響應(yīng)面法優(yōu)化鐵皮石斛多糖的提取及其成分分析

李佳 楊曉麗 楊小丹 田洋 白忠彬

(1云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院 云南昆明 650201;2云南省生物大數(shù)據(jù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 云南昆明 650201)

鐵皮石斛（Dendrobium officinale）是蘭科屬草本植物，又稱(chēng)鐵皮蘭、黑節(jié)草。因其喜溫暖濕潤(rùn)氣候和半陰半陽(yáng)的環(huán)境［1］，秦嶺、淮河以南的皖、浙以及云、貴、川等地成為了中國(guó)鐵皮石斛的主要分布地［2］。由于野生鐵皮石斛生長(zhǎng)條件的特殊性和分布的局限性，又經(jīng)長(zhǎng)期采挖，自然資源瀕臨枯竭，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)供應(yīng)緊缺。鐵皮石斛又被稱(chēng)為“九大仙草之首”，味甘、性微寒，在《本草綱目》中記載“石斛氣平，味甘、淡、微咸，陰中之陽(yáng)，降也”［3］，即鐵皮石斛有補(bǔ)腎臟、調(diào)理脾胃、滋陰補(bǔ)陽(yáng)、補(bǔ)養(yǎng)臟腑、清熱除痹、延年益壽之功效［4-5］。

鐵皮石斛中含有多種功能活性物質(zhì)，主要有多糖、氨基酸類(lèi)、生物堿和多種微量元素［6-8］。多糖是糖類(lèi)在自然界中的主要存在形式，有些多糖具有某種特殊的生理活性稱(chēng)為活性多糖。多糖是鐵皮石斛主要功效成分，且含量較高；根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，鐵皮石斛多糖具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖及其他作用（抑菌、促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)、抗衰老、降血壓等）［9-10］，因此在功能性食品、藥品和化妝品行業(yè)中具有良好的發(fā)展前景［11-13］。云南林下仿生鐵皮石斛功能活性成分含量較市場(chǎng)上所售石斛高，營(yíng)養(yǎng)更為豐富，因此，研究其活性成分高效、便捷的提取工藝，對(duì)于中國(guó)鐵皮石斛的市場(chǎng)開(kāi)發(fā)有重要意義。本研究通過(guò)單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面設(shè)計(jì)對(duì)鐵皮石斛多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，使用熱水浸提法來(lái)提取鐵皮石斛多糖，結(jié)合苯酚-硫酸法［11］測(cè)定鐵皮石斛多糖含量，再用Box-Behnken組合設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案來(lái)優(yōu)化分離純化條件［12-14］，旨在為鐵皮石斛多糖的功能活性研究奠定基礎(chǔ)，進(jìn)而為鐵皮石斛今后的市場(chǎng)發(fā)展提供有效的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 鐵皮石斛

云南省普洱市斛哥莊園，為仿野生林下鐵皮石斛。

1.1.2 試劑

硫酸（重慶川東化工有限公司），苯酚（Aladdin），無(wú)水乙醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司），正己烷（重慶川東化工有限公司），正丁醇（重慶川東化工有限公司），三氯甲烷（重慶川東化工有限公司），無(wú)水葡萄糖（廣東光華科技股份有限公司），所有有機(jī)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 儀器

FA1004N分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州市華普達(dá)數(shù)學(xué)儀器有限公司），IUV-5100紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司），RE-3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠(chǎng)），SC-36低速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司），F(xiàn)D-1A-50真空冷凍干燥機(jī)（上海比郎儀器制造有限公司），F(xiàn)L-2Y電爐（上海力辰邦西儀器科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 鐵皮石斛多糖的提取

1.2.1.1 原料的選擇和處理

取林下仿生鐵皮石斛鮮條切段，每段長(zhǎng)度0.5～1.0 cm，稱(chēng)取鐵皮石解鮮條段300.000g，于60℃恒溫干燥2～3 d；將烘干后的鐵皮石斛磨碎成粉，過(guò)100目篩，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1.2 鐵皮石斛脫脂

用分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取鐵皮石斛粉末25.000g，加入5倍體積的正己烷，用磁力攪拌器攪拌48h后用濾紙過(guò)濾；往濾渣中再加入5倍體積的95%乙醇攪拌48 h后過(guò)濾；將濾渣放入陶瓷盤(pán)子中自然風(fēng)干。

1.2.1.3 多糖提取

用分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)取鐵皮石斛粉未5.000 g，加入裝有400mL蒸餾水的500mL燒杯中，打開(kāi)電爐墊石棉網(wǎng)加熱至95～100℃提取，溶液沸騰時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)（2 h）；冷卻至室溫后用6層紗布過(guò)濾，加400mL蒸餾水對(duì)濾渣重復(fù)浸提2次，依次進(jìn)行過(guò)濾操作。

1.2.1.4 提取液處理

合并上述3次經(jīng)過(guò)濾的多糖提取液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（56～60℃）上旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至200 mL左右。Sevage法除蛋白：在多糖溶液中加入1/4的Sevage試劑（正丁醇∶三氯甲烷＝1∶4，V∶V），于搖床上30min，離心去除水層與溶劑層之間的變性蛋白層，重復(fù)操作6～8次，直至無(wú)變性蛋白析出。

1.2.1.5 冷凍干燥

量取經(jīng)脫蛋白處理的多糖溶液，加入4倍體積95%乙醇，于4℃冰箱靜置12 h后進(jìn)行離心，以轉(zhuǎn)速3500 r/min處理10 min；棄去上清液收集沉淀，將沉淀放入凍干盤(pán)中置于-80℃冰箱預(yù)冷凍；將已凍結(jié)的多糖真空冷凍干燥3～4 d，研磨成粉，裝入離心管或自封袋，即得鐵皮石解多糖粉末樣品。

1.2.2 鐵皮石斛多糖含量的測(cè)定

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

精確稱(chēng)取0.500 g干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖，配制成濃度為0.100 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；取11支試管，分別加入 0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，補(bǔ)齊蒸餾水體積至2.0 mL；加入5%苯酚溶液1.000 mL，搖勻，再加入濃硫酸5.0 mL，搖勻，沸水浴煮沸15 min，以流動(dòng)水冷卻至室溫后在490nm處測(cè)量吸光度；以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（圖1）。

圖1 苯酚-硫酸法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

1.2.2.2 苯酚-硫酸法測(cè)定鐵皮石斛多糖含量

準(zhǔn)確量取待檢測(cè)多糖溶液1.0mL于10.0mL具塞試管中，加水至2.0 mL，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備方法，加入1.0 mL 5%苯酚溶液，震蕩搖勻，加入5.0 mL濃硫酸，搖勻，沸水浴15 min后，以流動(dòng)水沖洗至室溫，在紫外分光光度計(jì)490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣品溶液中鐵皮石斛多糖濃度，通過(guò)多糖含量的計(jì)算方法計(jì)算鐵皮石斛多糖含量、純度及提取率。

式中：C表示標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出的多糖濃度（mg/mL）；C母表示樣品濃度，0.1 mg/mL；F表示樣品稀釋倍數(shù)（100倍）；0.91表示葡萄糖的校正系數(shù)。

1.2.3 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.3.1 液料比對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

稱(chēng)取5.000 g的鐵皮石斛粉末，以液料比為自變量做單因素試驗(yàn)。固定多糖提取條件為提取溫度95℃、提取時(shí)間1.5h、提取次數(shù)3次，考察液料比20∶1、40∶1、60∶1、80∶1、100∶1 （mL/g）對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響。

1.2.3.2 提取次數(shù)對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

稱(chēng)取5.000 g的鐵皮石斛粉末，以提取次數(shù)為自變量做單因素試驗(yàn)。固定多糖提取條件為提取溫度95℃、液料比80∶1（mL/g）、提取時(shí)間1.5h，考察提取次數(shù)1、2、3、4、5次對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響。

1.2.3.3 提取時(shí)間對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

稱(chēng)取5.000 g的鐵皮石斛粉末，以提取時(shí)間為自變量做單因素試驗(yàn)。固定其他提取條件為液料比80∶1（mL/g）、提取次數(shù)3次、提取溫度95℃，考察提取時(shí)間1.0、1.5、2、2.5、3.0 h對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響。

1.2.3.4 提取溫度對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

稱(chēng)取5.000 g的鐵皮石斛粉末，以提取溫度為自變量做單因素試驗(yàn)。固定多糖提取條件為液料比80∶1（mL/g）、提取時(shí)間1.5 h、提取次數(shù)3次，考察提取溫度60、70、80、90、95℃對(duì)多糖含量的影響。

1.2.4 Box-Behnken設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案

在單因素的基礎(chǔ)上，應(yīng)用Design Expert 8.0.6軟件進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究各參數(shù)對(duì)考察指標(biāo)的影響規(guī)律，并得到最優(yōu)提取條件。以提取溫度、提取時(shí)間、液料比和提取次數(shù)為自變量，以鐵皮石斛多糖含量為響應(yīng)值，其因素水平編碼見(jiàn)表1。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因子水平及編碼

1.2.5 鐵皮石斛多糖理化指標(biāo)檢測(cè)

采用GB/T 5009.3—2016標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中的水分［15］，多糖中灰分按GB/T 5009.4—2016規(guī)定方法檢測(cè)［16］。

1.2.6 鐵皮石斛多糖中無(wú)機(jī)元素含量測(cè)定

按GB/T 5009.91—2017規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中鉀元素［17］；按GB/T 5009.13—2017規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中銅元素［18］；按GB/T 5009.241—2017規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中鎂元素［19］；按GB/T 5009.14—2017規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中鋅元素［20］；按GB/T 5009.92—2016規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中鈣元素［21］；按GB/T 5009.93—2017規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中硒元素［22］；按GB/T 5009.242—2017規(guī)定的方法檢測(cè)多糖中錳元素［23］。

1.2.7 鐵皮石斛多糖中氨基酸成分檢測(cè)

多糖中氨基酸含量按GB/T 5009.124—2016規(guī)定的方法檢測(cè)［24］。

1.2.8 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)為3次重復(fù)平均值，采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和作圖，SPSS 5.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；利用Design-Expert 8.0研究液料比、提取溫度、提取時(shí)間及提取次數(shù)對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 液料比對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

圖2顯示，液料比在20∶1和40∶1時(shí)，鐵皮石斛多糖含量較低。原因是由于20∶1和40∶1時(shí)，液料比過(guò)低而多糖提取溶液濃度過(guò)高，多糖還粘附在鐵皮石斛表面，過(guò)濾時(shí)將多糖隨鐵皮石斛殘?jiān)鼮V掉，導(dǎo)致多糖含量降低。液料比增加到60∶1時(shí)，鐵皮石斛多糖含量顯著上升，是因?yàn)殡S料液的增加多糖提取比較充分，但由于經(jīng)過(guò)粗純化的多糖其溶解性好，因此隨著液料比的增加，多糖在后續(xù)的過(guò)濾過(guò)程中有所損失，導(dǎo)致含量下降。因此，液料比60∶1為鐵皮石斛多糖提取的最適液料比。

圖2 液料比對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

2.1.2 提取次數(shù)對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

圖3顯示，提取次數(shù)1～2次鐵皮石斛含量顯著下降。提取1～2次不足以將多糖提取完全，造成多糖大量損失；當(dāng)提取到3次時(shí)，多糖含量提取比較完全；提取次數(shù)超過(guò)3次以后鐵皮石斛多糖含量逐漸下降，可能是提取次數(shù)過(guò)多，多糖因粘帶濾渣被過(guò)濾掉而導(dǎo)致含量下降。在提取次數(shù)為3次時(shí)鐵皮石斛多糖含量最高，因此3次為鐵皮石斛多糖提取的最適提取次數(shù)。

圖3 提取次數(shù)對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

2.1.3 提取時(shí)間對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

圖4顯示，提取時(shí)間對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響比較大。提取時(shí)間為3.0h時(shí)鐵皮石斛多糖含量最低，2.5 h時(shí)最高，鐵皮石斛多糖需要一定時(shí)間才能夠完全溶出。因此，提取時(shí)間2.5h為鐵皮石斛多糖的最適提取時(shí)間。

圖4 提取時(shí)間對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

2.1.4 提取溫度對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

圖5顯示，隨著提取溫度的不斷增加，鐵皮石斛多糖含量也在明顯增大，提取溫度在90℃時(shí)鐵皮石斛多糖含量最高，之后多糖含量又有所下降，是由于多糖在高溫下發(fā)生部分水解［25］。

圖5 提取溫度對(duì)鐵皮石斛多糖含量的影響

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)

基于單因素試驗(yàn)分析，根據(jù)Box-Benhnken中心組合設(shè)計(jì)四因子三水平的響應(yīng)面分析試驗(yàn)，試驗(yàn)方案根據(jù)表1的因子與水平設(shè)計(jì)，所得響應(yīng)面的試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

續(xù)表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

從響應(yīng)面的設(shè)計(jì)及試驗(yàn)結(jié)果，獲得以鐵皮石斛多糖含量為響應(yīng)值的二次回歸方程為：

Y＝91.19＋4.72A-3.63B＋5C－4.28D-0.45AB＋1.22AC＋4.93AD＋4.36BC－8.65BD－0.12CD－15.51A2＋4.42B2－10.56C2－11.11D2

回歸模型方差分析見(jiàn)表3。利用方差分析結(jié)果建立的回歸模型p＜0.000 1，達(dá)到極顯著水平，得出R2＝0.928 5，Radj2＝0.845 1，說(shuō)明模型能夠較好地反映響應(yīng)值的變化；失擬項(xiàng)（p＝1）不顯著，說(shuō)明回歸模型和預(yù)測(cè)值之間有較好擬合度。

表3 回歸模型方差分析

通過(guò)液料比、提取次數(shù)、提取時(shí)間、提取溫度的試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化，得到相應(yīng)的數(shù)據(jù)分析。二次方程回歸系數(shù)的顯著性表明，因素C（提取溫度）（p＜0.010）、A（液料比）（p＜0.010）對(duì)鐵皮石斛多糖含量提取效應(yīng)極顯著；因素B（提取時(shí)間）（p＜0.050）、因素D（提取時(shí)間）（p＜0.050）對(duì)鐵皮石斛多糖含量提取影響顯著；交互項(xiàng)BD對(duì)鐵皮石斛多糖含量提取影響顯著，其余交互項(xiàng)影響均不顯著；二次項(xiàng)A2、C2、D2（p＜0.010）對(duì)鐵皮石斛多糖含量提取影響極顯著。各因素對(duì)多糖含量的影響順序：提取次數(shù)二次項(xiàng)＞提取溫度二次項(xiàng)＞提取時(shí)間和提取次數(shù)交互項(xiàng)＝提取溫度一次項(xiàng)＞液料比一次項(xiàng)＞提取次數(shù)一次項(xiàng)＞提取時(shí)間一次項(xiàng)＞提取時(shí)間二次項(xiàng)＞液料比和提取次數(shù)交互項(xiàng)＞提取時(shí)間和提取溫度交互項(xiàng)＞液料比和提取溫度交互項(xiàng)＞液料比和提取時(shí)間交互項(xiàng)＞提取溫度和提取次數(shù)交互項(xiàng)。

根據(jù)回歸模型作出相應(yīng)的響應(yīng)面和等高線(xiàn)（圖6～11），從各個(gè)因素交互作用對(duì)響應(yīng)面進(jìn)行分析，響應(yīng)面等高線(xiàn)圖可直觀地反映各因素對(duì)響應(yīng)值的影響，以便找出最佳工藝參數(shù)以及各參數(shù)之間的相互作用，等高線(xiàn)中最小橢圓的中心點(diǎn)即為響應(yīng)面的最高點(diǎn)。

圖6 提取時(shí)間與液料比對(duì)鐵皮石斛多糖含量影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)圖

圖7 提取溫度與液料比對(duì)鐵皮石斛多糖含量影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)

圖8 提取次數(shù)與液料比對(duì)鐵皮石斛多糖含量影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)

圖9 提取溫度與提取時(shí)間對(duì)鐵皮石斛多糖含量影響的響應(yīng)面和等高線(xiàn)

圖10 提取次數(shù)與提取時(shí)間對(duì)鐵皮石斛多糖含量影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)

圖11 提取次數(shù)與提取溫度對(duì)鐵皮石斛多糖含量影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)

等高線(xiàn)的形狀可反映出交互效應(yīng)的強(qiáng)弱，橢圓形表示兩因素交互作用顯著，而圓形則與之相反。響應(yīng)面圖中曲線(xiàn)越彎曲，說(shuō)明研究因素對(duì)結(jié)果影響越大，等高線(xiàn)呈橢圓形說(shuō)明研究因素之間的交互作用顯著，呈圓形則說(shuō)明交互作用不顯著。通過(guò)三維圖，觀察曲面的傾斜度，確定二者對(duì)響應(yīng)值的影響程度，傾斜度越高即坡度越陡，說(shuō)明二者交互作用越顯著。從響應(yīng)面和等高線(xiàn)圖可以看出，提取溫度與液料比的交互作用對(duì)鐵皮石斛多糖含量提取的影響最顯著。

2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)

通過(guò)響應(yīng)面方法的設(shè)計(jì)，得到鐵皮石斛多糖提取的最佳條件為：液料比61.48∶1，提取時(shí)間2.02h，提取溫度88.96℃，提取次數(shù)3.13次，預(yù)測(cè)的多糖含量為99.09%。但由于實(shí)際操作條件的限制，將提取的最優(yōu)提取工藝設(shè)置為：提取溫度90℃，提取時(shí)間2.5h，液料比60∶1，提取次數(shù)3次。在此條件下提取率為32%，多糖含量的理論預(yù)測(cè)值為98.63%。在此條件下進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，得到的多糖提取率接近35%，同時(shí)3次試驗(yàn)測(cè)得的多糖含量平均值為85.33%。因此，響應(yīng)面法對(duì)鐵皮石斛多糖提取條件的優(yōu)化是穩(wěn)定可行的。

2.4 鐵皮石斛多糖的成分分析

通過(guò)檢測(cè)鐵皮石斛多糖粉末中影響其理化性質(zhì)的成分可知，其水分含量為7.39%，灰分含量達(dá)到3.56%，由于進(jìn)行了凍干，因此水分含量較少，溶解后的多糖溶液較為粘稠。

無(wú)機(jī)元素檢測(cè)結(jié)果顯示，鐵皮石斛多糖中無(wú)機(jī)元素的總量為1.39%，其中K含量0.231%，Cu含量0.042%，Mg含量0.087%，Zn含量0.007%，Ca含量1.01%，Mn含量0.013%，Se含量0.003%。鐵皮石斛多糖中富含無(wú)機(jī)鹽，可以維持機(jī)體正常的生命活動(dòng)，比如Ca含量較高，可以有效地防治骨質(zhì)疏松；Zn可以提高機(jī)體的免疫力等。

經(jīng)檢測(cè)可知，鐵皮石斛多糖中含有16種氨基酸，其中包括7種成人必需氨基酸，9種非必需氨基酸，見(jiàn)表4。

表4 鐵皮石斛多糖中氨基酸含量

3 討論與結(jié)論

鐵皮石斛多糖的提取方法主要有傳統(tǒng)熱水浸提法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法、酶輔助提取法、超臨界輔助提取法等［26］。不同工藝對(duì)多糖成品的質(zhì)量、結(jié)構(gòu)、活性以及提取率均有很大的影響。本研究主要探討了鐵皮石斛的液料比、提取次數(shù)、提取溫度和提取時(shí)間對(duì)多糖含量提取的影響，在40∶1～100∶1對(duì)液料比進(jìn)行優(yōu)化，當(dāng)液料比為40∶1時(shí)，由于溶劑較少，鐵皮石斛多糖無(wú)法完全提取，所以多糖含量較低，結(jié)合實(shí)際操作過(guò)程認(rèn)為，液料比在60∶1時(shí)提取多糖最優(yōu)。在提取次數(shù)不斷增加時(shí)，鐵皮石斛中的多糖含量逐漸減小，并在提取次數(shù)為3次時(shí)多糖含量最高。通過(guò)對(duì)鐵皮石斛提取時(shí)間進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，隨提取時(shí)間延長(zhǎng)，多糖含量有所減少，提取時(shí)間在2.5 h時(shí)效果良好。提取溫度在60～90℃時(shí)，多糖含量隨提取溫度的提高逐漸增加，在100℃時(shí)又明顯下降，因此最適提取溫度為90℃。通過(guò)響應(yīng)面優(yōu)化鐵皮石斛多糖的分離粗純化條件，鐵皮石斛多糖提取的最優(yōu)條件為提取溫度90℃，提取時(shí)間2.5h，液料比60∶1，提取次數(shù)3次；在此條件下提取率接近35%，多糖含量為85.33%。與李程程等［27］提取效果基本吻合。

本研究對(duì)鐵皮石斛粉末進(jìn)行脫脂處理，并對(duì)鐵皮石斛提取液進(jìn)行透析以除去小分子物質(zhì)及鹽類(lèi)，經(jīng)醇沉冷凍干燥后，根據(jù)多糖含量計(jì)算方法，得到鐵皮石斛多糖純度為85.33%。通過(guò)對(duì)鐵皮石斛多糖組分中的灰分、水分以及無(wú)機(jī)元素、氨基酸進(jìn)行分析可知，其水分含量為7.39%，灰分含量達(dá)到3.56%，無(wú)機(jī)元素的總量為1.39%，氨基酸總量為0.67%，含16種氨基酸，包括7種成年人必需氨基酸和9種非必需氨基酸。由此可見(jiàn)，在本試驗(yàn)條件下提取到的鐵皮石斛多糖富含人體必需氨基酸，且礦物質(zhì)含量豐富，商業(yè)價(jià)值更高。