人參愈傷誘導(dǎo)及其次生代謝產(chǎn)物的影響因素研究進(jìn)展

強(qiáng)寶寶，韋坤華，梁瑩，韋桂麗，趙立春，繆劍華

（1.廣西藥用植物園，a.廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；b.廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心，南寧 530023；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 530200）

人參（Panax ginsengC.A.Mey）是五加科（Araliaceae）人參屬（Panax L.）植物，是中國傳統(tǒng)名貴中藥，被稱為“百藥之王”，主要分布于東三省、河北省、陜西省等地［1，2］，具有大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津養(yǎng)血、安神益智等功效［3］?，F(xiàn)代研究表明，人參所含的主要活性成分為人參皂苷，目前已知的人參皂苷有50多種，其中人參皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1是主要人參皂苷，占總?cè)藚⒃碥盏?0%以上［4，5］。此外，人參還含有多糖、氨基酸、生物堿、黃酮等多種化學(xué)成分［6］，在抗腫瘤、抗衰老、促進(jìn)生長發(fā)育、提高免疫力等方面具有很好的作用［7，8］。人參不僅作為藥材使用，還在藥膳、保健、化妝品等多個領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用［9，10］。人參栽培年限長（一般4～6年），而且生長過程中易受到許多環(huán)境因素的限制，如土壤、氣候和害蟲等［11］，對人參的品質(zhì)具有較大影響。雖然野山參的質(zhì)量及其人參皂苷含量都很高，但是資源缺乏［12］。

組織培養(yǎng)技術(shù)不受時間和地域的制約，在短時間可獲得比長期栽培植物更有價值的培養(yǎng)物。在人參的組織培養(yǎng)中，可以通過改變培養(yǎng)基的成分、變化培養(yǎng)條件、添加植物生長調(diào)節(jié)劑、添加誘導(dǎo)子等有效手段來促進(jìn)目的產(chǎn)物（主要為人參皂苷）的大量產(chǎn)生，使人參皂苷的生產(chǎn)可以達(dá)到預(yù)期的結(jié)果。Lee等［13］和Murthy等［12］比較了栽培人參根、山參根和不同人參培養(yǎng)物中人參皂苷的積累，發(fā)現(xiàn)不定根培養(yǎng)物中（系A(chǔ)R-4）人參皂苷含量積累最多（32.46 mg/g），約是栽培人參根的3倍（11.35 mg/g）。Murthy等［14，15］研究發(fā)現(xiàn)，除皂苷Re外，人參不定根中皂苷含量均高于野生參，這些結(jié)果均表明了人參組織培養(yǎng)的優(yōu)越性。本研究綜述了人參愈傷組織誘導(dǎo)研究進(jìn)展，并總結(jié)了人參次生代謝產(chǎn)物積累的影響因素，以期為組織培養(yǎng)提高人參的質(zhì)量和人參皂苷的產(chǎn)量提供參考方法和理論依據(jù)。

1 人參愈傷組織誘導(dǎo)研究

通過愈傷組織建立的組織培養(yǎng)技術(shù)不僅是植物快速繁殖的手段，也是植物遺傳改良、品種選育和提高目的產(chǎn)物的理想途徑。1964年，中國植物學(xué)家羅士韋教授采用人參根為外植體，成功培養(yǎng)獲得愈傷組織［16］。之后，美國、蘇聯(lián)、韓國等國家的研究者也相繼獲得了人參愈傷組織［17］。

1.1 不同外植體

人參不同的器官和組織對離體培養(yǎng)的反應(yīng)是不同的，其形態(tài)發(fā)生的能力也不同。可用于誘導(dǎo)人參愈傷組織的外植體以根和莖最為常見。金英善等［18］表明用東北刺人參的莖段和葉柄在AS和1/2 MS培 養(yǎng)基上，添加2.0 mg/L 6-BA和0.2～1.0 mg/L NAA可以獲得數(shù)量較多、質(zhì)量較好的愈傷組織。此后，王建華等［19，20］以人參芽孢、實(shí)生苗的根、莖、葉為外植體進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)，結(jié)果表明各種不同外植體在相同誘導(dǎo)條件下均能誘導(dǎo)出愈傷組織，并確定了人參愈傷組織誘導(dǎo)和生長最優(yōu)培養(yǎng)基分別為MS+2，4-D 3 mg/L+BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+KT 0.5 mg/L和MS+2，4-D 3 mg/L+KT 1 mg/L。邸雪峰等［21］研究表明，人參莖外植體誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D 2.57 mg/L，誘導(dǎo)率可達(dá)64.75%。黃景嘉等［22］以人參根切片作為外植體，在改良MS培養(yǎng)基中成功誘導(dǎo)出愈傷組織。

此外，有研究者用人參葉片誘導(dǎo)愈傷組織，最佳培養(yǎng)基為MS+7 mg/L 2，4-D和0.9 mg/L KT，誘導(dǎo)率可達(dá)80%以上［23］。齊海軍等［24］研究也表明，人參葉片能誘導(dǎo)獲得愈傷組織，最佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2，4-D 2 mg/L+NAA 0.66 mg/L+KT 1 mg/L，在此培養(yǎng)基中接種的葉片外植體，30 d后愈傷組織誘導(dǎo)率為93%。而用人參成熟根誘導(dǎo)得到愈傷組織產(chǎn)生許多胚狀體，在補(bǔ)充有6-BA和赤霉素的培養(yǎng)基（1/2 MS或B5）中繼代培養(yǎng)得到大量的再生植株［25］。此外，Du等［26］以人參花藥進(jìn)行培養(yǎng)誘導(dǎo)獲得愈傷組織，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中添加5 mg/L 2，4-D和1 mg/L KT誘導(dǎo)愈傷效果顯著，轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基中40 d后，分化成芽、根和最終的幼苗。

1.2 不同培養(yǎng)條件

組織培養(yǎng)的外在條件對人參愈傷組織的影響以溫度和光照最為顯著，常在25℃、黑暗環(huán)境中誘導(dǎo)人參愈傷組織。在植物生長調(diào)節(jié)劑配比方面，以2，4-D為主，并添加6-BA、KT、NAA等作為輔助調(diào)節(jié)劑。有研究者發(fā)現(xiàn)，人參根在24℃培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，經(jīng)20～30 d可形成愈傷組織，到45 d時，可見明顯的淡黃色愈傷組織［22］。蔡茁等［27］發(fā)現(xiàn)，廣譜植物培養(yǎng)基中N、P、K的配比不能完全適應(yīng)人參愈傷組織的誘導(dǎo)?；诖耍瑮罹У龋?8］研究了人參與胡蘿卜共培養(yǎng)體系，發(fā)現(xiàn)所獲得的愈傷組織在23℃、1 000 lx的條件下生長良好，在培養(yǎng)基MS+2，4-D 3 mg/L+IBA 2 mg/L+KT 0.5 mg/L上培養(yǎng)25 d時皂苷含量達(dá)到最高，共培養(yǎng)物的皂苷含量比人參愈傷組織皂苷含量高6.25%。王建華等［29］研究表明，人參發(fā)根愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D 1 mg/L+6-BA 0.1 mg/L；人參發(fā)根愈傷組織生長的最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D 1.5 mg/L+KT 1.5 mg/L。Zhang等［30］以野生人參不定根為外植體，在MS+2，4-D 0.5 mg/L+KT 0.3 mg/L的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)得到愈傷組織（誘導(dǎo)率53.3%），愈傷組織在含有0.5 mg/L 2，4-D的MS培養(yǎng)基上可誘導(dǎo)得到胚性愈傷組織和體細(xì)胞胚，體細(xì)胞胚在含有5 mg/L赤霉素的MS培養(yǎng)基上，85%的體細(xì)胞胚萌發(fā)；萌發(fā)的芽在1/3 SH+0.25 mg/L NAA的培養(yǎng)基上，可發(fā)育成具有良好主根的植物。

另外，張丹［31］研究了人參發(fā)狀根懸浮培養(yǎng)，得出以1/2 MS液體培養(yǎng)基（pH 5.8，3%蔗糖，NO3-/NH4+為2∶1，磷酸鹽濃度85 mg/L）為最佳培養(yǎng)基；搖床條件最適組合為接種量2.14 g，裝液量256.88 mL，溫度22.36℃，轉(zhuǎn)速134.68 r/min。在人參細(xì)胞培養(yǎng)中，添加0.01～1.00 mmol/L的草酸可以促進(jìn)人參細(xì)胞的生長［32］。

2 組培條件對人參次生代謝產(chǎn)物的影響

2.1 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基是供植物組織生長和維持的惟一養(yǎng)料，蔗糖是植物培養(yǎng)所需的主要碳源和能源，碳消耗與生物量積累以及細(xì)胞和器官的代謝狀態(tài)直接相關(guān)，培養(yǎng)基中所含成分對人參次生代謝產(chǎn)物有著直接的影響（表1）。為了改善人參細(xì)胞生長和提高皂苷的產(chǎn)量，F(xiàn)uruya等［33］研究改良MS培養(yǎng)基（除去NH4NO3）對5年生人參根愈傷組織懸浮培養(yǎng)的影響作用，在培養(yǎng)基提供0.5%葡萄糖和2%蔗糖時，最有利于愈傷組織的生長。在此培養(yǎng)條件下，與對照組相比，皂苷含量達(dá)到最大值（7.33 mg/g），并在2周后添加2%的蔗糖，能夠改善人參細(xì)胞的生長，愈傷組織干重達(dá)到最大值（17 g/L）。黃滔等［34］研究表明，隨著蔗糖濃度的升高，人參不定根干重增殖倍數(shù)呈先升高后降低的趨勢，當(dāng)蔗糖濃度在40 g/L時，單位體積培養(yǎng)基中的多糖產(chǎn)量（230.45 mg/L）和皂苷產(chǎn)量（91.41 mg/L）均達(dá)到最大值，表明40 g/L蔗糖濃度最有利于人參不定根中的多糖和皂苷積累。

無機(jī)鹽在培養(yǎng)基中可調(diào)節(jié)滲透壓、pH和酶活性等，是植物生長和分化所必需的。Paek等［35］研究了MS培養(yǎng)基中銨與硝酸鹽的比率對人參培養(yǎng)物中不定根生長和人參皂苷積累的影響，表明低銨濃度和高硝酸鹽濃度有利于根系生長，在銨與硝酸鹽比率為7.19∶18.5時，不定根的生物量最大；以0 mmol/L銨與18.5 mmol/L硝酸鹽的比例實(shí)現(xiàn)最大人參皂苷產(chǎn)率（83.6 mg/L），當(dāng)銨用作惟一的氮源時，根生物量和人參皂苷含量減少了1/3，所以較低濃度的銨與硝酸鹽的比例有利于人參培養(yǎng)。

同樣，磷元素是細(xì)胞內(nèi)能量代謝的重要因子，田鵬瑋［36］以人參懸浮培養(yǎng)細(xì)胞為材料，通過優(yōu)化培養(yǎng)條件對人參多糖和皂苷的積累進(jìn)行了研究，結(jié)果表明適當(dāng)提高培養(yǎng)基中的PO43-濃度可以促進(jìn)多糖和皂苷的積累，最高可分別達(dá)（30.69±2.42）mg/g和（28.14±4.34）mg/g；Ca2+也是細(xì)胞生長所必需的營養(yǎng)元素和次級信號物質(zhì)，適當(dāng)提高培養(yǎng)基中鈣離子的濃度可以使每克干細(xì)胞中總皂苷含量增加7.92 mg。Hg2+對人參細(xì)胞中代謝產(chǎn)物的生長也有很大影響，當(dāng)Hg2+濃度為1 μmol/L時，多糖含量達(dá)到最大值（23.52 mg/g），當(dāng)Hg2+濃度為100 μmol/L時，皂苷含量達(dá)到最大值（14.82 mg/g）。

此外，Jeong等［37］以1.5 MS培養(yǎng)基，輔以10 mg/L IAA和75 g/L蔗糖來培養(yǎng)人參不定根，以期提高人參皂苷的積累，在培養(yǎng)10 d后，培養(yǎng)基補(bǔ)充0.75強(qiáng)度的MS培養(yǎng)基，以滿足不定根的營養(yǎng)需求，當(dāng)培養(yǎng)20 d后再補(bǔ)充1.0強(qiáng)度MS培養(yǎng)基，使生物量增加27.45%（28.66 g/L），人參皂苷含量增加8.25%（4.92 mg/g），表明此方式顯著促進(jìn)了不定根的生長和人參皂苷的合成。并且發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)開始后20～30 d內(nèi)NH4+和HPO42-離子完全耗盡，其他營養(yǎng)物質(zhì)（K+，Cl-和SO42-）和糖的消耗量更大。此試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著培養(yǎng)周期的增加，初始培養(yǎng)基不能再滿足人參不定根生長的需求，通過培養(yǎng)基補(bǔ)充策略很好地改善了這一問題，對人參不定根中生物量的積累和人參皂苷的生物合成均具有重要促進(jìn)作用。

2.2 植物生長調(diào)節(jié)劑

植物生長調(diào)節(jié)劑是影響人參生物量增長以及次生代謝產(chǎn)物合成的關(guān)鍵因素之一（表1）。Kim等［38］測試了4種生長調(diào)節(jié)劑2，4-D、IBA、IAA和NAA對人參的調(diào)節(jié)作用，對比發(fā)現(xiàn)，在含有IBA（24.6 μmol/L）的培養(yǎng)基中獲得了更高含量的總?cè)藚⒃碥眨?.09±0.30）mg/g。有研究表明，1～5 mg/L濃度范圍內(nèi)的2，4-D對細(xì)胞生長至關(guān)重要，而0.1 mg/L 2，4-D有利于人參皂苷的合成［39］。在西洋參細(xì)胞懸浮培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，除了單一生長調(diào)節(jié)劑的作用，不同生長調(diào)節(jié)劑的組合對細(xì)胞生長和人參皂苷積累也有很好的效果［40］，如MS+6-BA 1 mg/L+2，4-D 0.5 mg/L+NAA 1 mg/L時細(xì)胞中人參多糖含量最高（20.82±0.56）mg/g）；MS+6-BA 1.5 mg/L+2，4-D 0.5 mg/L+NAA 2 mg/L時細(xì)胞中人參總皂苷的含量最高（17.92±0.71）mg/g）［36］。在大規(guī)模培養(yǎng)過程中，NAA和6-BA作為生長調(diào)節(jié)劑［41］，而2，4-D僅用于愈傷組織誘導(dǎo)。

表1 培養(yǎng)基成分對人參次生代謝產(chǎn)物的影響

2.3 不同誘導(dǎo)劑

不同的激發(fā)子通過信號分子和靶基因誘導(dǎo)不同類型的人參皂苷，誘導(dǎo)方式和誘導(dǎo)持續(xù)時間也影響人參次生代謝產(chǎn)物的含量（表2）。Kim等［42-44］發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯（MJ）的過表達(dá)增強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因人參根中原人參二醇（PPD）的產(chǎn)生，MJ通過催化上調(diào)來自Rh2的酶，促進(jìn)人參皂苷Rg3在毛狀根中積累。用MJ處理人參不定根，隨著MJ的加入，人參皂苷的產(chǎn)量以劑量依賴性的方式增加，150 μmol/L的MJ誘導(dǎo)后皂苷高達(dá)60 mg/g。于麗莉［45］對人參發(fā)狀根的皂苷合成進(jìn)行研究，在培養(yǎng)第22 d添加MJ，當(dāng)作用到培養(yǎng)周期的第27 d，人參發(fā)狀根皂苷含量達(dá)到最大（5.269 mg/g），MJ的最佳添加濃度為6×10-4μmol/L，同時發(fā)現(xiàn)，添加MJ后，刺激了發(fā)狀根代謝活動的增強(qiáng)，有利于次生代謝產(chǎn)物的合成。此外，Hu等［46］發(fā)現(xiàn)與MJ相比，茉莉酸-2-羥乙酯（HEJ）可以刺激三七中的人參皂苷Rb1和Rd葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（UGRdGT）活性升高，并表明HEJ對三七中的人參皂苷生物合成的下游調(diào)控不同，HEJ可以比MJ更有效地產(chǎn)生人參皂苷Rb1。

表2 誘導(dǎo)劑對人參次生代謝產(chǎn)物的影響

培養(yǎng)基中添加草酸可以使總皂苷含量提高5 mg/g，加甲殼素使多糖含量增加2.92 mg/g，皂苷含量增加2.32 mg/g；添加Hg2+有助于稀有皂苷C-K的積累，而添加乙二醇雙四乙酸（EGTA）增加了皂苷Rh2的積累［36］。Le等［47］用秋水仙素誘導(dǎo)人參不定根產(chǎn)生突變體，在生物反應(yīng)器中，使用添加了IBA的MS液體培養(yǎng)基培養(yǎng)6周，人參皂苷產(chǎn)量可達(dá)186.6 mg/L，比對照組高4.85倍。

Wang等［48］將人參不定根與固定化黑曲霉孢子（ISAN）共培養(yǎng)24 h后，人參皂苷含量最高為（26.43±0.49）mg/g，比未處理對照（8.55±0.78）mg/g高2.09倍。因此，人參不定根與黑曲霉孢子（ISAN）共培養(yǎng)是提高人參皂苷產(chǎn)量的一種很有前景的方法，為促進(jìn)植物次生代謝產(chǎn)物的積累提供了新的途徑。

此外，Zhang等［49］將短雙歧桿菌的α-L-鼠李糖苷酶基因過表達(dá)到毛根培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)30 d后，人參皂苷Rg含量是對照的2.2倍，表明α-L-鼠李糖苷酶基因根提高了人參皂苷Rg1的積累，使干重最高可達(dá)3.6 mg/g。與此相同的是，Liang等［50］用吐溫80滲透到人參毛狀根中處理25 d后，發(fā)現(xiàn)總?cè)藚⒃碥盏暮吭黾恿思s3倍，表明吐溫80不僅可以作為有效的透化劑來促進(jìn)毛狀根分泌人參皂苷，而且還可以作為促進(jìn)人參皂苷生物合成的誘導(dǎo)劑。

張悅等［51，52］在人參愈傷懸浮培養(yǎng)生長對數(shù)期添加0.001 mg/L水楊酸，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)后28 d添加水楊酸可以明顯促進(jìn)人參愈傷組織中人參皂苷的合成，是對照組的130%。Zhou等［53］利用從重樓中分離出的兩種低聚糖—七糖（hs）和八糖（os），刺激人參毛狀根的生長和人參皂苷的積累，在接種10 d后分別加入30 mg/L的七糖和八糖，根系總皂苷含量從1.6%增加到3.5%以上，結(jié)果表明這兩種低聚糖在植物組織培養(yǎng)中可能具有植物生長調(diào)節(jié)活性。另外，Ali等［54］研究發(fā)現(xiàn)2.5%的CO2處理人參根45 d后，總酚、類黃酮和1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）活性分別增加了60%、30%和20%，表明酚類化合物對植物免受二氧化碳的氧化起重要作用。以上結(jié)果均表明，向人參根懸浮培養(yǎng)物中遞送的高濃度CO2，誘導(dǎo)了具有高抗氧化性質(zhì)的總酚類物質(zhì)的積累。因此，人參根是具有高抗氧化能力的酚類化合物的良好來源。

2.4 人參內(nèi)生菌

內(nèi)生菌廣泛存在于健康植物組織內(nèi)部，能夠產(chǎn)生或促進(jìn)同原植物相同或相似的活性物質(zhì)，是植物微生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，人參內(nèi)生菌對人參皂苷的產(chǎn)生也具有調(diào)節(jié)作用（表3）。陳雪英［55］從西洋參的根部分離出3株內(nèi)生細(xì)菌，證明了其中1株中含有人參皂苷Rb1，且該菌株可將皂苷Rb1部分轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rd。之后，張薇［56］從人參根部得到2株人參內(nèi)生菌——莫勒接霉（Zygorhynchus moelleri）和灰綠犁頭霉（Absidiaglauca），發(fā)現(xiàn)能夠?qū)⑷藚⒃碥誖b1轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rd。呂國忠等［57］進(jìn)一步證實(shí)灰綠犁頭霉菌具有轉(zhuǎn)化底物人參皂苷Rb1制備Rd的能力。另外，侯耀達(dá)等［58］從7年生林下參根部分離得到1株霉菌GS1-33，能有效地將人參根總皂苷轉(zhuǎn)化為人參稀有皂苷C-K及Rh1。此外，陳泠［59］考察3R-2菌絲對人參毛狀根生長和次生代謝成分生物合成的影響，研究表明在3R-2菌絲與人參毛狀根共培養(yǎng)的14～21 d內(nèi)有顯著的促進(jìn)作用；培養(yǎng)14d時，人參皂苷Rc的含量達(dá)到最高。

表3 人參內(nèi)生菌對次生代謝產(chǎn)物的影響作用

2.5 其他

目前，除了以上所述的影響條件，在促進(jìn)人參產(chǎn)生更多次生代謝產(chǎn)物的影響因素方面，還發(fā)現(xiàn)幾種比較新的方法和誘導(dǎo)條件（表4）。Kim等［60］研究人參-西洋參雜交體（PGQ），發(fā)現(xiàn)其生長旺盛且它的根比親本的大，對PGQ及其親本的體細(xì)胞胚胎發(fā)生（SE）進(jìn)行了比較研究，PGQ外植體的胚胎誘導(dǎo)率較高（2 mg/L 2，4-D作用下胚胎誘導(dǎo)率約56%），其發(fā)芽胚在土壤轉(zhuǎn)移后都產(chǎn)生新的芽，在親本中發(fā)現(xiàn)了種間雜交人參，F(xiàn)1雜交體（PGQ）含有2個種特異性人參皂苷（人參皂苷Rf和西洋參假人參皂苷F11），其他人參皂苷含量均高于親本。

表4 其他作用方式對人參次生代謝產(chǎn)物的影響

張磊等［61］研究NO供體硝普鈉（SNP）在光照脅迫下對人參愈傷組織細(xì)胞生長及次生代謝產(chǎn)物積累的影響，發(fā)現(xiàn)在光照脅迫下，SNP處理后人參愈傷組織中抗氧化酶活性得到增強(qiáng)，清除了強(qiáng)光脅迫下產(chǎn)生的活性氧，緩解了強(qiáng)光對人參愈傷組織的脅迫作用，并發(fā)現(xiàn)NO可促進(jìn)萜類物質(zhì)的合成，并可促進(jìn)細(xì)胞合成纖維素、木質(zhì)素、多糖和皂苷的積累。

Le等［62］用伽馬射線照射不定根培養(yǎng)物，產(chǎn)生了4個獨(dú)特的突變株，發(fā)現(xiàn)突變系的人參皂苷含量比對照組的高4.2倍。伽馬射線處理的不定根突變株代表了人參皂苷商業(yè)化生產(chǎn)的良好方式。Lee等［63］用根霉屬真菌Rhizopus oligosporus發(fā)酵野生人參14 d后，總皂苷含量從3 274 mg/kg增加到5 573 mg/kg。

3 小結(jié)與展望

目前，關(guān)于人參組織培養(yǎng)技術(shù)的研究已經(jīng)日趨完善，在中國、日本和韓國已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了人參組織培養(yǎng)的工業(yè)化生產(chǎn)。在人參愈傷組織誘導(dǎo)方面，以人參根、莖、葉誘導(dǎo)最為常見，其中，莖和葉誘導(dǎo)效果比較明顯，誘導(dǎo)率比較高，因此，使用人參莖和葉誘導(dǎo)愈傷組織已被廣泛采用。人參愈傷誘導(dǎo)大多使用MS培養(yǎng)基，添加2，4-D作為愈傷組織主要誘導(dǎo)調(diào)節(jié)劑，并添加6-BA、KT、NAA等作為輔助調(diào)節(jié)劑。

人參皂苷是人參合成的重要代謝產(chǎn)物。在組織培養(yǎng)中，人參的次生代謝產(chǎn)物受培養(yǎng)基、生長素、誘導(dǎo)劑以及人參內(nèi)生菌等多種因素的影響，研究者們常利用此類因素的影響作用以達(dá)到促進(jìn)人參皂苷積累的目的。因此，深入地研究組培條件對人參次生代謝產(chǎn)物的影響作用，才能最大化地提高人參組培物的質(zhì)量和產(chǎn)量。隨著科技的進(jìn)步和相關(guān)研究的發(fā)展，提高人參皂苷的研究必將成為熱點(diǎn)，未來將產(chǎn)生巨大的科學(xué)價值和經(jīng)濟(jì)效益。