王亞寧 劉風(fēng)林 楊 娜
糖尿康片[豫藥制字Z20120840(汴)]是開封市中醫(yī)院經(jīng)河南省食品藥品監(jiān)督管理局審批的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑,主要由黃芪、玄參、黃連等6味藥物組成,臨床應(yīng)用于氣陰兩虛型2型糖尿病,在20余年的應(yīng)用中,療效確切[1]。受醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑條件的影響,本制劑最初的制備工藝是鬼箭羽提取成浸膏,而其他五味藥均是原粉入藥,然后進(jìn)行常規(guī)的中藥片劑生產(chǎn),因此,服用量相對較大。特別是對于病情相對嚴(yán)重的患者來說,服藥的依從性受了很大的影響,進(jìn)而也影響了患者疾病的轉(zhuǎn)歸[2,3]。隨著其應(yīng)用人群的不斷擴(kuò)大,越來越多的患者反映糖尿康片服用量較大,雖然其具有“純中藥制劑療效好、不良作用小”等優(yōu)點(diǎn)[4],但仍然不能滿足廣大病友的需求,因此,本研究旨在探索并建立糖尿康片超微粉制備工藝的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為該制劑進(jìn)一步的研究提供依據(jù)。
1.1 實(shí)驗(yàn)藥品糖尿康片由開封市中醫(yī)院制劑室提供(批號20200219、20190723)。
1.2 對照品鹽酸小檗堿對照品(批號110781-201813),購自中國藥品生物制品檢定所。
1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑高效液相色譜儀、超聲波清洗器、三用紫外分析儀、甲醇、乙醇、鹽酸、乙腈等。
2.1 浸出物取糖尿康片20片,粉碎后過2號篩。置于帶塞錐形瓶中精密加水100 ml后進(jìn)行冷浸。在前6 h的浸泡過程中經(jīng)常振搖,然后再靜置18 h后??焖賾?yīng)用干燥的濾器進(jìn)行過濾,精密量取20 ml續(xù)濾液置已提前處理好的蒸發(fā)皿(干燥恒重)中,水浴蒸干,放置于恒溫干燥箱內(nèi)干燥3 h,然后放置于干燥皿中冷卻半小時,然后快速精密稱定、計(jì)算[5]。
2.2 TLC鑒別本品內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)藥材為黃連:取本品2片,用研缽研碎后置于錐形瓶中,加乙醇10 ml后密塞,超聲15 min,濾過,將濾液置于蒸發(fā)皿中,水浴蒸干。用2 ml乙醇溶解殘?jiān)吹霉┰嚻啡芤?。精密稱取鹽酸小檗堿對照品0.5 mg,置1 ml容量瓶中,加甲醇少量溶解,然后加甲醇置刻度,即得0.5 mg/ml的對照品溶液。照薄層色譜法,分取上述溶液各2 μl,點(diǎn)于硅膠G薄層板上,置層析缸內(nèi)展開(乙酸乙酯∶丁酮∶甲酸∶水為10∶7∶1∶1),取出晾干于365nm紫外光下檢視[5]。
2.3 含量測定本品的內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)藥材為黃連,其測定目標(biāo)成分為鹽酸小檗堿[6]。
2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)色譜柱為DiarnonsilTM Cl8、流動相為0.033 mol/L 磷酸二氫鉀溶液:乙腈(70∶30),設(shè)定流速(1.0 ml/min),檢測波長(265 nm),柱溫(25 ℃),進(jìn)樣量為每次10 μl,理論塔板數(shù)(以鹽酸小檗峰計(jì)算)不小于4000。
2.3.2 對照品溶液的制備精密稱定鹽酸小檗堿對照品9.95 mg,置于50 ml容量瓶中,先用少量鹽酸甲醇溶液(1∶99)溶解后,再稀釋至刻度作為貯備液(0.199 mg/ml)。精密量取1 ml上述貯備液置于10 ml 容量瓶,用流動相稀釋至刻度,即得對照品溶液。
2.3.3 供試品溶液的制備取糖尿康片10片,研碎過3號篩,糖密稱取0.40 g至錐形瓶中,加入鹽酸甲醇溶液(1∶99)25 ml,密塞。精密稱定重量后,放置水浴鍋中加熱(溫度60 ℃、時間15 min),然后超聲30 min后取出,放至室溫后精密稱定重量,用鹽酸甲醇溶液(1∶99)補(bǔ)足損失的重量(與第1次相比)。混勻后過濾,精密量取1 ml續(xù)濾液置10 ml容量瓶,用流動相稀釋至刻度,即得供試品溶液。
2.3.4 供試品溶液的制備取樣品10片,研細(xì),過3號篩,精密稱定0.4 g,加入鹽酸:甲醇溶液(1∶99)25 ml,精密稱定重量,60 ℃水浴中加熱 15 min,取出,超聲處理 30 min,室溫放置過夜,精密稱定重量,用鹽酸∶甲醇溶液(1∶99)補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過濾,精密量取續(xù)濾液1 ml,置10 ml 量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.3.5 測定分別將對照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀中,以峰面積按外標(biāo)法進(jìn)行測定并計(jì)算。
2.3.6 線性關(guān)系考察精密量取對照品貯備液0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml、1.4 ml,分別置 10 ml 量瓶中,用流動相稀釋至刻度,則上述對照品的濃度分別為11.94 μg/ml、15.92 μg/ml、19.90 μg/ml、23.88 μg/ml、27.86 μg/ml,以上述色譜條件進(jìn)樣(各20 μl),按上述色譜條件進(jìn)樣,進(jìn)樣量分別為 0.2388 μg、0.3184 μg、0.3980 μg、0.4776 μg、0.5572 μg。
2.3.7 精密度實(shí)驗(yàn)以上述對照品溶液進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣5次。
2.3.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)以上述供試品溶液每隔2 h進(jìn)行進(jìn)樣,共6次。
2.3.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以上述方法分別制備5份供試品溶液,進(jìn)行測定。
2.3.10 加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱定適量已知含量的樣品6份,分別精密加入12 ml對照品溶液,照上述方法測定并計(jì)算回收率。
2.3.11 樣品含量測定取2批次樣品,照上述供試品制備方法制備并測定其中鹽酸小檗堿含量。
2.3.12 空白實(shí)驗(yàn)取陰性模擬制劑(不含黃連),照上述方法制備供試品并進(jìn)行測定。
3.1 浸出物糖尿康片冷浸物平均含量為0.3220 g。見表1。
表1 糖尿康片浸出物含量
3.2 線性關(guān)系以鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量 X(μg)對峰面 Y進(jìn)行線性回歸(n=5),得回歸方程:Y=4.3223×107X-1.7298×105,r=0.9999。結(jié)果表明:鹽酸小檗堿在 0.2388~0.5572 μg 范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。
3.3 精密度實(shí)驗(yàn)鹽酸小檗堿峰面積的RSD值為1.24%(n=5)。見表2。
表2 精密度實(shí)驗(yàn)
3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)鹽酸小檗堿的 RSD 為 1.46%(n=6)。見表3。
表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
3.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)5份供試品測得鹽酸小檗堿的RSD 為 0.95%(n=5)見表4。
表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
3.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取6組樣品,依法進(jìn)行回收率測定。見表5。
表5 6組樣品加樣回收率測定
3.7 樣品含量測定取3批樣品,按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,按上述色譜條件測定其中鹽酸小檗堿含量。見表6。
表6 3批樣品鹽酸小檗堿含量測定
3.8 空白實(shí)驗(yàn)照上述方法制備陰性溶液(不含黃連),照TLC法測定,于365 nm紫外光下檢視與對照品溶液相應(yīng)的位置上,未呈現(xiàn)相同的熒光斑點(diǎn)。
糖尿康片是由開封市中醫(yī)院龐國明主任醫(yī)師在多年的臨床經(jīng)驗(yàn)和參考前人治療糖尿病經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方。本研究在糖尿康片一般制法的基礎(chǔ)上,應(yīng)用超微粉碎對其原料進(jìn)行處理后按一般工藝制片,對新工藝下糖尿康片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究,探討其穩(wěn)定性、可行性。
本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,應(yīng)用冷浸法處理糖尿康片,其浸出物的平均含量為0.3220 g,RSD為0.63%,說明經(jīng)超微粉碎處理,其浸出物含量較穩(wěn)定;此外,線性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,鹽酸小檗堿對照品在 0.2388~0.5572 μg 范圍內(nèi)的線性關(guān)系較為良好。而且以對照品溶液進(jìn)行重復(fù)進(jìn)樣5次,其RSD值為1.24%,表明該儀器精密度良好;在相同的色譜條件下,于室溫0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h后依次進(jìn)樣進(jìn)行測定,其RSD 為 1.46%,提示鹽酸小檗堿供試品在12 h內(nèi)較為穩(wěn)定;以同一樣品重復(fù)制作5份供試品溶液,測定其鹽酸小檗堿含量,RSD為1.50%,提示該實(shí)驗(yàn)有較好的重復(fù)性;精密稱定適量已知含量的樣品6份,分別精密加入對照品溶液,測得鹽酸小檗堿的平均回收率為100.35%,RSD值為0.17%。最后對2批糖尿康片分別進(jìn)行測定,2批次糖尿康片中鹽酸小檗堿的平均含量分別為2.82 mg和2.84 mg,總平均含量為每片2.83 mg。
綜上所述,應(yīng)用本次實(shí)驗(yàn)方法制備供試品效果好,干擾成分少,各組分的分離能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?,此次研究中建立的質(zhì)量控制方法對超微粉制備的糖尿康片切實(shí)可行,其方法簡單,且精密度、重復(fù)性良好,結(jié)果差異小,準(zhǔn)確度高,適用于此工藝下制備的糖尿康片質(zhì)量控制。