thromboembolism，PTE）死亡的案例中[21]，法醫(yī)病理學(xué)家需要研究血栓栓子的形成時(shí)間，從而分析損傷與血栓栓塞發(fā)生之間的時(shí)間順序，進(jìn)而分析損傷與死亡之間的因果關(guān)系。FINESCHI 等[22]對(duì)140 例PTE 死亡案例進(jìn)行回顧性研究，經(jīng)對(duì)血栓組織切片進(jìn)行HE、Masson、磷鎢酸蘇木精（phosphotungstic acid-hematoxylin,PATH）、VG、Von Kossa 和Perl’s 等染色，以 及FIB、CD61、CD45、CD15、CD68 等IHC 染色，將血栓形成時(shí)間劃分為3 個(gè)階段，即傷后1～7 d、2～8 周和2 個(gè)月以上，并在后期收集的43 例PTE 死亡案例中得到了進(jìn)一步驗(yàn)證[23]。國(guó)內(nèi)法醫(yī)學(xué)者[24]亦應(yīng)用上述3 階段分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)23 例PTE 死亡案例分析，發(fā)現(xiàn)血栓形成時(shí)間與外傷發(fā)生時(shí)間基本一致。王林林等[21]總結(jié)前人對(duì)血栓形成時(shí)間推斷的研究成果并收集了相關(guān)法醫(yī)學(xué)實(shí)踐案例，結(jié)合IHC 和特殊染色結(jié)果，建議將血栓形成時(shí)間劃分為5階段，即傷后1～3 d、4～7 d、2～4周、5周～2 個(gè)月和2 個(gè)月以上，以利于血栓形成時(shí)間的精準(zhǔn)推斷。

1.5 TBI 及SDH形成時(shí)間推斷

TBI 后損傷時(shí)間推斷是法醫(yī)損傷病理學(xué)研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)[1]。筆者前期收集了TBI 人體標(biāo)本[25-26]，經(jīng)IHC 染色發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)纖維酸性蛋白、增殖細(xì)胞核抗原及可溶性蛋白100 均呈單峰表達(dá)，且上述指標(biāo)的聯(lián)合使用有助于TBI 后損傷時(shí)間的推斷。HAUSMANN 等[27]收集104 例人體TBI 標(biāo)本，對(duì)波形蛋白、肌腱蛋白及α-抗胰蛋白酶進(jìn)行IHC 染色，并應(yīng)用于TBI 后損傷時(shí)間推斷。周亦武等[28-30]研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白70、神經(jīng)絲蛋白200 及細(xì)胞周期素D1 于TBI 后呈時(shí)程性變化表達(dá)，推測(cè)上述指標(biāo)可作為TBI 后損傷時(shí)間推斷的參考指標(biāo)。此外，眾多學(xué)者對(duì)TBI 后細(xì)胞凋亡進(jìn)行了系列研究[31-33]，并用于TBI 后損傷時(shí)間的推斷。郭相伸等[34]通過(guò)免疫熒光雙重染色技術(shù)發(fā)現(xiàn)TBI 后核因子E2 相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid derived 2-like 2，Nrf2）在神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中均呈單峰表達(dá)，推測(cè)Nrf2 在多種類型神經(jīng)細(xì)胞的時(shí)程性表達(dá)有望為TBI 后損傷時(shí)間推斷提供新的參考指標(biāo)。

SDH 多由外傷造成，分急性（3 d 以內(nèi)）、亞急性（3 d～3 周）及慢性（3 周以上），其中非急性（亞急性和慢性）SDH 常在傷后一段時(shí)間才出現(xiàn)臨床癥狀，因此判斷非急性SDH 與外傷之間的因果關(guān)系是法醫(yī)學(xué)鑒定的難點(diǎn)[1]。VAN DEN BOS 等[35]在總結(jié)前人研究成果的基礎(chǔ)上，擴(kuò)大SDH 樣本量，聯(lián)合使用HE、IHC 及特殊染色技術(shù)，總結(jié)SDH 后24 h 到1 年的組織病理學(xué)變化特點(diǎn)，以期對(duì)SDH 形成時(shí)間進(jìn)行精準(zhǔn)推斷。

2 損傷并發(fā)癥鑒定

損傷并發(fā)癥[1]是指機(jī)體在原發(fā)性外傷的轉(zhuǎn)歸過(guò)程中發(fā)生的與原發(fā)性外傷之間存在直接因果關(guān)系的不良后果，其中脂肪栓塞、擠壓綜合征和骨筋膜室綜合征的鑒別與診斷可以通過(guò)IHC 和特殊染色進(jìn)行輔助診斷。

2.1 脂肪栓塞

脂肪栓塞分為創(chuàng)傷性和非創(chuàng)傷性。創(chuàng)傷性脂肪栓塞[1，36-37]常見(jiàn)于嚴(yán)重外傷（如長(zhǎng)骨骨折）、脂肪組織豐富的軟組織嚴(yán)重挫傷、大面積燒傷等，傷后短時(shí)間內(nèi)肺、腦、心等多器官微血管內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴并堵塞管腔，嚴(yán)重時(shí)可因脂肪栓塞綜合征（fat embolism syndrome，F(xiàn)ES）死亡。在常規(guī)HE 染色切片制作過(guò)程中，因脂肪栓子被有機(jī)溶劑溶解，顯微鏡下肺組織細(xì)小動(dòng)脈管腔內(nèi)可見(jiàn)大小不等的空泡，尤其是肺泡壁毛細(xì)血管呈串珠樣改變，但HE 染色無(wú)法明確血管內(nèi)空泡的性質(zhì)。因此，對(duì)懷疑因脂肪栓塞導(dǎo)致死亡的案件進(jìn)行鑒定時(shí)，應(yīng)提取肺、腦、心等組織制作冰凍切片，進(jìn)行蘇丹Ⅲ、油紅O 及猩紅染色，當(dāng)在血管內(nèi)發(fā)現(xiàn)亮橙黃色至紅色小球，可為脂肪栓塞鑒定提供直接證據(jù)[1，38]。周蘭等[38]利用油紅O 染色對(duì)20 例因FES 死亡的案例進(jìn)行回顧性研究時(shí)，發(fā)現(xiàn)18 例為單純肺脂肪栓塞、2 例為肺脂肪栓塞合并腦脂肪栓塞。葉光華等[39]報(bào)道1 例因隆胸手術(shù)并發(fā)FES 死亡的案例，死者生前曾通過(guò)抽吸臀部皮下脂肪顆粒注射到乳房皮下組織內(nèi)，HE 染色在死者肺動(dòng)脈細(xì)小分支內(nèi)觀察到大量空泡，蘇丹Ⅲ染色證實(shí)為脂肪栓子，進(jìn)一步檢查發(fā)現(xiàn)死者左側(cè)乳房針孔附近小靜脈破裂伴周圍大量游離脂肪顆粒形成，從而證明了死因與隆胸手術(shù)之間的關(guān)系。

2.2 擠壓綜合征和骨筋膜室綜合征

擠壓綜合征是指人體軀干、四肢等肌肉豐富的部位遭受嚴(yán)重?cái)D壓解除后，全身微循環(huán)障礙，腎小球?yàn)V過(guò)率降低，腎小管受阻、變性、壞死，出現(xiàn)以肌紅蛋白尿和急性腎衰竭為主要特征的臨床綜合征[1]，法醫(yī)學(xué)鑒定主要依據(jù)原發(fā)性軟組織損傷及腎組織特征性組織病理學(xué)檢驗(yàn)所見(jiàn)。HE 染色發(fā)現(xiàn)腎小管蛋白管型，IHC 染色證明為肌紅蛋白（myoglobin，Mb），可作為診斷擠壓綜合征的直接證據(jù)[1]。高彩榮等[40]對(duì)15 例確診為擠壓綜合征死亡的案例進(jìn)行回顧性研究，發(fā)現(xiàn)所有死亡均發(fā)生于傷后36 h～6 d，HE 染色均觀察到腎小管壞死及蛋白管型，IHC 染色證明其中13 例有腎小管Mb 管型。

骨筋膜室綜合征（osteofascial compartment syndrome，OCS）常并發(fā)于擠壓傷、藥物濫用、手術(shù)固定不當(dāng)、低位墜落，甚至蛇咬傷等引起的橫紋肌溶解綜合征[41-42]，亦可引起肌紅蛋白尿和急性腎衰竭，甚至死亡。王濤等[42]曾報(bào)道1 例成年男性從0.8 m 高工作臺(tái)上墜落致其右下肢疼痛并于4 d 后死亡的案例，尸體檢驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)其右下肢骨骼肌及軟組織廣泛腫脹、呈紫黑色伴大量血性液體滲出，HE 染色觀察到肌肉廣泛壞死伴大量中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量均質(zhì)蛋白管型，IHC 染色證明為Mb 管型，且死后血液中尿素氮和肌酐呈數(shù)倍升高，從而鑒定死者符合低位墜落致右下肢OCS 引起代謝功能紊亂并發(fā)急性腎功能衰竭死亡。

3 蛇咬傷和胰島素他殺鑒定

IHC 染色技術(shù)還常用于蛇咬傷、胰島素他殺案件的法醫(yī)學(xué)鑒定。蛇毒的毒性成分主要是具有酶活性的蛋白質(zhì)和多肽，且不同種類的蛇毒毒性成分的抗原特異性不同[43]，因此，可利用IHC 染色技術(shù)對(duì)蛇毒中毒及毒蛇種類進(jìn)行鑒別。趙樞泉等[44]報(bào)道了1 例老年女性在睡眠中被蛇咬傷，2 d 后死亡的案例。尸體檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)死者右外踝有3 處疑似毒蛇牙痕的點(diǎn)狀出血伴周圍軟組織腫脹，HE 染色提示皮下膠原組織及肌肉凝固性壞死、出血并伴有以中性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，IHC 染色發(fā)現(xiàn)上述損傷區(qū)蝮蛇蛇毒蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)，從而認(rèn)定死者系蝮蛇咬傷中毒死亡。胰島素過(guò)量使用可引起低血糖昏迷、休克甚至死亡，而利用胰島素進(jìn)行謀殺常因注射部位隱蔽或尸體高度腐敗使案件偵破處于困境。有研究[45]表明，利用IHC染色技術(shù)在疑似注射針痕周圍皮膚組織中檢測(cè)到胰島素或胰島素佐劑如魚精蛋白，可作為胰島素注射死亡的關(guān)鍵證據(jù)。楊怡等[45]報(bào)道1 例水中尸體死因鑒別的案例，在死者左上臂及左手背發(fā)現(xiàn)兩處疑似出血點(diǎn)，經(jīng)IHC 染色發(fā)現(xiàn)出血部位皮下軟組織中含有胰島素及魚精蛋白成分，綜合案情認(rèn)定死者系胰島素他殺后拋尸入水。

4 不足與展望

IHC 及特殊染色技術(shù)在法醫(yī)損傷病理學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用廣泛，并起到了越來(lái)越重要的作用。然而，IHC 和特殊染色技術(shù)在法醫(yī)損傷病理學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)用還存在以下不足：（1）大多數(shù)特殊染色技術(shù)的染色機(jī)制尚不明確，染色劑與組織細(xì)胞之間可能是物理性結(jié)合，也可能是化學(xué)性結(jié)合，在一定程度上影響了特殊染色技術(shù)的應(yīng)用及發(fā)展；（2）對(duì)于IHC 染色技術(shù)，抗原成分的破壞或抗體的非特異性結(jié)合都會(huì)影響染色結(jié)果，從而造成假陰性或假陽(yáng)性的判斷；（3）本文綜述的研究成果多為回顧性研究和案例報(bào)道，尤其是在損傷時(shí)間推斷方面，其影響因素較多，如個(gè)體差異（年齡、性別、疾?。p傷后治療、死后變化等，缺乏系統(tǒng)性的評(píng)價(jià)，影響損傷時(shí)間推斷結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。

隨著組織病理學(xué)技術(shù)的發(fā)展，全自動(dòng)IHC 和特殊染色機(jī)在組織病理學(xué)檢驗(yàn)中逐漸普及，與傳統(tǒng)的人工染色相比，全自動(dòng)染色機(jī)具有良好而穩(wěn)定的染色結(jié)果、自動(dòng)高效的工作流程，因此更具優(yōu)勢(shì)，值得推廣。在此基礎(chǔ)上，建議采用多指標(biāo)、多細(xì)胞類型、人工智能、優(yōu)化的統(tǒng)計(jì)方法，以及聯(lián)合應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)、組學(xué)技術(shù)、光譜學(xué)和（或）質(zhì)譜學(xué)成像技術(shù)等[2]，以利于IHC 和特殊染色技術(shù)在法醫(yī)損傷病理學(xué)實(shí)踐中的精準(zhǔn)應(yīng)用。