甲磺草胺液相色譜通用分析方法研究

孫鈺潔，陳 陽

(1.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗測試中心，江蘇南京 210013；2.江蘇省農(nóng)產(chǎn)品品牌發(fā)展中心，江蘇南京 210036)

甲磺草胺又名磺酰唑草酮，為原卟啉原氧化酶抑制劑，主要通過抑制雜草葉綠素生物合成，致使葉片迅速干枯死亡來滅殺雜草[1]。甲磺草胺除草譜廣，適用于防治多種農(nóng)作物田中一年生闊葉雜草﹑禾本科雜草和莎草等[2]。在美國﹑巴西等國家，甲磺草胺已經(jīng)取得登記并廣泛使用，國內(nèi)市場也逐步打開[3]。國內(nèi)已登記的甲磺草胺制劑有懸浮劑和水分散粒劑。甲磺草胺的檢測方法有高效液相色譜法[4]、液質(zhì)聯(lián)用法[5]，其制劑的分析國內(nèi)文獻(xiàn)沒有報道。液質(zhì)聯(lián)用儀價格昂貴，不適于實際生產(chǎn)中推廣，因此開發(fā)一種分析方法檢測不同制劑中甲磺草胺含量，對于甲磺草胺的生產(chǎn)和質(zhì)量控制具有重要意義。 本試驗選取40%甲磺草胺懸浮劑和75%甲磺草胺水分散粒劑作為試樣，開發(fā)了一種液相色譜通用方法分析已登記的甲磺草胺懸浮劑和水分散粒劑。

1 試驗部分

1.1 試劑和溶液

乙腈：色譜純(德國Merck公司)；水：超純水；磷酸，分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；磷酸溶液：Ψ(水∶磷酸)＝1 000∶1；甲磺草胺標(biāo)樣：含量98.5%，白色粉末(上海市農(nóng)藥研究所)；40%甲磺草胺懸浮劑(江蘇省蘇州富美實植物保護(hù)劑有限公司)；75%甲磺草胺水分散粒(瀘州東方農(nóng)化有限公司)。

1.2 儀器

Agilent1200高效液相色譜儀、二極管陣列檢測器、Agilent色譜工作站、色譜柱：Zorbax SB-C18(150 mm ×4.6 mm，5μm)(安捷倫公司)；Millipore超純水制備系統(tǒng)；超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm (Millipore)。

1.3 色譜操作條件

流動相：Ψ(乙腈∶磷酸水溶液)＝60∶40，經(jīng)濾膜過濾，并進(jìn)行脫氣；流速：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：230 nm；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時間：甲磺草胺約3.1 min (圖1)。

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取0.05 g(精確至0.000 1 g)甲磺草胺標(biāo)樣于 50 mL容量瓶中，加入40 mL乙腈，超聲波振蕩5 min，冷卻至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取含0.05 g (精確至0.000 1 g)甲磺草胺的試樣于50 mL容量瓶中，加入40 mL乙腈，超聲波振蕩 5 min，冷卻至室溫，用乙腈稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，過濾。

1.4.3 計算

在操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針甲磺草胺峰面積相對變化小于1.2%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中甲磺草胺峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中甲磺草胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)按公式(1)計算：

式中：ω1為試樣中甲磺草胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；A2為試樣溶液中甲磺草胺峰面積的平均值；m1為甲磺草胺標(biāo)樣的質(zhì)量，單位克(g)；ω為標(biāo)樣中甲磺草胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以%表示；A1為標(biāo)樣溶液中甲磺草胺峰面積的平均值；m2為試樣的質(zhì)量，單位克(g)。

2 結(jié)果分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

當(dāng)前，新一代信息技術(shù)不斷演進(jìn)，持續(xù)與實體經(jīng)濟加速融合，制造業(yè)是產(chǎn)業(yè)邁向中高端水平、經(jīng)濟轉(zhuǎn)向高質(zhì)量發(fā)展的中堅力量。為進(jìn)一步推動制造業(yè)轉(zhuǎn)型升級和創(chuàng)新發(fā)展，我國提出了信息化和工業(yè)化融合(簡稱“兩化融合”)發(fā)展戰(zhàn)略，相繼出臺了“互聯(lián)網(wǎng)+”行動、中國制造2025、制造業(yè)與互聯(lián)網(wǎng)融合發(fā)展戰(zhàn)略等一系列相關(guān)政策規(guī)劃。如何借助兩化融合增強企業(yè)創(chuàng)新驅(qū)動力、推動產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)高端化、以及經(jīng)濟高質(zhì)量發(fā)展成為理論研究和實踐運用亟待解決的重要問題，受到政府、學(xué)術(shù)界以及產(chǎn)業(yè)界的普遍關(guān)注，兩化融合績效的測算與分析是解決該問題的關(guān)鍵。

甲磺草胺的紫外光譜圖如圖4所示，從圖中可以看到甲磺草胺的最大吸收波長約230 nm，在該波長處靈敏度較高，干擾較少，能夠滿足分析的要求，故將檢測波長確定為230 nm。

2.1.2 流動相的選擇

色譜柱選擇常用的ZORBAX SB-C18反相柱。根據(jù)甲磺草胺物化性質(zhì)和溶劑的紫外吸收波長，選擇乙腈作為溶劑溶解樣品，并以乙腈和水作為流動相，為了得到更好的分離效果和峰形，在1 000 mL水里加入1 mL磷酸。選擇乙腈與磷酸水溶液比例60∶40作為流動相，流速0.8 mL/min。

2.2 方法線性關(guān)系的測定

按1.4.1節(jié)標(biāo)樣溶液的制備方法配制5個不同濃度的有效成分線性相關(guān)溶液。在操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，按濃度從低到高的順序測定每個溶液中甲磺草胺的峰面積，取2次測定的平均結(jié)果。以甲磺草胺質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖5)。

從圖5可以看出，當(dāng)甲磺草胺質(zhì)量濃度42.87～ 117.43 mg/L (進(jìn)樣體積5 μL)時，其質(zhì)量濃度與相應(yīng)的峰面積之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，計算得回歸方程為y=17.315 7x+47.107 3，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，完全可以滿足定量分析要求。

2.3 方法精密度試驗

按1.4.2節(jié)試樣溶液的制備方法配制5個40%甲磺草胺懸浮劑精密度溶液和5個75%甲磺草胺水分散粒劑精密度溶液。以76.83 mg/L有效成分線性相關(guān)溶液為標(biāo)樣溶液，在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、精密度溶液、精密度溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定，結(jié)果見表1、表2。

表2 75%甲磺草胺水分散粒劑中甲磺草胺精密度試驗結(jié)果

表1 40%甲磺草胺懸浮劑中甲磺草胺精密度試驗結(jié)果

從表2可以看出，75%甲磺草胺水分散粒劑中甲磺草胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果的RSD為0.235 0%，小于修改的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67=1.399 1，有效成分分析方法精密度的測定結(jié)果符合要求。

2.4 方法準(zhǔn)確度試驗

稱取含0.02 g (精確至0.000 1 g)甲磺草胺的40%甲磺草胺懸浮劑于50 mL容量瓶中，再加入甲磺草胺標(biāo)樣0.02 g (精確至0.000 1 g)，按1.4.2節(jié)試樣溶液的制備方法配制5個有效成分準(zhǔn)確度溶液。

稱取含0.02 g (精確至0.000 1 g)甲磺草胺的75%甲磺草胺水分散粒劑于50 mL容量瓶中，再加入甲磺草胺標(biāo)樣0.02 g (精確至0.000 1 g)，按1.4.2節(jié)試樣溶液的制備方法配制5個有效成分準(zhǔn)確度溶液。

以76.83 mg/L線性相關(guān)溶液為標(biāo)樣溶液，在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、準(zhǔn)確度溶液、準(zhǔn)確度溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定，結(jié)果見表3、表4。

表3 40%甲磺草胺懸浮劑回收率試驗結(jié)果

從表3可以看出，40%甲磺草胺懸浮劑中甲磺草胺平均回收率為100.30%，具有良好的準(zhǔn)確度。

從表4可以看出，75%甲磺草胺水分散粒劑中甲磺草胺平均回收率為99.19%，具有良好的準(zhǔn)確度。

3 結(jié) 論

本文選取國內(nèi)已登記的40%甲磺草胺懸浮劑和75%甲磺草胺水分散粒劑作為試樣，建立了一種高效液相色譜方法分析不同制劑中甲磺草胺的含量，并進(jìn)行了方法學(xué)驗證。試驗結(jié)果表明，方法的精密度和準(zhǔn)確度高，分離效果好，操作簡便、快捷，為不同制劑中甲磺草胺的分析提供了參考。