貴州麻陽河自然保護區(qū)黑葉猴腸道寄生蟲初步調(diào)查

楊天友 莫忠妹 熊富玉 聶 冉 石 運

(1.銅仁學(xué)院農(nóng)林工程與規(guī)劃學(xué)院，銅仁，554300；2.銅仁學(xué)院非人靈長類保護研究中心，銅仁，554300；3.銅仁學(xué)院貴州省梵凈山地區(qū)生物多樣性保護與利用重點實驗室，銅仁，554300；4.麻陽河國家級自然保護區(qū)管理局，沿河，565300)

寄生蟲感染是靈長類(Primates)動物最常見的疾病之一，目前已知許多原生動物和蠕蟲都可以感染靈長類動物[1]。全世界的非人靈長類動物攜帶了大約300種寄生蟲[2]。目前關(guān)于非人靈長類動物腸道寄生蟲的研究，多聚焦于腸道寄生蟲的感染情況調(diào)查[3]，且多數(shù)研究認為非人靈長類動物寄生蟲的感染與人類活動有關(guān)[3-6]。一些研究表明，由于非人靈長類動物與人類遺傳關(guān)系較近，在人與非人靈長類動物接觸密切的區(qū)域，非人靈長類動物與人類之間共患疾病傳播的可能性會更高[7-8]。而一些人類傳染性疾病也很可能是與野生靈長類動物接觸而被感染，如惡性瘧疾、黃熱病和艾滋病毒[8-10]。因此，對非人靈長類寄生蟲進行研究對于評估目標(biāo)物種和種群的健康狀況，以及制定準(zhǔn)確的管理和保護戰(zhàn)略非常重要。

黑葉猴(Trachypithecusfrancoisi)屬于猴科(Cercopithecidae)，疣猴亞科(Colobinae)，葉猴屬，在全球主要分布于中國重慶、貴州、廣西，以及越南北部一帶的喀斯特石山地區(qū)，種群數(shù)量1 600—1 900只[11]。黑葉猴屬于國家一級重點保護野生動物，被世界自然保護聯(lián)盟(IUCN)列為瀕危(EN)物種[12]。目前，研究人員已經(jīng)在圈養(yǎng)黑葉猴體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了毛首線蟲(Trichuris)、絳蟲(Tapeworm)等多種腸道寄生蟲[13-19]，但尚未見野生黑葉猴的腸道寄生蟲的調(diào)查報道。

麻陽河國家級自然保護區(qū)管理局從1997年就對保護區(qū)內(nèi)1群黑葉猴開展了人工投食馴化工作，這在一定程度上對黑葉猴的科學(xué)研究和當(dāng)?shù)厣鐓^(qū)發(fā)展起到了促進作用[20]。但是近來麻陽河大河壩片區(qū)的黑葉猴群不僅經(jīng)常光顧人類生活的村莊附近，盜食農(nóng)作物，偶爾還有游客向其投食，與人類接觸頻繁，增加了其感染寄生蟲的風(fēng)險[21]。本研究旨在了解麻陽河野生黑葉猴腸道寄生蟲的感染情況，為進一步探討人猴接觸是否會影響黑葉猴腸道寄生蟲的感染率，以及為麻陽河黑葉猴生態(tài)旅游和保護制定科學(xué)合理的政策提供參考資料。

1 研究方法

1.1 研究地點和研究對象

麻陽河國家級自然保護區(qū)位于貴州省沿河土家族自治縣及務(wù)川仡佬族苗族自治縣交界處。地理位置為28°37′30″—28°54′20″N，108°3′58″—108°19′45″E，總面積311.13 km2[22]。地貌類型以河谷地貌及巖溶地貌為主；保護區(qū)內(nèi)雨水充沛，全年平均降水量1 158.7 mm，年平均氣溫16.7℃，屬于典型的中亞熱帶氣候類型；植被受人為干擾較大，次生性較強，現(xiàn)存植被大多是處于不同的演替階段，但總體上仍屬于中亞熱帶濕潤常綠闊葉林[22]。貴州麻陽河保護區(qū)棲息有全球最大的黑葉猴種群，共有黑葉猴72群(含保護區(qū)外2群)，554只[23]。本研究選取的3個黑葉猴種群主要在保護區(qū)南部的大河壩至香菇壩一帶的次生林和農(nóng)耕區(qū)活動[23]。其中投食群(13只，即6號群[23])，除了保護區(qū)工作人員不定期投喂食物外，也經(jīng)常有游客攜帶食物進行投喂；猴王洞群(12只，即5號群[23])，經(jīng)?；顒釉赬552公路沿線，偶爾會有游客及路人向其投喂食物；香菇壩群(14只，即4號群[23])主要在香菇壩一帶的農(nóng)耕區(qū)和灌木林中活動。

1.2 樣品的采集與保存

2019年1月在麻陽河自然保護區(qū)采集了黑葉猴糞便38份，其中22份來自猴王洞群，10份來自香菇壩群，6份來自投食群。由于野生狀態(tài)下很難做到個體識別，為了避免重復(fù)采樣，每個猴群只采集1次糞便樣品，并在一天內(nèi)完成采樣工作。其中投食群和香菇壩群在白天對其進行跟蹤，在其活動之后的區(qū)域采集剛排泄的新鮮糞便；猴王洞群采樣期間主要活動在河谷兩側(cè)，跟蹤采樣難度大，因此是早上在其夜宿地采集前一天晚上排泄的新鮮糞便。采集的糞便放于編號的50 mL離心管內(nèi)，立即加入乙酸鈉-乙酸-甲醛溶液保存[24]。野外采集的樣品置于低溫保存箱帶回實驗室-4℃保存。

1.3 寄生蟲卵的檢測

用飽和食鹽水漂浮法和麥克馬斯特法進行檢測[18-19，25]。稱取糞便樣品2 g放入100 mL的小燒杯中，量取60 mL冷卻到室溫的飽和食鹽水倒入燒杯中，用玻璃棒充分?jǐn)嚢韬笥勉~篩(80目)進行過濾，將濾液靜置30 min，用移液槍吸取上清液裝滿麥克馬斯特計數(shù)板，在顯微鏡下逐格觀察。每個樣品檢測2次。參考《動物寄生蟲病彩色圖譜》[26]和相關(guān)文獻[3-6，19，24]對觀察到的蟲卵進行鑒定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

每克糞便樣品中的蟲卵數(shù)(即EPG值，量符號為EPG)，根據(jù)麥克馬斯特法計數(shù)原理[18-19，25]，按照公式EPG=A×200進行計算，式中，A為計數(shù)格內(nèi)觀察到的蟲卵總數(shù)的平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 感染的腸道寄生蟲卵的種類

在被測樣品中共檢測到寄生蟲3種，分別是鉤蟲(Ancylostomasp.)、蛔蟲(Ascarissp.)和蟯蟲(Enterobiussp.)，其中投食群和猴王洞群上述3種寄生蟲均有感染，而香菇壩群僅檢測到了蛔蟲和鉤蟲(表1)。

2.2 寄生蟲卵的感染率

采集到的38份黑葉猴糞便中，有25份檢測出腸道寄生蟲卵，總體感染概率為65.8%，其鉤蟲卵的檢出率最高，為60.5%，蛔蟲卵的檢出率為42.1%，而蟯蟲卵的檢出率僅7.9%(表1)。采集自投食群的6份糞便中，有5份糞便檢測出腸道寄生蟲卵，感染率最高，為83.3%；其次是猴王洞群，22份黑葉猴糞便中，有17份糞便檢測出腸道寄生蟲卵，感染率為77.3%；而采集自香菇壩群的10份糞便中，僅有3份糞便中檢測出腸道寄生蟲卵，感染率為30.0%(表1)。

2.3 混合感染多種寄生蟲的情況

對38份黑葉猴糞便混合感染情況分析發(fā)現(xiàn)，總混合感染率為44.7%，同時感染2種的占39.5%，同時感染3種的占5.3%。投食群總混合感染率最高，為66.7%；其次是猴王洞群，總混合感染率為54.5%，香菇壩群總混合感染率最低，僅有10.0%(表2)。

表2 黑葉猴腸道寄生蟲卵混合感染情況Tab.2 Nematode mixed infection status in Trachypithecus francoisi

2.4 腸道寄生蟲卵的載荷量差異

通過對投食群、猴王洞群以及香菇壩群的腸道寄生蟲卵的載荷量的比較發(fā)現(xiàn)：蛔蟲卵和蟯蟲卵的載荷量均是投食群最高，香菇壩群最低；鉤蟲卵的載荷量則不同，載荷量由高到低依次是猴王洞群、投食群、香菇壩群(表3)。

表3 黑葉猴腸道寄生蟲卵載荷量差異Tab.3 Differences of parasite loads in the Provisioned，Houwangdong and Xiangguba groups

3 討論

麻陽河國家級自然保護區(qū)黑葉猴糞便中共檢測到腸道寄生蟲3種，分別是鉤蟲、蛔蟲和蟯蟲。這3種寄生蟲是野生靈長類動物常見的腸道寄生蟲[3，5，27-28]，同時也是最常見的人獸共患寄生蟲[28]。大河壩區(qū)域的黑葉猴經(jīng)常進入附近的農(nóng)耕地取食村民種植的玉米、紅薯等農(nóng)作物[21]，而當(dāng)?shù)卮迕穹N植農(nóng)作物依然習(xí)慣使用農(nóng)家肥，從而有可能接觸到土壤中的寄生蟲卵，增加感染人獸共患寄生蟲的概率。Weyher等[29]在對東非狒狒(Papioanubis)腸道寄生蟲的研究中，就曾發(fā)現(xiàn)取食農(nóng)作物的東非狒狒腸道寄生蟲感染率更高。另一方面，也可能是由于黑葉猴活動區(qū)與當(dāng)?shù)卮迕穹硼B(yǎng)的山羊活動區(qū)重疊程度較高[30]，同域放養(yǎng)的山羊亦有可能導(dǎo)致黑葉猴感染腸道寄生蟲。

本研究采用單次跟蹤采集野生黑葉猴糞便的方法，可以最大限度地避免對同一個體的重復(fù)采樣。其中投食群有13只個體，采集到了6份糞便樣本；香菇壩群有14只個體，采集到了10份糞便樣本；猴王洞群有13只個體，在夜宿地采集了前一晚上黑葉猴排出的所有新鮮糞便，共計22份糞便樣本。因此，本次調(diào)查的結(jié)果可以反映出上述3個猴群腸道寄生蟲的實際感染情況。通過對投食群、猴王洞群以及香菇壩群的腸道寄生蟲感染的種類、感染率、混合感染率、腸道寄生蟲載荷量的情況進行比較分析，發(fā)現(xiàn)經(jīng)常與人類接觸的投食群和猴王洞群腸道寄生蟲的種類、感染率均高于香菇壩群。這一結(jié)果暗示了人類活動可能是影響野生靈長類寄生蟲感染的主要因素之一[3-6]。至于生態(tài)旅游、人工投食等原因?qū)е屡c人類接觸機會多的種群(或個體)感染腸道寄生蟲的感染率是否也相對較高[5，31-32]，還有待今后加大采樣的范圍和強度，并進一步深入探討才有可能解答。

鑒于本研究結(jié)果，建議相關(guān)部門可以通過禁止游客攜帶食物進入景區(qū)，在公路沿線設(shè)置嚴(yán)禁向黑葉猴投食的告示牌；在黑葉猴經(jīng)?；顒拥母?，種植黑葉猴不取食的本地產(chǎn)中藥材等多種方式，加強對黑葉猴的保護和管理，減少黑葉猴與人類接觸的機會，從而進一步減少人類將腸道寄生蟲感染給黑葉猴的概率。同時，還可以對當(dāng)?shù)卮迕窦坝慰瓦M行保護宣傳，提高當(dāng)?shù)鼐用窦坝慰偷谋Ｗo意識。

致謝：感謝麻陽河國家級自然保護區(qū)管理局顏修剛等工作人員在野外采樣過程中的大力支持，感謝?？虽h博士對論文撰寫和修改提出的寶貴建議。