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    28種植物提取物對棉蚜的殺蟲活性測定

    2021-11-17 12:03:54張軍高樊國全周小云鄭瑞明
    新疆農(nóng)業(yè)科學 2021年10期
    關(guān)鍵詞:莨菪棉蚜曼陀羅

    方 濤,張軍高,樊國全,陳 勇,梁 晶,李 進,周小云,王 莉,鄭瑞明,鄢 蓉,雷 斌

    (1.新疆農(nóng)業(yè)大學農(nóng)學院/棉花教育部工程研究中心,烏魯木齊 830052;2.新疆農(nóng)業(yè)科學院核技術(shù)生物技術(shù)研究所/新疆作物化學調(diào)控工程技術(shù)研究中心,烏魯木齊 830091)

    0 引 言

    【研究意義】2020年全國棉花總產(chǎn)值591.0×104t,其中新疆棉花總產(chǎn)值516.1×104t,約占全國總產(chǎn)值的87.33%[1]。棉蚜(AphisgossypiiGlover)是棉花生長的重要害蟲之一[2],該蟲吸取植物葉片營養(yǎng)后使葉片扭曲、枯萎,影響植物生長、發(fā)育,導致產(chǎn)量和品質(zhì)下降。棉蚜在吸取植物汁液的同時,還會向植物傳播大約76種病毒,棉蚜在取食植物時分泌的蜜露會影響植物光合作用和呼吸作用,易引起煤污病的發(fā)生[3-4]。使用化學農(nóng)藥防治棉蚜,棉蚜對新型煙堿類農(nóng)藥吡蟲啉、啶蟲脒易產(chǎn)生中等程度及以上抗性[5-6]。植物源殺蟲劑具有高效、綠色、安全等優(yōu)點,是減少農(nóng)藥用量的有效途徑,篩選出具有較高毒殺棉蚜活性的植物資源,對研制植物源農(nóng)藥、綠色防控棉蚜及農(nóng)藥減施有重要意義?!厩叭搜芯窟M展】目前已報道過的含有能夠控制有害生物活性物質(zhì)的植物有2 400余種,具有殺蟲活性有1 000多種,殺螨活性有39種,其中對昆蟲具有拒食活性的有384種,忌避活性的有279種,引誘活性的有28種,引起昆蟲不育的有4種,調(diào)節(jié)昆蟲生長發(fā)育的有31種[7]。張興等[8]對西北地區(qū)500余種植物篩選,篩選出上百種具有殺蟲作用的植物資源。【本研究切入點】植物提取物含有生物堿類、黃酮類、萜烯類等多種次生代謝物質(zhì),這些物質(zhì)有的已經(jīng)被證實具有殺蟲作用[9-10]。新疆地區(qū)植物資源豐富,但關(guān)于殺蟲植物研究與開發(fā)很少,尚無植物源農(nóng)藥產(chǎn)品研制相關(guān)報道。研究測定28種植物提取物對棉蚜的殺蟲活性?!緮M解決的關(guān)鍵問題】采集新疆地區(qū)部分植物,采用超聲提取法,提取28種植物中的活性物質(zhì),采用浸蟲浸葉法測定植物提取物對棉蚜的殺蟲活性,測定提取物殺蚜活性篩選出符合目標的植物資源,研究最佳提取方法,提高活性成分提取效率,為植物源農(nóng)藥研制提供技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材 料

    1.1.1 植物樣品

    從新疆瑪納斯、昭蘇輪臺等地區(qū)共采集28種植物樣品,包括豆科、菊科茄科等植物。表1

    表1 28種植物樣品名錄Table 1 The information of 28 plants

    1.1.2 供試昆蟲

    棉蚜(Aphisgossypii):從瑪納斯棉花試驗田采集,接種至室內(nèi)培養(yǎng)的棉花植株上。在人工氣候室內(nèi),在(25±1)℃、L∶D=14 h∶10 h,相對濕度(70±5)%條件下,連續(xù)飼養(yǎng)多代,備用。

    1.1.3 主要儀器和試劑

    儀器:DFG-9140電熱恒溫鼓風干燥箱、PQX-300智能人工氣候箱,上海鴻都電子科技有限公司;KQ-5000DE型數(shù)控超聲波清洗器,昆山市超聲儀器有限公司;SZM-45B2體式解剖鏡,上海光學儀器廠;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、SHZ-III型循環(huán)水真空泵、SHZ-III型循環(huán)水真空泵,上海亞榮生化儀器廠。

    試劑:甲醇、二甲基亞砜(分析純)均購自(天津北聯(lián)精細化學品開發(fā)有限公司);吐溫-80℃(化學純)購自上海山浦化工有限公司。

    1.2 方 法

    1.2.1 植物提取物的制備

    采用超聲提取法,將采集得到的植物樣品,自然陰干,放入40℃烘箱持續(xù)烘干,直至植物干粉重量不再變化。粉碎,過40目篩。稱取10 g植物干粉,以料液比1∶10的比例,置于超聲清洗儀中,持續(xù)超聲45 min,過濾,重復提取3次,合并3次濾液,濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),濃縮,得到植物提取液浸膏,加入適量二甲基亞砜,將植物提取物濃度定容至1 g/mL。定容后的提取物溶液轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶,保存于4℃冰箱,備用。

    1.2.2 植物粗提物對棉蚜生物活性測定

    采用浸蟲浸葉法,測定植物提取物對棉蚜的毒殺作用[11]。選取大小一致的載蚜葉片,剔除有翅成蚜,保留健康、大小一致的若蚜,每個葉片保留30余頭蚜蟲。用0.5%吐溫80℃水溶液稀釋粗提物至50 mg/mL,將載蚜葉完全浸泡在稀釋好的提取液種,浸泡5s后,用吸水紙吸收多余藥液,放置于裝有浸濕濾紙的9 mm培養(yǎng)皿中,每皿中保持30頭蚜蟲,棉葉背面朝上,正面緊貼濾紙,用浸濕脫脂棉包裹葉柄,保濕葉片。用保鮮膜密封培養(yǎng)皿上部,經(jīng)滅菌牙簽扎孔透氣,置于人工氣候箱培養(yǎng),每個處理重復3次,以含少量二甲基亞砜的0.5%吐溫80℃水溶液作為對照24 h后。在體式解剖鏡下,統(tǒng)計蚜蟲死亡個數(shù)(蚜蟲死亡標準:毛筆輕觸蚜蟲四肢及身體,蚜蟲無反應,視之死亡)。若當天對照死亡率超過15%,則視為失敗。

    校正死亡率=

    1.2.3 測定具有較強殺蚜活性植物提取物的毒力回歸方程和致死中濃度(LC50)

    挑選殺蚜活性最好的植物樣本,用0.5%吐溫80℃水溶液按照濃度梯度將提取物浸膏依次稀釋為50、25、12.5、6.25和3.125 mg/mL,分別測定不同濃度提取物對棉蚜的殺蟲活性。以濃度對數(shù)值為橫坐標,校正死亡率的機率值為縱坐標,計算提取物的毒力回歸方程。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel表格統(tǒng)計原始數(shù)據(jù),計算死亡率和校正死亡率,利用SPSS19.0軟件,進行平均值、標準差、單因素分析和線性回歸分析。使用DPS7.05軟件計算毒力回歸方程,確定其LC50與95%置信區(qū)間。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 28種植物活性提取物提取

    研究表明,共采集到28種植物,涉及到18個科。其中豆科植物種類最多,共有4種,其次是菊科植物和傘形科植物,均有3種,分別占比總數(shù)的14.29%、10.71%和10.71%,其他各科均為1種植物。提取率小于20%共有11種,大于20%的共有17種,其中線柏、梭梭、大戟3種植物提取物提取率較高,分別為34.47%、30.56%和28.17%。表2

    表2 28種植物提取物的提取率Table 2 Extraction rate of 28 kinds of plant extracts

    2.2 28種植物提取物殺蟲活性

    研究表明,24 h校正死亡率在50%以上的植物共有8種,分別為曼陀羅、大戟、毒參、芫荽、磨盤草、蒼耳、牛蒡和苦豆子,其中曼陀羅殺蟲效果最好,大戟次之,24 h校正死亡率分別為75.18%、68.88%,其余20種提取物毒殺作用較弱,24 h校正死亡率均在50%以下。表3

    表3 28種植物提取物對棉蚜殺蟲活性篩選Table 3 Screening of insecticidal activity of 28 plant extracts against cotton aphid

    2.3 殺蟲活性較高的植物提取物LC50

    研究表明,毒參提取物在100 mg/mL條件下,24 h校正死亡率為79.39%,并且其殺蚜活性隨濃度增加而增強,差異較顯著;其24 h毒力回歸方程為y=1.39x+3.18,LC50為20.54 mg/mL,檢驗值Ft=23.64。曼陀羅提取物在50 mg/mL濃度條件下24 h校正死亡率為74.40%,并且其殺蚜活性隨濃度增加而增強,差異較顯著;其24 h毒力回歸方程為y=1.22x+3.54,LC50為15.58 mg/mL,檢驗值Ft=94.39。表4~6

    表4 毒參提取物對棉蚜的生物活性Table 4 Biological activity of Hemlock extracts on cotton aphid

    3 討 論

    在新疆特有植物有1 773種,其中還包括具有特殊活性的植物,例如耐鹽植物、抗旱、抗高寒、抗紫外線植物高達400余種,但關(guān)對于此類植物在殺蟲方面的研究較為薄弱,并結(jié)合新疆采集相關(guān)28種植物資源[12-14]。

    研究表明,8種植物對棉蚜具有較強的毒殺作用,8種植物中豆科和菊科植物占比37.5%;張興[8]對西北地區(qū)近500種植物進行了相關(guān)殺蟲活性研究發(fā)現(xiàn),殺蟲活性超過50%的植物中共有128種,其中豆科和菊科植物超過1/4;黃乾龍[8,13]對西北地區(qū)121種植物進行殺蚜活性篩選,豆科和菊科植物在殺蚜活性較高的植物中占比超過30%。研究發(fā)現(xiàn),8種活性高的植物中,傘形科植物便有2種,其中1種植物提取物24 h校正死亡率達到69.76%。傘形科植物阿魏、旱芹、胡蘿卜對棉蚜24 h死亡率都達到95%以上[14],這與研究相似,均認為傘形科植物具有良好的應用前景。

    表5 曼陀羅提取物對棉蚜的生物活性Table 5 Biological activity of Datura metelL extract against cotton aphid

    表6 曼陀羅和毒參提取物毒力回歸方程Table 6 Regression equation of virulence of Datura metelL and Hemlock extracts

    分別以毒參、曼陀羅提取物濃度對數(shù)為橫坐標,棉蚜死亡率機率值作為縱坐標,利用DPS軟件建立直線回歸方程,檢驗值分別為Ft=23.64,94.39,均大于臨界值F(0.05,1,3)=10.128,故回歸方程有意義[16]。茄科植物曼陀羅、大戟、毒參,都具有較高殺蚜活性。但是與大戟、毒參等植物相比曼陀羅殺蚜效果最強,在田間地頭、山坡、河邊等均可生長,是一種獲取簡單、價格低廉的天然殺蟲植物。白花曼陀羅對桃蚜、楊毛蚜具有較強毒殺作用,在稀釋100倍后,室內(nèi)防治效果均在80%左右[15],這與研究結(jié)果相似。

    孟祥杰[16]對甘肅蘭州地區(qū)的紫花曼陀羅花、種子、莖葉等不同部位殺棉蚜研究發(fā)現(xiàn),僅莖葉甲醇提取物有一定的活性,其他部位基本無觸殺作用;雷霽等[17]研究發(fā)現(xiàn),曼陀羅及其變種對蚜蟲和螨蟲具有較高的殺蟲活性,并且變種紫花曼陀羅生物活性更高,殺蚜活性高于殺螨活性。曼陀羅殺蟲活性物質(zhì)主要是莨菪烷類生物堿,其中東莨菪堿(Scopolamine)、和莨菪堿(Hyoscyamine)是主要的殺蟲活性物質(zhì),不同花色、不同部位、不同生長時間,曼陀羅體內(nèi)的生物堿含量也不盡相同[18-19]。劉國宇等[20]通過對白、黃、紅3種不同顏色曼陀羅體內(nèi)莨菪烷類生物堿含量測定發(fā)現(xiàn),3種曼陀羅植株中莨菪烷類生物堿含量差異較大,白花曼陀生物堿含量最高,而白花曼陀羅不同組織部位中,1年生木質(zhì)莖生物堿含量最高,約為0.468%。

    曼陀羅殺蟲活性物質(zhì)主要是東莨菪堿(Scopolamine)、莨菪堿(Hyoscyamine)等莨菪烷類生物堿,此類生物堿通過作用昆蟲體內(nèi)乙酰膽堿酯酶,影響昆蟲的神經(jīng)系統(tǒng),進而起到毒殺作用[20-22]。崔正芳以棉蚜作為供試昆蟲,發(fā)現(xiàn)白花曼陀羅的觸殺活性在60%左右,而后又成功從中分離出莨菪堿和東莨菪堿;從唐古特莨菪分離出2種莨菪烷類生物堿單體莨菪堿和東莨菪堿,試驗發(fā)現(xiàn)這2種單體對棉蚜均有良好的觸殺活性,是魚藤酮的0.6~0.7倍[23-24]。將前人研究進展與試驗結(jié)果結(jié)合起來,試驗曼陀羅樣品中亦是莨菪烷類生物堿起殺蟲作用,但具體是哪一種或幾種化合物,以及其具體作用方式,仍有待進一步深入研究。

    4 結(jié) 論

    線柏、梭梭、大戟3種植物提取物提取率較高,分別為34.47%、30.56%和28.17%。白花曼陀羅和毒參甲醇提取物對棉蚜有較強的毒殺作用,其中曼陀羅提取物殺蟲活性高于毒參提取物,其24 h校正死亡率分別為75.18%、69.76%。曼陀羅和毒參24 h毒力回歸方程和LC50分別為y=1.22x+3.54、15.58 mg/mL,y=1.39x+3.18、20.54 mg/mL。

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