CdSe／ZnS量子點(diǎn)對四膜蟲的毒性研究

王志正， 林志康， 沈 陽， 趙宇俠

（1.上海理工大學(xué) 醫(yī)療器械與食品學(xué)院，上海200093； 2.上海健康醫(yī)學(xué)院 醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，上海201318；3.上海中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，上海201203）

量子點(diǎn)（quantum dots，QDs）是一種新型熒光納米材料，粒徑范圍一般在1～10 nm之間，由Ⅲ～Ⅴ族或Ⅱ～Ⅵ族元素合成，通常以某種半導(dǎo)體材料為內(nèi)核，外面包裹其他半導(dǎo)體材料，量子點(diǎn)也因此具有良好的光電性質(zhì).目前應(yīng)用比較多的是CdX（X＝S、Se、Te）量子點(diǎn)，其中以CdSe／ZnS量子點(diǎn)熒光強(qiáng)烈、發(fā)光穩(wěn)定、易于合成等特點(diǎn)備受研究者的關(guān)注.隨著材料的制備及表面生物修飾技術(shù)的進(jìn)步，鎘系量子點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于藥物檢測和生物成像等領(lǐng)域.Cui等［1］用寡核苷酸雜化的CdSe量子點(diǎn)檢測了最低限度0.2 pmol／L的DNA；龐代文等［2］用BSA修飾的CdSe／ZnS量子點(diǎn)測定了中藥片中微量的銅，檢測限達(dá)到了1.0×10－4μg／mL.另一方面，量子點(diǎn)對環(huán)境以及人體健康的潛在影響和風(fēng)險(xiǎn)也同時(shí)引起廣泛關(guān)注［3-7］.國內(nèi)外學(xué)者對量子點(diǎn)毒性機(jī)制、體內(nèi)遷移路徑和環(huán)境暴露風(fēng)險(xiǎn)等方面安全隱患進(jìn)行了大量的報(bào)道［3-7］，其中對哺乳動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物模型的毒性是目前報(bào)道最多、研究最透徹的，其細(xì)胞毒性機(jī)理可以歸納為以下3點(diǎn)：1）量子點(diǎn)內(nèi)核與介質(zhì)相互作用，降解釋放Cd2＋等重金屬離子［8-9］；2）通過產(chǎn)生活性氧物質(zhì)（reactive oxygen species，ROS）增加胞內(nèi)氧化壓力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［10］；3）非特異性吸附到細(xì)胞表面，與蛋白結(jié)合，破壞結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞的正常功能［11-12］.

以水生生物包括藻類、菌類、魚類以及無脊椎動(dòng)物為模型的納米材料生態(tài)毒性也有報(bào)道.文獻(xiàn)［13-14］報(bào)道了不同濃度的C60暴露于自然水環(huán)境后黑鱸大腦及中樞神經(jīng)中起保護(hù)作用的細(xì)胞遭到了破壞；朱小山等［15］報(bào)道了3種碳納米材料對斜生柵藻和大型蚤的生長抑制具有個(gè)體差異性；羅勛等［16］報(bào)道了納米銀對線蟲的生殖抑制和氧化應(yīng)激損傷.這些報(bào)道說明了量子點(diǎn)對水生生物的毒性效應(yīng)可能類似于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，而目前關(guān)于量子點(diǎn)對水生生物的毒性效應(yīng)，尤其是毒性機(jī)制的報(bào)道還不是很多，水生生物作為水生生態(tài)系統(tǒng)的重要組分，遭遇的毒性效應(yīng)過程以及產(chǎn)生的生物學(xué)變化關(guān)聯(lián)著生態(tài)系統(tǒng)的安全，明確量子點(diǎn)納米對水生生物的毒性機(jī)制，豐富毒性效應(yīng)及機(jī)制的相關(guān)數(shù)據(jù)資料將有助于掌握量子點(diǎn)并推斷其他納米材料的水生生態(tài)系統(tǒng)安全的風(fēng)險(xiǎn).

四膜蟲是一種分布于全球各地淡水環(huán)境中的纖毛蟲原生動(dòng)物，在水生生態(tài)系統(tǒng)食物鏈中處于重要的位置.四膜蟲對許多毒物的響應(yīng)比其他高等生物更為敏感、直接，是較理想的生物毒性試驗(yàn)對象，四膜蟲具有高等真核生物所共有的保守基因和基礎(chǔ)代謝通路［17-18］，在毒理學(xué)研究中作為水生生態(tài)系統(tǒng)模式生物使用.關(guān)于納米材料誘導(dǎo)的四膜蟲毒性的報(bào)道目前也僅限幾篇，姚瑩等［19］發(fā)現(xiàn)納米ZnO對四膜蟲的生長及抗氧化系統(tǒng)的抑制作用.羅慧［20］發(fā)現(xiàn)硒化鎘和硒化銀量子點(diǎn)能夠通過內(nèi)吞作用進(jìn)入四膜蟲細(xì)胞內(nèi)分布在細(xì)胞器，抑制細(xì)胞生長，破壞細(xì)胞膜，對DNA和線粒體造成損傷，誘導(dǎo)線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡.

這些毒性效應(yīng)都可能與氧化損傷相關(guān)聯(lián)，氧化損傷作為量子點(diǎn)的毒性機(jī)制之一，在細(xì)胞和動(dòng)物范圍被廣泛研究報(bào)道，但是未見對四膜蟲的報(bào)道，四模蟲作為水生模式生物，一方面可以代表單細(xì)胞真核生物的毒性反應(yīng)，同時(shí)也可以闡釋量子點(diǎn)對水生生物的生態(tài)毒性風(fēng)險(xiǎn)，本研究擬就量子點(diǎn)對四膜蟲的氧化損傷進(jìn)行初步調(diào)查，分別研究四膜蟲ROS的產(chǎn)生情況，四膜蟲細(xì)胞膜損傷情況以及抗氧化系統(tǒng)的調(diào)控等方面來考察該機(jī)制的影響，同時(shí)結(jié)合量子點(diǎn)對四膜蟲種群密度的抑制確定其毒性效果，通過研究量子點(diǎn)對四膜蟲的影響，一方面可以闡釋量子點(diǎn)納米作用于生物體后可能產(chǎn)生的毒性及其作用機(jī)制，另一方面也有助于更好的理解其對于整個(gè)水生生態(tài)系統(tǒng)潛在的風(fēng)險(xiǎn).

1 材料與方法

1.1 四膜蟲的培養(yǎng)嗜熱四膜蟲SB210株系，由中國科學(xué)院水生生物研究所繆偉實(shí)驗(yàn)組饋贈(zèng).四膜蟲是一種單細(xì)胞真核原生生物，呈橢圓長梨形，全身布滿纖毛，體長約40～60μm，廣泛分布于全球各地的淡水環(huán)境中，其生長周期短，易于培養(yǎng).四膜蟲的培養(yǎng)基組分為：2%蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.2%葡萄糖溶于超純水，121℃滅菌20 min，冷卻后接種四膜蟲，在28℃、150 r／min條件下于恒溫?fù)u床無菌培養(yǎng)至對數(shù)期進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn).

1.2 試劑與儀器實(shí)驗(yàn)所用的試劑：CdSe／ZnS量子點(diǎn)購自上海星紫科技有限公司，粒徑為4.5 nm左右，所用PCR引物由生工公司合成，RNA提取試劑Trizol購自Takara公司，熒光定量PCR試劑購自羅氏公司，碘化丙啶（propidium iodide PI）熒光染色劑、Bradford蛋白定量試劑盒均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；預(yù)染蛋白Marker購自Thermo公司；SOD蛋白抗體購自安諾倫生物科技有限公司；ECL超敏發(fā)光液購自美國Bio-Rad公司；無水乙醇購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，其他試劑均為分析純.

實(shí)驗(yàn)所用的儀器：激光共聚焦顯微鏡（Leica TCS-SP8，德國）；RT-PCR儀（羅氏Light Cycler 96，瑞士）；水合粒徑儀（馬爾文Zetasizer Nano ZS，英國）；冷凍離心機(jī)（Eppendorf H1650-W，德國）；混勻儀（Vorter Mixer QL-866）；流式細(xì)胞儀（BD LSRFortessa，美國）；熒光光譜儀（Horiba QM-8075）；透射電鏡（Hitachi HT7700，日本）；蛋白凝膠成像系統(tǒng)（Molecular Imager ChemiDocTM XRS＋I(xiàn)maging System，BIO-RAD公司）.

1.3 CdSe／ZnS量子點(diǎn)的表征量子點(diǎn)樣品的TEM圖在透射電鏡工作電位為200 kV測定；量子點(diǎn)的熒光光譜在熒光光譜儀上測定，激發(fā)光源為75 W氙燈，檢測器為PMT F900.QDs的水合粒徑通過馬爾文的粒徑分析儀測定.

1.4 激光共聚焦觀察量子點(diǎn)與四膜蟲的結(jié)合在培養(yǎng)基中加入適量量子點(diǎn)母液，使得終質(zhì)量濃度為2.4μg／mL，接種0.5 mL對數(shù)生長期的嗜熱四膜蟲，于恒溫?fù)u床150 r／min培養(yǎng)1 h，收集培養(yǎng)基于EP管中，4 000 r／min離心5 min，PBS洗滌兩次，去除培養(yǎng)基及四膜蟲細(xì)胞上附著的量子點(diǎn)，用4%多聚甲醛固定四膜蟲后，在激發(fā)波長為630 nm的激光共聚焦顯微鏡下觀察四膜蟲與量子點(diǎn)的結(jié)合.

1.5 流式細(xì)胞儀檢測ROS及細(xì)胞膜損傷取對數(shù)期的四膜蟲9 mL分裝到25 mL錐形瓶中，共設(shè)四組實(shí)驗(yàn)組，每組3個(gè)平行樣，加入1 mL不同濃度量子點(diǎn)母液，使量子點(diǎn)的終質(zhì)量濃度分別為0、0.1、2、8μg／mL，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后離心（2 000 r／min 10 min）并去除上清，加入預(yù)先配置好的PI、DCFH-DA熒光探針分別用于檢測細(xì)胞膜損傷、ROS的量，室溫避光孵育20 min后，用磷酸緩沖液（PBS）洗滌兩次去除未裝載的熒光探針，流式細(xì)胞儀檢測，PI的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為530和620 nm，ROS的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為488和525 nm.

1.6 量子點(diǎn)對四膜蟲存活率影響首先配置質(zhì)量濃度為250 mg／L的CdSe／ZnS量子點(diǎn)母液，在裝有無菌培養(yǎng)液的錐形瓶中加入不同量的母液使量子點(diǎn)終質(zhì)量濃度為0、0.1、0.4、2.4、9.6μg／mL，接種0.5 mL對數(shù)生長期的嗜熱四膜蟲，于28℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)，在150 r／min下培養(yǎng)48 h后，在體式顯微鏡下觀察記數(shù)細(xì)胞密度，每組3個(gè)平行，計(jì)算平均值，另設(shè)空白對照，與對照相比計(jì)算四膜蟲存活率，

并利用t檢驗(yàn)確定是否具有顯著性.

1.7 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)依據(jù)嗜熱四膜蟲GAPDH（序 列 號：AF319450.1）、GST（序 列 號：FJ175686.1）、SOD（序列號：XM_001007667.2）基因在GenBank和NCBI Reference Sequence中的序列，用軟件Primer 6設(shè)計(jì)基因的引物（見表1），由生工公司合成引物；按照試劑盒操作用Trizol提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄cDNA，根據(jù)RT-PCR試劑盒說明書取cDNA1.6μL、2×SYBR 5μL、引物0.4μL、ddH2O 3μL配制10μL的RT-PCR反應(yīng)體系，設(shè)置三組重復(fù)，95℃預(yù)變性30 s后，經(jīng)過95℃10 s，60℃30 s，共40個(gè)循環(huán)，最后95℃15 s，60℃1 min，測定溶峰曲線.

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物Tab.1 Primers for real time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）

1.8 蛋白免疫印跡法檢測蛋白的表達(dá)用100μL含有蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液從量子點(diǎn)處理后的四膜蟲中提取總蛋白，細(xì)胞裂解液以12 000 r／min離心20 min，收集上清液即為提取的總蛋白，采用Bradford法測定總蛋白濃度.將等量的總蛋白經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDSPAGE）后轉(zhuǎn)移到硝基纖維素膜上，用5%脫脂牛奶于室溫封閉膜1 h，分別與anti-GAPDH和anti-SOD抗體（1∶1 000）4℃孵育過夜，用TBST洗滌膜3次后用HRP標(biāo)記的二抗（1∶5 000）室溫孵育2 h，再漂洗3次，每次10 min，辣根過氧化物酶顯色.

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，單因素方差分析（one-way ANOVA）比較組間差異性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果與討論

2.1 量子點(diǎn)表征通過TEM、DLS及熒光光譜對CdSe／ZnS量子點(diǎn)進(jìn)行了表征，透射電鏡（圖1（a））顯示CdSe／ZnS量子點(diǎn)平均直徑在4.5 nm左右，熒光光譜儀（圖1（b））檢測結(jié)果顯示量子點(diǎn)的最大激發(fā)波長在573 nm，最大發(fā)射波長在603 nm.水合粒徑（圖1（c））結(jié)果顯示量子點(diǎn)平均直徑在116.5 nm，Pdi系數(shù)0.245，說明量子點(diǎn)在液體中存在聚團(tuán)現(xiàn)象，但分散情況良好.

圖1 量子點(diǎn)表征Fig.1 Characterization of quantum dots

2.2 量子點(diǎn)與四膜蟲的結(jié)合及對四膜蟲存活率的影響如圖2所示，（a）為熒光圖，（b）為明場圖，（c）為merge圖，激光共聚焦顯微鏡可以觀察到，量子點(diǎn)可以聚集在四膜蟲表面并發(fā)射熒光，說明量子點(diǎn)可以與四膜蟲細(xì)胞結(jié)合，具備誘導(dǎo)毒性效應(yīng)、抑制細(xì)胞生長的基礎(chǔ)，圖2（d）存活率的結(jié)果顯示，在實(shí)驗(yàn)的濃度范圍內(nèi)（0、0.1、0.4、2.4、9.6μg／mL），量子點(diǎn)對四膜蟲的生長抑制呈劑量依賴效應(yīng)，9.6μg／mL的CdSe／ZnS量子點(diǎn)對四膜蟲的生長抑制有39.6%左右，說明量子點(diǎn)對四膜蟲細(xì)胞具有毒性，但是在實(shí)驗(yàn)的過程中增加量子點(diǎn)劑量后四膜蟲的種群密度并沒有明顯下降（數(shù)據(jù)未附加），這可能是由于量子點(diǎn)在液體中存在聚團(tuán)現(xiàn)象，水合粒徑結(jié)果表明聚團(tuán)的量子點(diǎn)顆粒粒徑遠(yuǎn)大于正常量子點(diǎn)，文獻(xiàn)［21］研究表明量子點(diǎn)粒徑越大，對細(xì)胞的毒性越小，在本實(shí)驗(yàn)中更高的濃度沒有觀察到明顯的存活率抑制的增加，可能是由于高濃度條件下量子點(diǎn)的聚合現(xiàn)象帶來的影響，聚合后大粒徑的量子點(diǎn)具有小的比表面積，暴露在表面的鎘相對于小粒徑的少，與介質(zhì)作用產(chǎn)生的游離Cd2＋下降，毒性效應(yīng)受到影響.圖2（d）也說明增加濃度并不會(huì)造成更大的毒性效果.圖2中，與CK組相比有顯著差異，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01.

圖2 量子點(diǎn)與四膜蟲結(jié)合及對存活率影響Fig.2 Quantum dots bind to Tetrahymena cell and inhibitory effects of QDs on Tetrahymena cellular viability

生長抑制作用是毒理學(xué)最基本的指標(biāo)之一，在本研究中對量子點(diǎn)納米材料對四膜蟲的生長抑制作用也進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果顯示在研究的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)了劑量毒性效應(yīng)，羅慧［20］也發(fā)現(xiàn)CdSe量子點(diǎn)對四膜蟲生長存在抑制作用，且毒性強(qiáng)度與濃度成正比，這與本研究的結(jié)果一致.

2.3 量子點(diǎn)對四膜蟲的氧化損傷被廣泛接受的鎘系量子點(diǎn)的毒性機(jī)制的探討主要集中在重金屬元素Cd2＋的釋放、氧化過程中活性氧的產(chǎn)生以及活性氧自由基ROS介導(dǎo)的氧化應(yīng)激等方面［22］，而氧化損傷也是重金屬離子Cd2＋的毒性機(jī)制之一.活性氧可啟動(dòng)一個(gè)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，易與細(xì)胞膜上的各種不飽和脂肪酸及膽固醇反應(yīng)，這種直接作用于細(xì)胞的氧化損傷能導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)過氧化水平升高，引起DNA氧化損傷，細(xì)胞凋亡［23］.

圖3（b）的結(jié)果顯示，隨著量子點(diǎn)的質(zhì)量濃度增加（0.1、2、8μg／mL），ROS的產(chǎn)生量基本上呈現(xiàn)了平行增加的趨勢，相對于對照組，2μg／mL處理組四膜蟲的ROS增加了109.4%，增加最多；8μg／mL處理組比對照組增加了73.2%，比2μg／mL處理組略有下降，這可能是在高濃度的溶液中，受到量子點(diǎn)的聚合影響.ROS的作用之一就是攻擊細(xì)胞膜，PI用于檢測細(xì)胞膜的通透性變化，檢測結(jié)果代表細(xì)胞膜損傷程度，圖3（a）結(jié)果顯示隨著量子點(diǎn)濃度增加，細(xì)胞膜的損傷也對應(yīng)嚴(yán)重，除了8μg／mL量子點(diǎn)處理組沒有與ROS的產(chǎn)生呈現(xiàn)一致的趨勢外，其他處理組也大體與ROS的產(chǎn)生相呼應(yīng).說明了ROS的產(chǎn)生是膜損傷的主要原因.

圖3 量子點(diǎn)對四膜蟲的氧化損傷.Fig.3 Oxidative damage on Tetrahymena caused by QDs

Wang等［24］研究也發(fā)現(xiàn)，TiO2NPs的細(xì)胞毒性主要與活性氧自由基的產(chǎn)生有關(guān)，與本研究結(jié)果類似，印證了ROS介導(dǎo)的氧化損傷；Mortimer等［25］觀察到羧酸化CdSe／ZnS量子點(diǎn)在亞致死濃度下作用24 h內(nèi)沒有出現(xiàn)細(xì)胞壞死、嚴(yán)重氧化損傷、脂質(zhì)氧化和DNA損傷等明顯的細(xì)胞毒性，這與本研究的結(jié)果不一致，本研究的最高濃度在亞致死濃度下，但是細(xì)胞膜破壞和ROS的量都顯著增加，可能因?yàn)楸狙芯孔饔玫臅r(shí)間48 h比文獻(xiàn)［25］研究的24 h作用時(shí)間長.

量子點(diǎn)具有高的比表面活性，能夠轉(zhuǎn)移電子給溶液中的氧，產(chǎn)生單線氧等活性氧自由基，考慮到活性氧自由基的生命周期只有10－5～10－6s，所以產(chǎn)生的ROS要對四膜蟲實(shí)施毒性的必要條件是ROS產(chǎn)生位置要與細(xì)胞膜足夠近［26］，在本研究中共聚焦的觀察結(jié)果能夠看到量子點(diǎn)結(jié)合在細(xì)胞表面，有足夠近的距離給產(chǎn)生的ROS在生命周期內(nèi)完成與細(xì)胞膜的反應(yīng)過程，破壞細(xì)胞膜.

2.4 量子點(diǎn)對四膜蟲抗氧化系統(tǒng)的影響一般生物體都處在正常的氧化平衡狀態(tài)，自由基產(chǎn)生系統(tǒng)及抗氧化系統(tǒng)可以有一定的調(diào)節(jié)能力，細(xì)胞在遭到ROS攻擊，體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)會(huì)通過啟動(dòng)抗氧化基因編碼抗氧化蛋白的表達(dá)來調(diào)節(jié)機(jī)體的氧化還原平衡，圖4（a）和（b）結(jié)果表明，隨著量子點(diǎn)濃度的增加，四膜蟲細(xì)胞內(nèi)的抗氧化基因SOD和GST的表達(dá)都有不同程度的增加，但是相對對照組來說都處在低表達(dá)狀態(tài)，Western blot結(jié)果顯示如圖4（c）和（d），SOD蛋白的表達(dá)與SOD基因也大體一致：隨量子點(diǎn)劑量的增加而增加，相對對照組呈現(xiàn)低表達(dá).

圖4 量子點(diǎn)對四膜蟲抗氧化系統(tǒng)的影響Fig.4 Effects of quantum dots on antioxidant system of Tetrahymnias

在機(jī)體受到ROS攻擊時(shí)，對應(yīng)的抗氧化酶GST和SOD等表達(dá)一般會(huì)上升，以平衡ROS帶來的氧化應(yīng)激損傷，在本研究中隨著量子點(diǎn)濃度的增加，四膜蟲細(xì)胞內(nèi)的抗氧化基因GST和SOD及SOD蛋白的表達(dá)都有不同程度的增加呼應(yīng)了ROS產(chǎn)生的效果，Zou等［27］研究了光照條件下TiO2NPs對梨形四膜蟲代謝水平的影響，數(shù)據(jù)顯示四膜蟲體內(nèi)的活性氧自由基水平在光照下比在同濃度黑暗條件下增加了1.9倍，超氧化物歧化酶（SOD）水平增加了3.9倍，與本研究的結(jié)果一致.

但是對本研究來說，各處理組無論蛋白還是基因的表達(dá)，相對對照組來說都處在低表達(dá)狀態(tài)，可能源于量子點(diǎn)與蛋白結(jié)合、干擾蛋白表達(dá)的能力，本研究量子點(diǎn)具有納米級的小粒徑，能與大分子蛋白接近，并且量子點(diǎn)具有高反應(yīng)活性，其毒性機(jī)制中有一個(gè)重要的機(jī)制是量子點(diǎn)可能與大分子蛋白結(jié)合阻礙其實(shí)施對應(yīng)的生物學(xué)功能［8，12］.在本研究中出現(xiàn)的現(xiàn)象可能是由于低濃度時(shí)，納米聚合情況比較少（聚合的水合粒徑約為116 nm），非聚合狀態(tài)的游離納米粒子（4.5 nm）較多，所以和大分子蛋白結(jié)合率可能比較高，抑制了對應(yīng)的抗氧化系統(tǒng)的蛋白和基因的表達(dá)，而在高濃度組時(shí)游離的小納米相對較少，對抗氧化蛋白的抑制作用減弱，所以能夠觀察到蛋白和基因的表達(dá)均高于低濃度組.

3 結(jié)論

1）氧化損傷是量子點(diǎn)的毒性機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)ROS的量與細(xì)胞膜損傷程度基本呈一致變化，說明ROS所誘導(dǎo)的氧化損傷是四膜蟲細(xì)胞膜損傷的主要原因.

2）細(xì)胞膜作為機(jī)體的第一屏障，與細(xì)胞的生長存活直接相關(guān)，所以本研究觀察到的量子點(diǎn)對細(xì)胞存活的抑制可能來源與量子點(diǎn)的氧化損傷所導(dǎo)致的細(xì)胞膜的破壞.詳細(xì)的機(jī)制還有待于后續(xù)研究.

3）本研究結(jié)果中，無論對四膜蟲生長的抑制、細(xì)胞膜的破壞、氧化應(yīng)激等效應(yīng)都可能帶來食物鏈和生態(tài)系統(tǒng)的擾動(dòng)，水生生態(tài)系統(tǒng)的安全需要更多的研究關(guān)注.

致謝上海健康醫(yī)學(xué)院種子基金（E1-0200-19-201132）和上海健康醫(yī)學(xué)院百人庫項(xiàng)目（B1-0200-19-311133）對本文給予了資助，謹(jǐn)致謝意.