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    DCLK1、Ki67在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床特征分析

    2021-11-11 02:11:30潘燕芳孫奇李秋云姜海雅
    關(guān)鍵詞:陽(yáng)性細(xì)胞結(jié)腸癌分化

    潘燕芳 孫奇 李秋云 姜海雅

    結(jié)直腸癌的發(fā)病初期具有隱秘性,但是隨著病情發(fā)展會(huì)逐漸出現(xiàn)一系列癥狀。據(jù)不完全數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)結(jié)直腸癌占據(jù)大腸疾病70%左右,結(jié)直腸癌的發(fā)病與飲食及外部環(huán)境相關(guān),攝入大量高脂肪會(huì)加快結(jié)直腸癌的發(fā)生[1,2]。結(jié)直腸癌病變的主要位置在直腸與乙狀結(jié)腸交匯處,早期無(wú)顯著臨床特征,出現(xiàn)腹痛等癥狀多為進(jìn)展性病情,因此,提前預(yù)防、及時(shí)治療十分重要。結(jié)直腸癌的產(chǎn)生、進(jìn)展和多種基因密切相關(guān)[3,4]。Ki67蛋白是一種增殖細(xì)胞相關(guān)的核蛋白,可反映細(xì)胞的增殖情況,并且是重要腫瘤細(xì)胞增殖標(biāo)記物,參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Ki67是國(guó)內(nèi)臨床病理檢測(cè)使用廣泛的腫瘤增殖標(biāo)志物,在細(xì)胞核中表達(dá),往往與患者預(yù)后相 關(guān)[5]。DCLK1對(duì)消化系統(tǒng)有一定的影響,有研究發(fā)現(xiàn)DCLK1在胃癌組織中較癌旁組織及正常組織中陽(yáng)性發(fā)生率高,表明其與胃癌的預(yù)后有直接關(guān)系[6]。因此,現(xiàn)對(duì)DCLK1、Ki67在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床特征進(jìn)行分析。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料隨機(jī)選取2018年2月~2020年1月我院收治的結(jié)直腸癌患者100例,男女各50例,年齡38~71歲,中位年齡(47.35±9.16)歲;高分化18例、中分化51例、低分化31例。納入標(biāo)準(zhǔn):①符合結(jié)直腸癌的臨床診斷;②病理學(xué)、分子生物學(xué)等資料均完整;③嚴(yán)格遵循本研究要求接受手術(shù)、病理學(xué)檢查,保證本次研究結(jié)果高度準(zhǔn)確;④入組前未接受任何放療等治療方法,其中診斷性手術(shù)除外。

    排除標(biāo)準(zhǔn):①非結(jié)直腸癌患者且資料收集不完整者;②DCLK1、Ki67檢測(cè)結(jié)果不明確,無(wú)法判定結(jié)果者;③精神疾病者;④存在嚴(yán)重機(jī)體器官功能障礙及對(duì)本研究存在禁忌者。

    1.2 方法本組手術(shù)患者均經(jīng)病理科明確診斷為結(jié)直腸癌,收集結(jié)直腸癌組織標(biāo)本,應(yīng)用免疫組化技術(shù)予以DCLK1、Ki67檢驗(yàn),其檢驗(yàn)過(guò)程如下:將結(jié)腸癌組織切開于中性福爾馬林溶液中充分固定,按病理組織取材標(biāo)準(zhǔn)取材,脫水、包埋后,防脫片切片,烤片機(jī)烤片,65℃烤2h備用,按照LEICA BOND-MAX規(guī)范流程上機(jī)染色,一抗孵育20min,封片。DCLK1及Ki67購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。DCLK1染色結(jié)果標(biāo)準(zhǔn):蛋白表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量<10%為陰性,≥10%為陽(yáng)性,50%~75%為強(qiáng)陽(yáng)性,≥75%為極強(qiáng)陽(yáng)性。Ki67染色結(jié)果標(biāo)準(zhǔn):①按陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)記分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤14%記為0分,15%~25%記為1分,26%~50%記為2分,>50%記為3分;②按染色強(qiáng)度記分:無(wú)顏色記為0分,淺黃色記為1分,黃色記為2分,棕黃色記為3分;最終染色結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)為①+②≤1分為陰性,≥2分為陽(yáng)性。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 23.0軟件分析,計(jì)數(shù)指標(biāo)用n(%)表示,行χ2檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 DCLK1、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率DCLK1、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.0%(43/100),55.0%(55/100)。

    2.2 DCLK1、Ki67與結(jié)直腸癌患者的病理特征關(guān)系腫瘤直徑≥5cm,腫瘤腸壁侵襲漿膜外及發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的DCLK1及Ki67陽(yáng)性表達(dá)率較高(P<0.05)。且DCLK1及Ki67與腫瘤直 徑、腫瘤腸壁侵襲部位、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有正相關(guān)性,其中腫瘤直徑由小變大存在DCLK1、Ki67表達(dá)升高趨勢(shì),Pearson分析(r=0.197、P=0.049,r=0.242、P=0.015),腫瘤腸壁侵襲由黏膜層到黏膜外存在DCLK1、Ki67表達(dá)升高趨勢(shì),Pearson分析(r=0.260、P=0.009,r=0.257、P=0.014)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移由無(wú)到有存在DCLK1、Ki67表達(dá)升高趨勢(shì),Pearson分析(r=0.231、P=0.021,r=0.227、P=0.023)。結(jié)直腸癌患者腫瘤不同分化程度、不同TNM分期的DCLK1、Ki67表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且腫瘤分化程度由高分化向低分化存在DCLK1、Ki67表達(dá)升高趨勢(shì),Pearson分析(r=0.638、P=0.012,r= 0.522、P=0.019);TNM分期由Ⅰ期向Ⅳ期DCLK1、Ki67表達(dá)呈升高趨勢(shì)(r=0.418、P=0.026,r=0.402、P=0.028)。見表1。

    表1 DCLK1、Ki67與結(jié)直腸癌患者的病理特征關(guān)系[n(%)]

    2.3 DCLK1、Ki67表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響DCLK1陽(yáng)性表達(dá)患者1年生存率為76.74%(33/43)低于陰性表達(dá)患者的92.98%(53/57),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.368,P=0.021);Ki67陽(yáng)性表達(dá)患者1年生存率74.55%(41/55)低于陰性表達(dá)患者的91.11%(41/45),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.602,P=0.032)。

    3 討論

    早期直腸癌患者通過(guò)手術(shù)治療可以痊愈,但是有些患者有臨床癥狀時(shí)為進(jìn)行病變期,目前術(shù)前采用放化療可減小患者病灶面積,利于手術(shù)成功。對(duì)直腸癌患者根據(jù)病理程度進(jìn)行TNM分期,有利于患者預(yù)后,大量臨床資料表明DCLK1、Ki67表達(dá)與結(jié)腸癌預(yù)后有明顯的關(guān)系[7,8],并應(yīng)用于臨床指標(biāo)觀察,因此本研究通過(guò)對(duì)100例結(jié)直腸癌患者進(jìn)行DCLK1、Ki67表達(dá)檢測(cè),探討其對(duì)病理分期及預(yù)后的影響。

    DCLK1為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志,有國(guó)外研究學(xué)者以選擇性消除DCLK1陽(yáng)性細(xì)胞的方式進(jìn)行動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的微小RNA-144含量增加,而促使腫瘤發(fā)生的腫瘤干細(xì)胞基因、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平均下降,提示DCLK1可經(jīng)上述因素參與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[9]。研究證明,通過(guò)抑制結(jié)腸癌患者癌細(xì)胞內(nèi)DCLK1表達(dá)后,患者的成瘤性顯著下降,提出DCLK1和結(jié)直腸癌發(fā)生密切相關(guān)[10]。Ki67作為增殖性抗原標(biāo)志物被首次認(rèn)知,并在多種惡性腫瘤中發(fā)揮重要作用,其生物活性廣泛,其抗原屬于核酸蛋白,能夠調(diào)控細(xì)胞增殖,在細(xì)胞核中增多,是細(xì)胞繁殖的基礎(chǔ)。有文獻(xiàn)表示,Ki67與細(xì)胞基因RNA轉(zhuǎn)錄相關(guān),其抗原活性降低能夠?qū)е翿NA合成受限[8]。在結(jié)腸癌疾病中,Ki67是評(píng)估癌細(xì)胞活性應(yīng)用強(qiáng)度最高的分子指標(biāo)[7]。Ki67在結(jié)腸癌細(xì)胞(除G0期)周期中顯著表達(dá),在M期表達(dá)最高,能夠成為診斷結(jié)腸癌疾病的早期預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。早期結(jié)腸癌組織中Ki67呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)往往意味著患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)更大[11]。研究表明檢測(cè)結(jié)腸癌患者組織標(biāo)本的Ki67水平,發(fā)現(xiàn)其水平與患者腫瘤直接相關(guān),對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用[12]。因此結(jié)直腸癌早期診斷Ki67陽(yáng)性表達(dá)率對(duì)控制病情具有重大意義。本研究發(fā)現(xiàn)DCLK1、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率分別為43.0%(43/100)、55.0%(55/100),腫瘤直徑≥5cm、腫瘤腸壁侵襲漿膜外、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度低以及腫瘤分期高的患者DCLK1、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率高。且DCLK1、Ki67在結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)與患者腫瘤直徑、腸壁侵襲位置、轉(zhuǎn)移情況、腫瘤分化程度和TNM分期呈正相關(guān)。表示隨著結(jié)直腸癌的發(fā)展,患者DCLK1及Ki67陽(yáng)性表達(dá)率越高。同時(shí),隨著病情進(jìn)展,DCLK1、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率高的患者其腫瘤直徑大,發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高。DCLK1、Ki67陽(yáng)性表達(dá)患者1年生存率均低于陰性表達(dá)患者,進(jìn)一步提示臨床監(jiān)控DCLK1、Ki67水平對(duì)早期識(shí)別患者病情,控制預(yù)后具有積極作用。這與國(guó)內(nèi)其他研究相似[13,14]。

    綜上所述,DCLK1、Ki67在結(jié)直腸癌疾病檢測(cè)中陽(yáng)性表達(dá)率較高,與患者臨床病理關(guān)系密切,可作為結(jié)直腸癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志物。

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