NLRP3信號(hào)通路相關(guān)因子參與夾脊電針改善脊髓損傷大鼠的作用機(jī)制研究*

劉玲玲，梅繼林，李 諾，李曉寧

(1.青島市婦女兒童醫(yī)院，山東 青島 266011; 2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

脊髓損傷(Spinal cord injury，SCI)是脊髓最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，常因神經(jīng)元的不可逆丟失而導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)功能障礙[1]。急性脊髓損傷病理復(fù)雜，可分為原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷，損傷脊髓組織的修復(fù)是臨床的一大挑戰(zhàn)[2-3]。從時(shí)間進(jìn)程上，SCI分為兩個(gè)階段。原發(fā)性損傷是對(duì)脊髓的初始機(jī)械損傷，繼發(fā)性損傷是由局部微環(huán)境改變引起的脫細(xì)胞化和神經(jīng)元壞死，隨后損傷部位明顯擴(kuò)大至脊髓的更多節(jié)段[4]。越來(lái)越多的研究表明，神經(jīng)炎癥是導(dǎo)致SCI后繼發(fā)性損傷的關(guān)鍵因素，而炎癥小體的激活又反過(guò)來(lái)引發(fā)了神經(jīng)炎癥[5-6]。炎性小體是一種多聚體蛋白復(fù)合物，由caspase-1、caspase活化募集域蛋白(ASC)和傳感器NLR蛋白(如NLRP1、NLRP2和NLRP3等)組成[7]。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的巨噬細(xì)胞，因此是減少SCI后神經(jīng)炎癥的有前景的治療靶點(diǎn)[8]。大鼠SCI模型中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)NLRP3在小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)[9]，本課題組前期試驗(yàn)也已經(jīng)驗(yàn)證了NLRP3在SCI模型中的高表達(dá)[10]，NLRP3信號(hào)通路相關(guān)因子是否參與夾脊電針改善脊髓損傷大鼠的作用過(guò)程還有待驗(yàn)證。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

Sprague-Dawley(SD)大鼠120只，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司。分為假手術(shù)組(Sham組)、模型組(Model組)、夾脊電針組(EA組)、P2X7干擾組(P2X7R siRNA)和干擾對(duì)照組(Control siRNA)共5組,各24只;每組又分1 d、3 d、7 d和21 d共4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程符合國(guó)際動(dòng)物使用關(guān)懷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 主要試劑及儀器

1.2.1 儀器 石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leica)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(天津泰斯特公司，DH36001B)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備)；超純水系統(tǒng)(香港Heal Force)；激光共聚焦掃描顯微鏡(日本OLUMPUS)；電針儀(中國(guó)英迪KWD-808II)。

1.2.2 試劑 蘇木精(中國(guó)Solarbio);過(guò)氧化氫(中國(guó)國(guó)藥);DAB顯色液(中國(guó)Solarbio);山羊血清(中國(guó)Solarbio);cleaved caspase-1(中國(guó)Wanleibio);P2RX7(以色列alomone);IL-18(中國(guó)Bioss);HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG(美國(guó)thermofisher);OX42(美國(guó)abcam);FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(中國(guó)Beyotime);Cy3標(biāo)記山羊抗兔IgG(中國(guó)Beyotime);抗熒光衰減封片劑(中國(guó)Solarbio);P2X7慢病毒和陰性對(duì)照慢病毒(沈陽(yáng)萬(wàn)類生物科技有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備及評(píng)價(jià)

采用改良Allen’s打擊法制成脊髓損傷動(dòng)物模型，予10%水合氯醛腹腔麻醉，大鼠麻醉之后將大鼠固定于手術(shù)臺(tái)上，以胸10為中心脫毛、備皮和消毒，以胸10棘突為中心切開(kāi)3 cm手術(shù)切口，暴露胸9～11棘突。采用改良Allen’s打擊法，使脊髓組織出現(xiàn)急性損傷，隨后大鼠出現(xiàn)尾巴擺動(dòng)，身體痙攣性抽搐，預(yù)示造模成功，再縫合傷口。術(shù)后給予生理鹽水，給予青霉素注射。大鼠蘇醒后通過(guò)BBB評(píng)分1～3分及下腹部觸診膀胱脹大確認(rèn)造模成功[11]，使用BBB評(píng)分對(duì)大鼠后肢功能評(píng)分，1～3分納入本實(shí)驗(yàn)。

2.2 干預(yù)方法

2.2.1 假手術(shù)組(Sham) 切除相應(yīng)椎板，僅僅暴露脊髓，但不打擊脊髓，同其它各組大鼠一同捆綁，常規(guī)飼養(yǎng)，不給予任何處置。

2.2.2 模型組(Model) 造模制備成功后，除正常捆綁外，不給予任何處理。

2.2.3 夾脊電針組(EA) 模型制備成功后3 h給予夾脊電針治療：華佗牌針灸針，直刺入胸9、胸11節(jié)段兩側(cè)夾脊穴下4～5 mm，并連接電針儀，將電針儀正負(fù)極接頭分別夾在同側(cè)夾脊穴兩針柄，定時(shí)30 min，電流輸出在1～2 mA，輸出頻率為100 Hz，每天治療1 次，每次30 min[12]。

2.2.4 P2X7干擾組(P2X7R siRNA) 脊髓損傷模型制作成功后，注射8 μL 滴度為107 TU/mL的P2X7R干擾慢病毒懸液，選取損傷部位頭端和尾端進(jìn)行注射，各注射點(diǎn)注射2 μL病毒懸液。

2.2.5 干擾對(duì)照組(Control siRNA) 同P2X7干擾組注射陰性的對(duì)照慢病毒無(wú)其他處置。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 BBB評(píng)定各組大鼠肢體運(yùn)動(dòng)功能 各組大鼠在造模成功后第1、3、7和21天運(yùn)用BBB評(píng)分量表評(píng)定，評(píng)分最高21分，評(píng)分最低0分[13-14]，評(píng)分越低表示大鼠后肢運(yùn)動(dòng)障礙越嚴(yán)重。

2.3.2 免疫組化法檢測(cè)各組大鼠脊髓組織中NLRP3、ASC及IL-18的表達(dá)情況 固定后的脊髓組織修復(fù)，酒精脫水，二甲苯固定，包埋后切成層厚為5 μm的薄片，60℃溫箱中2 h，烘干，脫蠟，隨后進(jìn)行IHC檢測(cè)。

2.3.3 免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)觀察NLRP3與OX42共定位 切片脫蠟至水：將每張石蠟切片置于切片架上，于60℃烘箱中烤片，分別浸于I級(jí)和II級(jí)二甲苯中，再依次浸入95%、85%和75%乙醇；抗原修復(fù)：置于煮沸抗原修復(fù)液中，低火修復(fù)；血清封閉：滴加山羊血清至完全覆蓋組織；一抗孵育：滴加一抗共同孵育；二抗孵育：滴加熒光二抗完全覆蓋組織；DAPI復(fù)染：滴加DAPI以復(fù)染核；抗熒光衰減封片：膠頭滴管滴加抗熒光衰減封片劑，封片；鏡檢[15]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 BBB評(píng)分法觀察各組大鼠運(yùn)動(dòng)功能

與Sham組比較，各時(shí)間點(diǎn)Model組大鼠BBB評(píng)分顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與P2X7R siRNA組比較，3 d、7 d和21 d各時(shí)間點(diǎn)Control siRNA組大鼠BBB評(píng)分顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與Model組比較，術(shù)后3 d、7 d和21 d共3個(gè)時(shí)間點(diǎn)EA組和P2X7R siRNA組大鼠BBB評(píng)分均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著時(shí)間的推移，EA組和P2X7R siRNA組大鼠BBB評(píng)分表現(xiàn)為上升趨勢(shì)，表明EA組和P2X7R siRNA組都可以改善大鼠脊髓損傷后肢體功能，治療21 d時(shí)間點(diǎn)效果更顯著。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠治療前后BBB評(píng)分的變化

3.2 免疫組化法檢測(cè)各組大鼠脊髓組織相關(guān)因子表達(dá)變化情況

3.2.1 各組大鼠脊髓組織NLRP3表達(dá)變化比較 Sham 組大鼠脊髓組織中NLRP3表達(dá)量極低，與Sham組比較，各時(shí)間點(diǎn)Model組大鼠脊髓組織NLRP3蛋白表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明模型制備成功。與P2X7R siRNA組比較，3 d、7 d和21 d各時(shí)間點(diǎn)Control siRNA組大鼠脊髓組織NLRP3蛋白表達(dá)水平仍較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明構(gòu)建干擾慢病毒載體成功。經(jīng)夾脊電針治療后，3 d、7 d和21 d EA組大鼠脊髓組織NLRP3蛋白表達(dá)均低于Model組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，質(zhì)粒病毒裝載小片段RNA注射脊髓組織后，3 d、7 d和21 dP2X7R siRNA組大鼠脊髓組織NLRP3蛋白表達(dá)均低于Model組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見(jiàn)圖1、表2。隨著時(shí)間的推移，Model組與EA組大鼠脊髓組織NLRP3蛋白表達(dá)在1 d、3 d和7 d表現(xiàn)為上升趨勢(shì)，7 d時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高，21 d時(shí)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，且EA組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量始終低于Model組。結(jié)果表明脊髓損傷后微環(huán)境中NLRP3蛋白表達(dá)明顯升高，質(zhì)粒病毒siRNA干擾P2X7R能抑制NLRP3蛋白表達(dá)，夾脊電針也可抑制NLRP3蛋白的表達(dá)，進(jìn)而可能抑制其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，治療脊髓炎性損傷，隨著時(shí)間增加，治療優(yōu)勢(shì)更明顯。

圖1 各組大鼠脊髓組織NLRP3表達(dá)的比較(400×)

表2 各組大鼠脊髓組織NLRP3的平均光密度值

3.2.2 各組大鼠脊髓組織ASC表達(dá)比較 Sham組大鼠脊髓組織中ASC蛋白表達(dá)量極低，與Sham組比較，各時(shí)間點(diǎn)Model組大鼠脊髓組織ASC蛋白表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明模型制備成功。與P2X7R siRNA組比較，3 d、7 d和21 d各時(shí)間點(diǎn)Control siRNA組大鼠脊髓組織ASC蛋白表達(dá)水平仍較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明構(gòu)建干擾慢病毒載體成功。經(jīng)夾脊電針治療后，3 d、7 d和21 d EA組大鼠脊髓組織ASC蛋白表達(dá)均低于Model組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；質(zhì)粒病毒裝載siRNA干擾P2X7R表達(dá)后，3 d、7 d和21 d各時(shí)間點(diǎn)P2X7RsiRNA組大鼠脊髓組織ASC蛋白表達(dá)水平均低于Model組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見(jiàn)圖2、表3。隨著時(shí)間的推移，Model組與EA組大鼠脊髓組織ASC蛋白表達(dá)在1 d、3 d表現(xiàn)為上升趨勢(shì)，7 d、21 d時(shí)出現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)，且EA組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量始終低于Model組,結(jié)果表明脊髓損傷后微環(huán)境中ASC表達(dá)蛋白顯著升高，夾脊電針和質(zhì)粒病毒siRNA干擾P2X7R能抑制ASC蛋白的表達(dá)，可能抑制NLRP3介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，減輕脊髓損傷炎性損傷。

表3 各組大鼠脊髓組織ASC的平均光密度值

圖2 各組大鼠脊髓組織ASC表達(dá)的比較(400×)

3.2.3 各組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)比較 Sham組大鼠脊髓組織中IL-18表達(dá)量極低，與Sham組比較，各時(shí)間點(diǎn)Model組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明模型制備成功；與P2X7R siRNA組比較，3 d、7 d和21 d各時(shí)間點(diǎn)Control siRNA組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)水平仍較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明構(gòu)建干擾慢病毒載體成功。經(jīng)夾脊電針治療后，7 d、21 d EA組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)均低于Model組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，質(zhì)粒病毒裝載siRNA干擾P2X7R表達(dá)后，3 d、7 d和21 d各時(shí)間點(diǎn)P2X7R siRNA組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)水平均低于Model組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見(jiàn)圖3、表4。隨著時(shí)間的推移，Model組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)1 d、3 d逐漸升高，維持到7 d達(dá)到最高值，21 d出現(xiàn)緩慢下降的趨勢(shì)；EA組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)在1 d到3 d出現(xiàn)上升的趨勢(shì)，3 d達(dá)到最高值后7 d、21 d出現(xiàn)了顯著的表達(dá)下降趨勢(shì)。結(jié)果表明脊髓損傷后脊髓組織微環(huán)境中促炎因子IL-18的表達(dá)水平顯著升高，質(zhì)粒病毒siRNA干擾P2X7R能抑制促炎因子IL-18的分泌，夾脊電針也能抑制促炎因子IL-18的分泌，進(jìn)而治療脊髓組織炎性損傷，隨著時(shí)間的增加，治療優(yōu)勢(shì)更加顯著。

表4 各組大鼠脊髓組織IL-18的平均光密度值

圖3 各組大鼠脊髓組織IL-18表達(dá)的比較(400×)

3.3 各組大鼠脊髓組織中NLRP3與OX42共定位表達(dá)

NLRP3與小膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物OX42免疫熒光雙染可見(jiàn)，NLRP3與OX42存在共定位，且紅色熒光為NLRP3陽(yáng)性，綠色熒光為OX42陽(yáng)性，藍(lán)色熒光為細(xì)胞核，雙陽(yáng)性為橙色，與Sham組比較，各時(shí)間點(diǎn)Model組NLRP3與OX42共定位陽(yáng)性表達(dá)明顯增多，夾脊電針治療后3 d、7 d和21 d EA組NLRP3與OX42共定位陽(yáng)性表達(dá)明顯低于Model組，質(zhì)粒病毒裝載siRNA干擾P2X7R表達(dá)后，3 d、7 d和21 d P2X7R siRNA組NLRP3與OX42共定位陽(yáng)性表達(dá)明顯低于Model組，在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)中，1 d、3 d和7 d時(shí)間點(diǎn)Model組和EA組NLRP3與OX42共定位陽(yáng)性表達(dá)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，7 d時(shí)陽(yáng)性表達(dá)最多，21 d陽(yáng)性表達(dá)有下降趨勢(shì)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脊髓損傷后NLRP3在脊髓組織小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)明顯增多，夾脊電針和質(zhì)粒病毒裝載siRNA干擾P2X7R表達(dá)能夠有效地抑制小膠質(zhì)細(xì)胞中的NLRP3表達(dá)起到抑制炎癥反應(yīng)的作用。見(jiàn)圖4。

圖4 各組大鼠脊髓組織中P2X7R與OX42共定位表達(dá)(600×)

4 討論

SCI遵循雙階段時(shí)間進(jìn)程，初級(jí)損傷是由過(guò)度的機(jī)械撞擊直接導(dǎo)致的，導(dǎo)致椎體骨折，引起急性出血、壞死細(xì)胞死亡和神經(jīng)元丟失。繼發(fā)性損傷會(huì)導(dǎo)致彌漫性的、持久的損傷，這對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞具有破壞性，并引發(fā)延遲性細(xì)胞死亡和進(jìn)行性神經(jīng)變性，隨后損傷部位顯著擴(kuò)大到脊髓的更高節(jié)段[16-18]。炎癥是來(lái)自中樞神經(jīng)系統(tǒng)先天免疫系統(tǒng)的一種反應(yīng)，在組織損傷后中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病理中發(fā)揮重要作用,在SCI的繼發(fā)期發(fā)揮關(guān)鍵作用[19-20]。課題組前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)脊髓損傷后NLRP3炎癥小體可以被激活并且引起一系列的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，夾脊電針可以減輕NLRP3炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)脊髓損傷后的肢體功能恢復(fù)，由于P2X7R是NLRP3炎性小體最有效的激活因子之一[21]，據(jù)此引入P2X7R抑制劑，增加P2X7R抑制劑組和對(duì)照觀察組，延伸觀察時(shí)間點(diǎn)，進(jìn)一步探討在SCI大鼠中夾脊電針對(duì)NLRP3信號(hào)通路的作用機(jī)制。

炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)與“炎性小體”的多蛋白復(fù)合體的形成密切相關(guān)，炎癥小體是一種胞質(zhì)化的多蛋白復(fù)合物，作為細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞穩(wěn)態(tài)破壞的傳感器，它們的刺激導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子pro-IL-1b和pro-IL-18通過(guò)活化的caspase-1蛋白水解裂解。NLRP3炎性小體活性復(fù)合物由一個(gè)中心支架蛋白NLRP3結(jié)構(gòu)域、一個(gè)凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(包含caspase活化和招募結(jié)構(gòu)域CARD)ASC和caspase-1酶的前體形式pro-caspase-1組成。一般而言，每個(gè)炎性小體的3個(gè)主要區(qū)域是1個(gè)胞質(zhì)傳感器、1個(gè)接頭蛋白和1個(gè)效應(yīng)體半胱天冬酶。對(duì)NLRP3而言，細(xì)胞內(nèi)傳感器為NLRP3，接頭蛋白為ASC，Caspase-1是效應(yīng)體[22-23]。炎性小體的形成激活caspase-1，進(jìn)而將pro-IL-1β和pro-IL-18裂解成成熟的IL-1β和IL-18[12]，炎性因子的成熟和分泌進(jìn)而引起一些列的炎性反應(yīng)。小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在中樞神經(jīng)損傷機(jī)制中發(fā)揮重要作用，脊髓損傷后，脊髓組織中的小膠質(zhì)細(xì)胞被大量激活，損傷后引起炎癥反應(yīng)進(jìn)一步加重脊髓組織的繼發(fā)性損傷。因此調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞活化引起的炎癥反應(yīng)成為了治療脊髓損傷的重要切入點(diǎn)，小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的炎癥信號(hào)通路存在多條，其中離子門控制通道受體P2X7R是小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)炎癥表達(dá)極其重要信號(hào)通路。P2X7R是作為一種ATP門控型離子通道，脊髓損傷后細(xì)胞外ATP與P2X7R結(jié)合引發(fā)的寡聚化反應(yīng)，使離子通道迅速開(kāi)放，產(chǎn)生K+外流，引起胞內(nèi)K+的迅速耗竭，進(jìn)而激活NLRP3炎癥小體。有學(xué)者通過(guò)共聚焦顯微鏡和免疫共沉淀觀察P2X7R和NLRP3在小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞和小鼠腹膜巨噬細(xì)胞表達(dá)和定位情況[24]。發(fā)現(xiàn)P2X7R通道或孔洞打開(kāi)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)離子微環(huán)境的局部修飾，從而驅(qū)動(dòng)NLRP3炎性小體成分的募集，并促進(jìn)其在P2X7R附近的自身組裝。同時(shí)有研究觀察到細(xì)胞內(nèi)K+濃度降低，質(zhì)膜通道(包括P2X7R)開(kāi)放會(huì)激活NLRP3炎癥小體的活化，由此可見(jiàn)P2X7R離子門通道的打開(kāi)是NLRP3活化的重要步驟。Gustin等研究結(jié)果表明，小鼠大腦中形成有功能的NLRP3炎性小體的能力僅限于小膠質(zhì)細(xì)胞，而不是的星形膠質(zhì)細(xì)胞[25]。同樣，在大鼠SCI模型中，NLRP3也被證實(shí)在小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)[20]。

本研究發(fā)現(xiàn)，脊髓損傷后，模型組NLRP3、ASC及IL-18蛋白表達(dá)量增加，說(shuō)明此信號(hào)通路的相關(guān)因子參與了脊髓損傷的機(jī)制，抑制劑組NLRP3、ASC和IL-18表達(dá)量均顯著降低，是由于特異性地抑制P2X7R的表達(dá)，從而減少微環(huán)境中NLRP3、ASC及IL-18的含量，抑制脊髓組織的炎癥反應(yīng)，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

由此可知夾脊電針能有效抑制NLRP3蛋白及基因的表達(dá)，進(jìn)而可能減輕脊髓損傷的炎性損傷，這與課題組前期研究發(fā)現(xiàn)夾脊電針干預(yù)能抑制脊髓損傷組織NLRP3炎癥小體活化，進(jìn)而抑制炎癥反應(yīng)結(jié)果相一致[10]，并且免疫熒光雙染結(jié)果也表明NLRP3在小膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，這與前人的研究結(jié)果一致[20]。

脊髓損傷后經(jīng)脈阻滯，氣血虧虛，肌肉痿廢不用，與“痿證”相契合，多歸屬于此?！梆簟敝^虛弱，無(wú)力以運(yùn)動(dòng)?！堆C論》曰：“痿者，足廢不能行之謂”；《馮氏錦囊秘錄》云：“痿者，手足痿軟無(wú)力，百節(jié)緩縱不收也”。脊髓損傷無(wú)外內(nèi)外因，外因主要由外傷所致，脊髓的位置及其生理、病理都與督脈密不可分。

夾脊穴最早的描述出現(xiàn)在《素問(wèn)·刺瘧》曰:“十二瘧者,……又刺項(xiàng)以下俠脊者必已?！薄娥鹈浻窈狻酚涊d：“盛經(jīng)出血，又刺項(xiàng)以下挾脊者，必已”?！吨夂髠浼狈健吩唬骸傲钫?dāng)心厭，又夾脊左右一寸，各七壯”“去脊各一寸，灸之百壯”。針灸學(xué)家承淡安先生在著作《中國(guó)針灸學(xué)》將夾脊穴命名為“華佗夾脊穴”，并且精確了華佗夾脊穴的定位。穴位均位于脊柱兩側(cè)，左右對(duì)稱，夾脊穴從上到下形成與督脈平行的夾脊穴帶，位于足太陽(yáng)膀胱經(jīng)和督脈的中間，承載著成為溝通兩條陽(yáng)經(jīng)的紐帶，發(fā)揮著調(diào)理臟腑陰陽(yáng)、疏通經(jīng)絡(luò)氣血的關(guān)鍵作用[26]。從穴位解剖位置角度而言，每個(gè)夾脊穴處從淺到深涉及到皮膚、血管及局部肌肉外，還會(huì)有相應(yīng)的脊神經(jīng)和交感神經(jīng)伴行，針刺可以促進(jìn)血液流動(dòng)、緩解肌肉酸痛的作用，啟動(dòng)神經(jīng)體液調(diào)節(jié)機(jī)制，分泌神經(jīng)末梢化學(xué)因子，改善相應(yīng)臟腑功能[27]。電針形成的電磁場(chǎng)又會(huì)強(qiáng)化夾脊針的作用，使其作用效果發(fā)揮到更大。

電針是一種在針灸針針柄位置連接電針治療儀的治療方法，將電刺激與傳統(tǒng)針刺相結(jié)合，增加了刺激強(qiáng)度。研究表明，電針治療SCI可能是增加神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)含量、增加內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞表達(dá)量、增加了患者脊髓的血流量、抑制堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在體內(nèi)合成、阻斷逆行性中樞神經(jīng)元損傷途徑、抑制脊髓損傷后Ca2+含量等[28]。夾脊電針將穴位治療及電針的雙重優(yōu)勢(shì)充分利用，對(duì)損傷部位活血化瘀，并且催發(fā)經(jīng)氣傳導(dǎo)，氣血流通，達(dá)到鎮(zhèn)痛，疏通督脈、膀胱經(jīng)氣和調(diào)理臟腑氣血的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：脊髓組織損傷的大鼠脊髓組織中的炎癥相關(guān)因子表達(dá)量增加，而夾脊電針可以降低炎癥因子的表達(dá)量，從而加快了脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。因此，夾脊電針改善脊髓損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)功能，可能與抑制NLRP3信號(hào)通路相關(guān)炎癥因子表達(dá)有關(guān)。