血清和糞便CEA、CA199、AFP輔助診斷結(jié)直腸癌的研究

唐陽 賈逸文 彭瓊

結(jié)直腸癌是我國發(fā)病率、死亡率最高的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害患者生命健康，早期診斷與治療是改善預(yù)后的重要策略［1］。隨著對(duì)癌癥相關(guān)分子標(biāo)志物研究的逐步加深，合理的檢測及應(yīng)用結(jié)直腸癌相關(guān)分子標(biāo)志物已經(jīng)成為現(xiàn)階段臨床實(shí)踐的重要部分。癌胚抗原（Carcinoembryonic Anti?gen，CEA）、糖類抗原199（Carbohydrate Antigen 199，CA199）、甲胎蛋白（Alpha?fetoprotein，AFP）是腫瘤一級(jí)篩查中常用的無創(chuàng)性標(biāo)志物，在肺癌、卵巢癌、肝癌、結(jié)直腸癌等外周血中水平升高，有助于惡性腫瘤的診斷［2?4］。但長期臨床工作經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，受臨床分期、炎癥反應(yīng)、良性病變等因素影響，檢測以上標(biāo)志物在外周血中表達(dá)存在敏感度、特異性不足的局限，可能貽誤病情，影響疾病轉(zhuǎn)歸。本研究前期小樣本的預(yù)試驗(yàn)表明，檢測結(jié)直腸癌患者糞便CEA、CA199、AFP 可提高診斷效能，但仍需大樣本量的進(jìn)一步驗(yàn)證?；诖吮狙芯刻接懠S便CEA、CA199、AFP 與結(jié)直腸癌診斷效能，旨在為臨床醫(yī)師提供參考及指導(dǎo)，報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2021年3月本院收治的132 例結(jié)直腸癌患者（結(jié)直腸癌組）、50 例結(jié)直腸息肉患者（息肉組）、50 例腸鏡檢查未見異常的住院患者（對(duì)照組）。其中結(jié)直腸癌組女71 例，男61 例，年齡平均（50.86±7.19）歲，體質(zhì)量指數(shù)平均（23.19±0.81）kg/m2；息肉組女29 例，男21 例，年齡平均（50.16±7.86）歲，體質(zhì)量指數(shù)平均（23.32±0.79）kg/m2；對(duì)照組女25 例，男25 例，年齡平均（49.87±7.39）歲，體質(zhì)量指數(shù)平均（23.49±0.71）kg/m2。各組性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)直腸癌組T1 分期52 例，T2 分期80 例；低分化39 例，中分化47 例，高分化46 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合結(jié)直腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②T1、T2 分期；首次確診，既往無相關(guān)治療史；③年齡>18歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；②血液系統(tǒng)疾病者；③妊娠期者；④合并急性感染類疾病者；⑤伴有其他系統(tǒng)惡性腫瘤者。

1.2 方法

采集患者清晨空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，保存上清用于檢測外周血各指標(biāo)表達(dá)；并采集糞便標(biāo)本10 g，按照糞便重量：萃取液體積=1∶49 加入專用萃取液，充分震蕩混勻，取5 mL 勻漿8 500 r/min 離心5 min，取上清用于檢測糞便各指標(biāo)表達(dá)。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測CEA 水平，試劑盒購于上?？道噬锟萍加邢薰?；采用化學(xué)發(fā)光法檢測CA199 水平，試劑盒購于上海三抒生物科技有限公司；采用免疫層析法檢測AFP 水平，試劑盒購于武漢明德生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（±s）表示，多組間比較以單因素方差分析，兩兩比較以LSD?t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用n（%）表示、χ2檢驗(yàn)，應(yīng)用受試者工作特征曲線（ROC）及ROC 下面積（AUC）分析外周血和糞便各指標(biāo)診斷結(jié)直腸癌的效能。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血CEA、CA199、AFP 比較

外周血CEA、CA199 水平比較：結(jié)直腸癌組>息肉組>對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；結(jié)直腸癌組外周血AFP 高于息肉組、對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；息肉組、對(duì)照組AFP 比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 各組外周血CEA、CA199、AFP 比較（±s）Table 1 Comparison of CEA，CA199 and AFP in peripheral blood of each group（±s）

表1 各組外周血CEA、CA199、AFP 比較（±s）Table 1 Comparison of CEA，CA199 and AFP in peripheral blood of each group（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與息肉組比較，bP<0.05。

組別結(jié)直腸癌組息肉組對(duì)照組F 值P 值例數(shù)132 50 50 CEA（ng/mL）3.41±1.12ab 1.90±0.61a 1.24±0.39 122.639<0.001 CA199（u/mL）32.64±10.63ab 24.56±8.03a 16.33±5.15 60.365<0.001 AFP（μg/L）5.65±1.37ab 3.92±1.26 3.68±1.59 50.188<0.001

2.2 各組糞便CEA、CA199、AFP 比較

糞便CEA、CA199、AFP：結(jié)直腸癌組>息肉組>對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 各組糞便CEA、CA199、AFP 比較（±s，μg/g）Table 2 Comparison of stool CEA，CA199 and AFP in each group（±s，μg/g）

表2 各組糞便CEA、CA199、AFP 比較（±s，μg/g）Table 2 Comparison of stool CEA，CA199 and AFP in each group（±s，μg/g）

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與息肉組比較，bP<0.05。

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2.3 各指標(biāo)不同標(biāo)本診斷結(jié)直腸癌的價(jià)值

分別以結(jié)直腸癌組外周血、糞便各指標(biāo)為陽性樣本，以息肉組和對(duì)照組外周血、糞便各指標(biāo)為陰性樣本，繪制ROC 曲線顯示，與外周血各指標(biāo)相比，糞便各指標(biāo)診斷結(jié)直腸癌的AUC 較大（P<0.05）；應(yīng)用Logistic 二元回歸ROC 模型顯示，外周血各指標(biāo)聯(lián)合、糞便各指標(biāo)聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌的AUC 大于單一指標(biāo)，且糞便各指標(biāo)聯(lián)合的AUC 大于外周血各指標(biāo)聯(lián)合的AUC（P<0.05）。見表3、圖1。

圖1 各指標(biāo)不同標(biāo)本診斷結(jié)直腸癌的價(jià)值Figure 1 The value of different specimens of various indicators in the diagnosis of colorectal cancer

表3 ROC 分析結(jié)果Table 3 ROC analysis results

2.4 糞便中各指標(biāo)不同水平者結(jié)直腸癌發(fā)生率比較

結(jié)果顯示，CEA、CA199、AFP 高水平者結(jié)直腸癌發(fā)生率高于低水平者（P<0.05）。見表4。

表4 糞便中各指標(biāo)不同水平者結(jié)直腸癌發(fā)生率比較［n（%）］Table 4 Comparison of the incidence of colorectal cancer in feces with different levels of indicators［n（%）］

3 討論

結(jié)腸鏡和病理活檢是診斷結(jié)直腸癌有效手段，但存在侵入性、有創(chuàng)性的不足。隨著分子生物技術(shù)和腫瘤分子發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的加深，人們發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌的發(fā)生進(jìn)展是由于抑癌和促癌物質(zhì)的積累或遺傳物質(zhì)后天改變引起，一旦發(fā)生結(jié)直腸癌，腫瘤自身代謝可合成分泌多種物質(zhì)，并在糞便中穩(wěn)定存在，因此檢測糞便中腫瘤標(biāo)志物具有理論可行性［6］。

CEA 是一種人類胚胎抗原特性的酸性蛋白，形成于細(xì)胞漿中，通過細(xì)胞膜分泌至細(xì)胞外，然后進(jìn)入外周血、尿液、糞便等［7］。印海娟等［8］報(bào)道，胃癌患者血清CEA 高于良性病變者、健康對(duì)照者，可用于胃癌的篩查。經(jīng)過大量［9?11］報(bào)道，不僅胃癌患者外周血CEA 升高，肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等其他惡性腫瘤中亦可檢測到血清CEA 的升高，因此CEA 被認(rèn)為是一種廣譜腫瘤標(biāo)志物。但關(guān)于糞便CEA 在結(jié)直腸癌中應(yīng)用的報(bào)道鮮見，本研究結(jié)果提示糞便CEA 對(duì)結(jié)直腸癌的診斷價(jià)值更高，當(dāng)糞便CEA>22.11 μg/g 時(shí)，診斷結(jié)直腸癌的敏感為85.61%，特異度為91.00%，呈現(xiàn)出一定的診斷價(jià)值。結(jié)直腸癌是一種消化系統(tǒng)病變，糞便是反映消化道病變的一個(gè)窗口，從大腸黏膜脫落標(biāo)志物來源于腫瘤，并能持續(xù)釋放。人來結(jié)直腸上皮更新速度為每小時(shí)1%，若腫瘤以正常速度更新，則脫落入腸道上皮細(xì)胞總量中有≥1%來自腫瘤，所以對(duì)結(jié)直腸癌的敏感性更高，可作為結(jié)直腸癌的一個(gè)診斷標(biāo)志物。

CA199 分布于胰腺、腸、肝等，在血清中以唾液黏蛋白形式存在，在外周血中升高見于消化道炎癥、腫瘤等［12］。既往關(guān)于糞便CA199 檢測診斷腫瘤的報(bào)道鮮見，本研究對(duì)此探討發(fā)現(xiàn)，與息肉、對(duì)照組比較，結(jié)直腸癌患者外周血和糞便CA199均顯著升高，且糞便CA199 診斷AUC 較高，更具臨床應(yīng)用價(jià)值。由于CA199 在血清中含量高低與腫瘤分期有關(guān)，結(jié)直腸癌患者由于疾病分期的原因，可能仍處于正常范圍，所以診斷結(jié)直腸癌的敏感度降低［13］。當(dāng)糞便CA199>58.04 μg/g 時(shí)，診斷結(jié)直腸癌的AUC 為0.945，敏感度為87.88%，特異度為96.00%，每個(gè)參數(shù)均高于外周血對(duì)應(yīng)的CA199，具有作為結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志的潛質(zhì)。

AFP 具有運(yùn)輸功能、免疫抑制等多項(xiàng)效應(yīng)，主要由胎兒卵黃囊、肝細(xì)胞合成，在胎兒血液循環(huán)中濃度較高，至出生后2～3 個(gè)月明顯降低，難以在外周血中檢出，所以健康成人血清中AFP 含量較低［14］。湯俊等［15］報(bào)道，結(jié)直腸癌患者血清AFP 高于結(jié)直腸良性疾病和健康人群，本研究觀點(diǎn)與之相似。且本研究還發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者糞便AFP 高于息肉者、對(duì)照人群，提示檢測糞便AFP 可能有助于結(jié)直腸癌的診斷。同時(shí)外周血各指標(biāo)聯(lián)合、糞便各指標(biāo)聯(lián)合診斷結(jié)直腸癌的AUC大于對(duì)應(yīng)標(biāo)本單一指標(biāo)，糞便各指標(biāo)聯(lián)合的AUC大于外周血各指標(biāo)聯(lián)合的AUC，所以建議聯(lián)合檢測糞便CEA、CA199、AFP，以提供更可靠的參考信息，便于臨床醫(yī)師做出正確的決策。值得注意的是，由于本研究納入的均為結(jié)直腸疾病患者，無其他患病人群，各檢測指標(biāo)是否在其他腫瘤患者出現(xiàn)異常尚不明確，因此糞便CEA、CA199、AFP 是否能作為大樣本量人群篩查標(biāo)志物仍需后續(xù)前瞻性報(bào)道的論證。

綜上，結(jié)直腸癌、結(jié)直腸息肉、健康對(duì)照人群糞便與外周血CEA、CA199、AFP 保持相同的變化趨勢(shì)，其中糞便CEA、CA199、AFP 診斷結(jié)直腸癌的價(jià)值更高，可作為結(jié)直腸癌的無創(chuàng)性、便捷性診斷標(biāo)志物。