腸道濕熱證泄瀉小鼠模型的研制及葛根芩連湯療效?

惠華英， 何云山， 吳 儀， 羅成宇， 薛天悅， 譚周進(jìn)

(湖南中醫(yī)藥大學(xué),長沙 410208)

腸道濕熱證泄瀉，是指濕熱內(nèi)蘊(yùn)，阻滯腸道，以腹痛即瀉、瀉下急迫、糞色黃褐臭穢為主要表現(xiàn)的證候[1]，多為感受濕熱之邪或飲食不節(jié)(不潔)，致使?jié)駸崽N(yùn)結(jié)腸道而成。隨著人們生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的變化，腸道濕熱證泄瀉已成為多發(fā)性疾病。糖尿病、慢性肝病、腎病、潰瘍性結(jié)腸炎等往往伴隨著濕熱泄瀉的發(fā)生，增加了疾病的復(fù)雜性而影響診斷和治療，因此開展腸道濕熱證泄瀉的研究，可望加深對此類重大疾病診治方面的認(rèn)識。動(dòng)物模型是進(jìn)行中醫(yī)理論和中藥研究的重要橋梁，腸道濕熱證泄瀉動(dòng)物模型的建立是進(jìn)行疾病發(fā)生機(jī)理和治療研究的基礎(chǔ)和前提。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為濕熱侵襲腸道，津?yàn)闊崞榷伦?，可見便次增多；熱蒸腸道、氣機(jī)壅滯故見腹痛泄瀉或里急后重等，因此濕與熱是復(fù)制濕熱證模型的重要條件。現(xiàn)代對濕熱證模型的研究重視從內(nèi)濕和外濕的角度進(jìn)行模型制備，同時(shí)考慮環(huán)境和飲食復(fù)合因素共同作用模擬“內(nèi)外濕”，使內(nèi)外相引，并引入“致病因子”，最終生成具有濕熱證泄瀉證候表現(xiàn)的動(dòng)物模型。如“高糖高脂+高溫高濕+生物致病因子”法[2-4]、“高溫高濕+高糖高脂+苦寒藥物(大黃、番瀉葉)”法[5-7]。在這些模型的研究中，一般認(rèn)為“高溫高濕”制造外濕，“肥甘飲食”制造內(nèi)濕，而生物致病因子(大腸桿菌、傷寒桿菌、沙門氏菌等)及內(nèi)毒素模擬客邪[8]，所得模型出現(xiàn)體溫持續(xù)升高、肛周紅腫、腹瀉及急性炎癥反應(yīng)等癥狀，符合腸道濕熱證泄瀉臨床表現(xiàn)。但這種方法制備的模型無法區(qū)別濕熱的輕重，同時(shí)模型制備過程中引入了外來細(xì)菌，對機(jī)體自身的腸道菌群平衡造成干擾，而采用苦寒藥物法所得模型產(chǎn)生泄瀉是由藥物所致，無法體現(xiàn)出疾病發(fā)生的本質(zhì)。腸道濕熱證泄瀉動(dòng)物模型的制備，應(yīng)從病因病機(jī)多方面進(jìn)行模擬，所得動(dòng)物模型對相關(guān)疾病的預(yù)防及診治研究具有重要意義。

葛根芩連湯源自漢·張仲景所著《傷寒論》，全方由葛根、黃芩、黃連、炙甘草組成，功效解表清里，是治療腸道濕熱證泄瀉的代表方。藥理研究表明，葛根芩連湯具有解熱抗炎、抗菌、抗心律失常、降糖降脂、增強(qiáng)機(jī)體免疫等功能[9-11]，臨床廣泛用于治療急性腸炎、感染性腹瀉、結(jié)腸炎、小兒手足口病、糖尿病等[12-16]，避免了抗生素使用所造成的耐藥性和不良?xì)埩?，有利于人類和?dòng)物健康。然而，對葛根芩連湯療效機(jī)理的研究還有待深入?！恶T氏錦囊秘錄》中指出：“蓋陰絡(luò)不傷，腸胃不虛，雖有外邪，亦不能患，惟醉飽房勞，坐臥風(fēng)濕，恣啖生冷，以致濕熱陰絡(luò)受傷”[17]。據(jù)此，本研究依據(jù)病因病機(jī)復(fù)制腸道濕熱證泄瀉小鼠模型，并以葛根芩連湯進(jìn)行治療，以期為該病的形成及方劑療效機(jī)理研究提供參考。本研究已通過湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會審查，倫理學(xué)批號LLBH-201910150002。

1 材料

1.1 動(dòng)物

清潔級雄性昆明小鼠，體質(zhì)量18～22 g，購于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號SCXK(湘)2016-0002。飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號SYXK(湘)2019-0009，動(dòng)物房為SPF清潔級，室溫23 ℃～25 ℃，相對濕度50%～70%，動(dòng)物普通飼料由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。高糖高脂飼料組成為普通飼料中混入12% 豬油和8% 蜂蜜，高糖高脂飼料由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)編號蘇飼證(2014)01008。

1.2 藥物及制備

葛根芩連湯組成：黃連9 g(四川，批號CKN19041006)，炙甘草6 g(甘肅，批號1806004)，葛根15 g(湖南，批號CK19042602)，黃芩9 g(內(nèi)蒙古，批號TH1905220)，以上藥材購自湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院。依據(jù)原方先煮葛根后納諸藥。葛根加水浸泡30 min，先武火煮沸后轉(zhuǎn)小火繼續(xù)煎煮20 min，加入已浸泡30 min的剩余諸藥，煮沸后繼續(xù)煎煮30 min，三層紗布過濾。濾渣中繼續(xù)加水200 mL，煮沸后繼續(xù)煎煮30 min過濾，合并2次所得濾液，濃縮至含生藥濃度為0.25 g·mL-1，4 ℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑及儀器

小鼠P物質(zhì)(SP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(Mouse SP ELISA kit)，上海茁彩生物科技有限公司(Lot 1211E19)；紅星二鍋頭 (56度)，北京紅星股份有限公司。PRX-280C型人工氣候箱(江蘇天翎儀器有限公司)；PMK4202ZH-E型電子天平(奧豪斯儀器有限公司)；BCD-220WP3CX型冰箱(合肥美菱股份有限公司)；PURELAB Chorus型超純水儀(ELGA)；BA410型顯微鏡(麥克迪奧實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司)；1850R型高速冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)；VORTEX-5型渦旋混合器(Kylin-bell)。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組及給藥

雄性小鼠50只，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后隨機(jī)分為正常組20只，模型組30只。模型制備成功后，取正常組和模型組小鼠各10只處死取樣，剩余模型動(dòng)物隨機(jī)分為治療組和自愈組各10只。按照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臨床等效劑量，治療組小鼠灌胃葛根芩連湯水煎液20 mL·kg-1·d-1，每日2次，2次時(shí)間間隔8 h，連續(xù)4 d。正常組和自愈組給予等量無菌水。

2.2 腸道濕熱證泄瀉模型制備

模型的制備參照綜合因素法加以改進(jìn)[5]：模型組小鼠先在屏蔽環(huán)境中喂養(yǎng)高糖高脂飼料11 d，于第12天開始將模型小鼠置于溫度(32±0.5) ℃、相對濕度95% 的人工氣候箱中，連續(xù)8 h·d-1，并于放入人工氣候箱前后分別灌胃白酒稀釋液 (V白酒∶V無菌水=1∶1) 10 mL·kg-1，中午灌胃冰水10 mL·kg-1，普通飼料喂養(yǎng)，每天更換墊料持續(xù)4 d，正常組灌胃等量無菌水。

2.3 小鼠一般狀態(tài)觀察

根據(jù)2017年中華中醫(yī)藥學(xué)會脾胃病分會發(fā)布的《泄瀉中醫(yī)診療專家共識意見》中腸道濕熱證泄瀉癥狀[1]，每日觀察小鼠的大便性狀、飲水量、食量、體質(zhì)量、小便、毛發(fā)、精神狀態(tài)、活動(dòng)程度等情況。分別于喂食高糖高脂飼料前、放入人工氣候箱前、放入人工氣候箱4 d后以及治療4 d后測定小鼠肛溫。

2.4 血生化檢測

小鼠禁食禁水12 h，取眼球血注入促凝管中，混勻后送至湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院進(jìn)行血生化檢測，4 h內(nèi)完成總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、空腹血糖(GLU)等指標(biāo)的測定。

2.5 小鼠P物質(zhì)(SP)含量測定

快速摘取小鼠眼球采血至1.5 mL EP 管中，室溫放置2 h后于4 ℃1000×g 條件下離心20 min，分離上清，按照小鼠P物質(zhì)測定試劑盒說明書進(jìn)行操作，測定血清P物質(zhì)水平。

2.6 腸道組織病理切片

造模成功后，取正常組和模型組小鼠快速斷頸處死，于超凈工作臺上取出整段小腸，分別截取約2 cm腸道放入4%多聚甲醛中固定，經(jīng)脫水、浸蠟、包埋、切片、染色后制成病理切片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果與分析

3.1 腸道濕熱證泄瀉模型的建立

3.1.1 腸道濕熱證泄瀉模型小鼠的一般特征 腸道濕熱證泄瀉主要臨床癥狀為腹痛即瀉，瀉下急迫或?yàn)a而不爽，糞色黃褐臭穢，肛門灼熱，煩熱口渴。在整個(gè)飼養(yǎng)過程中，正常組小鼠毛發(fā)細(xì)密有光澤，精神狀態(tài)佳，肛門潔凈，大便顆粒飽滿，水分適中，爪甲抓握能力強(qiáng)(圖1A-C)。與正常組比較，模型組小鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)11 d后出現(xiàn)了毛色發(fā)暗、大便干硬、小便色黃現(xiàn)象；高溫高濕+白酒+冰水處理1 d后，模型小鼠表現(xiàn)為懶動(dòng)、活動(dòng)量減少，部分小鼠出現(xiàn)腹瀉，此階段進(jìn)行4 d后，模型小鼠全部出現(xiàn)腹瀉，大便黃褐、稀或黏膩，肛門污穢，精神萎靡，爪甲抓握能力差(圖1D-F)。

圖1 小鼠狀態(tài)及大便比較圖(A、B、C：正常組；D、E、F：模型組)

3.1.2 腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠食量和飲水量影響 對于濕熱證，食量和飲水量是重要的評價(jià)指標(biāo)。圖2示，正常組小鼠在整個(gè)喂養(yǎng)階段進(jìn)食量變化幅度不大，但模型組小鼠在高糖高脂喂養(yǎng)階段進(jìn)食量增加，且總體增加幅度較大。在進(jìn)入人工氣候箱后，模型組小鼠食量明顯減少，甚至低于正常組小鼠。在整個(gè)造模過程中，模型小鼠前期的飲水量較正常組增加，在進(jìn)入高溫高濕氣候箱中喂養(yǎng)后飲水量較正常組減少。

注：A.腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠食量的影響；B.腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠飲水量的影響

3.1.3 腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠體質(zhì)量和肛溫的影響 在正常喂養(yǎng)情況下，小鼠體質(zhì)量隨著小鼠成長逐漸均勻的增加。本實(shí)驗(yàn)中，在高糖高脂階段，模型組小鼠體質(zhì)量逐漸增加，但進(jìn)入人工氣候箱和灌胃白酒、冰水后，模型組小鼠體質(zhì)量增長速度下降，且造模結(jié)束時(shí)模型組小鼠體質(zhì)量顯著低于正常組小鼠(t=2.769，P=0.013)。表1示，造模前正常組與模型組小鼠肛溫相近，且正常組小鼠肛溫在喂養(yǎng)期間穩(wěn)定在36.7 ℃～37 ℃之間，而模型組小鼠肛溫隨著“高糖高脂”喂養(yǎng)時(shí)間的延長逐漸升高，在造模結(jié)束時(shí)模型小鼠肛溫顯著高于正常組(t=-2.704，P=0.027)。

表1 腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠體質(zhì)量和肛溫影響比較

3.1.4 腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠腸黏膜的影響 對小鼠腸道組織切片進(jìn)行HE染色，觀察小鼠腸道黏膜完整性。圖3A示，正常組小鼠腸道組織結(jié)構(gòu)完整，腸絨毛排列緊密，形態(tài)規(guī)則，杯形細(xì)胞豐富，固有層細(xì)胞排列整齊。模型組小鼠腸絨毛出現(xiàn)脫落，絨毛整齊度和完整性受到影響，炎癥細(xì)胞浸潤，出現(xiàn)腸黏膜上皮壞死脫落現(xiàn)象(圖3B)。

注：A.正常組小腸組織切片；B.模型組小腸組織切片

3.1.5 腸道濕熱證泄瀉造模對小鼠血清SP的影響 采用小鼠SP測定試劑盒對小鼠血清中SP含量進(jìn)行測定。圖4示，與正常組比較，模型動(dòng)物血清中SP含量升高，且2組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(t=-2.790,P=0.010)。

注：**P<0.01

3.1.6 腸道濕熱證泄瀉小鼠血生化特征 表2示，與正常組比較，模型組小鼠血中TG和HDL-C含量降低，且TG含量與正常組比較差異顯著(t=-2.488，P=0.038)。模型組小鼠血中所含GLU和TC水平高于正常組，但2組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 腸道濕熱泄瀉造模對模型動(dòng)物血生化影響比較

3.2 葛根芩連湯對腸道濕熱證泄瀉小鼠的療效

3.2.1 葛根芩連湯干預(yù)腸道濕熱證泄瀉小鼠的一般特征 模型動(dòng)物在使用葛根芩連湯治療前，小鼠活潑性差，扎堆，懶動(dòng)，卷毛，毛發(fā)無光澤，爪甲抓握能力差，大便稀溏，肛門污濁，葛根芩連湯治療1 d后，治療組小鼠活潑性增加，部分小鼠大便成型，肛門恢復(fù)潔凈；治療4 d后所有治療組小鼠稀便消失，大便顆粒飽滿且性狀接近于正常組，小鼠肛門潔凈，活動(dòng)靈敏，爪甲抓握有力，毛發(fā)光澤度恢復(fù)到正常組水平。

3.2.2 葛根芩連湯干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠食量和飲水量的影響 圖5A示，停止造模后自愈組和治療組小鼠食量均有增加，但治療組小鼠食量較自愈組小鼠食量增加更快。圖5B示，使用葛根芩連湯治療后，治療組小鼠的飲水量總體接近正常組水平，而自愈組飲水量較正常組相比偏低。

注：A.方劑干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠食量的影響；B.方劑干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠飲水量的影響

3.2.3 葛根芩連湯干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠體質(zhì)量和肛溫的影響 停止造模后，治療組和自愈組動(dòng)物體質(zhì)量均逐漸增加，但與正常組比較體質(zhì)量仍然偏低。表3示，治療前自愈組和治療組肛溫明顯高于正常組，且差異極顯著(t=-10.191,P=0.000；t=-12.255,P=0.000)。使用葛根芩連湯治療4 d后，治療組小鼠肛溫降低且接近于正常組水平。停止造模后，自愈組小鼠肛溫也發(fā)生下降，但與正常組和治療組比較仍然偏高，且與正常組比較差異顯著(t=-6.235,P=0.000)。

表3 葛根芩連湯干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠體質(zhì)量與肛溫影響比較

3.2.4 葛根芩連湯干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠血清SP影響 圖6示，使用葛根芩連湯對模型小鼠進(jìn)行干預(yù)后，治療組小鼠血清SP含量下降且接近于正常組水平(t=1.365，P=0.209)。自愈組小鼠血清SP含量高于正常組和治療組，且與治療組比較差異顯著(t=-4.084，P=0.004)，但與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-2.266，P=0.053)。

3.2.5 葛根芩連湯干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠血生化的影響 表4示，自愈組小鼠TC、TG含量均低于正常組，且與正常組相比差異顯著(t=3.365，P=0.010；t=4.173，P=0.003)，而GLU水平顯著高于正常組(t=-2.335，P=0.048)。經(jīng)葛根芩連湯治療后，治療組小鼠TC、TG含量與自愈組相比均回升，且與正常組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.717，P=0.494；t=2.048，P=0.75)。在血糖方面，治療組小鼠GLU水平降低且接近于正常組水平(t=-0.331，P=0.749)。

表4 葛根芩連湯干預(yù)對腸道濕熱證泄瀉小鼠血生化的影響

4 討論

泄瀉系因感受濕熱外邪，或飲食內(nèi)傷致脾失健運(yùn)，傳導(dǎo)失司，脾虛濕盛是泄瀉的主要病機(jī)。《景岳全書》曰：“泄瀉之因，惟水、火、土三氣為最。夫水者，寒氣也；火者，熱氣也；土者，濕氣也。此瀉痢之本也。[18]”《脾胃論》曰：“故夫飲食失節(jié)，寒溫不適，脾胃乃傷。[19]”高糖高脂飼料性屬肥甘厚膩之品，過食損傷脾胃，窒礙胃腸，可聚濕化熱。模型制備過程中，以高糖高脂飼料喂食模型動(dòng)物11 d后，模型組小鼠出現(xiàn)大便干硬和小便色黃現(xiàn)象，提示小鼠可能出現(xiàn)脾胃運(yùn)化功能障礙，體內(nèi)已有內(nèi)熱蓄積?！皾駸嵴趄v五六月，肌表口鼻皆能入，太陰陽明受病多”[20]，暑濕環(huán)境可使機(jī)體感受濕熱外邪，內(nèi)歸于脾，且高溫高濕抑制機(jī)體抗病力，增加易感性。酒性屬濕熱之品，嗜酒成癖久易化濕生熱，寒涼飲食易傷脾陽。本研究中將脾胃運(yùn)化功能受到影響的模型動(dòng)物置入高溫高濕的人工氣候箱中喂養(yǎng)，同氣相求，使內(nèi)外濕熱相引，給小鼠交替灌胃高劑量白酒和冰水，進(jìn)一步損傷脾胃加重機(jī)體濕熱內(nèi)聚。在預(yù)實(shí)驗(yàn)中，給小鼠直接使用高度數(shù)白酒易造成模型動(dòng)物胃腸道嚴(yán)重脹氣致死或酒醉現(xiàn)象，為降低小鼠死亡率，設(shè)計(jì)灌胃稀釋后的白酒，減少酒精對小鼠腸道的刺激損傷作用，但仍保持高飲酒量。在高糖高脂、高溫高濕、白酒、冰水多因素作用下，最終導(dǎo)致小鼠脾胃運(yùn)化機(jī)能失常，升降失序，清濁不分，下走大腸而出現(xiàn)泄瀉，且在高溫高濕條件下喂養(yǎng)并灌胃白酒、冰水后，模型動(dòng)物出現(xiàn)了食量減少、體質(zhì)量下降、抓握無力等癥狀，說明小鼠脾胃納運(yùn)失職，消化吸收功能減退，水谷之精微不能吸收輸布全身，造成機(jī)體失養(yǎng)，不思飲食，神疲乏力。肛溫升高提示小鼠可能濕熱內(nèi)聚，下注腸道，這與腸道濕熱證泄瀉的次癥肛門灼熱相符。

腸道是機(jī)體與外界直接接觸的器官之一。當(dāng)腸道上皮結(jié)構(gòu)異常或其表面的黏液層被破壞時(shí)，將導(dǎo)致腸道的機(jī)械屏障作用減弱，腸黏膜通透性增高。大量研究證實(shí)，濕熱證本質(zhì)與機(jī)體的免疫及炎癥過程有關(guān)。采用“高糖高脂+高溫高濕+大腸桿菌”法制備的大腸濕熱證模型，血清中所含促炎因子IL-1、IL-2和IL-6水平升高[21]，以“高糖高脂+高溫高濕+白酒+大腸桿菌”法制備的濕熱泄瀉動(dòng)物模型，出現(xiàn)小腸黏膜絨毛脫落、腸上皮細(xì)胞腫脹甚至壞死等[22]。在本研究中，動(dòng)物小腸HE染色切片顯示，模型動(dòng)物腸道出現(xiàn)了腸黏膜絨毛脫落或腸上皮壞死現(xiàn)象，腸黏膜完整性遭到破壞，說明本法所得模型亦存在機(jī)體腸道炎性反應(yīng)。

胃腸激素是一種既存在于胃腸道又存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的腦-腸肽，由胃腸道管壁上的內(nèi)分泌細(xì)胞分泌，可直接作用于神經(jīng)元，具有迅速收縮胃腸道平滑肌的能力，促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)。胃腸激素分泌紊亂可引起胃腸功能性疾病，測定胃腸激素水平已成為臨床診斷許多胃腸道疾病的重要手段。SP是胃腸激素的一種，是調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的主要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)[23]。血循環(huán)中的SP大部分來自于小腸，進(jìn)食脂肪、刺激迷走神經(jīng)等都可引起SP含量增加[24]。馮五金等[25]研究了脾胃濕熱證、肝脾不和證及大腸濕熱證患者血中胃腸激素水平，發(fā)現(xiàn)不同證型胃腸激素水平變化不同。大腸濕熱證患者胃腸激素水平升高，且以SP顯著升高為特征，中藥治療后患者的SP含量有明顯恢復(fù)，說明腸道分泌旺盛和運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)是大腸濕熱證的特征，與臨床表現(xiàn)一致。文艷巧等[4]采用“高糖高脂+饑飽失常+濕熱環(huán)境+飲酒+大腸桿菌”法制備的濕熱證大鼠模型，血清及腸道中所含SP水平均明顯升高，采用清熱解毒方郁金散治療后模型大鼠SP含量均降低，進(jìn)一步驗(yàn)證了濕熱證與SP水平的相關(guān)性。本研究中，模型小鼠血清SP與正常組相比顯著升高，提示模型動(dòng)物出現(xiàn)腸道分泌旺盛及運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)現(xiàn)象，使腸道蠕動(dòng)加快，產(chǎn)生腹瀉，與前人研究結(jié)果相一致。

濕熱證與血脂代謝異常有關(guān)[26，27]。田杰、闕鐵生等[28，29]研究驗(yàn)證了血脂代謝紊亂是溫病濕熱證共有的特征之一。賈月嫦等[30]采用“高脂飼料+高溫高濕+大腸桿菌感染”法建立的濕熱證大鼠模型血清中TG、TC和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量升高，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平降低。程方平等[31]制備的濕熱證大鼠模型血清中HDL-C和LDL-C含量均升高。呂文亮[32]采用“肥甘飲食+高溫高濕+鼠傷寒沙門氏菌”法建立的濕熱證模型大鼠血清所含TC、TG、LDL-C升高而HDL-C降低。姚萬玲[33]采用“高糖高脂+饑飽失常+高溫高濕+飲酒+腹腔注射大腸桿菌”復(fù)合因素建立的濕熱證大鼠模型所含TC和TG水平均升高，可見血脂代謝異常是濕熱證的特征之一。本研究中，模型小鼠血清中TC和GLU含量升高而HDL-C水平降低，且模型組TG含量顯著低于正常組，說明模型小鼠存在血脂代謝異?，F(xiàn)象，與前人研究結(jié)果相一致。以上分析結(jié)果提示，模型小鼠體內(nèi)出現(xiàn)濕熱蘊(yùn)積現(xiàn)象。

葛根芩連湯雖為表里雙解之劑，但側(cè)重于清里熱、止熱利，臨床常用于里熱腹瀉[34]。方中葛根既能解表退熱，又能生發(fā)脾陽之氣而治下利。黃芩黃連性味苦寒，清熱燥濕，厚腸止利；炙甘草益氣和中，亦可調(diào)和諸藥。采用“高糖高脂+高溫高濕+白酒+冰水”所致腹瀉小鼠經(jīng)葛根芩連湯治療后，大便恢復(fù)正常，肛周潔凈，肛溫降低，行動(dòng)靈敏，食量和體質(zhì)量增加，說明葛根芩連湯對腸道濕熱證泄瀉模型癥狀具有明顯的改善作用。方劑干預(yù)4 d后，治療組小鼠血清SP含量恢復(fù)，TG和GLU含量向正常組水平回歸，提示葛根芩連湯可降低模型動(dòng)物血清SP含量，調(diào)節(jié)胃腸激素和血糖水平，改善機(jī)體血脂代謝異常。以上信息說明，葛根芩連湯對腹瀉小鼠療效顯著，同時(shí)也反證了腸道濕熱證泄瀉模型制備成功。

采用“高糖高脂+高溫高濕+白酒+冰水”復(fù)合因素法，成功復(fù)制了腸道濕熱證泄瀉小鼠模型，葛根芩連湯對模型小鼠的顯著療效反證了模型制備成功。本研究從模型動(dòng)物的癥狀表現(xiàn)、SP含量、血生化指標(biāo)及腸道病理切片的角度進(jìn)行了模型的評價(jià)，但這些指標(biāo)對于腸道濕熱證泄瀉的客觀化評價(jià)還存在不足。結(jié)合現(xiàn)代系統(tǒng)生物學(xué)檢測技術(shù)和生物信息學(xué)分析方法，從系統(tǒng)生物學(xué)、腸道菌群、炎癥免疫反應(yīng)、糖脂代謝等多方面、多角度研究腸道濕熱證泄瀉的特異性評價(jià)指標(biāo)，對濕熱證的客觀化診斷具有重大意義。