340例雙耳重度極重度非綜合征型聾患兒常見耳聾基因篩查結(jié)果分析

劉海燕 陳亞秋 黃永望 丁怡冰 王洪月 劉爽 肖彩霞

先天性聽力障礙是常見的出生缺陷之一，據(jù)文獻(xiàn)報道，60%～70%的聽力障礙與遺傳因素有關(guān)，而基因突變是導(dǎo)致遺傳性聾的重要原因[1～3]。研究表明，耳聾致病基因突變具有較高的異質(zhì)性，非綜合征型聾主要由少數(shù)幾個熱點(diǎn)基因的突變引起，這使得基因篩查得到極大關(guān)注[4,5]。中國人群的熱點(diǎn)耳聾基因包括GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體DNA12SrRNA等。因此，本研究擬通過對340例雙耳重度極重度非綜合癥型聾患兒4個常見耳聾基因20個位點(diǎn)進(jìn)行篩查，探討雙耳重度極重度聽力損失的病因，為患兒及其家庭成員遺傳咨詢和指導(dǎo)、防聾治聾提供參考。

1 資料與方法

1.1研究對象 選擇2013年～2020年12月經(jīng)天津市婦女兒童保健中心診斷為雙耳重度極重度感音神經(jīng)性聾患兒340例作為研究對象，回顧性分析病史資料，包括患兒的一般信息、耳聾發(fā)病年齡、感冒發(fā)燒史、耳毒性藥物使用史、頭部外傷史、家族史、母孕期疾病史，體格檢查及影像學(xué)資料，排除耵聹栓塞、外耳道閉鎖、中耳炎及綜合征型聾患兒。340例患兒中，男188例，女152例，年齡6個月～6歲，平均1.24±0.98歲。

1.2聽力診斷方法 聽力診斷檢查包括中耳功能檢查、聽性腦干反應(yīng)(ABR)、聽性穩(wěn)態(tài)反應(yīng)(ASSR)和診斷型耳聲發(fā)射測試。中耳功能檢查時，1歲以下患兒采用1 000 Hz和226 Hz探測音、1歲以上患兒采用226 Hz探測音聲導(dǎo)抗測試。ABR檢查帶通濾波0.1～3 kHz，33.1 Hz重復(fù)短聲刺激，疊加2 000次，以波V反應(yīng)閾為參考指標(biāo)，聽力損失分級如下：輕度31～50 dB nHL、中度51～70 dB nHL、重度71～90 dB nHL、極重度≥91 dB nHL。受檢患兒采用10%的水合氯醛0.5 ml/kg鎮(zhèn)靜，用藥前患兒監(jiān)護(hù)人均在自愿情況下簽署知情同意書。

1.3耳聾基因篩查方法 于濾紙片上采集患兒末梢循環(huán)血，自然風(fēng)干后送至華大基因檢測實(shí)驗(yàn)室，采用基質(zhì)輔助激光解析離子飛行質(zhì)譜技術(shù)，檢測4個常見耳聾基因20個位點(diǎn)，分別為：GJB2(35delG、167delT、176-191del16、235delC、299-300delAT)、GJB3(538C>T、547G>A)、SLC26A4(218C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)及線粒體DNA12SrRNA(1555A>G和1494C>T)。

2 結(jié)果

340例雙耳重度極重度聽力損失患兒共檢出基因突變134例(39.41%，134/340)，明確診斷為遺傳性聾91例，占受檢總?cè)藬?shù)的26.76%(91/340)，占基因突變陽性患兒的67.91%(91/134)，其中純合突變49例，復(fù)合雜合突變42例；雜合突變43例，占受檢總?cè)藬?shù)的12.65%(43/340)，占基因突變陽性患兒的32.09%(43/134)。2例聾兒基因突變檢查結(jié)果正常，但顳骨CT顯示前庭水管擴(kuò)大。

134例基因突變患兒中，GJB2基因突變68例，占受檢者總數(shù)的20.00%(68/340)，占基因突變總例數(shù)的50.74%(68/134)，其中純合突變32例(9.41%，32/340)，c.235delC純合突變29例，占基因突變患兒的21.64%(29/134)，299_300delAT純合突變3例，占基因突變陽性患兒的2.24%(3/134)；復(fù)合雜合突變18例(5.29%，18/340)，雜合突變18例(5.29%，18/340)(表1)。SLC26A4基因突變62例，占受檢者總數(shù)的18.24%(62/340)，占基因突變總例數(shù)的46.27%(62/134)，其中IVS7-2A>G純合突變17例(5.00%，17/340)，占基因突變陽性患兒的12.69%(17/134)，復(fù)合雜合突變24例，雜合突變21例(表1)。

表1 340例患兒檢出基因突變位點(diǎn)不同突變形式例數(shù)分布(例)

雙基因雜合突變4例(4/340，1.18%)，其中c.235delC/c.IVS7-2A>G 雜合突變2例，c.235delC/c.2168A>G雜合突變2例。未檢測出GJB3基因和線粒體DNA12SrRNA基因突變。

3 討論

本研究雙耳重度極重度聾患兒中GJB2基因突變檢出率最高，主要突變位點(diǎn)為235delC、299-300delAT；其次是SLC26A4基因，主要突變位點(diǎn)為IVS7-2A>G，這與戴樸等[6]對中國不同地區(qū)和種族重度感音神經(jīng)性聾群體熱點(diǎn)突變的研究結(jié)果一致。

GJB2是常見的耳聾致病基因，主要遺傳方式為常染色體隱性遺傳，既往研究表明，GJB2基因突變導(dǎo)致的聽力損失特點(diǎn)主要為雙耳先天性非進(jìn)行性重度或極重度聾，少部分表現(xiàn)為后天性聾。本組對象中GJB2基因突變占基因突變總數(shù)的50.74%(68/134)，與王國建等[7]不同聽力學(xué)表型人群中常見耳聾基因突變檢出率的結(jié)果一致。本研究中，GJB2雜合突變18例，為明確病因，下一步需要做GJB2基因測序；基因篩查及測序不僅可以早期發(fā)現(xiàn)先天性耳聾，還可能發(fā)現(xiàn)基因突變導(dǎo)致的遲發(fā)性聽力損失，通過定期復(fù)查隨訪追蹤，有利于耳聾的早發(fā)現(xiàn)早干預(yù)。

SLC26A4基因也是常見的致聾基因，其檢出率僅次于GJB2，是導(dǎo)致前庭水管擴(kuò)大(enlarged vestibular aqueduct，EVA)的主要基因[8]。王秋菊等[9]對我國107例前庭水管擴(kuò)大耳聾家系研究發(fā)現(xiàn)，高達(dá)97.9%的患者至少攜帶一個SLC26A4 突變，88.4%的患者是雙等位基因突變，其研究中共檢出 40 種突變，其中 c.919-2A>G突變是中國人群中最常見的突變方式，占突變總數(shù)的57.63%。SLC26A4基因突變的遺傳方式主要為常染色體隱性遺傳，其導(dǎo)致的聽力損失特點(diǎn)多表現(xiàn)為雙耳先天性重度、極重度感音神經(jīng)性聾，隨著年齡增長聽力逐漸下降，最終全聾；墮床、輕微頭部外傷、感冒、噪聲等可誘發(fā)并加重耳聾[10]。IVS7-2A>G為中國人的熱點(diǎn)突變位點(diǎn)，燕志強(qiáng)等[11]研究發(fā)現(xiàn)SLC26A4基因突變的感音神經(jīng)性聾患者中，IVS7-2A>G突變檢出率62.3%；本組對象中IVS7-2A>G純合突變17例、復(fù)合雜合突變24例。柴福等[12]通過芯片捕獲高通量測序發(fā)現(xiàn)了SLC26A4基因新的致病突變基因位點(diǎn)c.1545-1546insC。本研究中SLC26A4基因雜合突變21例，為更進(jìn)一步明確病因，需要進(jìn)一步行SLC26A4基因測序。2例聾兒基因突變檢查結(jié)果正常，但顳骨CT顯示前庭水管擴(kuò)大，可能存在本研究未檢測到的基因突變,需要進(jìn)一步行SLC26A4基因測序。

GJB3基因主要導(dǎo)致后天高頻聽力損失，線粒體DNA12SrRNA主要導(dǎo)致藥物性聾，攜帶此基因突變者對氨基糖苷類抗生素高度敏感，本研究中未檢測到GJB3基因、線粒體DNA12SrRNA的熱點(diǎn)突變。

綜上所述，本組雙耳重度極重度感音神經(jīng)性聾患兒以GJB2、SLC26A4基因突變檢出率較高，值得一提的是，43例患兒檢測出GJB2或SLC26A4單基因雜合突變，下一步需要行GJB2或SLC26A4單基因測序；另有部分患兒未檢測到基因突變位點(diǎn)，為明確病因，需行高通量測序。近幾年基因測序?qū)τ诎l(fā)現(xiàn)新的致病突變以及明確病因方面發(fā)揮的作用越來越重要，早期明確耳聾患兒的病因，可以為患兒及其家庭成員提供遺傳咨詢和指導(dǎo)，為防聾治聾提供幫助。