揚州地區(qū)167例非綜合征型聾患者耳聾相關(guān)基因突變分析

王瑩 關(guān)兵 常玲美 徐麗 張俊中

耳聾是臨床上最常見的遺傳性疾病之一，在各種導(dǎo)致耳聾的病因中，遺傳因素占60%[1]。目前已知的耳聾基因有200多種[2],但絕大多數(shù)遺傳性聾只與幾個耳聾基因突變有關(guān)，我國遺傳性聾主要與GJB2、SLC26A4、GJB3和mtDNA12SrRNA基因突變有關(guān)[3]。本研究對揚州地區(qū)167例非綜合征型聾患者進(jìn)行上述最常見的4個耳聾基因的20個位點進(jìn)行檢測，以期明確病因，為其康復(fù)治療及遺傳咨詢提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1研究對象 研究對象為2014年2月～2020年4月經(jīng)揚州大學(xué)蘇北人民醫(yī)院耳鼻喉科確診為非綜合征型聾的167例患者，男87例，女80例，2歲～50歲，平均20±4.5歲，所有患者均為重度及極重度感音神經(jīng)性聾，不伴身體其他部位畸形?；颊呔鶃碜該P州市或揚州市周邊地區(qū)，均為漢族；語前聾132例，語后聾35例，其中大前庭水管綜合征8例；有耳聾家族史者48例，有頭部外傷史3例；耳毒性藥物應(yīng)用史1例；無早產(chǎn)、出生時缺氧窒息患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有眼、腎、骨、皮膚等部位病變的綜合征型聾患者；②傳導(dǎo)性聾患者、外耳及中耳畸形的患者；③伴有全身性疾病者、智力障礙者、既往有腦炎、腦膜炎、腮腺炎等明確非遺傳因素致聾患者；④患者或家屬不同意參加此研究者。

1.2研究方法

1.2.1病史采集 采用一對一問卷調(diào)查形式，由患者或其監(jiān)護(hù)人填寫，內(nèi)容如下：①一般情況:就診時間、姓名、性別、年齡、出生年月、民族、籍貫、居住地址和電話等;②耳聾的發(fā)病時間、發(fā)病原因或誘因、耳聾之前是否會說話、耳聾病情發(fā)展情況及伴隨癥狀等;③個人史:環(huán)境噪聲史、耳毒性藥物應(yīng)用史和頭部外傷史等。本研究獲得揚州大學(xué)附屬蘇北人民醫(yī)院道德倫理委員會批準(zhǔn)，對所有研究對象的臨床信息錄取和血樣采集，均獲得了患者本人或其監(jiān)護(hù)人的同意，并簽署了知情同意書。

1.2.2遺傳性聾基因芯片檢測方法 采集患者靜脈血3 ml，涂于耳聾基因檢測卡片上，送往天津華大基因科技有限公司科學(xué)研究所，對最常見的4個耳聾基因的20個位點進(jìn)行檢測，包括：GJB2基因(35delG、176_191del16、235delC、299_300delAT)、GJB3基因(538C>T、547G>A)、SLC26A4(PDS)基因(281C>T、589G>A、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G)、mtDNA12SrRNA基因(1555A>G、1494C>T、1095T>C)。

2 結(jié)果

167例非綜合征型聾患者中檢出常見致聾基因突變者63例，總突變率為37.72%(63/167)，其中，檢測出GJB2突變者47例，SLC26A4 突變者15例(8.98%，15/167)，mtDNA12SrRNA c.1555A>G突變1例(0.60%,1/167)；未檢出GJB3基因突變者(表1)。本組患者中SLC26A4基因IVS7-2A>G 純合突變、IVS7-2A>G及2168A>G 復(fù)合雜合突變、IVS7-2A>G及2162C>T復(fù)合雜合突變者經(jīng)顳骨CT檢查均確診為大前庭水管綜合征，mtDNA12SrRNA c.1555A>G突變患者有耳毒性藥物應(yīng)用史，其外婆亦有耳聾病史。

表1 63例基因突變者基因突變位點、檢出人數(shù)及檢出率

3 討論

耳聾基因具有較高的遺傳異質(zhì)性，不同地區(qū)不同人群其耳聾基因的突變頻率、突變方式和突變熱點均有差異。國內(nèi)外大量研究表明，大多數(shù)重度以上非綜合征型聾主要由為數(shù)不多的幾個耳聾基因突變所致，主要為GJB2、SLC26A4、GJB3和mtDNA12SrRNA四個基因。

戴樸等[4]研究顯示，在遺傳性感音神經(jīng)性聾患者中，42.41%能夠檢測出相關(guān)耳聾基因突變。胡煜等[5]對上述4個基因9個位點進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示致聾基因突變率為26.80%(48/179)，遺傳性聾基因突變攜帶者達(dá)17.32%(31/179)。孫捷等[6]對新疆地區(qū)的遺傳性聾患者進(jìn)行4個基因9個位點的檢測，耳聾相關(guān)基因突變者占51.16%。本研究167例非綜合征型聾患者中未檢出GJB3基因突變，其余3個基因總突變率為37.72%(63/167)。由此可見耳聾基因存在明顯的地區(qū)差異性、遺傳異質(zhì)性，檢測位點的多少對耳聾基因突變檢出率高低也有明顯影響。

GJB2基因的突變方式很多，有移碼突變、無義突變、錯義突變及剪接位點突變等，該基因突變的患者多表現(xiàn)為常染色體隱性遺傳。GJB2基因突變是非綜合征型聾最常見的基因突變，不同地區(qū)不同種族的耳聾患者GJB2突變頻率和熱點不同。在中國人群中，GJB2基因常見突變類型有235delC、299_300delAT、176_191del16等，占該基因突變?nèi)巳旱?0%以上[7,8]；在本組對象中，GJB2基因突變占所有患者的28.14%(47/167)，與戴樸等[8]文獻(xiàn)報道的GJB2基因突變在國內(nèi)不同地區(qū)非綜合征型聾人群的攜帶率4%～30.4%相一致。本研究中僅檢測了GJB2的4個位點，突變攜帶率為28.14%，占所有檢出耳聾基因突變的74.60%(47/63)，與Smith等[9]報道的GJB2基因突變是常染色體隱性遺傳性聾的一半以上責(zé)任基因相一致；其中235delC突變檢出率最高(17.96%)，299delAT次之(10.18%)，176del16再次之(4.5%)。GJB2基因突變所致的耳聾多為重度聽力損失，且發(fā)病年齡段主要集中在嬰幼兒時期[10]。本組耳聾患者中，存在GJB2基因235delC純合突變者占4.79%(8/167)，GJB2基因299delAT純合突變者占1.80%(3/167)；GJB2純合突變者可確定耳聾原因為GJB2基因突變所致。另外，GJB2基因235delC雜合突變占13.17%(22/167)，其中4例為235delC/176del16復(fù)合雜合突變，4例為235delC/299delAT復(fù)合雜合突變，235delC、299delAT和176del16均有隱性致聾效應(yīng)，可認(rèn)為235delC/299delAT及235delC/176del16復(fù)合雜合突變的協(xié)同作用是導(dǎo)致患者耳聾的主要原因。有文獻(xiàn)認(rèn)為多數(shù)的235delC雜合突變(約70%～90%)可以經(jīng)DNA測序檢測到另一個病理性突變位點[11]，本研究有14例235delC雜合突變、4例176del16雜合突變及10例299delAT雜合突變未能檢測到另一個病理性突變位點，可能與本研究僅檢測了GJB2的4個熱點突變而非全組基因位點有關(guān)。

目前為止，SLC26A4基因突變被認(rèn)為是僅次于GJB2基因突變引起遺傳性感音神經(jīng)性聾的遺傳學(xué)病因。SLC26A4基因所編碼的Pendrin蛋白主要負(fù)責(zé)氯離子的轉(zhuǎn)運，氯離子轉(zhuǎn)運障礙最終可引起前庭水管或耳蝸結(jié)構(gòu)異常而導(dǎo)致疾病[12]。SLC26A4基因與大前庭水管綜合征(large vestibular aqueduct syndrome, LVAS)及Pendred綜合征(pendrend syndrome, PS)密切相關(guān)。SLC26A4最常見的突變位點有IVS7-2A>G、2168A>G、1226C>T等，本組對象檢出IVS7-2A>G位點突變者占8.98%(15/167)，與國內(nèi)其他研究[13]結(jié)果接近。本組患者中SLC26A4基因IVS7-2A>G 純合突變、IVS7-2A>G及2168A>G 復(fù)合雜合突變、IVS7-2A>G及2162C>T復(fù)合雜合突變者經(jīng)顳骨CT檢查均為大前庭水管綜合征(EVAS)，提示若發(fā)現(xiàn)該基因突變的患者，可通過指導(dǎo)其生活習(xí)慣及避免感冒、撞擊頭部等防止和延緩聽力下降的發(fā)生。李俎怡等[14]認(rèn)為GJB2基因和SLC26A4基因的單雜合突變并不會致病，只能說明患者攜帶此突變基因，而這兩個基因的純合突變和復(fù)合雜合突變則被認(rèn)為具有致病性。

氨基糖苷類藥物中毒引起的耳聾分為兩種：一種是藥物劑量過大引起的耳聾，為非遺傳性聾；另一種是線粒體基因突變引起的耳聾，為遺傳性聾。mtDNA12SrRNA c.1555A>G、c.1494C>T為兩個常見突變位點，戴樸等[15]報道的13個母系遺傳聾家系患者中33個患者攜帶有mtDNA12SrRNA基因1555位點的A-G均質(zhì)突變;Zhao等[16]在一個母系遺傳非綜合征型聾大家系中，在mtDNA12SrRNA 1494位點發(fā)現(xiàn)了一個C-T的同質(zhì)轉(zhuǎn)換。本研究中發(fā)現(xiàn)mtDNA12SrRNA基因1555A>G突變者1例，該患者有耳毒性藥物應(yīng)用史，患者外婆亦有耳聾病史，遂建議該患者母親及母親的姐妹進(jìn)一步進(jìn)行耳聾基因檢測，并告知患者及該家系相關(guān)基因攜帶者應(yīng)避免使用耳毒性藥物，防止耳聾的發(fā)生。GJB3基因突變在中國耳聾患者中攜帶率較低[17]，本組患者中未檢出GJB3基因突變。

本組對象GJB2基因突變檢出率28.14%(47/167)，SCL26A4基因突變檢出率8.98%(15/167)，mtDNA12SrRNA基因突變檢出率0.60%(1/167);可見對于部分發(fā)達(dá)地區(qū)可將此4個基因20個位點的基因檢測技術(shù)納為非綜合征型聾患者的病因檢測方法，以利明確其病因，指導(dǎo)婚育及用藥，亦可通過產(chǎn)前診斷指導(dǎo)耳聾患者家庭的生育，避免和盡量減少聾兒的出生。