膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用研究

陳慧貞

（定西市食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，甘肅定西 743000）

食品安全是一個(gè)全球性的話題，目前食品安全事故頻頻發(fā)生，對(duì)大眾健康造成嚴(yán)重威脅。食品安全問題主要有農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、食品添加劑和生物毒素等，因此需選擇一種快速、便捷的食品安全檢測(cè)技術(shù)，以降低食品安全事故的發(fā)生率。在食品安全快速檢測(cè)方面，目前推出了ELISA法、膠體金快速檢測(cè)法和浸紙法。ELISA法需要儀器輔助完成，不能用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。膠體金免疫層析法具有操作簡(jiǎn)單、靈敏性強(qiáng)、結(jié)果直觀，在食品安全檢測(cè)中得到推廣。

1 膠體金免疫層析技術(shù)的概念

膠體金是一種氯金酸水溶液，在白磷、檸檬酸鈉、還原劑的作用下，形成特定尺寸的膠體，并在靜電作用下形成穩(wěn)定的膠體溶液，膠體金顆粒電子密度高，當(dāng)粒子聚集超過某一密度閾值時(shí)，就會(huì)形成粉紅色的斑點(diǎn)，肉眼就可以觀察到。膠體金試劑的這種性質(zhì)符合免疫層析檢測(cè)的要求，因此可作為免疫層析檢測(cè)的一個(gè)指標(biāo)。由于還原劑種類不同，相應(yīng)的膠體顆粒也有一定的差異，在很多方面都能滿足食品檢測(cè)的要求，達(dá)到理想的檢測(cè)效果。

2 膠體金免疫層析技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 膠體金免疫層析技術(shù)對(duì)于食品農(nóng)藥、獸藥殘留的檢測(cè)

目前，很多食品都含有農(nóng)藥殘留、獸藥殘留和生物毒素等，對(duì)消費(fèi)者的健康產(chǎn)生了不利影響。膠體金免疫層析法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、方便、不需要大型儀器，在食品檢測(cè)領(lǐng)域中普遍應(yīng)用。萬宇平等[1]使用氟喹諾酮類膠體金免疫試紙條檢測(cè)牛奶中的氟喹諾酮類藥物殘留，檢測(cè)需要5 min，和三聚氰胺等藥物沒有交叉反應(yīng)，測(cè)試結(jié)果與儀器檢測(cè)一致，重現(xiàn)性好。測(cè)試紙?jiān)? ℃下有效期為12個(gè)月。膠體金免疫層析法的預(yù)處理非常簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短，具有較好的靈敏度和特異性?；前坊z體藥物的作用是治療動(dòng)物全身感染，它會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)殘留，能增強(qiáng)細(xì)菌耐藥性，長(zhǎng)期進(jìn)食會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)皮炎、白細(xì)胞減少等癥狀。張佳宜等[2]使用檸檬酸三鈉還原法進(jìn)行了膠體金制備，優(yōu)化了膠體金免疫層析法，成功檢測(cè)出豬肉、牛奶中的磺胺殘留，檢測(cè)磺胺嘧啶的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值為20 g/kg，與高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）檢測(cè)豬肉、牛奶樣品中的磺胺殘留結(jié)果一致，說明這種檢測(cè)方法是準(zhǔn)確的，且檢測(cè)只需10 min。阿特拉津?qū)儆诔志眯猿輨?，可以減弱光合作用，主要面向玉米、高粱、甘蔗園的除草工作，阿特拉津用量較大，殘留時(shí)間長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，阿特拉津具有潛在致癌作用，需引起足夠重視。盛偉等[3]使用膠體金免疫層析法對(duì)自來水、玉米中的阿特拉津殘留進(jìn)行了檢測(cè)，與間接酶聯(lián)免疫 吸 附 法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）檢測(cè)結(jié)果相同，膠體金免疫層析法的檢出限值為2 ng/mL，滿足阿特拉津殘留量檢測(cè)要求。

2.2 膠體金免疫層析技術(shù)對(duì)于非食品添加成分檢測(cè)的應(yīng)用

很多食品制造商為牟取暴利，不遵守食品衛(wèi)生法律規(guī)定，在食品中添加大量添加劑，嚴(yán)重威脅人們的生命健康。有報(bào)道指出，對(duì)添加劑羅丹明B可以使用HPLC進(jìn)行準(zhǔn)確檢測(cè)，這種檢測(cè)方法精度高，也能符合痕量分析的要求，但存在應(yīng)用范圍窄、設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜等問題,使用膠體金技術(shù)可以避免這些問題[4-5]。目前，在進(jìn)行食品有害物檢測(cè)過程中，大部分食品中的藥物殘留都有定量標(biāo)準(zhǔn)，因此只開展定性檢測(cè)不符合食品安全檢測(cè)的要求，這是膠體金檢測(cè)技術(shù)存在的不足。食品中不允許添加羅丹明等非食品色素，由于不需要對(duì)其進(jìn)行定量分析，因此可以用膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)食品中的羅丹明。宋旭[6]研究了乳制品中三聚氰胺的快速檢測(cè)方法，主要選擇納米金層析法和膠體金免疫層析法。蘇丹紅是一種合成染料，非法商家為增加產(chǎn)品的新鮮度，吸引消費(fèi)者而將其添加到食品中，對(duì)人們的健康造成危害。國(guó)內(nèi)外主要采用HPLC或液相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用 法（Liquid Chromatograph Mass Spectrometer，LC-MS）檢測(cè)蘇丹紅，存在設(shè)備昂貴、應(yīng)用范圍窄、操作復(fù)雜及成本高等問題。付云杰等[7]用膠體金免疫層析法研究出蘇丹紅I型檢測(cè)試劑，用金標(biāo)記抗原將抗體固定在NC膜上作為試紙實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)線，蘇丹紅I的最低檢出限為15 μg/kg，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，金標(biāo)準(zhǔn)抗體法可用于檢測(cè)無色物質(zhì)。

2.3 膠體金免疫層析技術(shù)在食品霉菌毒素檢測(cè)中的應(yīng)用

霉菌毒素是由霉菌產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，能對(duì)人和動(dòng)物產(chǎn)生危害，有很強(qiáng)的毒性作用，它會(huì)污染農(nóng)作物，并通過牛奶、肉類、雞蛋等進(jìn)入人體內(nèi)。它的毒性作用主要表現(xiàn)為致癌、遺傳毒性、引起畸形、中毒性肝損傷、生殖障礙和免疫抑制。霉菌毒素污染范圍很廣，它能與食品中有機(jī)化合物結(jié)合，嚴(yán)重威脅消費(fèi)者健康。黃曲霉毒素B是一種次生代謝產(chǎn)物，毒性強(qiáng)，致癌性強(qiáng)，理化性質(zhì)穩(wěn)定，它能污染食物，對(duì)人類健康產(chǎn)生威脅。有專家指出，免疫層析紙和HPLC法檢測(cè)結(jié)果一致率超過90.5%，因此，免疫層析紙能用于食品中黃曲霉毒素B的快速檢測(cè)。BOYLE等[8]使用膠體金技術(shù)對(duì)鮮牛奶、巧克力奶、酸奶和奶粉中的葡萄球菌腸毒素進(jìn)行檢測(cè)，獲得了最佳的鑒定結(jié)果。為對(duì)不同物質(zhì)包括牛奶、鼻黏膜中的白喉毒素進(jìn)行檢測(cè)，LYUBAVINAL[9]等發(fā)明了使用膠體金標(biāo)記單克隆抗體的免疫層析分析方法，毒素檢測(cè)限為10 ng/mL，用時(shí)只需要15 min,如果使用銀顯影液增強(qiáng)標(biāo)記單克隆抗體，檢出限降低到1.25 ng/mL,實(shí)驗(yàn)顯示膠體金免疫層析法的交叉反應(yīng)率很低。

2.4 膠體金免疫層析技術(shù)在食品致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用

食品中含有大量的微生物，有很多致病菌，如大腸桿菌、沙門氏菌、布魯氏菌等，檢測(cè)致病菌的最常見方法是生化鑒定及分離，該方法操作較復(fù)雜，靈敏度、特異性較低，無法做到即時(shí)檢測(cè)及盡早預(yù)防。此外，在病原微生物檢測(cè)中，高效液相色譜和氣相色譜法也有普遍的應(yīng)用，但檢測(cè)設(shè)備較昂貴，無法開展快速檢測(cè)，使用膠體金免疫層析可以避免這種缺點(diǎn)。JAENAM等[10]運(yùn)用膠體金免疫層析法檢測(cè)微生物病原體和金黃色葡萄球菌，在制備膠體金結(jié)合墊的過程中，可通過離心去除多余抗體，增強(qiáng)結(jié)合墊性能及試紙靈敏度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該試紙具有較高的敏感性和特異性，但由于實(shí)驗(yàn)室菌株資源有限，只檢測(cè)到4種細(xì)菌，還需進(jìn)一步檢測(cè)是否與其他細(xì)菌發(fā)生交叉反應(yīng)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）、ELISA等方法的靈敏度較高，但無法進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。免疫層析檢測(cè)試紙可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，具有簡(jiǎn)單快速、無需專用設(shè)備和試劑、無污染等特點(diǎn)，適合廣大基層檢驗(yàn)員，可進(jìn)行大規(guī)模的檢測(cè)和普查。

3 膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全中的檢測(cè)

部分經(jīng)營(yíng)者生產(chǎn)、銷售不符合食品安全標(biāo)準(zhǔn)的食品，導(dǎo)致食品安全事故時(shí)有發(fā)生。由于許多食品的保質(zhì)期較短，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)會(huì)嚴(yán)重影響食品質(zhì)量。因此，在食品安全檢測(cè)中，往往需要現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和快速檢測(cè)。免疫膠體金技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、儀器便攜等優(yōu)點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，為現(xiàn)場(chǎng)食品安全執(zhí)法提供足夠的科學(xué)依據(jù)。影響食品安全的因素很多，大致可以分為有害微生物、非法藥品、農(nóng)藥獸藥殘留。這些有害物質(zhì)會(huì)對(duì)人體造成嚴(yán)重的傷害，影響人們的正常生活。食物中有害物質(zhì)含量過高，食用后會(huì)導(dǎo)致各種疾病。食物中常見的有害物質(zhì)，如大腸桿菌、葡萄球菌、布魯氏菌和各種真菌毒素。這些有害物質(zhì)會(huì)導(dǎo)致各種疾病，甚至影響消費(fèi)者的健康。在評(píng)價(jià)食品中有害物質(zhì)時(shí)，傳統(tǒng)的方法是分離生化鑒定，但技術(shù)操作相對(duì)復(fù)雜，特異性和靈敏度不理想，限制了實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和預(yù)防工作。免疫膠體金技術(shù)是彌補(bǔ)這些問題的最好方法。該方法能快速檢測(cè)出食品中的有害物質(zhì)。

4 結(jié)語

膠體金免疫層析技術(shù)是一種先進(jìn)的食品檢測(cè)技術(shù)，因具有操作簡(jiǎn)單、快捷、結(jié)果直觀，且不需要使用特殊設(shè)備、試劑和沒有污染等優(yōu)點(diǎn)，適合基層檢驗(yàn)人員用于食品的大批量檢測(cè)和廣泛普查，適合食品現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。目前，我國(guó)的膠體金免疫層析產(chǎn)品仍處在研究初期，市場(chǎng)中的免疫層析產(chǎn)品都是進(jìn)口零部件或銷售國(guó)外產(chǎn)品。食品快速檢測(cè)產(chǎn)品擁有較大的市場(chǎng)，國(guó)內(nèi)要盡快研究出不同的檢測(cè)試紙，不僅能確保食品質(zhì)量符合要求，保證人們的身體健康，還可以避免國(guó)內(nèi)資金流失。免疫檢測(cè)的未來發(fā)展方向是多重檢測(cè)、定量檢測(cè)或半定量檢測(cè)。