老年腦膠質(zhì)瘤組織中骨膜蛋白及EMT標記物的表達及臨床意義

潘曉燕 范宜娟 楊瀅瑜 陳榮 湯芃芃

(上海寶山區(qū)仁和醫(yī)院 上海復(fù)旦大學(xué)附屬華山北院寶山分院病理科，上海 200431)

腦膠質(zhì)瘤在顱內(nèi)腫瘤中占比較高，高級別腦膠質(zhì)瘤較多見，且惡性程度高，侵襲能力強，病情進展快〔1〕。目前，腦膠質(zhì)瘤主要治療方式為手術(shù)聯(lián)合放化療，能有效緩解病情，但緩解時間較短，患者5年生存率不足5%〔2〕。因此，尋找腦膠質(zhì)瘤新的標記物和新的治療靶點至關(guān)重要。上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)能通過促進腫瘤細胞擴散至遠處，增加腫瘤的惡性行為，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移〔3〕。研究表明，EMT與腦膠質(zhì)瘤惡性程度相關(guān)，EMT標記物上皮鈣黏蛋白(E-cad)、纖連蛋白(Fn)、波形蛋白(Vim)、神經(jīng)鈣黏蛋白(N-cad)能在一定程度上反映腫瘤惡性程度〔4〕。骨膜蛋白(POSTN)可誘導(dǎo)腫瘤細胞活化，促進腫瘤細胞侵襲和遷移〔5〕。有研究發(fā)現(xiàn)，POSTN能通過調(diào)控EMT過程，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程〔6〕。但是，目前關(guān)于POSTN、EMT與腦膠質(zhì)瘤惡性程度關(guān)聯(lián)的相關(guān)研究較少?；诖耍狙芯糠治隼夏昴X膠質(zhì)瘤組織中骨膜蛋白及EMT標記物的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集上海寶山區(qū)仁和醫(yī)院2017年1月至2020年4月完成神經(jīng)外科手術(shù)的105例老年腦膠質(zhì)瘤患者臨床資料，患者腦膠質(zhì)瘤標本、正常組織標本均保存完整?；颊咧心?8例，女47例；年齡63～81歲，平均年齡(72.54±5.53)歲；腫瘤直徑2.11～5.94 cm，平均直徑(3.88±0.54)cm；分級：Ⅰ級10例，Ⅱ級36例，Ⅲ級22例，Ⅳ級37例。

1.2入選標準 (1)納入標準：①符合《中國腦膠質(zhì)瘤分子診療指南》〔7〕中腦膠質(zhì)瘤診斷標準；②年齡>60歲；③在上海寶山區(qū)仁和醫(yī)院首次手術(shù)切除；④經(jīng)手術(shù)病理確診為腦膠質(zhì)瘤；⑤實驗室數(shù)據(jù)庫中有可用的組織蠟塊。(2)排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②其他疾病史及治療史；③臨床資料不完整。

1.3免疫組織化學(xué)染色法 10%中性甲醛固定、石蠟包埋的組織標本4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟、脫水，抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性 過氧化物酶，Envision二步法進行免疫組織化學(xué)染色，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水透明，封片。免疫組織化學(xué)染色評定標準：隨機選取5個高倍鏡視野觀察，細胞質(zhì)或細胞核出現(xiàn)黃色或棕黃色為陽性細胞。根據(jù)染色程度進行惡性程度評分：無染色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分。根據(jù)陽性細胞百分比進行評分：陽性細胞百分數(shù)≤5%為0分，>5%且≤25%為1分，>25%且≤50%為2分，>50%且≤75%為3分，惡性程度>75%為4分。染色程度與陽性細胞百分比相乘的結(jié)果作為最終評定惡性程度標準：0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中等陽性()，9～12分為強陽性()。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS24.0軟件進行秩和檢驗、Kendall′s tau-b相關(guān)性分析檢驗。

2 結(jié) 果

2.1腦膠質(zhì)瘤組織和正常組織中POSTN及EMT標記物表達 腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達高于正常組織，E-cad表達低于正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 腦膠質(zhì)瘤組織和正常組織中POSTN及EMT標記物表達〔n(%),n=105〕

2.2不同級別腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN及EMT標記物表達 高級別腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達高于低級別腦膠質(zhì)瘤組織，E-cad表達低于低級別腦膠質(zhì)瘤組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同級別腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN及EMT標記物表達〔n(%)〕

2.3POSTN及EMT標記物表達與腦膠質(zhì)瘤惡性程度的相關(guān)性 腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈正相關(guān)(r=0.545、0.671、0.624、0.630，P<0.05)；E-cad表達與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈負相關(guān)(r=-0.649，P<0.05)。

2.4POSTN與EMT標記物表達相關(guān)性 POSTN與Fn、Vim、N-cad表達正相關(guān)(r=0.173、0.481、0.168，P<0.05)；POSTN與E-cad表達呈負相關(guān)(r=-0.410，P<0.05)。

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤侵襲性強、增殖快，目前仍無法通過手術(shù)清除，術(shù)后通常需聯(lián)合化療〔8〕。但是，腦膠質(zhì)瘤患者由于膠質(zhì)瘤、血腦屏障水腫，造成腦組織間隙靜水壓升高，對化療藥物的濃度造成影響，可能會影響化療效果，容易導(dǎo)致復(fù)發(fā)〔9〕。

在腫瘤侵襲過程中，EMT現(xiàn)象具有重要的作用〔10〕。POSTN是一種糖蛋白，分子質(zhì)量相對較高，具有多功能性，參與細胞外基質(zhì)的組成〔11〕。研究表明，POSTN高表達和腫瘤轉(zhuǎn)移具有密切的聯(lián)系，會增加預(yù)后不良的風(fēng)險〔12〕。本研究結(jié)果說明，惡性程度越高的腦膠質(zhì)瘤組織POSTN表達越高，EMT越嚴重。由此推測，POSTN、EMT標記物可能與老年腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。進一步經(jīng)相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤組織中POSTN、Fn、Vim、N-cad表達與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈正相關(guān)；E-cad表達與腦膠質(zhì)瘤惡性程度呈負相關(guān)。分析原因為：POSTN能使腫瘤細胞中Wnt信號加強，從而調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，促進腫瘤細胞的生長，強化腫瘤細胞的生存能力，促進腫瘤惡化〔13，14〕。作為一種基質(zhì)蛋白，POSTN也能影響細胞的黏附過程促進腫瘤的侵襲與增殖，參與腫瘤血管、淋巴管的形成，促進轉(zhuǎn)移〔15〕。EMT現(xiàn)象與腦膠質(zhì)瘤惡性程度的相關(guān)性已被證實，如李楠等〔16〕研究。本研究說明，POSTN可能通過影響EMT，參與腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。分析原因為：POSTN參與癌癥壞死進程，對局灶性黏附激酶等生存信號及前侵襲信號具有調(diào)節(jié)作用，從而影響轉(zhuǎn)移癌癥細胞的活性，促進EMT現(xiàn)象〔17〕。Ouanouki等〔18〕研究中使用花青素抑制POSTN后，F(xiàn)n、Vim表達降低。說明，POSTN可能是調(diào)節(jié)EMT標記物的關(guān)鍵信號中間蛋白，可見POSTN調(diào)控EMT過程影響膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)機制有一定的研究價值，可在未來進一步進行研究分析明確。

綜上所述，老年腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展與組織中POSTN表達、EMT標記物有一定聯(lián)系，檢測POSTN及EMT標記物或可指導(dǎo)老年腦膠質(zhì)瘤病情評估。