基于分子對(duì)接技術(shù)探索京制牛黃解毒片治療新型冠狀病毒肺炎的機(jī)制

戴子琦，李木子，高 豐，肖婷婷，吳倩文，侯新娟，陳可點(diǎn)，顧昱昊，崔鶴蓉，杜 菁*，徐 冰*，雷海民*

(1.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100102；2.北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司，北京 100062)

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)引起的新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)具有潛伏期長(zhǎng)、傳染性強(qiáng)和各類人員普遍易感的特點(diǎn)，對(duì)全球人民的健康、經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和社會(huì)的穩(wěn)定帶來了巨大影響[1]。在臨床上，清肺排毒湯和化濕敗毒方等中藥復(fù)方及安宮牛黃丸和連花清瘟膠囊等中成藥均被證實(shí)具有較好的療效。

京制牛黃解毒片是北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司生產(chǎn)的治療火熱內(nèi)盛證的國(guó)家二級(jí)中藥保護(hù)品種[2]，由黃連、黃柏、石膏、金銀花、薄荷、桔梗、連翹、大黃、黃芩、梔子、菊花、荊芥穗、防風(fēng)、旋覆花、白芷、川芎、蔓荊子、蠶沙、甘草、人工牛黃和冰片組成，具有清熱解毒、散風(fēng)止痛的功效，主治肺胃蘊(yùn)熱引起的頭目眩暈、口鼻生瘡、風(fēng)火牙痛、暴發(fā)火眼、咽喉疼痛和耳鳴腫痛。

本研究擬通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法確定核心靶標(biāo)，并對(duì)其進(jìn)行功能富集，以期在分子層面上闡釋京制牛黃解毒片多成分、多靶點(diǎn)和多途徑發(fā)揮清熱解毒、散風(fēng)止痛功效的科學(xué)內(nèi)涵，為其治療COVID-19的臨床應(yīng)用提供參考，同時(shí)為其進(jìn)一步的作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1京制牛黃解毒片中活性化合物篩選及作用靶點(diǎn)的確定 本研究運(yùn)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)TCMSP(http://tcmspw.com/tcmsp.php)檢索京制牛黃解毒片中所含20味藥材的化學(xué)成分，根據(jù)收集到的相關(guān)信息按口服利用度(OB)和類藥性(DL)為指標(biāo)進(jìn)一步遴選各藥味中的化學(xué)成分，符合DL≥0.18且OB≥30%的化學(xué)成分作為活性成分，并得到相關(guān)的作用靶點(diǎn)信息。為了避免個(gè)別認(rèn)可度高的有效成分被篩選掉，因此查閱《中國(guó)藥典》2020年版，得到此類成分合并至篩選結(jié)果中。將得到的靶標(biāo)蛋白借助Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org/)查詢對(duì)應(yīng)的基因名。

1.2COVID-19靶點(diǎn)的收集及潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 在Gene Cards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/)以“novel coronavirus pneumonia”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，得到COVID-19相關(guān)的作用靶點(diǎn)，與所得活性化合物對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)取交集，以得到京制牛黃解毒片治療COVID-19的潛在作用靶點(diǎn)。

1.3蛋白-蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)、“藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病” 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將得到的京制牛黃解毒片治療COVID-19的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入String平臺(tái)(https://string-db.org/)，去除孤立靶點(diǎn)，以置信度(0.400)為條件篩選，得到潛在靶點(diǎn)的相互作用關(guān)系。分析結(jié)果保存為tsv格式，將此數(shù)據(jù)導(dǎo)入到Cytoscape 3.7.2軟件中，結(jié)合度值進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建。并利用Cytoscape 3.7.2軟件完成 “藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建[3]。

1.4靶點(diǎn)通路富集分析 為進(jìn)一步了解作用靶標(biāo)的生物學(xué)功能，將關(guān)鍵靶點(diǎn)導(dǎo)入到DAVID網(wǎng)站中(https://david.ncifcrf.gov/)對(duì)其進(jìn)行基因本體論(GO)富集分析和京都基因與基因組百科全書(KEGG)信號(hào)通路分析。在DAVID的基因列表通用管理面板中復(fù)制黏貼基因列表，Select Identifier選擇“OFFICIAL GENE SYMBOL”，List Type設(shè)置為“Gene List”，提交且選擇相對(duì)應(yīng)的物種“Homo Sapiens”，得到結(jié)果并對(duì)其進(jìn)行可視化處理。

1.5分子對(duì)接研究 SARS-CoV-2的宿主細(xì)胞受體是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶Ⅱ(ACE2)，且SARS-CoV-2是通過其棘突S蛋白與人體細(xì)胞表面的ACE2 受體結(jié)合，從而造成病毒侵入人體內(nèi)而導(dǎo)致COVID-19。本研究選取“藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)中綜合排名前10的關(guān)鍵成分以及COVID-19關(guān)鍵靶點(diǎn)SARS-CoV-2 3CL水解酶(Mpro)、ACE2進(jìn)行分子對(duì)接。由RCSB PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.rcsb.org/)中獲得Mpro(PDB ID：6LU7)和ACE2(PDB ID：1r42)的三維結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入AutoDock 4.2.6進(jìn)行除水，加氫，分別保存為PDBQT格式。從Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)中下載化合物結(jié)構(gòu)sdf文件，采用Chem3D軟件將其轉(zhuǎn)化為mol2文件，再將其導(dǎo)入AutoDock 4.2.6中，保存為PDBQT格式。最后，運(yùn)用AutoDock 4.2.6對(duì)其進(jìn)行分子對(duì)接，本研究以親和能≤-5.0 kcal·mol-1作為篩選標(biāo)準(zhǔn)[4]。

2 結(jié)果

2.1活性化合物的篩選結(jié)果 經(jīng)過TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索后，京制牛黃解毒片20味藥材(生石膏除外)篩選出的活性化合物共420個(gè)(OB≥30%，DL≥0.18，查閱《中國(guó)藥典》的成分包含，無靶點(diǎn)蛋白的化合物刪除)。其中黃連、黃柏、金銀花、薄荷、桔梗、連翹、大黃、黃芩、梔子、菊花、荊芥穗、防風(fēng)、旋覆花、白芷、川芎、蔓荊子、蠶沙、甘草、牛黃、冰片分別為14、38、24、11、7、23、19、37、16、23、9、19、19、22、8、28、3、92、5、3個(gè)。

2.2京制牛黃解毒片治療COVID-19的潛在作用靶點(diǎn) 通過Gene Cards數(shù)據(jù)庫(kù)共收集到259個(gè)與COVID-19相關(guān)的靶點(diǎn)，與京制牛黃解毒片的334個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行交集分析后得到60個(gè)共有靶點(diǎn)，見圖1。

圖1 京制牛黃解毒片治療COVID-19靶點(diǎn)的韋恩圖

2.3京制牛黃解毒片治療COVID-19潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用STRING網(wǎng)站對(duì)潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行分析，將輸出結(jié)果Tsv文件導(dǎo)入Cytoscape 3.7.2軟件，構(gòu)建出PPI網(wǎng)絡(luò)圖，見圖2。由圖2可知，包含60個(gè)節(jié)點(diǎn)和870條邊。圖中節(jié)點(diǎn)是指蛋白，節(jié)點(diǎn)越大，顏色越深，表明等級(jí)值越大，每條邊表示蛋白與蛋白之間的相互作用[5]。靶蛋白的平均節(jié)點(diǎn)等級(jí)值為29，超過平均節(jié)點(diǎn)等級(jí)值的有33個(gè)。篩選出前5個(gè)節(jié)點(diǎn)度值的靶點(diǎn)蛋白，分別是白細(xì)胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子(TNF)、絲裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、絲裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)和絲裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)，表明這5個(gè)核心靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵作用。研究表明，重癥COVID-19患者的IL-6和白細(xì)胞介素-10(IL-10)水平均較輕癥患者高[6]，在一定程度上支持了該網(wǎng)絡(luò)圖。

圖2 京制牛黃解毒片與COVID-19交集靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

2.4“藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 運(yùn)用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建“藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖，見圖3。由圖3可知，紫色三角形表示各味藥材，淺藍(lán)橢圓形表示活性化合物，綠色方形表示潛在作用靶點(diǎn)，紅色菱形表示疾病，共包括305個(gè)節(jié)點(diǎn)(19個(gè)藥材節(jié)點(diǎn)、225個(gè)化合物節(jié)點(diǎn)、60個(gè)靶點(diǎn)節(jié)點(diǎn)、1個(gè)表示COVID-19的節(jié)點(diǎn))和1 362條邊。度值反映網(wǎng)絡(luò)中節(jié)點(diǎn)與其他節(jié)點(diǎn)連接的數(shù)量，中心度值是網(wǎng)絡(luò)中所有最短路徑中經(jīng)過該節(jié)點(diǎn)路徑的數(shù)量與最短路徑總數(shù)之比，度值與中心度值是2個(gè)主要拓?fù)鋮?shù)，用來衡量1個(gè)節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的重要性。本研究根據(jù)度值和中心度值篩選大于等于所有點(diǎn)中位數(shù)2倍的節(jié)點(diǎn)，并滿足接近中心度值大于所有點(diǎn)中位數(shù)值的節(jié)點(diǎn)作為網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，探討京制牛黃解毒片的潛在物質(zhì)基礎(chǔ)。通過分析篩選到的關(guān)鍵化合物有15個(gè)，關(guān)鍵靶點(diǎn)有17個(gè)。其中排名前5位的化合物是槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素和β-谷甾醇；排名前5的靶點(diǎn)是前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)、前列腺素G/H合成酶1(PTGS1)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶 (NOS2)、二肽基肽酶Ⅳ(DPP4)和凝血因子Ⅹa(F10)，見表1和表2。由圖3可知，1個(gè)活性化合物可對(duì)多個(gè)靶點(diǎn)起作用，與此同時(shí)也存在多個(gè)成分對(duì)1個(gè)靶點(diǎn)起作用，體現(xiàn)了京制牛黃解毒片多成分和多靶點(diǎn)相互協(xié)同治療COVID-19的特點(diǎn)。

表1 京制牛黃解毒片的主要活性化合物(排名前10)

表2 京制牛黃解毒片的主要靶點(diǎn)

圖3 “藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)

2.5GO富集分析及KEGG通路分析結(jié)果 通過DAVID網(wǎng)站中的GO富集分析得到了GO條目(P<0.05)，其中包含100個(gè)生物過程(BP)條目，前15條目見圖4。

圖4 GO (BP)功能分析

在BP中靶點(diǎn)主要涉及細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素的反應(yīng)、藥物應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。KEGG通路富集分析篩選得到52條(P<0.05)，主要涉及細(xì)胞凋亡、TNF信號(hào)通路、乙型肝炎、HIF-1信號(hào)通路和鞘脂信號(hào)通路等，其中細(xì)胞凋亡通路涉及的靶點(diǎn)有磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亞基γ亞型(PIK3CG)、半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、腫瘤壞死因子(TNF)、轉(zhuǎn)錄因子p65(RELA)、凋亡調(diào)節(jié)劑(BAX)、凋亡調(diào)節(jié)因子(BCL2)和細(xì)胞腫瘤抗原p53(TP53)；TNF信號(hào)通路涉及的靶點(diǎn)有PIK3CG、細(xì)胞間黏附因子1(ICAM1)、CASP3、TNF、PTGS2、絲裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)和RELA；乙型肝炎通路涉及的靶點(diǎn)有PIK3CG、CASP3、TNF、RELA、BAX、BCL2和TP53；HIF-1信號(hào)通路涉及的靶點(diǎn)有PIK3CG、RELA、血紅素加氧酶1(HMOX1)、BCL2、內(nèi)皮一氧化氮合酶(NOS3)和(NOS2)；鞘脂信號(hào)通路涉及的靶點(diǎn)有PIK3CG、TNF、MAPK14、RELA、BAX、BCL2、TP53和NOS3。選取P值較小的前20條通路進(jìn)行可視化，結(jié)果見圖5。

圖5 京制牛黃解毒片作用靶點(diǎn)KEGG富集通路分析的20條通路

2.6京制牛黃解毒片核心化合物作用于SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2的分子對(duì)接 一般認(rèn)為配體與受體結(jié)合的構(gòu)象穩(wěn)定時(shí)，能量越低，發(fā)生作用的可能性越大。分子對(duì)接結(jié)果顯示，將京制牛黃解毒片在“藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)中的度值及中心度值綜合排名前10的活性化合物及5種臨床治療藥物與SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2分別進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果見表3。由表3可知，這些化合物與2個(gè)酶之間的親和能均低于-5.0 kcal·mol-1，表明京制牛黃解毒片中的核心化合物與這2個(gè)酶均有較好的結(jié)合活性。其中，化合物β-谷甾醇、大黃素、山柰酚、木犀草素、柚皮素與SARS-CoV-2 3CL水解酶親和能較低，且它們與ACE2的親和能均低于-7.0 kcal·mol-1。這5個(gè)化合物與5種目前臨床治療藥物比較，親和能未見顯著差異。由此可知，這些核心化合物與受體蛋白形成構(gòu)象能量低，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，結(jié)合活性較高。部分化合物與SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2的分子對(duì)接圖見圖6和圖7。

表3 京制牛黃解毒片核心化合物及臨床治療藥物與SARS-CoV-2 3CL水解酶及ACE2的結(jié)合親和能

圖6 與SARS-CoV-2 3CL水解酶的分子對(duì)接

圖7 與ACE2的分子對(duì)接

3 討論

本研究運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法和技術(shù)共篩選出京制牛黃解毒片中活性成分420個(gè)，作用靶點(diǎn)334個(gè)，進(jìn)一步得到關(guān)鍵化合物15個(gè)，關(guān)鍵靶點(diǎn)17個(gè)，體現(xiàn)了京制牛黃解毒片多成分、多靶點(diǎn)聯(lián)合作用的整體性和關(guān)聯(lián)性的特點(diǎn)。根據(jù)構(gòu)建的“藥材-化合物-作用靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)鋵傩苑治鼋Y(jié)果可知，京制牛黃解毒片主要活性成分和綜合評(píng)分最高的前10個(gè)化學(xué)成分中有8個(gè)屬于黃酮類化合物，排名前5的關(guān)鍵化合物是槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素和β-谷甾醇?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等作用[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素可降低感染小鼠死亡率和肺指數(shù)，抑制病毒的復(fù)制，減輕肺部的炎癥，對(duì)流感病毒感染小鼠有治療作用[8]；槲皮素可明顯減輕肺結(jié)核病造成的肺臟炎癥反應(yīng)，推測(cè)其機(jī)制為槲皮素抑制Toll受體4(TLR4)和腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)的高表達(dá)，阻礙相關(guān)炎癥信號(hào)通路激活從而減少相關(guān)炎癥因子的釋放，抑制炎癥反應(yīng)，減輕組織病理?yè)p傷，起免疫調(diào)節(jié)抗感染作用[9]；此外槲皮素通過抑制鞘氨醇激酶1/鞘氨醇-1-磷酸(SphK1/S1P)信號(hào)在體內(nèi)外均可改善肺纖維化[10]。木犀草素可以抑制白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)、白細(xì)胞介素-5(IL-5)、IL-6、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、IL-10、白細(xì)胞介素-13(IL-13)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、β干擾素(IFN-β)，并提高IL-10的水平。另外，木犀草素還能夠抑制免疫細(xì)胞遷移和定位的趨化因子，如趨化因子2(CCL2)、CXC類趨化因子2(CXCL2)、CXC類趨化因子8(CXCL8)和CXC類趨化因子9(CXCL9)等[11]。山柰酚可調(diào)節(jié)信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)和核因子κB(NF-κB)信號(hào)通路的激活，以減弱IL-6對(duì)環(huán)氧化酶-2(COX-2)或PTGS2表達(dá)的影響，其對(duì)調(diào)節(jié)急性和慢性炎癥起關(guān)鍵作用[12]。β-谷甾醇具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[13]。

根據(jù)PPI網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果，其中度值排名靠前的靶點(diǎn)有IL-6、TNF、MAPK3、MAPK8和MAPK1等。IL-6是免疫系統(tǒng)對(duì)損傷和感染最初反應(yīng)所表達(dá)的重要細(xì)胞因子，在早期激活Janus激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(JAK/STAT)信號(hào)通路，啟動(dòng)調(diào)節(jié)B細(xì)胞分化、漿細(xì)胞生成以及一系列急性期反應(yīng)，在急性炎癥反應(yīng)中處于核心地位[14]。阻斷IL-6與其受體的結(jié)合可以抑制炎性風(fēng)暴，從而具有治療炎癥的作用[15]。SARS-CoV-2感染的重癥患者血漿、肺泡灌洗液以及外周血單核細(xì)胞內(nèi)白細(xì)胞介素2(IL-2)、IL-6、IL-7、IL-10、TNF-α、CCL2、趨化因子3(CCL3)、趨化因子4(CCL4)和CXC類趨化因子10(CXCL10)的表達(dá)水平明顯升高[16-17]。此外研究表明，在氧化應(yīng)激、DNA損傷、癌癥和病毒感染的環(huán)境應(yīng)激下絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成員MAPK3、MAPK8、MAPK1和MAPK14被激活[18]。

GO功能富集分析得到BP條目100個(gè)(P<0.05)，KEGG通路富集分析篩選得到52條(P<0.05)信號(hào)通路，GO功能富集分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，京制牛黃解毒片活性成分主要涉及細(xì)胞對(duì)缺氧的反應(yīng)、凋亡過程、炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生等生物學(xué)過程；KEGG通路富集分析顯示，在靶點(diǎn)富集的前20條通路中，7條通路與病毒感染相關(guān)，包括乙型肝炎、結(jié)核病、百日咳和丙型肝炎等。這預(yù)示著京制牛黃解毒片在抗病毒中具有重要作用，可能是其治療COVID-19的原因。KEGG主要涉及癌癥通路、細(xì)胞凋亡、鞘脂信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、乙型肝炎和HIF-1信號(hào)通路，以上通路除癌癥通路均涉及基因TNF，且TNF在PPI網(wǎng)絡(luò)圖中也處在核心位置。TNF是由活化單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等生成及分泌的一種強(qiáng)有力的致炎癥因子，TNF-α與2型TNF受體(TNFR2)結(jié)合后可通過經(jīng)典和非經(jīng)典方法激活NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生更多的炎癥介質(zhì)，如IL-6、IL-8、白細(xì)胞介素-1(IL-1)以及前列腺素(PG)等[19]。此外，缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)由缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIP-1α)和缺氧誘導(dǎo)因子-1β(HIF-1β)2種亞基構(gòu)成，是缺氧應(yīng)激的關(guān)鍵因子，是氧穩(wěn)態(tài)的主要調(diào)節(jié)劑。HIF-1通路與病毒性肺炎的炎癥因子釋放有關(guān)[20]，且HIP-1α表達(dá)的上調(diào)可導(dǎo)致肺部阻塞性疾病的發(fā)展[21]。MAPK通路與病毒性肺炎有關(guān)[22]，表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)磷酸化后，激活MAPK信號(hào)通路，誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞黏蛋白MUC5AC合成表達(dá)上調(diào)，促進(jìn)杯狀細(xì)胞增生，增加黏液分泌，導(dǎo)致氣道阻塞[23]。

ACE2和新冠病毒的棘突S蛋白高效結(jié)合，通過識(shí)別ACE2蛋白進(jìn)入人體細(xì)胞。新冠病毒復(fù)制所必須的酶是3CL水解酶，抑制3CL水解酶能夠有效抑制病毒的感染與復(fù)制。分子對(duì)接結(jié)果顯示，京制牛黃解毒片中的核心化合物與SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2的親和能均小于-5.0 kcal·mol-1，并與5種目前臨床使用的阿比多爾、利托那韋、洛匹那韋等藥物的親和能接近，由此可見，這些核心化合物與受體蛋白結(jié)合活性較高。推測(cè)京制牛黃解毒片中的核心化合物可能通過與ACE2的結(jié)合來阻止病毒侵入機(jī)體，通過與3CL水解酶的結(jié)合控制對(duì)病毒的復(fù)制，但具體作用機(jī)制還有待深入研究。

目前，已有學(xué)者采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對(duì)中藥方劑抗COVID-19的活性成分進(jìn)行預(yù)測(cè)。通過總結(jié)現(xiàn)有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，雖然金花清感顆粒、清肺排毒湯、麻杏石甘湯[24-26]等一線臨床用藥在藥味組成上具有差異，而對(duì)其所預(yù)測(cè)篩選得到的抗COVID-19核心化合物中大多存在槲皮素、木犀草素、山柰酚和漢黃芩素等黃酮類化合物。結(jié)合本文研究結(jié)果，同樣證實(shí)了槲皮素、木犀草素和山柰酚等黃酮類化合物可能對(duì)COVID-19具有藥效作用。綜上所述，京制牛黃解毒片全方具有清熱解毒、散風(fēng)止痛的功效，方中主要通過槲皮素、木犀草素和山柰酚等黃酮類化合物以及β-谷甾醇等植物甾醇類化合物，調(diào)節(jié)與病毒感染、細(xì)胞凋亡和免疫炎癥相關(guān)的PTGS2、NOS2、PIK3CG、CASP3、BCL2、RELA、BAX和TNF等關(guān)鍵靶標(biāo)，這些靶點(diǎn)共同參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、TNF、鞘脂和HIF-1等信號(hào)細(xì)胞凋亡、通路發(fā)揮調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)、抗病毒感染和改善肺纖維化的作用，從而具有治療COVID-19的作用。鑒于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的局限性，后期還需對(duì)京制牛黃解毒片的活性成分、作用靶點(diǎn)及信號(hào)通路進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。