蒼耳子烘制前后綠原酸含量的變化

姜 爽，李明達(dá)，劉成琳,2，武子敬,2*

（1.通化師范學(xué)院，通化 134002；2.通化師范學(xué)院吉林省長白山藥用植物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，通化 134002）

蒼耳子為菊科植物蒼耳Xanthium s ibiricumPatr.的干燥成熟帶總苞的果實(shí)，最早收載于《千金·食治》，又名為葈耳實(shí)，秋季果實(shí)成熟時(shí)采收，干燥，除去梗、葉等雜質(zhì)。性溫，味辛、苦，有毒，具有散風(fēng)寒、通鼻竅、祛風(fēng)濕的功能[1,2]。主要用于風(fēng)寒頭痛、鼻塞流涕、鼻孰、鼻淵、風(fēng)疹痰癢、濕痹拘攣等。是傳統(tǒng)的鼻科要藥，亦為常用有毒中藥[3-5]。蒼耳子中的化學(xué)成分有多種，主要包括甾醇類、噻嗪類、倍半萜類、水溶性苷類、酚酸及其衍生物、黃酮類、蒽醌類、揮發(fā)油、生堿類等化學(xué)成分[3,5,6]?，F(xiàn)代研究表明，蒼耳子的藥理作用有降血糖、抗過敏、抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤的作用[7]。中醫(yī)認(rèn)為，蒼耳子有小毒，對(duì)于蒼耳子的炮制記載主要為“炮制去刺”[8]，須經(jīng)炮制后才可用于臨床，炒制的火候把握很重要，故本論文采用高溫烘制的方法，對(duì)蒼耳子進(jìn)行炮制，考察其中活性成分綠原酸的含量變化情況。

1 材料與方法

1.1 材料儀器與試劑

1.1.1 材料

蒼耳子購于通化醫(yī)藥大廈，經(jīng)通化師范學(xué)院于俊林教授鑒定為菊科植物蒼耳Xanthium sibiricumPatr.的干燥成熟帶總苞的果實(shí)；綠原酸對(duì)照品（四川維克奇生物有限公司），供含量檢測用。

取生蒼耳子適量置于真空干燥箱，溫度調(diào)200℃恒溫，烘制15min，取出晾涼備用。

1.1.2 儀器

賽默飛高效液相色譜儀（包括自動(dòng)取樣器、四元泵系統(tǒng)、紫外檢測器、工作站），精密電子天平（天津天馬恒基儀器有限公司）；SG3300H超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）；DZF-6050真空干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.3 試劑

水為娃哈哈純凈水，甲醇、乙腈為色譜純，磷酸為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照品溶液制備

精密稱取綠原酸對(duì)照品1.25mg,置10mL容量瓶中，加適量甲醇溶解至刻度，即得綠原酸對(duì)照品溶液（濃度為0.125mg/mL）。

1.2.2樣品的制備

1.2.2.1 供試品溶液的制備

精密稱取生品蒼耳子、烘制蒼耳子約2g，置250mL具塞錐形瓶中，加水100mL，精密稱定，超聲處理（250W，40kHz）1h，取出放涼，精密稱定，用水補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate Polar RP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈（A）：0.04%磷酸水（B），梯度洗脫（0~20min，10%→25%），柱溫：30℃，檢測波長：327nm，進(jìn)樣量：5μL。結(jié)果見圖1、2、3，為對(duì)照品、生品和烘制品的蒼耳子的供試品溶液綠原酸高效液相色譜圖。

圖1 綠原酸對(duì)照品HPLC圖

圖2 生品蒼耳子供試品HPLC圖

圖3 烘制蒼耳子供試品HPLC圖

1.3.2 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液2、5、10、15、20μL，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄不同進(jìn)樣量的混合對(duì)照品溶液的峰面積和保留時(shí)間，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，Y=47.22X+1.4995，R2=0.998（n=5），線性范圍在0.25~2.5μg，結(jié)果見圖4。

圖4 綠原酸對(duì)照品線性關(guān)系圖

1.3.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一混合生品、烘制品的供試品溶液，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件，一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣量5μL，記錄峰面積并計(jì)算生品、烘制供試品溶液中綠原酸峰面積的RSD值分別為0.66%、0.62%，表明儀器精密度良好。

1.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

精密吸取同一生品、烘制品的供試品溶液，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件，分別在0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量5μL，記錄10h內(nèi)生品、烘制品的供試品溶液中綠原酸峰面積并計(jì)算RSD值分別為0.67%、0.57%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批生品、烘制蒼耳子藥材約2g，精密稱定，按“1.2.2.1”項(xiàng)下方法平行制備6份生品、烘制品的供試品溶液，在“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量5μL，記錄峰面積并計(jì)算生品、烘制品的供試品溶液含量RSD分別為0.63%、0.67%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.3.6 回收率試驗(yàn)

取已知含量的生品、烘制蒼耳子（其中生品、烘制品蒼耳子的綠原酸的含量分別為12.01mg·g-1、24.05mg·g-1）約0.05 g，精密稱定，平行6份，分別加入綠原酸對(duì)照品適量，按“1.2.2.1”項(xiàng)下方法制備生品、烘制品蒼耳子的供試品溶液，在“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定含量，計(jì)算回收率平均值分別為99.63%、99.80%，RSD值分別為0.90%、0.43%。

2 結(jié)論與討論

本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定生品蒼耳子和烘制品蒼耳子中綠原酸的含量，該方法簡便、快速、重現(xiàn)性好。生品蒼耳子中綠原酸含量12.01 mg·g-1，烘制品蒼耳子中綠原酸含量24.05 mg·g-1?？梢姼邷睾嬷破肪G原酸的含量明顯比生品中綠原酸的含量增加，而且用高溫烘制的炮制方法對(duì)蒼耳子進(jìn)行炮制，操作方法簡單可行，這也為高溫烘制法對(duì)蒼耳子飲片的炮制奠定基礎(chǔ)。