基于AHP-CRITIC法的正交設(shè)計優(yōu)選貞芪顆粒提取工藝及促生長作用初步研究

汪柱勇,楊 新，周 意, 閔真立*，張子健，陳亞軍，李亞威，楊楚虹，劉 潔，李 碩*

(1.武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430070；2.武漢回盛生物科技股份有限公司，湖北省獸藥工程技術(shù)研究中心，湖北武漢 430040)

實踐證明，許多具有免疫增強(qiáng)作用的單味中藥或復(fù)方制劑在增強(qiáng)免疫的同時還具有促生長的作用[1-3]，這類藥物在畜牧養(yǎng)殖中具有廣闊的前景。促生長飼料添加劑兼具營養(yǎng)和藥用功能，在增強(qiáng)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗菌和改善腸道微生態(tài)等方面有明顯作用。研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加黃芪或女貞子或其提取物能夠通過降低料重比、增加日增重、提高飼料轉(zhuǎn)化率以及增強(qiáng)免疫功能等來改善禽畜的生長性能，從而直接或間接地對禽畜的生長起到促進(jìn)作用[4-8]。因此，擬以貞芪扶正顆粒為依托，開發(fā)一種具有促生長作用的新中獸藥復(fù)方制劑——貞芪顆粒。

貞芪扶正顆粒目前收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二十冊[9]。該復(fù)方制劑由黃芪、女貞子兩味中藥組成，本研究將總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷、干膏得率作為評價指標(biāo)，采用層次分析法(analytic hierarchy process，AHP)、基于指標(biāo)相關(guān)性的權(quán)重確定方法(criteria importance through intercriteria correlation，CRITIC)及AHP-CRITIC混合加權(quán)法對正交實驗結(jié)果進(jìn)行綜合評定，并根據(jù)評定結(jié)果篩選最佳權(quán)重系數(shù)，進(jìn)而采用 SPSS 26.0軟件對最佳權(quán)重系數(shù)所評估分?jǐn)?shù)進(jìn)行分析，確定貞芪顆粒的最佳提取工藝參數(shù)，并對該參數(shù)條件下的提取物進(jìn)行初步的促生豬生長作用評價，旨在為貞芪顆粒的后續(xù)研究開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備 安捷倫Aligent-1260高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；ELSD 6000蒸發(fā)光散射檢測器，美國格雷斯奧泰公司；UV-3200型紫外可見光分光計，上海美譜達(dá)儀器有限公司；SPQ型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；ME204型電子分析天平，梅特勒托利多儀器有限公司；DHG-9140A型恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司；KQ5200B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；DFY-X300型高效多功能粉碎機(jī)，溫州頂立醫(yī)療器械有限公司。

1.2 試劑 對照品D-無水葡萄糖(批號110833-201907，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.90%)、黃芪甲苷(批號110781-201717，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.90%)、毛蕊異黃酮葡萄糖苷(批號111920-201907，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.80%)、特女貞苷(批號111926-201906，質(zhì)量分?jǐn)?shù)95.00%)、紅景天苷(批號110818-202009，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.80%)均購于中國食品藥品檢定研究院；黃芪、女貞子購于九州通醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，經(jīng)鑒定均符合 2015年版《中華人民共和國藥典》相關(guān)項下規(guī)定；五味健脾顆粒，生產(chǎn)單位：保定冀中藥業(yè)有限公司；乙腈、甲醇為色譜純；水為自制超純水；其他試劑均為分析純。

1.3 實驗動物分組及處理 100頭生長健康的保育豬，公母各半，品種：杜長大三元雜交豬，日齡：80 d左右，體重：42 kg左右，隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白組和陽性藥品對照組(五味健脾顆粒)，每組20頭。豬舍為半開放式結(jié)構(gòu)，雙列式配置，按常規(guī)程序驅(qū)蟲和免疫，專人管理，采用自動飼槽和自動飲水器，自由飲水與采食，采用雙軸流風(fēng)機(jī)保持豬舍溫度在22 ℃～28 ℃之間，濕度在68%～72%之間?；A(chǔ)日糧為玉米-豆粕型日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。空白組飼喂基礎(chǔ)日糧，劑量組為基礎(chǔ)日糧混拌本品顆粒，高劑量組為2 kg本品拌料1噸、中劑量組為1 kg本品拌料1噸、低劑量組為500 g本品拌料1噸，陽性藥品對照組按說明書添加，預(yù)飼養(yǎng)7 d，正式期30 d。試驗地點：湖北省潛江市某豬場。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 藥材吸液率考察 按照處方量稱取黃芪、女貞子置于3000 mL燒杯中，加入1000 mL水，測定藥材全部潤透時的吸液率，結(jié)果測得藥材的吸液率為92.24%，因此，第一次提取多加1倍溶劑。

1.5 對照品溶液的制備 稱取D-無水葡萄糖適量，加純化水制成濃度為0.3 mg/mL的無水葡萄糖對照品溶液；分別稱取黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、紅景天苷對照品適量，加甲醇制成濃度分別為0.5 mg/mL、0.5 mg/mL、0.2 mg/mL的各對照品溶液；稱取特女貞苷對照品適量，加50%甲醇溶液制成濃度為0.25 mg/mL的特女貞苷對照品溶液；用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.6 供試品溶液的制備 稱取處方量藥材9份，分別按正交表所列參數(shù)提取，濾過，合并濾液，加水定容至3000 mL，備用。

1.7 陰性樣品溶液的制備 分別稱取缺黃芪、女貞子的陰性處方量藥材2份，加13倍質(zhì)量的水煎煮1次，濾過，濾渣再加12倍質(zhì)量的水煎煮，每次2 h，濾過，合并濾液，加水定容至3000 mL容量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.8 色譜條件

1.8.1 黃芪甲苷色譜條件 Inerstil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈-水(35∶65)；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測器：ELSD檢測器；漂移管溫度：109 ℃；蒸發(fā)器氣體體積流量：2.9 L/min；進(jìn)樣量：20 μL(對照品進(jìn)樣量分別為10、20 μL)。

1.8.2毛蕊異黃酮葡萄糖苷色譜條件 Inerstil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.2%甲酸溶液；梯度洗脫：0～20 min，20%～40%乙腈；20～30 min，40%乙腈；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測器：DAD檢測器；檢測波長：260 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

1.8.3 特女貞苷色譜條件 Inerstil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為水-乙腈；梯度洗脫：0～50 min，5%～50%乙腈；50～60 min，50%～75%乙腈；60～63 min，75%～5%乙腈；體積流量：1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測器：DAD檢測器；檢測波長：224 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

1.8.4 紅景天苷色譜條件 Inerstil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相為乙腈-水(6∶94)，體積流量：1 mL/min；柱溫30 ℃；檢測器：DAD檢測器；檢測波長：275 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

1.9 測定方法

1.9.1 總多糖含量測定 精密量取“1.6”項下藥液75 mL，蒸干，加純化水定容至25 mL量瓶中，精密量取2 mL置25 mL量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取1 mL置50 mL中，加純化水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別量取各供試品溶液2 mL于25 mL具塞刻度試管中，精密加入5%苯酚溶液(新蒸餾)1 mL，再迅速精密加入濃硫酸5 mL，邊加邊振搖，放置10 min，置40 ℃水浴中加熱15 min，取出，在冰水浴中冷卻5 min。照紫外-可見分光光度法在490 nm波長下測定A值。通過系列對照品濃度曲線計算所測樣品中總多糖含量。

1.9.2 黃芪甲苷含量測定 精密量取“1.6”項下藥液75 mL，蒸干，加純化水定容至25 mL容量瓶中，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取4次，每次25 mL，合并正丁醇層，用氨試液洗滌3次，每次30 mL，棄去氨試液層，合并正丁醇層，減壓蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為備用液。將上述備用液、“1.5”項下對照品溶液在“1.8.1”項下色譜條件測定，記錄色譜峰面積，用外標(biāo)兩點對數(shù)法計算含量。

1.9.3 毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量測定 精密量取“1.6”項下藥液75 mL，蒸干，加甲醇超聲30 min，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為備用液。將上述備用液、“1.5”項下對照品溶液在“1.8.2”項下色譜條件測定，記錄色譜峰面積，并依次計算含量。

1.9.4 特女貞苷含量測定 精密量取“1.6”項下藥液75 mL，蒸干，加甲醇50 mL，精密稱定重量，超聲30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過，精密量取濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為備用液。將上述備用液、“1.5”項下對照品溶液在“1.8.3”項下色譜條件測定，記錄色譜峰面積，并依次計算含量。

1.9.5 紅景天苷含量測定 精密量取“1.6”項下藥液75 mL，蒸干，加甲醇超聲30 min，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為備用液。將上述備用液、“1.5”項下對照品溶液在“1.8.4”項下色譜條件測定，記錄色譜峰面積，并依次計算含量。

1.9.6 干膏得率的測定 精密量取“1.6”項下藥液25 mL，置于已干燥至恒重質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105 ℃恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥3 h，取出，置干燥器中冷卻30 min，取出，迅速稱定，計算干膏收率。

1.10 方法學(xué)考察

1.10.1 線性關(guān)系考察 分別精密量取“1.5”項下各對照品系列濃度溶液，按相應(yīng)的色譜條件進(jìn)樣分析，以對照品濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，線性關(guān)系考察結(jié)果見表2。

A：缺黃芪陰性樣品；B：黃芪甲苷對照品；C：缺黃芪陰性樣品；D：毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品；E：缺女貞子陰性樣品；F：特女貞苷對照品；G：缺女貞子陰性樣品；H：紅景天苷對照品；1 黃芪甲苷；2 毛蕊異黃酮葡萄糖苷；3 特女貞苷；4 紅景天苷

表2 回歸方程及線性范圍

1.10.2 精密度考察 按“1.5”項下方法分別精密量取各對照品溶液1 mL并稀釋至10 mL，分別照相應(yīng)的分析方法連續(xù)進(jìn)樣6次，測定各成分含量。結(jié)果總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷RSD分別為1.77%、1.86%、1.41%、1.58%和1.63%，表明儀器精密度良好。

1.10.3 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，分別于制備后0、2、4、8、12和24 h進(jìn)樣分析，測定各成分含量，結(jié)果總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷RSD分別為1.98%、1.74%、1.21%、1.93%和1.56%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.10.4 重復(fù)性考察 稱取處方量藥材30份，按“1.6”項下方法制備供試品溶液，分別照相應(yīng)分析方法測定各成分含量，計算求得總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷含量RSD分別為1.86%、1.40%、1.66%、1.59%和1.31%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.10.5 加樣回收試驗 精密量取已知濃度的供試品溶液(總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷質(zhì)量濃度分別為0.0285、0.0520、0.0036、0.0843和0.0114 mg/mL)5 mL，共30份，分為5組，置于10 mL量瓶中，依次加入相應(yīng)對照品溶液(總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷質(zhì)量濃度分別為0.3315、0.5714、0.6014、0.2652和0.2846 mg/mL)5 mL，按照“1.9”項下各成分測定方法制備樣品，按“1.8”項下色譜條件測定含量，計算各成分加樣回收率。結(jié)果總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷加樣回收率分別為100.21%、99.87%，99.26%，100.19%和99.54%；RSD分別為1.93%、1.88%，1.64%，1.92%和1.79%，表明該方法回收率良好。

1.11 正交試驗設(shè)計 根據(jù)前期單因素預(yù)實驗結(jié)果，選取對提取結(jié)果影響較大的提取次數(shù)(A)、提取時間(B)、料液比(C)3個因素進(jìn)行優(yōu)化，空白(D)為誤差列，每個因素選取3個水平，采用L9(34)正交表安排試驗。正交試驗因素水平見表3。

表3 正交試驗因素水平表

1.12 權(quán)重指標(biāo)的確立

1.12.1 AHP法權(quán)重系數(shù) 根據(jù)貞芪顆粒藥味君臣佐使配伍規(guī)律、各成分藥理作用強(qiáng)弱及含量多少，將各個評價指標(biāo)進(jìn)行量化處理，即將6個指標(biāo)分成6個層次，并確定各指標(biāo)權(quán)重優(yōu)先順序為：總多糖>黃芪甲苷>毛蕊異黃酮葡萄糖苷>特女貞苷>紅景天苷>干膏得率，構(gòu)建成對比較的優(yōu)先判斷矩陣，各指標(biāo)相對權(quán)重見表4。

表4 指標(biāo)成對比較的優(yōu)先判斷矩陣

1.12.2 CRITIC法權(quán)重系數(shù) CRITIC法是一種客觀權(quán)重賦權(quán)法，其通過對比強(qiáng)度反映同一指標(biāo)不同方案的差值大小，通過相關(guān)性來體現(xiàn)各指標(biāo)間的沖突性[10]，是一種比熵權(quán)法和標(biāo)準(zhǔn)離差法更好的客觀賦權(quán)法。本研究采用CRITIC法確定各指標(biāo)間權(quán)重，將表4中的數(shù)據(jù)經(jīng)過線性插值處理[指標(biāo)成分值=(實測值-最小值)/(最大值-最小值)]，使用SPSS 26.0對線性插值處理后的數(shù)據(jù)進(jìn)行皮爾遜相關(guān)系數(shù)分析及描述性統(tǒng)計分析，得到標(biāo)準(zhǔn)偏差即對比強(qiáng)度(Sj)，計算相應(yīng)沖突性(δj)、信息量(Cj)、客觀權(quán)重(ωj)。其相應(yīng)的計算公式如下：

1.12.3 AHP-CRITIC混合加權(quán)法權(quán)重系數(shù) 根據(jù)貞芪顆粒功能主治及組方比例的特點，AHP法量化了評價指標(biāo)兩兩比較判斷的優(yōu)先信息，以主觀信息評價了各指標(biāo)間的權(quán)重系數(shù)，基本體現(xiàn)了復(fù)方君臣佐使配伍規(guī)律及評價指標(biāo)優(yōu)先順序，同時采用了CRITIC法對各指標(biāo)進(jìn)行客觀分析。考慮到各指標(biāo)間的沖突性和各樣本數(shù)據(jù)的變異性對賦權(quán)的影響，本研究將結(jié)合2種賦權(quán)方法，兼顧主客觀因素，根據(jù)公式ω綜合ij= ωAHP-ijωCRITIC-ij/∑ωAHP-ijωCRITIC-ij計算綜合權(quán)重。

1.13 藥效學(xué)初步研究 從試驗開始后，對試驗豬群適口性進(jìn)行觀察，每天觀察豬群表現(xiàn)，包括精神狀態(tài)、進(jìn)食、飲水，以及尿液和糞便性狀，并對其生長性能指標(biāo)進(jìn)行了測定。按照上述優(yōu)選工藝A3B3C2，進(jìn)行工業(yè)放大實驗，將所得顆粒進(jìn)行動物預(yù)實驗研究，驗證其藥效。取提取液繼續(xù)濃縮至適量，加糖粉經(jīng)流化床制粒。記錄試驗開始前和試驗第30天各組保育豬重量，計算其平均日增重(ADG)；記錄每天加料量，除去損耗量，計算各組平日日采食量(ADFI)，并計算料肉比(F∶ G)：F∶ G=ADFI / ADG。用SPSS 26.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，差異顯著時采用Duncan多重比較法對各組間平均值進(jìn)行多重比較，所得數(shù)據(jù)均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗結(jié)果 貞芪顆粒正交試驗設(shè)計與結(jié)果見表5。

表5 正交試驗設(shè)計與結(jié)果

2.2 AHP法權(quán)重系數(shù)結(jié)果 根據(jù)表4賦權(quán)結(jié)果，算得總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷、干膏得率6項指標(biāo)權(quán)重系數(shù)分別為：0.3806、0.2516、0.1602、0.1009、0.0643、0.0425，并進(jìn)行了一致性檢驗，一致性比率(CR)=0.0194<0.10。

2.3 CRITIC法權(quán)重系數(shù)結(jié)果 根據(jù)表6可知，總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷、干膏得率的權(quán)重系數(shù)分別為：0.1366、0.1336、0.1720、0.3067、0.1213、0.1298。

表6 CRITIC法相關(guān)計算數(shù)據(jù)

2.4 AHP-CRITIC 混合加權(quán)法權(quán)重系數(shù) 計算得到總多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、特女貞苷、紅景天苷、干膏得率的綜合權(quán)重系數(shù)分別為：0.3302、0.2136、0.1751、0.1966、0.0495、0.0350。

2.5 綜合評價結(jié)果的比較 分別采用AHP法、CRITIC法及AHP-CRITIC混合加權(quán)法分析得到的權(quán)重系數(shù)對實驗結(jié)果進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表7。通過相關(guān)系數(shù)分析，AHP法與CRITIC法之間的相關(guān)系數(shù)為0.9635，AHP法與混合加權(quán)法之間的相關(guān)系數(shù)為0.9936，CRITIC法與混合加權(quán)法之間的相關(guān)系數(shù)為0.9861，三者相關(guān)性顯著(P<0.01)。

表7 三種賦權(quán)法綜合評分結(jié)果

2.6 提取工藝的確定 采用AHP-CRITIC混合加權(quán)法得到的權(quán)重系數(shù)對實驗結(jié)果進(jìn)行綜合評分，利用SPSS 26.0對正交實驗結(jié)果進(jìn)行分析，直觀分析結(jié)果見表8，方差分析結(jié)果見表9。

表8 直觀分析表

表9 方差分析表

2.7 工藝驗證 稱取3份藥材處方量藥材，按優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行提取，即加12倍量水，提取3次，每次2.5 h，測定各項指標(biāo)，并進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表10。

表10 驗證試驗結(jié)果

2.8 藥效學(xué)研究結(jié)果 從開始飼喂至試驗結(jié)束，與空白對照組相比，豬群精神狀態(tài)良好，進(jìn)食、飲水、尿液和糞便均未見異常，表現(xiàn)正常。生長性能指標(biāo)的測定結(jié)果，試驗期間各組豬ADG、ADFI和F∶G變化見圖2。從圖2可以看出，經(jīng)過30 d的飼喂，飼料添加劑的4組體重相比空白組有更加明顯的增長；5組ADFI無明顯差異(P>0.05)；高、中、低劑量組和陽性對照組的F∶G無顯著性差異(P>0.05)，但都顯著低于空白對照組(P<0.05)，其中中劑量組的F∶ G最低。

(A)添加劑對保育豬試驗前后的總體重影響；(B)添加劑對保育豬試驗期間ADG、ADFI、F∶G的影響；數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示(n=20)

3 討論與結(jié)論

3.1 評價指標(biāo)及正交試驗因素水平的選擇 在中藥復(fù)方的制備工藝中，提取是工藝研究中極其重要的環(huán)節(jié)，提取工藝的合理性直接決定了產(chǎn)品的質(zhì)量，同時，中藥復(fù)方具有復(fù)雜的成分，各成分之間具有協(xié)同作用。因此，對某一種藥材的質(zhì)量控制或單一活性成分的測定均不能完全反映該制劑的療效和質(zhì)量。為了更加科學(xué)的體現(xiàn)復(fù)方的整體性、復(fù)雜性和有效性，研究參照藥典對黃芪藥材中的評價成分黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷，女貞子藥材中的特女貞苷，同時結(jié)合本產(chǎn)品的功能主治加入具有免疫增強(qiáng)作用的紅景天苷[11]以及對禽畜具有促生長作用的多糖[4，12]和中藥復(fù)方常用的干膏得率共同作為評價指標(biāo)。

在進(jìn)行正交試驗之前，本實驗對提取次數(shù)、提取時間和料液比3個單因素分別進(jìn)行了5水平考察，分別是提取次數(shù)1次、2次、3次、4次、5次；提取時間1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h；料液比1∶6、1∶9、1∶12、1∶15、1∶18。根據(jù)實驗結(jié)果，剔除對實驗結(jié)果影響較小的2個水平，選取對各指標(biāo)含量影響較大的3個水平區(qū)間進(jìn)行正交試驗設(shè)計。

3.2 評價方法及權(quán)重系數(shù)的選擇 提取工藝的優(yōu)劣是影響產(chǎn)品質(zhì)量最直接的因素，選擇一個科學(xué)、合理的評價方法對提取工藝進(jìn)行篩選是至關(guān)重要的。AHP法等主觀權(quán)重系數(shù)法在一定程度上能夠體現(xiàn)中藥復(fù)方君臣佐使的配伍規(guī)律，但指標(biāo)賦權(quán)值易受學(xué)者知識深度和廣度的影響，忽略實際樣本的數(shù)據(jù)信息，使得出的結(jié)果主觀性較強(qiáng)?？陀^權(quán)重系數(shù)法能對實際的樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、整理，卻易忽視指標(biāo)間的輕重關(guān)系。采用AHP-CRITIC 混合加權(quán)法，能夠結(jié)合不同評價方法的權(quán)重系數(shù)，融合主客觀不同類型賦權(quán)方法的優(yōu)點，保證數(shù)據(jù)點均勻分散，使實驗結(jié)果穩(wěn)定可靠，篩選出合理、科學(xué)的提取工藝參數(shù)。

3.3 試驗效果分析 CR結(jié)果表明指標(biāo)優(yōu)先判斷矩陣具有良好的一致性，AHP法權(quán)重系數(shù)有效。3種賦權(quán)方法結(jié)果的相關(guān)性分析結(jié)果表明，3種權(quán)重法得到的評分結(jié)果具有一致性，但是從權(quán)重系數(shù)分析，AHP法與 CRITIC 法之間的相關(guān)系數(shù)為-0.2028，兩者呈負(fù)相關(guān)，所反映的信息不具疊加性。相比之下，AHP-CRITIC 混合加權(quán)法從主觀客觀2個方面加以考慮，所體現(xiàn)的信息量也就更為全面，因此綜合評分結(jié)果更為科學(xué)、合理、更接近實際情況。對直觀分析表結(jié)果分析可知，各因素對提取效率的影響為A>B>C，方差分析結(jié)果表明，A、B兩因素對實驗結(jié)果都具有顯著性影響(P<0.05)，C無顯著性影響(P>0.05)，結(jié)合實際生產(chǎn)情況，得最佳工藝參數(shù)為A3B3C2，即12倍質(zhì)量水加熱回流提取3次，每次2.5 h。3批驗證試驗結(jié)果表明，3批樣品各指標(biāo)性成分含量的RSD均小于2.0%，組間無顯著性差異，表明該工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性良好，可用于貞芪顆粒的工業(yè)化提取。飼喂結(jié)果表明，試驗豬群對本品的適口性良好，臨床使用安全；本品和陽性藥物均能顯著促進(jìn)保育豬的生長，三種劑量的促生長作用與陽性藥物的效果相當(dāng)，且中劑量的效果最好。

3.4 結(jié)論 研究以貞芪扶正顆粒為依托，根據(jù)其現(xiàn)代藥理作用基礎(chǔ)，篩選出與目標(biāo)相關(guān)聯(lián)的成分作為評價指標(biāo)，通過科學(xué)、合理的評價方法優(yōu)選提取工藝，開發(fā)一種符合國家三類新獸藥評判標(biāo)準(zhǔn)的新中獸藥貞芪顆粒，且優(yōu)化工藝所制備的顆粒能促進(jìn)生豬生長，其具體的作用機(jī)制正在進(jìn)一步研究。