高通量測(cè)序技術(shù)在白血病臨床應(yīng)用中的研究進(jìn)展

殷悅，王雅梅

(首都醫(yī)科大學(xué) a.2017級(jí)臨床醫(yī)學(xué)“5+3”一體化專(zhuān)業(yè)三班,b.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生化與分子生物學(xué)系，北京 100069)

白血病是由造血干細(xì)胞惡性增殖、分化障礙、凋亡受阻等機(jī)制引起的血液系統(tǒng)惡性腫瘤性疾病。近年來(lái)，白血病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，在我國(guó)各種惡性腫瘤致死率中居第六位(男性)和第八位(女性)，在兒童和青少年的惡性腫瘤中居第一位[1-3]。由于白血病的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，而其隱匿性、異質(zhì)性和復(fù)雜性[4]，增加了早期診斷的難度，致使一些患者錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī)；盡管通過(guò)放療、化療、骨髓移植以及免疫學(xué)療法治療可以提高白血病患者的生存率，但停止治療后由耐藥引起的復(fù)發(fā)也成為臨床治療的難題[5]。

隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的完成，高通量測(cè)序技術(shù)的突破性發(fā)展推動(dòng)了精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)時(shí)代的到來(lái)。高通量測(cè)序技術(shù)為臨床腫瘤學(xué)的研究開(kāi)拓了新思路，提供了解決難題的有效方法[6]。目前，高通量測(cè)序技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于白血病的臨床研究，在白血病相關(guān)突變基因的篩查、尋找新的治療靶點(diǎn)、個(gè)性化治療以及預(yù)后監(jiān)測(cè)方面均顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)[7]。現(xiàn)主要介紹高通量測(cè)序技術(shù)在白血病臨床診斷、患者風(fēng)險(xiǎn)分層、治療、預(yù)后分析中的應(yīng)用進(jìn)展。

1 高通量測(cè)序技術(shù)概述

1.1高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展 繼Sanger測(cè)序?yàn)榇淼牡谝淮鷾y(cè)序技術(shù)問(wèn)世以來(lái)，基因測(cè)序技術(shù)不斷發(fā)展。2005年，隨著瑞士Roche公司的焦磷酸測(cè)序技術(shù)、美國(guó)Illumina公司的Solexa和美國(guó)ABI的SOLiD等測(cè)序平臺(tái)的出現(xiàn)，標(biāo)志著第二代測(cè)序技術(shù)即高通量測(cè)序時(shí)代的到來(lái)。此后，高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展，出現(xiàn)并行單分子合成測(cè)序技術(shù)、單分子實(shí)時(shí)合成測(cè)序技術(shù)、納米孔單分子測(cè)序技術(shù)、基于熒光共振能量傳遞的測(cè)序技術(shù)等第三代測(cè)序技術(shù)[8]。目前，高通量測(cè)序技術(shù)可以同時(shí)對(duì)幾百萬(wàn)甚至數(shù)億條DNA序列進(jìn)行測(cè)序[9]。第三代測(cè)序技術(shù)彌補(bǔ)了第二代測(cè)序技術(shù)的缺陷，具有通量更高、測(cè)序時(shí)間更短、數(shù)據(jù)讀取速度更快的特點(diǎn)，可提高測(cè)序的精確度、降低測(cè)序反應(yīng)的成本，真正實(shí)現(xiàn)了單分子測(cè)序，已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)研究的重要技術(shù)手段。

1.2高通量測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用 高通量測(cè)序技術(shù)以大數(shù)據(jù)、多維度的研究模式提高了醫(yī)學(xué)研究的效率，改變了人們對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)。全基因組、轉(zhuǎn)錄組及表觀遺傳組學(xué)的高通量測(cè)序分析在揭示腫瘤異質(zhì)性、追蹤細(xì)胞譜系、探索腫瘤克隆演變的復(fù)雜機(jī)制研究中發(fā)揮重要作用[10]。在白血病的臨床檢測(cè)中，國(guó)際指南已將越來(lái)越多的基因突變列為預(yù)后指標(biāo)，建議利用高通量測(cè)序技術(shù)篩查多基因突變進(jìn)行預(yù)后評(píng)估[11]。高通量測(cè)序技術(shù)與經(jīng)典細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)的有效融合使人類(lèi)對(duì)白血病的生物學(xué)、遺傳學(xué)基礎(chǔ)有了更深入的了解[12]。

2 高通量測(cè)序技術(shù)在白血病臨床研究中的應(yīng)用

2.1在白血病診斷中的應(yīng)用 白血病是造血干細(xì)胞異常克隆性疾病，具有高度的異質(zhì)性，受外界環(huán)境因素影響，血液腫瘤細(xì)胞會(huì)發(fā)生動(dòng)態(tài)的基因突變和克隆演變。這種復(fù)雜的基因改變是傳統(tǒng)技術(shù)無(wú)法全面檢測(cè)的，而高通量測(cè)序技術(shù)可一次檢測(cè)多種基因變異，有效識(shí)別亞克隆，且靈敏度更高，在探索白血病基因突變、腫瘤克隆演變的復(fù)雜機(jī)制研究中發(fā)揮重要作用。

2.1.1混合譜系白血病的診斷 混合譜系白血病是一類(lèi)惡性程度高、預(yù)后差、治療難度大的急性白血病，因具有獨(dú)特的臨床和生物學(xué)特征而引起廣泛關(guān)注?；旌献V系白血病以基因重排為特征，常規(guī)的臨床診斷方法包括細(xì)胞遺傳學(xué)和熒光原位雜交，在許多患者中無(wú)法檢測(cè)到混合譜系白血病易位伴侶基因。長(zhǎng)距離反向聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是混合譜系白血病臨床診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但長(zhǎng)距離反向PCR技術(shù)受DNA酶解程度、酶解片段自身環(huán)化效率的制約，環(huán)化易產(chǎn)生多聯(lián)體且需要大量的基因組DNA樣本。為了克服該技術(shù)的局限性，研究人員采用高通量測(cè)序的方法，只需要微量RNA樣本，結(jié)合錨定復(fù)合PCR富集快速識(shí)別患者標(biāo)本中廣泛的混合譜系白血病融合，采用美國(guó)Illumina公司Archer FusionPlex Heme(血紅素)和Myeloid(髓樣)試劑盒制備的文庫(kù)，在Illumina平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。與長(zhǎng)距離反向-PCR相比，Archer FusionPlex錨定復(fù)合PCR富集高通量測(cè)序方法是檢測(cè)混合譜系白血病基因重排的相對(duì)簡(jiǎn)單而有效的技術(shù)[13]。因此，對(duì)于混合譜系白血病的臨床診斷，Archer FusionPlex錨定復(fù)合PCR富集高通量測(cè)序有望成為新的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。

2.1.2急性髓細(xì)胞性白血病(acute myelogenous leukemia,AML)的診斷 全基因組重測(cè)序使得大量臨床相關(guān)基因可以在一個(gè)單一的試驗(yàn)中同時(shí)進(jìn)行評(píng)估，快速、經(jīng)濟(jì)、有效地識(shí)別特定疾病人群的相關(guān)突變，在突變基因多和突變譜廣的情況下更為有效[14]。急性白血病的突變譜能夠鑒別具有診斷預(yù)后預(yù)測(cè)和治療作用的遺傳突變。研究表明，Ion Torrent PGMTM測(cè)序可以快速、簡(jiǎn)便地獲得AML患者的基因突變譜，明確患者的基因型診斷，為AML進(jìn)一步分層診療、制訂治療方案提供依據(jù)[15]。

田淼等[16]報(bào)道了利用高通量微RNA(microRNA，miRNA)測(cè)序技術(shù)分析AML血漿外泌體miRNA，作為疾病監(jiān)測(cè)的標(biāo)志物來(lái)替代傳統(tǒng)骨髓穿刺活檢的研究。該研究采用Solexa高通量測(cè)序技術(shù)，分析了AML患者和正常人血漿外泌體miRNA的表達(dá)，獲得了211個(gè)顯著差異表達(dá)的miRNA。該結(jié)果與Hornick等[17]在小鼠模型中的研究結(jié)果一致。其中，血漿外泌體miR-155-5p、miR-335-5p、miR-451a有望作為AML早期診斷的分子標(biāo)志物，證實(shí)了高通量測(cè)序技術(shù)在癌癥早期診斷中的潛力。

高通量測(cè)序技術(shù)可以改進(jìn)和細(xì)分AML的遺傳學(xué)診斷，除了現(xiàn)有的世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)亞型，利用高通量測(cè)序的分析發(fā)現(xiàn)了AML的3個(gè)基因組類(lèi)別：染色質(zhì)-剪接體、TP53基因-非整倍性以及IDH2R172基因突變[18]。

2.1.3兒童急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的診斷 兒童ALL的臨床遺傳學(xué)診斷通常使用核型分析(G帶)和熒光原位雜交，但是遺傳學(xué)技術(shù)不能捕獲癌癥基因組中復(fù)雜像差的全部光譜。Nordlund等[19]采用全基因組鏈讀測(cè)序技術(shù)分析了12例ALL基因組，高精度地解析出由細(xì)胞遺傳學(xué)定義的大多數(shù)基因組畸變，甚至在其中10例鑒定出遺傳學(xué)方法未能檢出的結(jié)構(gòu)重排，但DUX4-IGH融合基因未能檢出。全基因組鏈讀測(cè)序技術(shù)在ALL診斷方面可以作為傳統(tǒng)遺傳學(xué)技術(shù)的補(bǔ)充，有助于提高ALL遺傳學(xué)診斷的精準(zhǔn)度。

2.2在白血病患者風(fēng)險(xiǎn)分層中的應(yīng)用 隨著白血病研究的不斷深入，患者在確診后還需要進(jìn)行各種預(yù)后指標(biāo)的全面檢查，根據(jù)不同的指標(biāo)對(duì)患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)和分層，然后制訂合理的個(gè)性化治療方案，目的是減少低危患者的治療毒性，使高?；颊叩玫接行е委?。染色體和各種基因變異是進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分層的重要指標(biāo)，高通量測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用提高了患者風(fēng)險(xiǎn)分層的準(zhǔn)確性。

2.2.1ALL風(fēng)險(xiǎn)分層 RNA測(cè)序技術(shù)和全基因組測(cè)序技術(shù)可以檢測(cè)基因的結(jié)構(gòu)變化和序列改變，細(xì)化ALL的亞型分類(lèi)和風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。ALL中有一種高危亞型被稱(chēng)為費(fèi)城染色體樣(Philadelphia chromosome like,Ph-like)ALL。2016年，Ph-like ALL作為一種暫定亞型被納入WHO急性白血病分類(lèi)，作為一種獨(dú)立的亞型存在。隨著基因組高通量測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步，更多與Ph-like ALL高危特點(diǎn)及預(yù)后不良有關(guān)的基因組改變被不斷發(fā)現(xiàn)。目前，Ph-like ALL的臨床試驗(yàn)正在檢測(cè)靶向性治療方法的可行性，研究人員預(yù)測(cè)高通量測(cè)序技術(shù)將開(kāi)拓新穎精確的治療方案，包括脫細(xì)胞技術(shù)、以基因變異為導(dǎo)向的殘留病灶的監(jiān)測(cè)等[20]。

2.2.2AML風(fēng)險(xiǎn)分層 基于高通量測(cè)序的多基因檢測(cè)在AML的風(fēng)險(xiǎn)分層中也發(fā)揮了重要作用。日本科學(xué)家選取369例初生兒科AML患者中的139例進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組分析(RNA測(cè)序)，在53例患者中鑒定出54個(gè)框內(nèi)基因融合和1個(gè)Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1(Runt-related transcription factor 1，RUNX1)基因框外融合。RNA測(cè)序結(jié)果揭示了兒童AML中基因重排和突變的復(fù)雜性，顯示了兒童AML患者和成人AML患者不同的實(shí)體特征，因此應(yīng)重新考慮風(fēng)險(xiǎn)分層，為兒童AML患者臨床治療方案的制訂提供依據(jù)[21]。

傳統(tǒng)的細(xì)胞遺傳學(xué)將AML患者分為良好、中度和不良風(fēng)險(xiǎn)組。然而在包含了大部分患者的中等風(fēng)險(xiǎn)組中，患者治療結(jié)果卻各不相同。Lin等[22]的研究利用高通量測(cè)序技術(shù)分析了112例接受標(biāo)準(zhǔn)治療的AML患者中的260個(gè)基因，從中找到了與預(yù)后相關(guān)的獨(dú)立突變基因。在中等風(fēng)險(xiǎn)細(xì)胞遺傳學(xué)的患者中，CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α基因雙突變，異檸檬酸脫氫酶2和核仁磷酸蛋白1基因突變且缺乏FMS樣酪氨酸激酶3基因內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)基因的患者更接近于具有良好風(fēng)險(xiǎn)細(xì)胞遺傳學(xué)的患者。甲基胞嘧啶雙加氧酶2、RUNX1、ASXL1和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A基因突變的患者，則類(lèi)似于具有不良細(xì)胞遺傳學(xué)風(fēng)險(xiǎn)的患者。在此基礎(chǔ)上對(duì)患者重新分類(lèi)，顯著減少了被分類(lèi)為中度風(fēng)險(xiǎn)的患者數(shù)量。此項(xiàng)研究表明，基于高通量測(cè)序的多基因測(cè)序在臨床上可用于建立指導(dǎo)治療決策的準(zhǔn)確風(fēng)險(xiǎn)分層系統(tǒng)。

應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)建立大量AML患者基因圖譜的數(shù)據(jù)庫(kù)，為AML的風(fēng)險(xiǎn)分層等多種研究提供了有力支持。在癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)計(jì)劃的一項(xiàng)研究中，應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)200例AML患者進(jìn)行全基因組(50例)或全外顯子組測(cè)序(150例)，對(duì)RNA和miRNA的表達(dá)進(jìn)行分析，得到了突變譜分析數(shù)據(jù)[23]。Gerstung等[24]設(shè)計(jì)了可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)緩解率、復(fù)發(fā)率和死亡率的多階段統(tǒng)計(jì)模型，并在單獨(dú)的TCGA患者數(shù)據(jù)集合上成功驗(yàn)證。在模擬中，總生存率不變的情況下，基于新算法的精確風(fēng)險(xiǎn)分層能夠?qū)⑼N異體造血細(xì)胞移植術(shù)的數(shù)量減少多達(dá)25%。

2.3在白血病治療中的應(yīng)用 高通量測(cè)序是分析髓樣腫瘤基因變異頻譜的有力工具，再與靶向治療和基因組生物標(biāo)志物相結(jié)合，為許多患者的精準(zhǔn)醫(yī)療創(chuàng)造了條件[25-26]。傳統(tǒng)技術(shù)對(duì)于基因變異無(wú)法深入研究，因而對(duì)很多特殊、罕見(jiàn)的病例，高通量測(cè)序技術(shù)可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)技術(shù)的缺點(diǎn)。

2.3.1侵襲性自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK細(xì)胞)白血病的治療 隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，多基因聯(lián)合檢測(cè)可以更好地進(jìn)行疾病發(fā)病機(jī)制的研究，基于高通量測(cè)序的突變分析的優(yōu)勢(shì)更加明顯[27-28]。侵襲性NK細(xì)胞白血病(aggressive natural killer cell leukemia，ANKL)是NK細(xì)胞腫瘤的一種罕見(jiàn)形式，大多數(shù)患者短期內(nèi)出現(xiàn)多器官功能衰竭，甚至在接受及時(shí)治療后數(shù)天至數(shù)月內(nèi)死亡，且常規(guī)的化療并不起作用[29-30]。Huang等[31]通過(guò)結(jié)合全基因組、轉(zhuǎn)錄組和靶向測(cè)序以及細(xì)胞因子芯片對(duì)ANKL的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了全面研究，先從8例新發(fā)ANKL患者的血液中分選帶有CD25+CD3-標(biāo)記的NK細(xì)胞、受損的正常粒細(xì)胞進(jìn)行全基因組測(cè)序，以尋找與ANKL相關(guān)的功能序列。研究人員采用美國(guó)Illumina公司的Ampli-Seq對(duì)29例ANKL患者的血漿樣本進(jìn)行靶向測(cè)序，在48%(14/29)的ANKL患者中發(fā)現(xiàn)了Janus激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(Janus kinase-signal transduction and activator of transcription，JAK-STAT)途徑的突變。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的結(jié)果表明STAT3激活和MYC表達(dá)對(duì)于ANKL細(xì)胞的增殖和存活至關(guān)重要。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞介素(interleukin,IL)-10可以刺激STAT3的磷酸化，從而使癌細(xì)胞增殖，STAT3磷酸化抑制劑(Stattic)和MYC抑制劑(JQ1)可以抑制癌細(xì)胞增殖。該研究利用高通量測(cè)序技術(shù)，鑒定并在功能上驗(yàn)證了參與ANKL發(fā)病機(jī)制的IL-10/JAK-STAT/MYC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，為開(kāi)發(fā)治療這種亞型白血病的新藥提供了有力的支持。

2.3.2混合表型急性白血病的治療 應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)分析混合表型急性白血病致病基因潛在的調(diào)控位點(diǎn)，可為靶向治療提供依據(jù)。Granja等[32]通過(guò)單細(xì)胞RNA測(cè)序技術(shù)和單細(xì)胞ATAC測(cè)序技術(shù)聯(lián)合分析，使用健康人的外周血和骨髓單個(gè)核細(xì)胞構(gòu)建造血發(fā)育的免疫表型、轉(zhuǎn)錄組和表觀單細(xì)胞圖譜，再將混合表型急性白血病患者的單細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子RUNX1可能潛在調(diào)控混合表型急性白血病患者惡性致癌基因，針對(duì)RUNX1抑制劑的研究將為治療混合表型急性白血病的藥物研發(fā)提供新思路。Hou等[33]利用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)原發(fā)性血小板增多癥患者進(jìn)行單細(xì)胞全外顯子測(cè)序發(fā)現(xiàn)了與原發(fā)性血小板增多癥發(fā)病機(jī)制相關(guān)基因SESN2、NTRK1基因。關(guān)鍵基因的發(fā)現(xiàn)可以作為新的靶點(diǎn)，為新藥物的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

2.3.3AML的治療 通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)篩選出的AML相關(guān)突變基因包括核仁磷酸蛋白1、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α、RUNX1、FMS樣酪氨酸激酶3、TP53、ASXL1等[34]。目前，已被作為治療靶點(diǎn)列入白血病治療指南中。應(yīng)用這些靶點(diǎn)研發(fā)的分子靶向治療藥物有望提高AML患者的療效。如針對(duì)AML患者中FMS樣酪氨酸激酶3突變的抑制劑米朵妥林，異檸檬酸脫氫酶2突變選擇性抑制劑Enasidenib等[35]。Fu等[36]利用TCGA數(shù)據(jù)，結(jié)合德國(guó)AML合作組織提供的AML患者的臨床和生存信息數(shù)據(jù)，通過(guò)生物信息學(xué)分析在全基因組范圍內(nèi)篩選出了與預(yù)后相關(guān)的標(biāo)志基因FHL1基因，實(shí)驗(yàn)證實(shí)FHL1高表達(dá)不利于AML化療和骨髓移植的預(yù)后及患者的生存，因此FHL1有望成為新的治療靶點(diǎn)。高通量測(cè)序技術(shù)為AML患者的精準(zhǔn)治療提供了技術(shù)保障，逐漸推動(dòng)AML由化療治療轉(zhuǎn)為靶向治療[36]，而精準(zhǔn)的靶向治療還有利于改善患者的預(yù)后[37]。

2.4在白血病預(yù)后分析中的應(yīng)用 微小殘留病(minimal residual disease,MRD)是指經(jīng)治療后患者體內(nèi)仍存在惡性細(xì)胞，是ALL中最重要的獨(dú)立預(yù)后因素。使用高通量測(cè)序技術(shù)可以檢測(cè)治療后ALL患者體內(nèi)是否存在MRD，從而可以預(yù)測(cè)并采取措施預(yù)防白血病的復(fù)發(fā)。研究顯示，使用高通量測(cè)序檢測(cè)兒童ALL患者體內(nèi)球蛋白重鏈基因和互補(bǔ)決定區(qū)3基因，有助于分析白血病的分支演變模式；同時(shí)通過(guò)檢測(cè)MRD，協(xié)助判斷ALL患者復(fù)發(fā)的可能性[38]。目前公認(rèn)ALL的MRD分析金標(biāo)準(zhǔn)是利用等位基因特異性引物對(duì)克隆免疫球蛋白和T細(xì)胞受體基因重排進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR。研究顯示，高通量測(cè)序在預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)方面的靈敏度高于實(shí)時(shí)定量PCR[39]；此外，高通量測(cè)序還可以提供有關(guān)治療期間和治療后生理性B細(xì)胞和T細(xì)胞庫(kù)的信息，這些信息已顯示出與預(yù)后相關(guān)。因此，高通量測(cè)序在預(yù)測(cè)白血病的復(fù)發(fā)方面有巨大的潛力且有望成為新的金標(biāo)準(zhǔn)。

在白血病的預(yù)后分析中，基因突變也是不容忽視的因素。特定基因突變與疾病的不良預(yù)后相關(guān)，如FBXW7基因[40]、IL-7R[41]、JAK1[42]。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多與白血病預(yù)后不良的基因突變被檢出。目前WHO等權(quán)威的臨床指南已將基因突變引入惡性血液腫瘤的危險(xiǎn)度預(yù)后分層和細(xì)化分類(lèi)中，臨床相關(guān)的基因在指南更新中所占比例逐年增加。WHO對(duì)于髓樣腫瘤和AML的最新更新中包括了兩個(gè)新的分類(lèi)：RUNX1突變的AML和BCR-ABL1基因的AML，且2017年歐洲白血病網(wǎng)關(guān)于AML的建議風(fēng)險(xiǎn)分層中新增了RUNX1、ASXL1和TP53的基因突變[37]。因此，結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)的基因水平綜合評(píng)估和最小殘留疾病的評(píng)估有望進(jìn)一步改善風(fēng)險(xiǎn)分層和白血病的預(yù)后。

3 展 望

高通量測(cè)序技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于白血病的臨床研究，在白血病相關(guān)突變基因的篩查、尋找新的治療靶點(diǎn)、個(gè)性化治療以及預(yù)后監(jiān)測(cè)方面均顯示出巨大優(yōu)勢(shì)，但仍面臨許多困難和挑戰(zhàn)。高通量測(cè)序技術(shù)測(cè)定的致病基因靶點(diǎn)，需要進(jìn)行大量驗(yàn)證以區(qū)分白血病基因變異的共性和異質(zhì)性，排除干擾因素。高通量測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于臨床診斷仍缺少規(guī)范的操作指南和數(shù)據(jù)解讀標(biāo)準(zhǔn)，不同的實(shí)驗(yàn)室測(cè)序方法、平臺(tái)、閱讀深度和變異分析可能不同。此外，通過(guò)高通量測(cè)序技術(shù)測(cè)定的標(biāo)志物目前還無(wú)法取代大多數(shù)的形態(tài)學(xué)檢查，需要大量的臨床研究制訂相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。為規(guī)范高通量測(cè)序技術(shù)在血液腫瘤診療中的應(yīng)用，中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)血液腫瘤專(zhuān)業(yè)委員會(huì)聯(lián)合多家權(quán)威機(jī)構(gòu)和專(zhuān)家共同制訂了《二代測(cè)序技術(shù)在血液腫瘤中的應(yīng)用中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)(2018年版)》[43]，該共識(shí)的制訂對(duì)高通量測(cè)序技術(shù)在血液腫瘤中的臨床應(yīng)用起到規(guī)范化的作用，為提高我國(guó)血液腫瘤的診療水平發(fā)揮重要作用。

美國(guó)國(guó)立癌癥研究院提出的精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)概念是將個(gè)體疾病的遺傳學(xué)信息用于指導(dǎo)其診斷和治療的醫(yī)學(xué)。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，未來(lái)人們利用單分子測(cè)序技術(shù)可以建立個(gè)人基因組的信息檔案[44]，人類(lèi)對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)更加微觀，從基因的層面尋找治療靶點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療。高通量測(cè)序技術(shù)在白血病臨床診斷、治療、預(yù)后以及新藥研發(fā)方面的應(yīng)用中已經(jīng)展示了巨大的潛力，對(duì)白血病的分類(lèi)細(xì)化甚至為罕見(jiàn)病的治療帶來(lái)希望。目前，高通量測(cè)序技術(shù)還在飛速發(fā)展，其潛力有待進(jìn)一步發(fā)掘?？梢灶A(yù)見(jiàn)，隨著與發(fā)病機(jī)制相關(guān)的突變基因、細(xì)胞信號(hào)通路和靶點(diǎn)的不斷發(fā)現(xiàn)，白血病有望早日實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療。