19%啶氧.丙環(huán)唑微乳劑分析方法研究

張常慶， 曹俊麗， 陳少雁， 余德勉， 張 釗

(上海悅聯(lián)生物科技有限公司，上海 201215)

關鍵字：啶氧菌酯; 丙環(huán)唑

啶氧菌酯是含氟類的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑產(chǎn)品，屬于內(nèi)吸性廣譜殺菌劑，具有保護、滲透和內(nèi)吸作用。其作用機理是藥劑進入病菌細胞內(nèi)后，阻斷細胞色素b和細胞色素c1之間的電子傳遞，從而抑制線粒體的呼吸作用，破壞病菌的能量合成及循環(huán)。

丙環(huán)唑是一種廣譜性的三唑類殺真菌劑，作為一種由保護和治療作用的內(nèi)吸性葉面殺菌劑，可被根、莖、葉部吸收，并通過木質部向上傳導。丙環(huán)唑主要通過干擾真菌細胞膜上類固醇生物合成及抑制麥角甾醇的形成來抑制或干擾菌體附著胞及吸器的發(fā)育、孢子形成和破壞菌絲細胞結構，從而降低病原菌的致病力。

將啶氧菌酯和丙環(huán)唑2個藥劑以適當比例混配使用，具有保護和治療活性，殺菌譜廣、活性高；且具有滲透、內(nèi)吸和擴散分布能力，在植物中的重新分布能夠既保護已有葉片也能保護新生組織；同時還能夠促進作物健康，具有提高作物抗逆能力和顯著增加作物葉綠素含量等特點。

根據(jù)文獻報道，丙環(huán)唑有氣相[1]和液相[2-3]分析方法，啶氧菌酯的液相[4-5]分析方法，丙環(huán)唑和啶氧菌酯氣相和液相分析的方法都具有較好的準確度和精密度。但丙環(huán)唑和啶氧菌酯同時分析的方法還尚未見報道。由于19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑(7%+12%)為復配制劑，在實際生產(chǎn)中，如果兩個組分單獨測定易耗費時間。經(jīng)過試驗，摸索出一個在同一條件同時測定丙環(huán)唑和啶氧菌酯的分析方法。經(jīng)過實驗驗證，此分析方法具有較好的準確度和精確度。

1 材料儀器

1.1 樣品和試劑 乙腈：色譜純；冰乙酸：分析純；水：二次重蒸；啶氧菌酯標樣：已知啶氧菌酯含量≥98.0%；丙環(huán)唑標樣：已知丙環(huán)唑含量≥98.0%；流動相：乙腈+水=60+40(V/V)冰乙酸調(diào)pH=3.0，流動相經(jīng)0.45um孔徑的濾膜，并在超聲波浴槽中脫氣10min。

1.2 儀器 高效液相色譜儀：具紫外可變波長檢測器；色譜數(shù)據(jù)處理機；色譜柱：Φ4.6mm×150mm不銹鋼柱，內(nèi)裝CAPCELL PAK C18/5μm為填充料的不銹鋼柱。

1.3 高效液相色譜操作條件 流量：1.0mL/min；柱溫：室溫(溫差變化<2℃)；檢測波長：230nm；

進樣體積：5μL；保留時間：丙環(huán)唑A約7.7min，丙環(huán)唑B約7.9min，啶氧菌酯約10.0min。

上述操作參數(shù)是典型的，可根據(jù)儀器的特點，對給定的操作參數(shù)做適當調(diào)整，以期獲得最佳效果，典型的啶氧菌酯(丙環(huán)唑)高效液相色譜圖(圖1)。

2 實驗方法

2.1 標樣溶液的配置 稱取啶氧菌酯標樣0.05g和丙環(huán)唑標樣0.09g(精確到0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩5min使樣品溶解，冷卻至室溫，搖勻。

2.2 試樣溶液的配置 稱取含啶氧菌酯0.05g(精確到0.000 2g)樣品，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩5min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，過濾，備用。

2.3 試樣的測定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，計算各針相對響應值的重復性，待相鄰2針的響應值變化<1.0%后，按照標樣溶液，試樣溶液，試樣溶液，標樣溶液的順序進行測定。

2.4 試樣中有效含量的計算 將測得的2針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣溶液中的峰面積分別進行平均，試樣中啶氧菌酯(丙環(huán)唑)的質量分數(shù)X1(%)按式(1)計算：

(1)

式中：

A1—標樣溶液中啶氧菌酯(丙環(huán)唑)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中啶氧菌酯(丙環(huán)唑)峰面積的平均值；

m1—啶氧菌酯(丙環(huán)唑)標樣的質量，g;

m2—啶氧菌酯(丙環(huán)唑)試樣的質量，g；

P—啶氧菌酯(丙環(huán)唑)標樣的質量百分數(shù)，%。

3 結果與討論

3.1 流動相和波長選擇 首先對19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑中有效成分啶氧菌酯、丙環(huán)唑在DAD條件下做紫外吸收掃描(圖2～3)，由(圖2～3)并結合分析中助劑雜質干擾因素(圖4)，選定檢測波長為230nm。在乙腈、水中調(diào)節(jié)比例，將啶氧菌酯和丙環(huán)唑進行有效分離，同時避免助劑和雜質干擾，最后確定為乙腈：水=60：40冰乙酸調(diào)節(jié)ph3.0作為流動相，在此條件下對19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑中啶氧菌酯、丙環(huán)唑純度掃描。19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑中啶氧菌酯、丙環(huán)唑的峰純度均>99.9%，19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑中啶氧菌酯、丙環(huán)唑中有效成分出峰位置無明顯物質干擾，符合定量分析要求。

圖2 19%啶氧.丙環(huán)唑微乳劑中啶氧菌酯HPLC-DAD特異性掃描圖

圖3 19%啶氧.丙環(huán)唑微乳劑中丙環(huán)唑HPLC-DAD特異性掃描圖

圖4 19%啶氧.丙環(huán)唑微乳劑制劑空白圖

3.2 分析方法的線性相關性實驗 準確配制一系列不同濃度的啶氧菌酯和丙環(huán)唑標樣溶液，然后分別按2.3測定步驟進行分析檢測，分別以啶氧菌酯和丙環(huán)唑的重量為橫坐標，啶氧菌酯和丙環(huán)唑峰面積為縱坐標，計算一元線性回歸方程和作線性相關圖。線性相關性測定試驗數(shù)據(jù)(表1)。

啶氧菌酯一元線性回歸方程：y=11.736 00x-0.032 42，相關系數(shù)：R2=1.000 0。

圖5 啶氧菌酯線性關系圖

丙環(huán)唑一元線性回歸方程：y=6.186 32x+0.135 97，相關系數(shù)：R2= 0.999 9。

圖6 丙環(huán)唑線性關系圖

3.3 分析方法的精密度實驗 任取一批19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑，按本標準中2.3測定步驟連續(xù)測定啶氧菌酯、丙環(huán)唑含量10次，分別計算其標準偏差、變異系數(shù)。精密度測定試驗數(shù)據(jù)(表2)。

表2 啶氧菌酯、丙環(huán)唑精密度測定試驗數(shù)據(jù)表

從啶氧菌酯、丙環(huán)唑精密度測定數(shù)據(jù)表中可以看出，啶氧菌酯的標準偏差0.028，變異系數(shù)為0.40%、丙環(huán)唑的標準偏差為0.035，變異系數(shù)為0.28%。

3.4 分析方法的準確度實驗 選取已知含量的19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑樣品，準確稱取5份，并分別加入定量的啶氧菌酯、丙環(huán)唑標樣，然后按本標準中2.3測定步驟測定啶氧菌酯、丙環(huán)唑標樣的加入量，同理論值進行比較，計算回收率。回收率測定試驗數(shù)據(jù)(表3)。

表3 回收率測定試驗數(shù)據(jù)表

按照本標準規(guī)定的方法進行檢測試驗啶氧菌酯、丙環(huán)唑的回收率分別為：99.30%～100.99%、98.64%～101.69%之間，啶氧菌酯和丙環(huán)唑的平均回收率分別為100.43%和99.79%。

4 結論

結果表明，本文中建立的同柱分析19%啶氧·丙環(huán)唑微乳劑中啶氧菌酯和丙環(huán)唑的方法在測定該制劑中的啶氧菌酯和丙環(huán)唑含量的準確度和精密度較高，線性關系良好。由于一次即可測定啶氧菌酯和丙環(huán)唑的含量，使得該方法快速、簡便，適合于產(chǎn)品的質量檢測和控制。