缺氧誘導(dǎo)因子-1/2在肝細(xì)胞癌中的研究進(jìn)展

郭海鑫，胡唯偉，楊勇，陳真

(中國(guó)藥科大學(xué)，江蘇 南京 210009)

肝癌(liver cancer)是2018年全球第六大癌癥和第四大癌癥死因，其中肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)占到原發(fā)性肝癌的75%～85%[1]。2019年1月國(guó)家癌癥中心公布了2015中國(guó)癌癥數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)顯示，惡性腫瘤已經(jīng)成為我國(guó)國(guó)內(nèi)居民首要的死亡原因，其中，肝癌的發(fā)病率高居第四位，其死亡率更是僅次于肺癌，居第二[2]。包括肝細(xì)胞癌在內(nèi)的實(shí)體瘤的發(fā)生發(fā)展除了受腫瘤細(xì)胞自身的內(nèi)在因素控制外，腫瘤細(xì)胞所處的生長(zhǎng)環(huán)境也會(huì)對(duì)腫瘤產(chǎn)生重要的影響[3]。

自1955年，Thomlinson等通過(guò)對(duì)肺癌患者癌巢組織的研究后，第一次提出腫瘤缺氧的概念以來(lái)，經(jīng)過(guò)近70年的臨床病理分析及實(shí)驗(yàn)室體內(nèi)外研究的證實(shí)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)在一種高度缺氧的環(huán)境內(nèi)，并且這種現(xiàn)象是廣泛存在于各種實(shí)體瘤中。缺氧作為腫瘤微環(huán)境的一種特征，腫瘤細(xì)胞通過(guò)啟動(dòng)一系列轉(zhuǎn)錄因子，不僅使腫瘤適應(yīng)了低氧的生長(zhǎng)環(huán)境，還能參與到腫瘤的增殖凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移、表型的決定、血管生成、能量代謝和腫瘤耐藥、放化療抵抗以及病人的預(yù)后程度等進(jìn)程中。在這一系列的轉(zhuǎn)錄因子中缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible factors，HIFs)是一種調(diào)控與氧相關(guān)的核心轉(zhuǎn)錄激活因子。腫瘤細(xì)胞在缺氧條件下通過(guò)缺氧誘導(dǎo)因子激活下游眾多信號(hào)通路，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的惡性程度[4-5]。本文主要聚焦在目前研究熱度相對(duì)比較高的缺氧誘導(dǎo)因子家族中的HIF-1α和HIF-2α，綜述了HIF-1α和HIF-2α在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程的作用及臨床現(xiàn)狀。

1 缺氧誘導(dǎo)因子(HIFs)概述

1.1 HIFs的結(jié)構(gòu)和分類(lèi) HIFs是一個(gè)異二聚體結(jié)構(gòu)蛋白，屬于PAS(Per/Amt/Sim)結(jié)構(gòu)域家族。它由兩個(gè)均具有螺旋-環(huán)-螺旋(basic-helix-loop-helix，bHLH)結(jié)構(gòu)的氧敏感型的α亞基和氧不敏感型的β亞基組成[6-7]。目前，已發(fā)現(xiàn)的缺氧誘導(dǎo)因子家族有3個(gè)亞型，分別是HIF-1、HIF-2、HIF-3，三者均是由α亞基和β亞基組成[8]。現(xiàn)有研究主要集中在發(fā)現(xiàn)比較早且生物活性相對(duì)明確的HIF-1α和HIF-2α中，對(duì)HIF-3α研究相對(duì)較少。

在HIFs蛋白3個(gè)不同亞型的α亞基中均含有氧依賴(lài)降解區(qū)(oxygen-dependent degradation domain，ODDD)，這是對(duì)氧敏感的關(guān)鍵區(qū)域，也是蛋白結(jié)構(gòu)中唯一能夠感知氧氣濃度變化的亞單位，不僅決定著HIF蛋白的穩(wěn)定性，同時(shí)也決定了蛋白的生物活性。在HIF-1α和HIF-2α中，分別在N端和C端均具有一個(gè)反式轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(transactivation domains，TAD)[9]。二者在N端的反式轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(N-TAD)的不同，直接導(dǎo)致特異性的調(diào)節(jié)不同靶基因，同時(shí)N-TAD與ODDD存在重疊，因此在調(diào)節(jié)蛋白穩(wěn)定以及維持生物活性方面起著重要的作用。C端的反式轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域(C-TAD)能夠與p300/CBP結(jié)合后共同啟動(dòng)缺氧條件下的轉(zhuǎn)錄。

β亞基屬于結(jié)構(gòu)性亞基，其中發(fā)現(xiàn)最早的研究最多的是HIF-1β亞基。HIF-1β又稱(chēng)芳香烴核轉(zhuǎn)位子(aryl hydrocarbon receptor translocator，ARNT)。其蛋白表達(dá)不受氧影響，能夠持續(xù)性的表達(dá)。因?yàn)镠IF-1α和HIF-2α在蛋白結(jié)構(gòu)和序列上存在高度相似，所以二者都能夠與HIF-1β形成不同的異二聚體。

1.2 HIFs的氧調(diào)節(jié)機(jī)制 HIFs蛋白的生理功能主要由氧敏感型的α亞基調(diào)控，因此在眾多對(duì)HIFs的研究中，主要是針對(duì)具有生物活性的HIF-α亞基。同樣，HIFs蛋白的凋亡一般也是指發(fā)揮主要生物活性的由氧調(diào)控的HIF-α亞基的凋亡。含氧(或常氧)時(shí)，在脯氨酰羥化酶(prolylhydroxylases，PHD)的作用下，N-TAD區(qū)域的ODDD區(qū)域的脯氨酸殘基被羥化。羥化后的脯氨酸殘基能夠被腫瘤抑制蛋白pVHL(von Hippel-Lindau protein)識(shí)別捕獲，pVHL能夠被E3泛素連接酶配體所識(shí)別，組成泛素連接酶復(fù)合物，從而介導(dǎo)HIF-α亞基進(jìn)入泛素蛋白酶體途徑降解。缺氧(或低氧)時(shí)，PHD表達(dá)量減少，使得HIF-α亞基的ODDD區(qū)域脯氨酸殘基羥化水平降低，減少了與pVHL的結(jié)合，泛素化降解途徑受到抑制，從而使得HIF-α亞基表達(dá)量上升。HIF-β亞基在結(jié)構(gòu)上不含ODDD結(jié)構(gòu)域， 因此HIF-1β亞基的表達(dá)不受氧氣含量的影響，在常氧或缺氧時(shí)均能夠穩(wěn)定表達(dá)。在缺氧時(shí)，HIF-1α或HIF-2α易位至細(xì)胞核內(nèi)，與HIF-1β在核內(nèi)結(jié)合形成異二聚體后，與p300/CBP進(jìn)一步結(jié)合形成具有轉(zhuǎn)錄活性的HIF轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，啟動(dòng)相應(yīng)靶基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[10-11]。

有研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧條件下，腫瘤中首先出現(xiàn)顯著上調(diào)的是HIF-1α，其表達(dá)峰值出現(xiàn)在缺氧后4 h。當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間缺氧后，HIF-1α的表達(dá)量下降，同時(shí)HIF-2α表達(dá)量上升[12]。同時(shí)，由此可見(jiàn)，HIF-1α與HIF-2α存在著一定的反饋機(jī)制。急性缺氧條件下，以HIF-1α表達(dá)為主，在長(zhǎng)時(shí)間的慢性缺氧條件下是以HIF-2α表達(dá)為主[4]。

1.3 缺氧誘導(dǎo)因子的靶基因 HIF-1α和HIF-2α在結(jié)構(gòu)和序列上有著高度的相似性，并且都具有結(jié)合靶點(diǎn)基因啟動(dòng)子中的缺氧反應(yīng)元件(hypoxia response element，HRE)，因此二者在下游調(diào)控上存在著一些共同的靶基因，如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)、 白細(xì)胞介素-6(IL-6)、葡萄糖載體蛋白-1(GLUT-1)、腎上腺髓質(zhì)素(ADM)、脂肪細(xì)胞分化相關(guān)蛋白 (ADPR)等[13]。但因二者在缺氧條件下存在著一定的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，表達(dá)量有所差異，以及結(jié)構(gòu)序列上的差異，所以它們的所介導(dǎo)的共同的靶基因調(diào)節(jié)模式有所不同。也因此，二者存在著一些各自特異性的靶基因。如胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)、內(nèi)皮素-1(ET-1)、血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)、血紅素氧合酶-1(HO-1)、誘導(dǎo)型NO合酶(iNOS)等均是 HIF-1α的特異性靶基因。細(xì)胞周期蛋白(cyclin D1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(TGF-α)、VEGF受體-2(Flk-1)、干性轉(zhuǎn)錄因子Oct-4等則是受到HIF-2α調(diào)控的特異性調(diào)控的靶基因。這些共有的和特異性的靶基因均是腫瘤在惡性發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵性靶點(diǎn)。

2 缺氧誘導(dǎo)因子與肝細(xì)胞癌

肝細(xì)胞癌主要是由肝硬化引起，其由包括非酒精性脂肪肝(NAFLD)，酒精性脂肪肝(ALD)和病毒性肝炎在內(nèi)的慢性肝病發(fā)展而來(lái)，這些慢性肝病中大部分都存在組織缺氧的特征[14]。目前HCC的治療選擇非常有限，加上HCC患者確診時(shí)大部分都已經(jīng)是晚期，只有少數(shù)HCC早期階段的患者可以通過(guò)肝切除或移植等手術(shù)治療手段治愈。但是，其中近一半左右的患者在切除后會(huì)發(fā)生腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。同時(shí)，臨床上HCC晚期的患者對(duì)化療存在很強(qiáng)的抵抗。

缺氧條件下腫瘤內(nèi)的HIF-1α和HIF-2α的轉(zhuǎn)錄和活化導(dǎo)致了下游大量的基因的表達(dá)被上調(diào)。大部分基因所編碼的蛋白參與到了腫瘤的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移、代謝、血管生成，同時(shí)也影響了腫瘤的耐藥性。

2.1 缺氧誘導(dǎo)因子調(diào)控肝細(xì)胞癌機(jī)制 臨床病理及目前已有報(bào)道，在HCC組織中HIF-1α癌巢的表達(dá)水平均高于癌旁組織，但對(duì)于HIF-2α的表達(dá)與癌巢組織的關(guān)系仍然存在爭(zhēng)議[15-16]。另外，HIF-1α或HIF-2α的高表達(dá)水平與較差的腫瘤分級(jí)、靜脈血管浸潤(rùn)、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移和包膜浸潤(rùn)有關(guān)。同時(shí)，因?yàn)槎叩母弑磉_(dá)也與無(wú)病期短和較低的生存率相關(guān)，所以HIF-1α和/或HIF-2α也可作為HCC不良預(yù)后的檢測(cè)標(biāo)志物。 此外，也有臨床報(bào)道，HIF-1α的遺傳變異與HCC發(fā)生和預(yù)后也存在相關(guān)，也可因此將其作為檢測(cè)的生物標(biāo)志物。這些臨床結(jié)果提示HIFs在HCC發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。

在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)和丙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HCV)陽(yáng)性的HCC患者中，HIF-1α的表達(dá)量要顯著高于高于陰性HCC患者，同時(shí)HBV中的HBx蛋白表達(dá)量與HIF-1α表達(dá)也呈現(xiàn)正相關(guān)[17]。除此以外，HIF-1α通過(guò)介導(dǎo)生長(zhǎng)因子，如血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(transforming growth factor-α，TGF-α)和胰島素樣生長(zhǎng)因子-2(insulin-like growth factor-2，IGF-2)等促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖以及血管新生。同時(shí)這些細(xì)胞因子的與它們相應(yīng)酪氨酸激酶受體結(jié)合后也會(huì)通過(guò)PI3K/AKT或Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路在缺氧條件下促進(jìn)HIF-1α的生成，形成反饋機(jī)制，加速腫瘤惡化。除了生長(zhǎng)因子外，也有研究報(bào)道腎上腺素受體β2(ADRB2)蛋白以AKT依賴(lài)形式穩(wěn)定HIF-1α蛋白促進(jìn)HCC的增殖[18]。另外，熱休克蛋白HSP90通過(guò)調(diào)節(jié)HIF-1a表達(dá)也能夠促進(jìn)HCC的增殖并且抑制細(xì)胞凋亡[19]。雖然HIF-2α轉(zhuǎn)錄的靶基因有促進(jìn)細(xì)胞增殖的周期蛋白，但是目前對(duì)于HIF-2α在HCC增殖方面的作用仍然存在爭(zhēng)議。有研究報(bào)道，HIF-2α能夠通過(guò)E2F1信號(hào)途徑抑制HCC的增殖，促進(jìn)HCC凋亡[20]。

茄子生長(zhǎng)成熟后采收，采收要注意采收的時(shí)間，一般在開(kāi)花后的25天，也就是茄子萼片與果實(shí)相接處白色或淡綠色環(huán)狀帶即將消失時(shí)即可采收。采收之后，要及時(shí)包裝和售賣(mài)，保障茄子的質(zhì)量。

腫瘤的轉(zhuǎn)移是許多HCC患者發(fā)生不良預(yù)后的主要原因，而上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的必要條件。HIF-1α和HIF-2α能夠直接下調(diào)E-鈣黏蛋白(E-cadherin)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，以獲得轉(zhuǎn)移能力[21-22]。同時(shí)，HIFs也能通過(guò)誘導(dǎo)諸如Snail、Twist-1、Twist-2等E-Cadherin抑制因子來(lái)促使腫瘤細(xì)胞加快EMT進(jìn)程[22-23]。有研究報(bào)道，在持續(xù)性缺氧狀態(tài)下的HCC細(xì)胞的壞死碎片可以誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞釋放IL-1β，IL-1β通過(guò)與環(huán)氧酶-2結(jié)合，上調(diào)HIF-1α，從而促進(jìn)HCC細(xì)胞的EMT進(jìn)程[24]。最新的研究發(fā)現(xiàn)，HCC中HIF-2a能夠被lncRNA NEAT1激活從而在慢性缺氧條件下促進(jìn)EMT[25]。

除了腫瘤細(xì)胞通過(guò)自身發(fā)生EMT外，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)是影響腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的另一關(guān)鍵因素。MMPs能夠降解腫瘤細(xì)胞的組織學(xué)屏障胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，從而使腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)病灶，進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，加速腫瘤的轉(zhuǎn)移。其中，MMP-2和MMP-9是MMPs家族中降解ECM最主要的成員。已有報(bào)道，HCC缺氧條件下確實(shí)MMP-2高表達(dá)[26]，并通過(guò)siRNA技術(shù)沉默HIF-1α基因后能夠顯著的減少M(fèi)MP-2和MMP-9的蛋白表達(dá)[27]，由此可見(jiàn)缺氧條件下HIF-1α能參與調(diào)控MMP-2和MMP-9，促進(jìn)腫瘤的形成轉(zhuǎn)移灶。

HCC細(xì)胞是一種高代謝的腫瘤細(xì)胞，對(duì)葡萄糖的消耗要高于一般的正常細(xì)胞。這種高代謝特征則是通過(guò)糖酵解的方式來(lái)維持。甚至在富氧條件下，腫瘤細(xì)胞通過(guò)進(jìn)行有氧糖酵解來(lái)更加快速地獲取更多的ATP，即腫瘤細(xì)胞的瓦氏效應(yīng)(Warburg effect)。HIF-1α通過(guò)特異性的轉(zhuǎn)錄激活一系列與糖酵解相關(guān)的靶基因，例如葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT-1、GLUT-3以及糖酵解酶GAPDH、HK1、HK2、PFKL、PGK1、PKM2、ALDOA、ENO1和 LDHA等，極大地提高糖酵解效率，促進(jìn)了瓦氏效應(yīng)[28]。在缺氧條件下，腫瘤細(xì)胞會(huì)發(fā)生無(wú)氧糖酵解，即巴斯德效應(yīng)(Pasteur effect)。已有文獻(xiàn)報(bào)道HIF-1a是巴斯德效應(yīng)中核心轉(zhuǎn)錄因子，在缺少HIF-1a的前提下，腫瘤細(xì)胞無(wú)法在缺氧環(huán)境中完成無(wú)氧糖酵解以滿(mǎn)足高代謝所需的ATP，從而使腫瘤細(xì)胞凋亡[29]。

2.2 缺氧誘導(dǎo)因子促進(jìn)肝細(xì)胞癌耐藥 目前，多激酶抑制劑索拉菲尼(Sorafenib)和樂(lè)伐替尼(Lenvatinib)是僅有的兩個(gè)FDA批準(zhǔn)的用于治療晚期HCC的一線(xiàn)化療藥物，但它們對(duì)改善HCC晚期患者整個(gè)生存期的作用也很有局限。因此，在目前并無(wú)更多更好的化療藥物供患者選擇的前提下，為了更好的利用有限的治療藥物，了解它們?cè)贖CC中的耐藥機(jī)制尤為重要。

Sorafenib是一種多靶點(diǎn)激酶抑制劑，可以通過(guò)靶向抑制酪氨酸激酶受體如VEGFR和PDGFR等抑制腫瘤血管生成，同時(shí)也能夠抑制胞內(nèi)絲氨酸/蘇氨酸激酶而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。但臨床中，一方面，由于原發(fā)性耐藥的原因，HCC晚期患者中只有少數(shù)患者對(duì)Sorafenib響應(yīng)。另一方面，在對(duì)Sorafenib響應(yīng)的患者中，Sorafenib僅能延長(zhǎng)患者3個(gè)月左右的生存期，之后就會(huì)因獲得性耐藥對(duì)其產(chǎn)生抵抗。

Sorafenib通過(guò)阻斷HIF-1α/VEGF途徑減少腫瘤血管生成，造成HCC的供養(yǎng)和供氧不足，以此阻止HCC細(xì)胞增殖和遷移侵襲[30]。雖然一定程度上通過(guò)“饑餓”手段殺傷了腫瘤細(xì)胞，但長(zhǎng)此以往，使得更耐缺氧和饑餓的HCC細(xì)胞存活下來(lái)，大大的降低了Sorafenib后期的治療效果[31-32]。P-糖蛋白在化藥抵抗中扮演著重要的角色，它與化療藥物結(jié)合后形成的復(fù)合物會(huì)被細(xì)胞外排，有研究直接敲低HIF-1α后發(fā)現(xiàn)可降低P-糖蛋白的表達(dá)[33]，提高Sorafenib的利用效率。ADRB2也能夠通過(guò)HIF-1α調(diào)節(jié)糖酵解方式使HCC或者Sorafenib的抵抗性[18]。除此以外，缺氧還能誘導(dǎo)Yes相關(guān)蛋白(Yes associated protein，YAP)的核轉(zhuǎn)位，增強(qiáng)HCC細(xì)胞的干性和抗凋亡能力使其存活下來(lái)。由于HIF-1α和HIF-2α之間存在相互調(diào)控的關(guān)系，Sorafenib對(duì)HIF-1α/VEGF的抑制，會(huì)促使HIF-2α的表達(dá)增加，激活TGF-α/EGFR途徑，以此補(bǔ)償Sorafenib通過(guò)HIF-1α/VEGF通路對(duì)HCC的殺傷作用[34]。另有研究報(bào)道，COX-2/PGE2軸能夠調(diào)節(jié)HIF-2α，降低HCC對(duì)Sorafenib的抵抗[35]。另外，還有研究報(bào)道HIF-2α還能夠直接轉(zhuǎn)錄調(diào)控多藥耐藥(multi-drug resistance，MDR)相關(guān)基因MDR-1、MRP-1及LRP[36]。這些耐藥基因除了能夠加速化療藥物的外排，降低化療藥物的治療效果外，還與腫瘤的增殖、遷移、侵襲等生理功能相關(guān)。Lenvatinib是在2018年才被批準(zhǔn)用作治療HCC晚期患者一線(xiàn)治療藥物，因此目前對(duì)Lenvatinib的HCC耐藥研究機(jī)制研究相對(duì)較少。

2.3 缺氧誘導(dǎo)因子與肝細(xì)胞癌治療 HIFs能夠以直接或間接的方式參與到HCC的發(fā)生發(fā)展以及耐藥過(guò)程中，因此，靶向抑制HIFs聯(lián)合現(xiàn)有一線(xiàn)藥物的治療會(huì)是HCC治療的一個(gè)新的突破口，有望因此改善晚期HCC患者生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期。

BAY87-2243是拜耳公司(Bayer)開(kāi)發(fā)的一種通過(guò)特異性抑制HIF-1α和HIF-2α累積的HIFs抑制劑。2011年Bayer啟動(dòng)了BAY87-2243的臨床試驗(yàn)(NCT01297530)，但在2013年，BAY87-2243的臨床試驗(yàn)被Bayer主動(dòng)終止。在肝細(xì)胞癌治療方面，有研究通過(guò)組蛋白去乙?；?HDAC)抑制劑與BAY87-2243聯(lián)用，能有更加有效的抑制HCC遷移侵襲[37]。

拓?fù)涮婵?Topotecan)是HIF-1α特異性抑制劑，能夠阻止HIF-1信使RNA的翻譯。目前已經(jīng)完成了用于HCC的治療的I期臨床試驗(yàn)[38]。

PT2385是HIF-2α特異性抑制劑，可通過(guò)抑制HIF-2α、增加AR和抑制STAT3、Akt和ERK途徑下游的激活而提高Sorafenib治療效果[39]。

另外，姜黃素衍生物EF24，是一類(lèi)非典型的HIF-1α抑制劑，通過(guò)抑制細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)凋亡等其本身就具有一定的抑癌作用，是一個(gè)潛在癌癥治療藥物。Sorafenib與EF24聯(lián)用，EF24在缺氧條件下通過(guò)介導(dǎo)pVHL與HIF-1α的結(jié)合，促進(jìn)HCC細(xì)胞中HIF-1α的以pVHL以來(lái)的方式通過(guò)E3泛素化途徑降解以達(dá)到抑制HIF-1α的作用，降低HIF-1α的表達(dá)所帶來(lái)的對(duì)Sorafenib的耐藥[31]。

鑒于HIF-1α和HIF-2α之間的反饋調(diào)節(jié)機(jī)制以及二者均參與到其耐藥過(guò)程中，更多的研究者開(kāi)始意識(shí)到，在臨床上應(yīng)當(dāng)選取能夠同時(shí)靶向HIF-1α和HIF-2α的抑制劑，才能更加相對(duì)有效的解決由缺氧引起的耐藥問(wèn)題。

2-甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol，2ME2)是無(wú)生物活性的雌二醇通過(guò)兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)體內(nèi)代謝的產(chǎn)物。它能夠通過(guò)抑制HIF-α亞基蛋白合成、核易位及轉(zhuǎn)錄活性的方式抑制HIF-1α和HIF-2α，且人體耐受性極好。這些優(yōu)勢(shì)使得2ME2在抗腫瘤作用中表現(xiàn)出極高的價(jià)值。目前，2ME2用于治療腫瘤已經(jīng)進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)階段，雖然效果并不理想，但是由于其良好的耐受性，2ME2的研究主要是集中在化療領(lǐng)域。有文獻(xiàn)報(bào)道，在缺氧條件下2ME2聯(lián)合Sorafenib 用于HCC細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)中，聯(lián)合使用下能抑制HCC細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，極大提高了Sorafenib的藥效[40]。

YC-1是HIF-2α/HIF-1α抑制劑。YC-1在對(duì)HIFs的抑制上，蛋白水平顯著降低，而mRNA卻并無(wú)變化，這說(shuō)明YC-1是通過(guò)轉(zhuǎn)錄水平來(lái)抑制HIFs[41]。

除了小分子抑制劑外，基因技術(shù)的不斷發(fā)展，siRNA、shRNA這種更加精準(zhǔn)的基因靶向技術(shù)也進(jìn)入臨床中用于治療癌癥。通過(guò)siRNA或shRNA直接沉默HIFs基因，使其不表達(dá)或低表達(dá)。另外一種基因治療手段則是反義寡核酸技術(shù)，通過(guò)反義DNA或反義RNA去識(shí)別靶基因的mRNA，干擾靶基因的蛋白翻譯[42]。

3 展望

HCC患者往往在早期的時(shí)候被忽略而錯(cuò)過(guò)最佳治療，被發(fā)現(xiàn)確診的時(shí)候大部分患者都已經(jīng)入晚期，可供選擇的有效治療藥物品種少更是使得其晚期患者的治療和生存期大打折扣。缺氧是包括肝癌在內(nèi)的所有實(shí)體瘤的共性，HIFs及其所調(diào)控的下游基因的激活在HCC進(jìn)程中發(fā)揮著舉足輕重的作用。研究者們也開(kāi)始越來(lái)越多的關(guān)注到缺氧對(duì)HCC的影響，并以此篩選了眾多的HIFs抑制劑化合物，但離真正應(yīng)用到臨床還相差甚遠(yuǎn)。一方面是HCC患者用藥的巨大需求以及現(xiàn)有治療藥物太少且療效有限的窘迫局面，另一方面是HIFs在HCC進(jìn)程中發(fā)揮著巨大作用，是HCC患者治療的希望。HIFs作為一個(gè)新靶點(diǎn)，HCC治療的新策略，新思路，對(duì)其作用機(jī)制仍需要不斷深入挖掘。