FOXA2過表達(dá)對卵巢癌OVCAR3細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用及機(jī)制研究

王凱 郭盼盼 管陳安 孫依娜 王俊強(qiáng) 余軍輝

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居婦科惡性腫瘤的第二位，死亡率高居首位，是最致命的婦科惡性腫瘤[1]。由于缺乏有效的篩查和早期診斷方法，大多患者確診時已處于晚期階段，雖然可進(jìn)行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)輔以順鉑和紫杉醇為主的化療，但臨床緩解的平均時間為2年，5年生存率僅為45%[2]。卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展與各種癌基因或抑癌基因異常表達(dá)密切相關(guān)。

上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是指在某些生理或病理狀態(tài)下出現(xiàn)的上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變的過程。多項(xiàng)研究表明，EMT在腫瘤進(jìn)展、癌細(xì)胞侵襲、胚胎的發(fā)育和器官的形成、傷口愈合及纖維化等一系列生理病理過程中起關(guān)鍵作用[3-5]。在腫瘤的發(fā)展及癌細(xì)胞的侵襲過程中，EMT降低了細(xì)胞之間的黏附性，增強(qiáng)了細(xì)胞的侵襲、遷移、抵抗化療藥物的能力[6]。這一過程中上皮性細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)下調(diào)，間質(zhì)標(biāo)志物波形蛋白（Vimentin）表達(dá)上調(diào)。參與介導(dǎo)EMT的分子機(jī)制及信號通路多種多樣，其中Wnt/β-catenin的激活能明顯增強(qiáng)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail超家族鋅指轉(zhuǎn)錄因子（Snail family zinc finger，SNAI）、Twist家族 BHLH 轉(zhuǎn)錄因子 （Twist family BHLH transcription factor，Twist）和鋅指E盒同源結(jié)合蛋白（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB）表達(dá)，進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力[7]。

叉頭框蛋白 A2（Forkhead-box protein A2，F(xiàn)OXA2）又稱為肝細(xì)胞核因子3β，為DNA結(jié)合蛋白，其在胚胎發(fā)育的多個環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。同時研究也表明，F(xiàn)OXA2是一個潛在的EMT調(diào)控靶點(diǎn)，F(xiàn)OXA2與多種惡性腫瘤如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、食管癌等的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[8-10]。另外，也有研究發(fā)現(xiàn)FOXA2在卵巢癌組織中較癌旁正常組織中明顯下調(diào)，且陰性表達(dá)者5年病死率較高，說明FOXA2可能作為卵巢癌診斷以及預(yù)后的生物標(biāo)志物[11]，但其對卵巢癌及EMT的具體作用及相關(guān)分子機(jī)制仍不清楚。本研究通過檢測過表達(dá)FOXA2的卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力和EMT發(fā)生相關(guān)蛋白 E-cadherin和 Vimentin及 Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白β-catenin的表達(dá)情況，探討FOXA2過表達(dá)對卵巢癌細(xì)胞EMT的抑制及可能的作用機(jī)制，以期為卵巢癌的早期診斷和治療以及生物標(biāo)志物的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料 人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3和正常卵巢上皮細(xì)胞IOSE80購買于中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫。FOXA2基因序列（基因序列號：NM_021784.5）由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行全基因合成。FOXA2 pcDNA3.1質(zhì)粒載體購自美國Invitrogen公司。RIPA buffer（含蛋白酶和磷酸酶抑制劑）購自美國Thermo Fisher公司。PVDF膜購自美國GE Healthcare公司。EndoFree Plasmid Maxi Kit購自德國Qiagen公司。一抗rabbit anti-E-cadherin和rabbit anti-Vimentin均購自美國CST公司。二抗Alexa Fluor594 Affinipure Donkey Anti-Rabbit IgG均購自美國Jackson ImmunoResearch公司。一抗rabbit anti-FOXA2、rabbit anti-β-catenin、rabbit anti-H3 Histone（細(xì)胞核內(nèi)參）以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)參GAPDH rabbit anti-GAPDH（內(nèi)參）購自美國Abcam公司。二抗山羊抗兔IgG-HRP及持久性化學(xué)發(fā)光底物SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate購自美國Thermo Fisher公司。

1.2 方法

1.2.1 正常卵巢上皮細(xì)胞IOSE80和卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3的培養(yǎng)和傳代 人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3和正常卵巢上皮細(xì)胞IOSE80分別采用RPMI 1640培養(yǎng)液以及DMEM高糖培養(yǎng)液（含10% FBS以及雙抗）進(jìn)行復(fù)蘇，在37℃、5% CO2條件下進(jìn)行培養(yǎng)至融合度90%左右，用胰酶消化，按1∶3傳代，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 IOSE80、OVCAR3細(xì)胞FOXA2 mRNA表達(dá)水平檢測 采用real-time PCR法。收集兩種細(xì)胞，采用TRIzol試劑提取總RNA，然后按QuantiTectReverse Transcription Kit說明書合成cDNA。以GAPDH為內(nèi)參，采用PowerUp SYBRTMGreen Master Mix試劑盒進(jìn)行real-time PCR擴(kuò)增。具體引物序列見表1。PCR反應(yīng)體系：10 μl PowerUp SYBRTMGreen Master Mix，4 μl cDNA（cDNA原液按照1：10稀釋），0.5 μl正向引物（10 μmol/L），0.5 μl反向引物（10 μmol/L），補(bǔ)加 H2O 至 20 μl。反應(yīng)條件：95 ℃，1 min；95 ℃，15 s；60 ℃，25 s；共40個循環(huán)。每個實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每個樣品設(shè)置3個復(fù)孔，其相對表達(dá)量采用 2-ΔΔCt法進(jìn)行計算。

表1 引物序列

1.2.3 FOXA2-pcDNA3.1過表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染 按照FOXA2基因序列（基因序列號：NM_021784.5），由生工生物工程公司進(jìn)行全基因合成，同時基因兩端引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位點(diǎn)。將FOXA2合成產(chǎn)物和 pcDNA3.1質(zhì)粒分別用BamHⅠ和EcoRⅠ進(jìn)行雙酶切、純化、連接，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，37℃培養(yǎng)過夜；提取FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒后進(jìn)行測序鑒定。鑒定無誤后，采用無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒EndoFree Plasmid Maxi Kit進(jìn)行 FOXA2-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒以及pcDNA3.1對照質(zhì)粒的提取用于后續(xù)的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染按照LipofectamineTM3000說明書分別轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒和pcDNA3.1對照質(zhì)粒，并設(shè)未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組，8 h后換成新鮮完全培養(yǎng)液，48 h后提取總RNA用于后續(xù)分析過表達(dá)效率，72 h后提取蛋白用于后續(xù)Western blot檢測。

1.2.4 OVCAR3轉(zhuǎn)染細(xì)胞中FOXA2過表達(dá)效率檢測采用real-time PCR法。收集對照質(zhì)粒pcDNA3.1以及重組質(zhì)粒FOXA2-pcDNA3.1轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，總RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄以及定量PCR檢測同方法1.2.2。

1.2.5 細(xì)胞增殖能力檢測 采用CCK-8法。將轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒以及FOXA2-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒24 h后的OVCAR3細(xì)胞進(jìn)行消化收集，細(xì)胞計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。按每孔2×103/100 μl細(xì)胞密度接種96孔板，待細(xì)胞貼壁后記為0 h，分別在0、24、48和72 h后加入10 μl CCK-8，在37℃、5% CO2條件下孵育2 h后用酶標(biāo)儀檢測450 nm處的吸光度值以反映細(xì)胞增殖能力。每組均作6個復(fù)孔，取平均值。

1.2.6 細(xì)胞侵襲能力檢測 采用Transwell實(shí)驗(yàn)。取出Matrigel Invasion Chamber 24 Well恢復(fù)到室溫，隨后加入500 μl無血清培養(yǎng)基，37℃孵育2 h，水化基底膜，吸去多余液體備用。將轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒以及FOXA2-pcDNA3.1過表達(dá)質(zhì)粒24 h后的OVCAR3細(xì)胞進(jìn)行消化收集，采用無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至 2×105/ml，上室加入 200 μl細(xì)胞懸液，下室加入 600 μl含 15% FBS細(xì)胞培養(yǎng)液，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育48 h后4%多聚甲醛固定30 min，0.1%結(jié)晶紫染色30 min，PBS清洗后，倒置顯微鏡拍照計數(shù)。每個組設(shè)置3個復(fù)孔，每個復(fù)孔200倍隨機(jī)選取5個視野，統(tǒng)計侵襲細(xì)胞的平均數(shù)。

1.2.7 E-cadherin和Vimentin定位與表達(dá)檢測 采用細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)。將無菌細(xì)胞爬片置于12孔板中，取對數(shù)生長期的OVCAR3細(xì)胞接種于爬片上，當(dāng)細(xì)胞匯合度為50%時，4%多聚甲醛固定爬片，經(jīng)0.5% Triton X-100/PBS作用5 min，PBS漂洗后加入10%正常驢血清封閉30 min，然后滴加稀釋的一抗rabbit anti-E-cadherin（1∶200）和 rabbit anti-Vimentin（1∶200），4 ℃濕盒孵育過夜，陰性對照以PBS代替一抗；PBS漂洗后，滴加稀釋的熒光二抗。二抗信息：Alexa Fluor594 Affinipure Donkey Anti-Rabbit IgG（1∶200），4 ℃濕盒暗處孵育 1 h，PBS漂洗后4'6-二脒基-2-苯基吲哚（4'6-diamidino-2-phenylindole，DAPI） 染色 5 min，PBS 再次漂洗后，抗熒光淬滅劑封片。使用激光共聚焦觀察594 nm（紅色激發(fā)波長）顯示的熒光并拍照。

1.2.8 EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平檢測 采用Western blot法。上述細(xì)胞收集后，加入150 μl RIPA buffer（含蛋白酶和磷酸酶抑制劑）提取總蛋白，BCA法測定蛋白濃度。取每個樣品約50 μg蛋白置于10%SDS-PAGE電泳分離，100 V恒壓電轉(zhuǎn)至PVDF膜，然后加入5%脫脂奶粉室溫封閉1 h。分別加入相應(yīng)一抗∶rabbit anti-E-cadherin（1∶2 000）、rabbit anti-FOXA2（1∶2 000）、rabbit anti-Vimentin（1∶2 000）以及 rabbit anti-GAPDH(內(nèi)參，1∶1 000，4 ℃孵育過夜。用 TTBS洗膜 3次（每次5 min），加入山羊抗兔 IgG-HRP二抗（1∶5 000），室溫反應(yīng) 1 h。用TTBS洗膜4次（每次5 min），滴加SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate后暗室曝光X-film進(jìn)行顯影，圖像采用Image Pro Plus 6.0軟件分析條帶的光密度，并以GAPDH為內(nèi)參進(jìn)行結(jié)果分析。每個實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

采用NE-PERTMNuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents分離細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白，然后進(jìn)行BCA定量。Western blot檢測方法同上。一抗信息：rabbit anti-βcatenin（1∶4 000）、rabbit anti-H3 Histone（1∶5 000）（細(xì)胞核內(nèi)參）以及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)參GAPDH。

2 結(jié)果

2.1 OVCAR3細(xì)胞與IOSE80細(xì)胞FOXA2 mRNA表達(dá)水平比較 與IOSE80細(xì)胞相比，OVCAR3細(xì)胞FOXA2 mRNA表達(dá)水平下調(diào)了5.023倍（P＜0.05），見圖1。因此，后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用OVCAR3細(xì)胞過表達(dá)FOXA2，探究FOXA2過表達(dá)對該細(xì)胞的EMT發(fā)生的影響。

圖1 OVCAR3細(xì)胞與 IOSE80細(xì)胞叉頭框蛋白 A2（FOXA2）mRNA表達(dá)水平比較

2.2 FOXA2-pcDNA3.1重組載體鑒定、OVCAR3細(xì)胞FOXA2過表達(dá)效率 通過對全基因合成的FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒進(jìn)行測序，測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫的序列比對完全一致，表明成功構(gòu)建了FOXA2-pcDNA3.1過表達(dá)載體。與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組相比，轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組OVCAR3細(xì)胞FOXA2表達(dá)水平上調(diào)了18.84倍（P＜0.05），見圖 2。

圖2 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組OVCAR3細(xì)胞叉頭框蛋白A2（FOXA2）mRNA表達(dá)水平比較

2.3 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組的OVCAR3細(xì)胞增殖能力比較 細(xì)胞培養(yǎng)48 h后，與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組相比，轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組OVCAR3細(xì)胞增殖能力明顯下降（P＜0.05），見圖3。

圖3 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組OVCAR3細(xì)胞增殖能力比較

2.4 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組的OVCAR3細(xì)胞侵襲能力比較 與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組相比，轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組OVCAR3細(xì)胞穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯下調(diào)（P＜0.05），表明過表達(dá)FOXA2使OVCAR3細(xì)胞的侵襲能力明顯減弱，見圖4。

圖4 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組OVCAR3細(xì)胞侵襲能力比較[a：Transwell實(shí)驗(yàn)顯微鏡下所見（×100）；b：穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)量比較]

2.5 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組OVCAR3細(xì)胞 FOXA2、E-cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)水平比較 與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組相比，轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組OVCAR3細(xì)胞FOXA2、E-cadherin蛋白表達(dá)水平均明顯上調(diào)（均 P＜0.05），而 Vimentin表達(dá)水平下調(diào)（P＜0.05），見圖5。細(xì)胞免疫熒光檢測E-cadherin和Vimentin定位及表達(dá)，結(jié)果顯示兩種蛋白（紅色熒光）主要定位在細(xì)胞質(zhì)，DAPI（藍(lán)色熒光）定位在細(xì)胞核。與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組相比，轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組OVCAR3細(xì)胞E-cadherin陽性信號明顯增強(qiáng)，而Vimentin陽性信號明顯減弱，見圖6（插頁）。即OVCAR3細(xì)胞中，過表達(dá)FOXA2明顯抑制EMT發(fā)生、發(fā)展。

圖5 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組的OVCAR3細(xì)胞叉頭框蛋白A2（FOXA2）、E- 鈣黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表達(dá)水平比較

圖6 E-鈣黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）在OVCAR3細(xì)胞中的定位和表達(dá)（藍(lán)色代表DAPI細(xì)胞核染色；紅色代表E-cadherin和Vimentin細(xì)胞質(zhì)染色；×630）

2.6 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組OVCAR3細(xì)胞β-catenin蛋白表達(dá)水平比較 與轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組和未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組相比，轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組OVCAR3細(xì)胞β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中大量積累，而在細(xì)胞核中顯著減少（P＜0.05），見圖7。即OVCAR3細(xì)胞中，過表達(dá)FOXA2可以顯著抑制Wnt/β-catenin信號通路。

圖7 轉(zhuǎn)染FOXA2-pcDNA3.1重組質(zhì)粒組、轉(zhuǎn)染pcDNA3.1對照質(zhì)粒組及未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白對照組OVCAR3細(xì)胞β-連環(huán)蛋白（β-catenin）表達(dá)水平比較

3 討論

卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，但病死率卻高居首位。由于卵巢癌發(fā)病隱匿，缺乏典型的癥狀及有效的卵巢癌篩查生物標(biāo)志物，被診斷時大多患者已經(jīng)處于卵巢癌的晚期階段，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康[12-13]。因此，探尋有效的卵巢癌生物標(biāo)志物及發(fā)病機(jī)制是當(dāng)下的研究熱點(diǎn)。

FOXA2基因位于人的20號染色體上，由3個外顯子及2個內(nèi)含子構(gòu)成，全長45 kb，包含兩段轉(zhuǎn)錄激活區(qū)域、保守的叉頭框區(qū)域以及抑制區(qū)和磷酸化區(qū)[14]。FOXA2作為FOXA家族中的一員在胚胎發(fā)育、能量代謝、惡性腫瘤的發(fā)生、增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮重要作用，同時當(dāng)FOXA1不足時，F(xiàn)OXA2可以代替FOXA1的功能[15]。在不同的腫瘤中，F(xiàn)OXA2的表達(dá)及其作用均不相同。FOXA2的表達(dá)情況與腫瘤發(fā)生以及惡性轉(zhuǎn)化過程高度相關(guān)，而且FOXA2可以通過直接結(jié)合在E-cadherin的啟動子上激活其表達(dá)[16-18]。張震[19]的研究顯示FOXA2是乳腺癌E型細(xì)胞的相關(guān)因子，抑制EMT過程；李正平等[20]研究發(fā)現(xiàn)FOXA2是通過上調(diào)E-cadherin表達(dá)，下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloprotein，MMP）基因表達(dá)，進(jìn)一步抑制EMT過程來實(shí)現(xiàn)對肝癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的抑制。張正良等[21]發(fā)現(xiàn)FOXA2通過抑制EMT過程進(jìn)而抑制胃癌的發(fā)生、發(fā)展。然而Song等[22]發(fā)現(xiàn)FOXA2在胰腺癌中促進(jìn)EMT發(fā)生，增加細(xì)胞活性誘發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移，從而誘發(fā)胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展，本研究中FOXA2抑制卵巢癌OVCAR3細(xì)胞的增殖和侵襲，該結(jié)果與已有研究結(jié)果相符。另外本研究結(jié)果顯示過表達(dá)FOXA2會促進(jìn)E-cadherin蛋白表達(dá)，抑制Vimentin蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制EMT過程。說明FOXA2可能通過抑制EMT過程抑制卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。

Wnt/β-catenin信號通路是高等動物胚胎發(fā)育分化過程中的重要信號通路，可以調(diào)控相關(guān)靶基因參與細(xì)胞的增殖、分化、極化、侵襲、凋亡等過程。同時Wnt/βcatenin通路異常也與惡性腫瘤的發(fā)生相關(guān)，通常表現(xiàn)為正常表達(dá)于細(xì)胞膜的β-catenin蛋白發(fā)生細(xì)胞質(zhì)聚集與細(xì)胞核異位表達(dá)[23]。有研究表明，β-catenin蛋白在卵巢癌組織中異位聚集表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，說明卵巢癌中存在Wnt/β-catenin通路的活化[24]。而本研究中過表達(dá)FOXA2，卵巢癌OVCAR3細(xì)胞中β-catenin蛋白在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中明顯增加，可能激活了Wnt/βcatenin信號通路。這說明過表達(dá)FOXA2可能通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路從而影響EMT過程，進(jìn)而抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。

綜上所述，F(xiàn)OXA2過表達(dá)可能通過Wnt/β-catenin信號通路影響EMT過程，進(jìn)而抑制卵巢癌OVCAR3細(xì)胞的增殖和侵襲能力。本研究可能為卵巢癌的診斷、治療以及預(yù)后生物標(biāo)志物的選擇提供參考。然而，F(xiàn)OXA2的功能及其在卵巢癌發(fā)生中的作用及其具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。