敷和湯對(duì)CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)致抑郁模型大鼠的行為學(xué)及血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

鄭若韻，賀 娟，熊為鋒，王 旭，韓 玲，郝 宇

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，北京 100029）

五運(yùn)六氣理論是中醫(yī)學(xué)“天人合一”整體觀思想的集中體現(xiàn)。運(yùn)氣理論認(rèn)為疾病的發(fā)生受到天地氣化的影響，因此在診治疾病時(shí)應(yīng)充分考慮運(yùn)氣學(xué)特點(diǎn)?！叭蛩咎旆健笔顷悷o(wú)擇根據(jù)運(yùn)氣七篇大論中關(guān)于不同中運(yùn)，不同司天在泉下的運(yùn)氣特點(diǎn)，創(chuàng)立的16首針對(duì)每年易發(fā)疾病的方劑，后世應(yīng)用于臨床，多有奇效，成為歷代醫(yī)家以運(yùn)氣指導(dǎo)臨床用藥的代表。但是，目前關(guān)于運(yùn)氣方的研究多為臨床個(gè)案驗(yàn)案的報(bào)道[1-3]，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究尚不多見(jiàn)，導(dǎo)致運(yùn)氣方臨床療效的科學(xué)性難以證實(shí)，也限制了運(yùn)氣方的應(yīng)用推廣。

精神類疾病是發(fā)病率高、致殘率高、預(yù)后差的一類疾病，其中抑郁癥以其發(fā)病率高，對(duì)人生活、工作影響大，且存在部分嚴(yán)重抑郁患者自殺現(xiàn)象而備受關(guān)注[4-5]。探索其發(fā)病原因與治療措施，降低抑郁癥發(fā)病率，提高臨床療效，是醫(yī)學(xué)研究的重要內(nèi)容。《素問(wèn)》運(yùn)氣七篇大論中記載了大量干支運(yùn)氣與精神類疾病發(fā)生的相關(guān)性論述，如《素問(wèn)·氣交變大論篇》曰：“歲木太過(guò)，風(fēng)氣流行，脾土受邪，民病……忽忽善怒，眩冒巔疾。……歲火太過(guò)，炎暑流行，肺金受邪。民病……譫妄狂越。”《素問(wèn)·五常政大論篇》言：“卑監(jiān)之紀(jì)，是謂減化，……其主飄怒振發(fā)；……太陽(yáng)司天，寒氣下臨，心氣上從，……喜悲數(shù)欠?！币陨稀吧婆薄鞍d疾”“譫妄狂越”“飄怒振發(fā)”“喜悲數(shù)欠”等皆是精神疾病的癥狀表現(xiàn)。且有研究證實(shí)抑郁癥患者存在明顯的五運(yùn)六氣稟賦特征[6]，抑郁癥發(fā)病具有明顯的五運(yùn)六氣時(shí)間規(guī)律[7]。由此推測(cè)在運(yùn)氣理論指導(dǎo)下創(chuàng)立的運(yùn)氣方對(duì)于精神類疾病的治療可能有獨(dú)到的作用。而精神類疾病的動(dòng)物模型中，也以抑郁癥的動(dòng)物模型較理想而常用[8]。

因此本研究以抑郁癥為切入點(diǎn)，復(fù)制國(guó)際精神藥理學(xué)界公認(rèn)的慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和刺激（Chronic unpredictable mild stress，CUMS）抑郁大鼠模型[9]，研究2019年（己亥年）運(yùn)氣方敷和湯對(duì)抑郁模型大鼠的藥效作用，并與臨床療效確切的西藥氟西汀和中藥柴芩溫膽湯進(jìn)行對(duì)比[10-11]，以期為運(yùn)氣方的臨床使用提供科學(xué)依據(jù)，挖掘運(yùn)氣理論對(duì)于臨床診療的重要指導(dǎo)價(jià)值。

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)于北京斯貝福實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：11401500044296，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0002。飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房（SPF級(jí)），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（京）2016-0038。12 h晝夜循環(huán)，室溫恒定在22～24℃，相對(duì)濕度保持在55%～65%。本研究通過(guò)北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理審查，審查編號(hào)：BUCM-4-2019030507-1046，動(dòng)物的飼養(yǎng)和使用符合國(guó)際動(dòng)物倫理法。

1.2 藥物 中藥飲片均購(gòu)自北京同仁堂（亳州）飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院專家鑒定合格。敷和湯方劑組成：半夏15 g，五味子15 g，枳實(shí)15 g，茯苓30 g，干姜10 g，橘皮15 g，棗仁15 g，訶子10 g，炙甘草15 g。柴芩溫膽湯方劑組成：柴胡12 g，黃芩12 g，清半夏9 g，竹茹10 g，茯苓15 g，枳實(shí)12 g，陳皮15 g，炙甘草9 g。鹽酸氟西汀（Patheam France，禮來(lái)蘇州制藥有限公司分裝，批號(hào)：H20170003，規(guī)格：20 mg/粒）。敷和湯和柴芩溫膽湯復(fù)方按照傳統(tǒng)中藥煎煮方法水煎煮2次，每次30 min，合并煎液，水煎濃縮至200%（相當(dāng)于生藥2 g/mL），4℃冰箱冷藏備用。鹽酸氟西汀膠囊臨用時(shí)用去離子水配成質(zhì)量濃度為0.3 mg/mL的藥液。

1.3 試劑 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品：去甲腎上腺素（NE）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：088K1147）；腎上腺素（E）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：108K0930）；多巴胺（DA）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：062426ED）；3，4-二羥基苯乙酸（DOPAC）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：1364209 22509196）；高香草酸（HVA）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：107K5002）；5-羥色胺（5-HT）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：028K5152）；5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：1413645 14608169）。內(nèi)標(biāo)：3，4-二羥芐胺（DHBA）（Sigma-Aldrich公司，批號(hào)：04429MO）。色譜級(jí)甲醇（Fisher，批號(hào)：186358）；L-半胱氨酸（Amresco公司，批號(hào)：20120928）；磷酸二氫鈉（Merck公司，批號(hào)：C10095211）；辛烷磺酸鈉（Alfa Aesar公司，批號(hào)：T23B035）；乙二胺四乙酸二鈉（Alfa Aesar公司，批號(hào)：G05R019）；氯化鉀（Alfa Aesar公司，批號(hào)：J23R026）；蔗糖（上海國(guó)藥試劑，批號(hào)：20190310，500 g/瓶）。

1.4 主要儀器Agilent 1100LC型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent，包括G1379A型脫氣機(jī)、G1311A型色譜泵、G1313A型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱）；DECADEⅡSDC型電化學(xué)檢測(cè)器[荷蘭ANTEC公司，包括玻璃碳工作電極、Ag/AgCl參比電極、工作站（Clarity CHS）]；Biofuge Stratos高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)HERAEUS）；VCX130型超聲破碎儀（美國(guó)SONICS）。

1.5 分組與造模40只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白組、模型組、氟西汀組、柴芩溫膽湯組、敷和湯組，每組8只。空白組群養(yǎng)，8只/籠，自由攝食、飲水，不給予任何刺激，其余各組動(dòng)物孤養(yǎng)，1只/籠，接受42 d造模刺激。采用CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)方法建立抑郁大鼠模型[9]。CUMS：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，選取以下7種溫和刺激。冰水游泳（4℃，5min）；束縛（3 h）；禁水（24 h）；禁食（24 h）；夾尾（1 min）；晝夜顛倒（顛倒晝夜順序，08:00:00—20:00:00模擬黑夜，20:00:00—08:00:00模擬白晝）；45°籠具傾斜（24 h）。為避免大鼠產(chǎn)生應(yīng)激刺激的耐受性，造模期間，每天隨機(jī)施加一種刺激，每種應(yīng)激不在連續(xù)的2 d內(nèi)重復(fù)出現(xiàn)，7 d為1個(gè)周期。

1.6 實(shí)驗(yàn)給藥 每天每只大鼠灌胃給藥量按照成人平均體質(zhì)量60 kg換算成大鼠的等效藥物劑量（給藥量=成人劑量×6.17/60）。氟西汀組大鼠灌胃給予2.057 mg/kg氟西汀混懸液（去離子水溶解）；柴芩溫膽湯組大鼠灌胃給予9.667 g/kg柴芩溫膽湯；敷和湯組大鼠灌胃給予14.397 g/kg敷和湯，每7 d復(fù)測(cè)大鼠體質(zhì)量1次，根據(jù)體質(zhì)量變化更新灌胃劑量。氟西汀組、柴芩溫膽湯組、敷和湯組大鼠于造模后30～60 min灌胃給藥，空白組、模型組給予等量去離子水。每天固定時(shí)間灌胃，1次/d，連續(xù)給藥42 d。

1.7 觀測(cè)指標(biāo)

1.7.1 大鼠一般情況 觀察大鼠皮膚毛發(fā)的色澤、枯榮，活躍程度，飲食情況，大小便狀態(tài)等。

1.7.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，訓(xùn)練所有大鼠使其適應(yīng)含1%蔗糖飲水。在糖水適應(yīng)結(jié)束后應(yīng)激刺激開(kāi)始之前，進(jìn)行糖水偏好基礎(chǔ)值的測(cè)試，每組選用最接近總糖水偏愛(ài)基礎(chǔ)值平均值的6只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，即篩除對(duì)糖水極端敏感或極端不敏感的個(gè)體，分別于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前1天（0 d）、實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第7天（7 d）、第14天（14 d）、第21天（21 d）、第28天（28 d）、第35天（35 d）、第42天（42 d）進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)[12]，記錄大鼠的糖水消耗、純水消耗、總液體消耗，并計(jì)算糖水偏好指數(shù)。糖水偏好指數(shù)=[（糖水消耗/總液體消耗）]×100%，比較分析各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)糖水偏好指數(shù)的組間差異。

1.7.3 血清單胺神經(jīng)遞質(zhì)的測(cè)定 采用高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)（HPLC-ECD）測(cè)定大鼠血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT的含量。在完成大鼠各項(xiàng)行為學(xué)檢測(cè)后，禁食24 h，用10%的水合氯醛，按照3 mL/kg的劑量，麻醉大鼠后，腹主動(dòng)脈取血于采血管內(nèi)，靜置30 min，3 000 r/min離心10 min，取約1.5 mL上清液于進(jìn)口2 mL尖頭EP管中，置于-80℃冰箱保存待測(cè)。

樣品前處理：每500 μL血清加入100 μL裂解液（1.3 mol/L高氯酸，0.04%L-胱氨酸，2.0 mmol/L EDTA-2Na），冰浴超聲破碎10 s。4℃、15 000 r/min離心30 min，取上清液-80℃凍存以析出蛋白，檢測(cè)前再以15 000 r/min離心30 min，取上清液用0.22 μm耐酸過(guò)濾器過(guò)濾，取20 μL檢測(cè)。

色譜條件：Skyam C18柱（2.1 mm×100 mm，3 μm）；流動(dòng)相：磷酸二氫鈉100 mmol/L，辛烷磺酸鈉0.74 mmol/L，乙二胺四乙酸鈉0.027 mmol/L，氯化鉀8 mmol/L，甲醇8%，pH值為3；流速：0.2 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL；測(cè)定電極電勢(shì)：500 mV。檢測(cè)前額葉皮質(zhì)、海馬、下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，包括去甲腎上腺素（NE）、5-羥色胺（5-HT）、5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）、多巴胺（DA）及其代謝產(chǎn)物3，4-二羥基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，符合正態(tài)分布和滿足方差齊性，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法；重復(fù)測(cè)量計(jì)量資料采用重復(fù)測(cè)量方差分析。不服從正態(tài)分布者用非參數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)圖采用GraphPad Prism 7.0軟件進(jìn)行繪制。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般狀況 在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，各組大鼠生長(zhǎng)狀態(tài)優(yōu)良，行動(dòng)靈活，二便、攝食飲水均正常。造模與給藥結(jié)束后，與空白組比較，模型組大鼠精神狀態(tài)極差，活動(dòng)量明顯減少，膽小，易受驚嚇，常拱背蜷縮，皮毛枯黃無(wú)光澤，伴隨攝食減少，大便稀溏等現(xiàn)象；與模型組比較，氟西汀組、柴芩溫膽湯組和敷和湯組大鼠外觀表征好轉(zhuǎn)明顯，皮毛色澤明亮、細(xì)膩光滑，精神尚可，活動(dòng)度明顯增加，攝食、飲水情況良好；大、小便情況尚可，總體情況接近空白組大鼠。柴芩溫膽湯組和敷和湯組大鼠活躍度提高較氟西汀組大鼠更為明顯，且柴芩溫膽湯組和敷和湯組大鼠組間差異不明顯。

2.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)前（0 d）各組大鼠的糖水偏好指數(shù)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），5組大鼠糖水偏好指數(shù)整體比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），即存在分組效應(yīng)，造模及給藥結(jié)束后（42 d），與空白組比較，模型組大鼠糖水偏好指數(shù)明顯降低（P＜0.01）；與模型組比較，氟西汀組、柴芩溫膽湯組、敷和湯組大鼠糖水偏好指數(shù)明顯升高（P＜0.01）。所有大鼠不同時(shí)間點(diǎn)糖水偏好指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），即存在時(shí)間效應(yīng)。分組因素和時(shí)間之間存在交互效應(yīng)（P＜0.01），隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)，模型組大鼠糖水偏好指數(shù)總體呈下降趨勢(shì)，各治療組糖水偏好指數(shù)在21 d（敷和湯組在14 d）后均呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)。（見(jiàn)表1、圖1）

表1 各組大鼠糖水偏好指數(shù)比較（±s，%）

表1 各組大鼠糖水偏好指數(shù)比較（±s，%）

注：F時(shí)間主效應(yīng)=7.599，P時(shí)間主效應(yīng)=0.000；F分組主效應(yīng)=8.655，P分組主效應(yīng)=0.000；F交互效應(yīng)=1.858，P交互效應(yīng)=0.019；與空白組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與模型組比較，cP＜0.05，dP＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量(g/kg) 0 d 7 d 14 d 21 d 28 d 35 d 42 d F P空白組 6 - 85.69±9.35 80.85±12.01 93.85±6.12 75.40±23.7 83.65±7.56 88.72±7.15 88.09±5.68 0.688 0.662模型組 6 - 83.67±12.74 75.82±15.29 63.66±17.16a 59.04±18.36 56.19±18.33b 69.37±11.33a 49.93±14.75b 7.108 0.000氟西汀組 6 2.057×10-3 81.49±15.79 89.80±10.05 68.75±22.41 54.59±19.05 74.76±13.65c 91.42±4.28d 85.03±3.59d 3.859 0.010柴芩溫膽湯組6 9.667×10-3 76.90±9.39 81.36±13.40 77.49±23.39 56.51±15.06 75.67±10.93c 89.68±4.68c 85.89±5.57d 2.621 0.049敷和湯組 6 14.397×10-3 86.83±8.92 81.55±11.87 56.09±13.88b 68.3±19.74 76.77±14.05c 84.35±4.00 88.36±9.63d 3.743 0.012 F 0.695 0.945 4.007 1.239 3.510 10.227 21.304 P 0.602 0.454 0.012 0.320 0.021 0.000 0.000

圖1 糖水偏好指數(shù)時(shí)間和分組交互效應(yīng)輪廓圖

2.3 各組大鼠血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物水平比較

2.3.1 各組大鼠血清NE及其代謝產(chǎn)物E含量比較 與空白組比較，模型組大鼠血清E含量明顯降低（P＜0.05），NE含量有升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；氟西汀組、柴芩溫膽湯組和敷和湯組大鼠血清NE、E含量與模型組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見(jiàn)表2）

表2 各組大鼠血清NE及其代謝產(chǎn)物E含量比較（±s，ng/mL）

表2 各組大鼠血清NE及其代謝產(chǎn)物E含量比較（±s，ng/mL）

注：與空白組比較，aP＜0.05

組別 動(dòng)物數(shù)（只） 給藥劑量(g/kg)NE E空白組 8 - 165.01±69.37 10.17±3.93模型組 8 - 178.79±65.35 6.24±2.01a氟西汀組 8 2.057×10-3 165.05±58.0 4.47±2.94柴芩溫膽湯組 8 9.667×10-3 215.94±72.46 6.18±2.81敷和湯組 8 14.397×10-3 189.22±45.57 5.87±3.12

2.3.2 各組大鼠血清DA及其代謝產(chǎn)物DOPAC、HVA含量比較 與空白組比較，模型組大鼠血清HVA含量明顯降低（P＜0.05），DA含量有明顯降低趨勢(shì)，DOPAC含量有升高趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，柴芩溫膽湯組大鼠血清HVA含量明顯升高（P＜0.01），氟西汀組和敷和湯組大鼠DA、DOPAC、HVA與模型組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見(jiàn)表3）

表3 各組大鼠血清DA及其代謝產(chǎn)物含量比較（±s，ng/mL）

表3 各組大鼠血清DA及其代謝產(chǎn)物含量比較（±s，ng/mL）

注：與空白組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01

?組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量(g/kg)DA DOPAC HVA空白組 8 - 2.23±1.95 3.33±1.70 79.3±19.02模型組 8 - 0.53±0.45 3.79±1.96 50.5±16.08a氟西汀組 8 2.057×10-3 0.66±0.61 3.64±1.42 50.43±15.7柴芩溫膽湯組8 9.667×10-3 0.70±0.55 3.23±1.24 74.04±15.62b敷和湯組 8 14.397×10-3 0.51±0.40 4.33±1.80 53.86±12.71

2.3.3 各組大鼠5-HT及其代謝產(chǎn)物5-HIAA含量比較 與空白組比較，模型組大鼠血清5-HT含量明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，柴芩溫膽湯組、敷和湯組大鼠血清5-HT含量明顯升高（P＜0.01），柴芩溫膽湯組大鼠血清5-HIAA含量明顯升高（P＜0.01）。（見(jiàn)表4）

表4 各組大鼠血清5-HT及其代謝產(chǎn)物含量比較（±s，ng/mL）

表4 各組大鼠血清5-HT及其代謝產(chǎn)物含量比較（±s，ng/mL）

注：與空白組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.01

組別 動(dòng)物數(shù)（只）給藥劑量(g/kg) 5-HT 5-HIAA空白組 8 - 1 652.47±523.73 13.59±5.4模型組 8 - 1 001.84±403.62a 13.56±5.62氟西汀組 8 2.057×10-3 1 455.21±192.95 12.19±4.68柴芩溫膽湯組8 9.667×10-3 2 212.75±561.96b 20.07±3.62b敷和湯組 8 14.397×10-3 2 096.79±449.69b 17.20±2.09

3 討 論

本研究基于中醫(yī)運(yùn)氣理論，觀察運(yùn)氣方敷和湯對(duì)抑郁模型大鼠行為學(xué)和血清單胺類神經(jīng)遞質(zhì)及其代謝產(chǎn)物的影響。根據(jù)運(yùn)氣理論，敷和湯適用于己亥之歲，厥陰風(fēng)木司天，少陽(yáng)相火在泉時(shí)段，全年木火之氣盛行[13]。方中半夏辛能潤(rùn)下，合茯苓淡滲，祛濕除黃；棗仁生用瀉相火；甘草以緩厥陰，風(fēng)在上，以酸甘瀉之，火在下，以五味子之咸制之；干姜溫右脅之冷；枳實(shí)以泄脾之濕；陳皮、訶子醒胃悅脾。本實(shí)驗(yàn)于2019年（己亥年）開(kāi)展，符合運(yùn)氣理論所述敷和湯適用的運(yùn)氣特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照藥氟西汀及抗抑郁常用經(jīng)典方劑柴芩溫膽湯作為對(duì)照，探究運(yùn)氣情況對(duì)各方發(fā)揮抗抑郁療效的影響。

CUMS是目前較為公認(rèn)的抑郁癥動(dòng)物模型，聯(lián)合孤養(yǎng)建立的動(dòng)物模型能夠穩(wěn)定地模擬人類抑郁癥患者的核心癥狀，即快感缺失，且具有高度的有效性，基于此模型研究抑郁癥的病因?qū)W和抗抑郁藥的作用有重要的科學(xué)意義[14]。而快感缺失程度則常用經(jīng)典行為學(xué)實(shí)驗(yàn)糖水實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估[12]。本研究采用CUMS聯(lián)合孤養(yǎng)方法復(fù)制抑郁大鼠模型，結(jié)果表明經(jīng)過(guò)6周的CUMS干預(yù)，模型組動(dòng)物的糖水偏好指數(shù)明顯低于空白組（P＜0.01），快感缺乏，符合抑郁癥核心癥狀的主要表現(xiàn)，表明造模成功。實(shí)驗(yàn)前（0 d），各組大鼠糖水偏好指數(shù)基線水平具有一致性，各組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥結(jié)束后（42d），與模型組比較，氟西汀組、柴芩溫膽湯組、敷和湯組大鼠糖水偏好指數(shù)明顯升高（P＜0.01），說(shuō)明3種藥物干預(yù)均具有改善抑郁癥狀的作用。

NE、DA、5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)屬于中樞神經(jīng)遞質(zhì)，參與機(jī)體運(yùn)動(dòng)、睡眠、情感等活動(dòng)的調(diào)節(jié)，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)正常的生理功能的維持發(fā)揮重要作用[15-16]。單胺假說(shuō)是比較公認(rèn)的抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，大腦中5-HT及NE濃度水平或功能下降是導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)，DA亦參與了抑郁癥的發(fā)病過(guò)程，因此提高單胺類神經(jīng)功能，提升單胺類濃度，可以起到抗抑郁的治療效果[17]。本研究中給藥后，模型組大鼠血清E、HVA、5-HT含量均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。敷和湯則顯著提高了血清5-HT含量（P＜0.01），柴芩溫膽湯顯著提高了血清HVA、5-HT和5-HIAA的含量（P＜0.01）。已有研究表明，重度抑郁癥（MDD）患者的血清5-HT濃度明顯低于健康對(duì)照組[18]；抑郁患者血漿DA代謝產(chǎn)物HVA和DOPAC水平明顯降低[19]。本次實(shí)驗(yàn)中血清5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平的升高與抑郁行為改善的相關(guān)性也提示，血清5-HT及HVA可能在抑郁障礙的診斷和抗抑郁效果的判斷中發(fā)揮重要作用。柴芩溫膽湯作為抗抑郁常用經(jīng)典方劑，已有實(shí)驗(yàn)研究表明其能有效改善抑郁癥模型小鼠抑郁表現(xiàn)，增加模型小鼠腦組織中的5-HT含量[20]，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之相補(bǔ)充，為驗(yàn)證運(yùn)氣方的療效提供有效對(duì)照。本次實(shí)驗(yàn)中模型組NE含量與空白組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

本研究結(jié)果表明，敷和湯改善抑郁癥狀的作用較顯著，其機(jī)制可能與上調(diào)大鼠血清5-HT含量有關(guān)。同時(shí)，一般情況觀測(cè)中敷和湯組和柴芩溫膽湯組的大鼠活躍度提高較氟西汀組大鼠更為明顯，而兩個(gè)中藥組間未觀察到明顯差異；柴芩溫膽湯組、敷和湯組大鼠糖水偏好指數(shù)均明顯升高（P＜0.01），敷和湯組大鼠糖水偏好指數(shù)高于柴芩溫膽湯組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），一定程度上說(shuō)明改善抑郁癥狀的作用相當(dāng)。我們據(jù)此推測(cè)實(shí)驗(yàn)中復(fù)制的抑郁癥動(dòng)物模型，其發(fā)病受到運(yùn)氣的影響，結(jié)合運(yùn)氣用藥的治療效果與常用經(jīng)典方劑相當(dāng)，提示了五運(yùn)六氣對(duì)于疾病發(fā)生的影響，說(shuō)明根據(jù)運(yùn)氣特點(diǎn)指導(dǎo)臨床用藥有其現(xiàn)實(shí)意義。本研究?jī)H對(duì)抑郁大鼠血清單胺神經(jīng)遞質(zhì)的變化進(jìn)行了分析，未對(duì)上游相關(guān)通路進(jìn)行深入探究，是本研究的局限性。