用TTC培養(yǎng)基法對(duì)食品進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的效果及價(jià)值研究

梁健宇

摘要：目的：探討TTC培養(yǎng)基法對(duì)食品進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的價(jià)值。方法：遴選本檢驗(yàn)所需要檢驗(yàn)的100份食品樣品進(jìn)行研究（2019年03月至2020年12月），由同一位工作人員采集兩份同樣的樣品，其中一份實(shí)施TTC培養(yǎng)基法、平板菌落計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)，另一份將樣品送往上級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，對(duì)兩份樣品進(jìn)行同種項(xiàng)目檢測(cè)，并以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)，分析不同檢驗(yàn)方法臨床價(jià)值。結(jié)果：平板菌落計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率83.00%，TTC培養(yǎng)基法檢驗(yàn)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為99.00%，組間對(duì)比P<0.05。結(jié)論：TTC培養(yǎng)基法在食品微生物檢驗(yàn)中準(zhǔn)確率較高，可作為檢驗(yàn)食品質(zhì)量的優(yōu)選方案，值得借鑒。

關(guān)鍵詞：TTC培養(yǎng)基法;食品;微生物檢驗(yàn);平板菌落計(jì)數(shù)法;上級(jí)實(shí)驗(yàn)室;食品質(zhì)量

【中圖分類號(hào)】G644.5 ? ? ? ? ? ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2021）07--02

受益于社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、居民生活質(zhì)量的提升，當(dāng)前我國(guó)居民對(duì)食品衛(wèi)生要求逐漸升高，但研究發(fā)現(xiàn)食物在加工及運(yùn)輸過程中受多種因素影響，極易出現(xiàn)衛(wèi)生狀況不合格等情況，究其原因是食物與微生物接觸后導(dǎo)致食物發(fā)生污染，不僅會(huì)影響食品質(zhì)量，亦可影響我國(guó)居民健康程度，鑒于此需對(duì)食品進(jìn)行有效檢驗(yàn)[1]。目前多通過平板菌落計(jì)數(shù)法對(duì)食品中微生物菌落總數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，但據(jù)悉該方案雖可獲得一定價(jià)值，但平板菌落計(jì)數(shù)法無法確保檢驗(yàn)質(zhì)量，近年隨著食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，目前TTC培養(yǎng)基法被應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)中，為進(jìn)一步明確其臨床價(jià)值，本文遴選2019年03月至2020年12月接收食品樣品100份進(jìn)行研究，具體情況如下。

1資料與方法

1.1一般資料

遴選100份食品樣品進(jìn)行研究，其中48份小吃、46份冷凍飲品、6份能力驗(yàn)證樣品，均來源于本實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)的樣品。TTC溶液來自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，平板計(jì)數(shù)瓊脂來自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，營(yíng)養(yǎng)瓊脂來自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2方法

納入研究100份食品樣品均實(shí)施TTC培養(yǎng)基法、平板菌落計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)，具體操作方法如下：（1）平板菌落計(jì)數(shù)法：為確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，平板菌落計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)需按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)（GB4789.2-2016標(biāo)準(zhǔn)）進(jìn)行，實(shí)施前采集25g樣品放入含無菌生理鹽水（225ml）錐形瓶中，通過搖晃使樣品充分混勻;其次吸出1ml樣品（無菌吸管），而后沿著試管壁緩慢注入9ml生理鹽水，通過震蕩混合，得到1：100的樣品溶液;按上述方法制備出1：1000、1：10000的樣品溶液。在檢驗(yàn)過程中根據(jù)樣品污染情況選擇稀釋合適的樣品溶液，分別吸取1ml放置入無菌器皿中（每個(gè)稀釋度做2個(gè)器皿），分別提取1ml空白稀釋液放置入2個(gè)器皿中（空白對(duì)照樣品）。最后對(duì)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行加溫（46℃）處理，將15ml加入器皿中通過轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，當(dāng)出現(xiàn)瓊脂塊后翻轉(zhuǎn)放置在36℃溫度中培養(yǎng)48-50h。（2）TTC培養(yǎng)基法：為確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性，TTC培養(yǎng)基法實(shí)施需按照GB4789.2-2016標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，首先取1ml0.5%的TTC溶液（100ml）加入瓊脂培養(yǎng)基中制備出TTC瓊脂培養(yǎng)基，樣品接種及培養(yǎng)方法如平板菌落計(jì)數(shù)法。

1.3觀察指標(biāo)

以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析TTC培養(yǎng)基法、平板菌落計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)與金標(biāo)準(zhǔn)符合率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

食品樣品選用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析準(zhǔn)確率等計(jì)數(shù)資料（以n、%表示，X2檢驗(yàn)），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以P<0.05表示。

2.結(jié)果

上級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比發(fā)現(xiàn)TTC培養(yǎng)基法檢驗(yàn)與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為99.00%，平板菌落計(jì)數(shù)法與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為83.00%，組間對(duì)比（P<0.05）。詳見表1。

3.討論

隨著社會(huì)的發(fā)展近年食品加工企業(yè)得到了快速發(fā)展，市面上食品種類越來越多，但近年食品安全問題層出不窮，不僅嚴(yán)重威脅人體健康，還提高社會(huì)大眾對(duì)食物安全重視程度[2]。據(jù)悉食品在加工、貯存、運(yùn)輸過程中會(huì)接觸各種微生物，一旦食品中微生物含量超標(biāo)會(huì)導(dǎo)致食物變質(zhì)，鑒于此需加強(qiáng)食品的檢驗(yàn)以明確其是否合格，針對(duì)不合格者需及時(shí)處理，避免進(jìn)入市場(chǎng)后引起的社會(huì)性問題[3]。

既往人們多通過平板菌落計(jì)數(shù)法對(duì)食品中微生物進(jìn)行檢驗(yàn)，但其檢驗(yàn)效果及準(zhǔn)確性一般，但最新研究發(fā)現(xiàn)TTC培養(yǎng)基法在食品檢驗(yàn)中亦可獲得理想價(jià)值，為進(jìn)一步探討TTC培養(yǎng)基法在食品微生物檢驗(yàn)中價(jià)值，本文選擇100份食品樣品進(jìn)行研究，給予其不同方案檢驗(yàn)以明確準(zhǔn)確率最高方案，為臨床檢驗(yàn)食品質(zhì)量提供參考，結(jié)果顯示：以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)平板菌落計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率83.00%，TTC培養(yǎng)基法檢驗(yàn)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為99.00%，組間對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），由此證實(shí)TTC培養(yǎng)基法在食品檢驗(yàn)中更具優(yōu)勢(shì)，可替代平板菌落計(jì)數(shù)法成為檢驗(yàn)食品質(zhì)量的首選方案，分析：（1）從理論上將平板菌落計(jì)數(shù)法主要是根據(jù)固體培養(yǎng)器皿中微生物沉積情況對(duì)菌落數(shù)量進(jìn)行分析，但在實(shí)際檢驗(yàn)過程中需要對(duì)待檢樣品進(jìn)行稀釋，將樣品中的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，并將取得的稀釋液涂抹在平板上進(jìn)行分析，在實(shí)施細(xì)菌培養(yǎng)過程單個(gè)細(xì)胞通過繁殖均可形成菌落，不需要借助顯微鏡便可直接發(fā)現(xiàn);其次在菌落計(jì)算完畢后可通過稀釋倍數(shù)等對(duì)微生物總量進(jìn)行計(jì)算，分析其感染程度，通過實(shí)踐發(fā)現(xiàn)平板菌落計(jì)數(shù)法操作簡(jiǎn)單，因此被廣泛應(yīng)用在微生物檢驗(yàn)過程中，但該方案對(duì)操作人員專業(yè)能力要求較高，若操作過程中沒有將各個(gè)微生物分開，或平行劃線、扇形劃線等操作要求不達(dá)標(biāo)，不僅會(huì)導(dǎo)致微生物集合在一起，還會(huì)影響菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，因此一旦實(shí)際操作過程中檢驗(yàn)人員專業(yè)知識(shí)不足或操作水平無法達(dá)到檢驗(yàn)要求，便會(huì)導(dǎo)致檢驗(yàn)不不合格等情況[4-8]。（2）TTC培養(yǎng)基法作為標(biāo)準(zhǔn)的氧化還原電位為80mV的氧化還原位置，在水中無色但一旦被還原，便會(huì)轉(zhuǎn)化為紅色且不會(huì)溶于水;研究發(fā)現(xiàn)，大部分微生物中含有脫氫酶，其會(huì)導(dǎo)致作用物發(fā)生脫氫效果，因此在實(shí)施過程中自瓊脂中加入適量的TTC（每100ml中加入0.5%TTC1ml），借助細(xì)菌微生物特性使其變成紅色，在檢驗(yàn)過程中通過觀察TTC瓊脂顏色，便可對(duì)微生物含量進(jìn)行測(cè)定[9]。與平板菌落計(jì)數(shù)法相比TTC培養(yǎng)基法準(zhǔn)確率較高，據(jù)悉當(dāng)食品樣品污染程度較嚴(yán)重（每個(gè)器皿中微生物含量計(jì)數(shù)>200）便會(huì)平板計(jì)數(shù)無法進(jìn)行，而TTC培養(yǎng)基法檢驗(yàn)中即使微生物含量計(jì)數(shù)>300依舊可準(zhǔn)確檢出微生物數(shù)量，但該方案檢驗(yàn)成本較高，無法廣泛應(yīng)用在食品微生物檢驗(yàn)過程中[10]。

食品微生物檢驗(yàn)結(jié)果受制度、設(shè)備、流程、人為因素等影響，制度因素是指實(shí)驗(yàn)室制定的檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，醫(yī)院平時(shí)在管理中對(duì)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)宣傳不足，導(dǎo)致工作人員在實(shí)際檢驗(yàn)中不按照規(guī)定制度進(jìn)行檢驗(yàn)，致使檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確率不高;所謂設(shè)備因素是指進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的設(shè)備出現(xiàn)老化、故障，導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差，從而影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確率，還有部分檢驗(yàn)人員因操作不規(guī)范導(dǎo)致檢驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確;所謂流程因素是檢驗(yàn)人員對(duì)檢驗(yàn)流程、培養(yǎng)基方法認(rèn)知不足，導(dǎo)致培養(yǎng)基在存貯過程中發(fā)生污染;人為因素是檢驗(yàn)人員專業(yè)能力不足所致，實(shí)驗(yàn)室管理人員對(duì)檢驗(yàn)人員考核不足，平時(shí)沒有加強(qiáng)專業(yè)能力培訓(xùn)會(huì)導(dǎo)致其無法滿足檢驗(yàn)需求，從而出現(xiàn)管理失誤等情況，除上述因素外食品微生物檢驗(yàn)結(jié)果還受多種因素影響，因此檢驗(yàn)人員在工作中一定要加強(qiáng)自身專業(yè)素養(yǎng)提升，避免因自身因素影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確率。結(jié)合上述影響檢驗(yàn)結(jié)果因素，微生物檢驗(yàn)科室一定要結(jié)合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)定，規(guī)范檢驗(yàn)制度明確檢驗(yàn)過程中需要注意事項(xiàng)，從而確保檢驗(yàn)質(zhì)量;其次在實(shí)驗(yàn)室管理中一定要保持良好的通風(fēng)及照明，并盡量在干凈無菌環(huán)境中進(jìn)行檢驗(yàn)，避免其他因素造成的污染，同時(shí)需按照相關(guān)規(guī)定合理穿戴檢驗(yàn)服，以確保自身安全性;再者定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行消毒，所用設(shè)備均需按照相關(guān)要求消毒、滅菌后使用，同時(shí)實(shí)驗(yàn)室要加強(qiáng)質(zhì)量控制，還需重視檢驗(yàn)制度的制定與完善，降低其他因素對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響。為確保微生物檢驗(yàn)結(jié)果及質(zhì)量，檢驗(yàn)室需定期引進(jìn)先進(jìn)的設(shè)備，在設(shè)備使用前需首先明確設(shè)備操作方法，還需根據(jù)提示進(jìn)行預(yù)熱，同時(shí)對(duì)科室內(nèi)專業(yè)人員進(jìn)行培訓(xùn)使其按照相關(guān)流程進(jìn)行工作，而在工作中需保持謹(jǐn)慎的態(tài)度，盡可能準(zhǔn)確記錄培養(yǎng)基顏色、生物學(xué)指標(biāo)等，確保其在培養(yǎng)過程中滿足微生物生長(zhǎng)要求，避免影響檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確率。

注意事項(xiàng)：TTC培養(yǎng)基法檢驗(yàn)結(jié)果不僅受操作流程規(guī)范程度、無菌制度的影響，還易受檢驗(yàn)人員專業(yè)能力影響，因此檢驗(yàn)室在管理中要加強(qiáng)檢驗(yàn)人員專業(yè)能力的培訓(xùn)，盡可能通過定期培訓(xùn)、講座、技能考核等提高其專業(yè)能力，使其在工作中高質(zhì)量完成各檢驗(yàn)任務(wù)，還可有效處理突發(fā)事件，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境也會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果，因此在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)過程中需合理控制溫度、濕度，盡可能讓各個(gè)培養(yǎng)皿干燥、整潔并符合檢驗(yàn)要求，而操作人員在檢驗(yàn)前需對(duì)各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行檢查，確保其各正常運(yùn)轉(zhuǎn)且不會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果。為避免操作流程復(fù)雜影響檢驗(yàn)結(jié)果，需對(duì)食品微生物的檢驗(yàn)檢測(cè)材料、設(shè)備、方式進(jìn)行明確，不可隨意更改，還需對(duì)食品微生物進(jìn)行針對(duì)性抽檢，以明確其檢驗(yàn)結(jié)果。

不足之處：基于本研究方案設(shè)計(jì)較為簡(jiǎn)單，通過對(duì)比研究雖可證實(shí)TTC培養(yǎng)基法價(jià)值，但未明確其對(duì)細(xì)菌菌落檢出情況，加之本研究納入樣本數(shù)量較少，無法為檢驗(yàn)人員提供高質(zhì)量的參考，鑒于此后期需優(yōu)化研究設(shè)計(jì)方案，通過多指標(biāo)、多數(shù)據(jù)對(duì)比為食品檢驗(yàn)人員提供參考，還需盡可能擴(kuò)大研究樣本以分析影響檢驗(yàn)結(jié)果因素，從而展開針對(duì)性管理，提高TTC培養(yǎng)基法檢驗(yàn)價(jià)值。

綜上所述，TTC培養(yǎng)基法可提高食品檢驗(yàn)準(zhǔn)確率，因此可將其作為檢驗(yàn)食品質(zhì)量的首選方案，值得借鑒。

參考文獻(xiàn)：

[1]吳芳媛，馮秋芳，林黎.食品微生物檢驗(yàn)常用培養(yǎng)基配制、滅菌及貯藏研究[J].食品安全導(dǎo)刊，2020，12（36）：83.

[2]任泓燕.食品微生物檢驗(yàn)樣品的采集保存和檢驗(yàn)技術(shù)[J].微量元素與健康研究，2021，38（02）：38-39.

[3]吳澤君，石文松，賀晶，等.含復(fù)合防腐劑食品微生物檢驗(yàn)中稀釋液的選擇探討[J].現(xiàn)代食品，2020，26（20）：170-172+181.

[4]GB 4789.29-2020， 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌（椰毒假單胞菌酵米面亞種）[S].

[5]周瑾.基于食品微生物檢驗(yàn)的方法及質(zhì)量控制分析[J].人人健康，2020，12（14）：195.

[6]郭冬琴.“食品微生物學(xué)”整合“食品微生物檢驗(yàn)”的教學(xué)思考[J].食品界，2020，11（07）：91.

[7]許金榜.《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗(yàn)方法》（GB 8538-2016）中微生物學(xué)部分存在的問題與改進(jìn)建議[J].飲料工業(yè)，2020，23（03）：38-41.

[8]葛雯，李鑫，張爽.抗疫背景下“食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)”課程思政探索與實(shí)踐——以“食品微生物檢驗(yàn)員的素養(yǎng)要求”教學(xué)任務(wù)為例[J].淮北職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2020，19（03）：44-46.

[9]楊文君.食品微生物檢驗(yàn)常用培養(yǎng)基配制及滅菌后貯存有效期的研究[J].現(xiàn)代食品，2020，12（09）：187-190.

[10]傅志豐，周鶴，許文蓓.淺談食品微生物檢驗(yàn)中菌落總數(shù)和大腸菌群測(cè)定注意事項(xiàng)[J].食品安全導(dǎo)刊，2019，15（26）：34-36.